Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы . 10
1.1. Арахноэнтомозы плотоядных животных как сформировавшиеся паразитарные системы . 10
1.2. Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике. 24
2. Собственные исследования . 37
2.1. Материалы и методы исследований . 37
2.2. Результаты исследований 51
2.2.1. Физико-химические свойства препарата инсакар 51
2.2.2. Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 52
2.2.2.1. Острая токсичность препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» при введении в желудок . 52
2.2.2.2. Изучение острой накожной токсичности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 55
2.2.2.3. Изучение кумулятивных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 57
2.2.2.4. Местное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на кожу 61
2.2.2.5. Действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» на конъюнктиву глаза 62
2.2.2.6. Кожно-резорбтивное действие препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 63
2.2.2.7. Оценка сравнительной эффективности акарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» 71
2.2.3. Изучение аллергизирующих свойств препарата «Инсакар плюс» 77
2.2.4. Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс». 78
2.2.4.1. Оценка Т-клеточного звена иммунной системы . 78
2.2.4.2. Реакция прямой гемаглютинаци 81
2.2.5. Изучение овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в
лабораторных условиях 85
2.2.6. Изучение терапевтической эффективности препарата «Инсакар плюс» при энтомозах и акарозах плотоядных животных в производственных условиях 86
2.2.7. Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак 91
2.2.8. Изучение сравнительной эффективности препаратов «Инсакар плюс» и «Инспектор Тотал С» при демодекозе собак 91
2.2.9. Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс» 94
3. Обсуждение полученных результатов . 96
4. Выводы . 107
5. Практические предложения . 109
6. Список использованной литературы 110
Приложение 144
- Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике
- Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
- Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»
- Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак
Введение к работе
Актуальность темы. Арахноэнтомозы плотоядных животных
распространены повсеместно: встречаются на всех материках, где обитают плотоядные животные, они имеют широкий ареал и проникают с животными во всё новые места обитания. (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев А., 1981; Непоклонов А.А., Брюшинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов А.А., 1986; Василевич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007 и др.).
В развитии кожных заболеваний плотоядных животных важную роль играют эктопаразиты. Наиболее распространены из арахнозов плотоядных животных саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз и демодекоз. К паукообразным принадлежит и группа иксодовых клещей - наружных паразитов животных, зарегистрированных в качестве биологических переносчиков кровепаразитов (пироплазмы) собак. Немаловажную роль в развитии кожных заболеваний играют энтомозы, вызванные блохами, вшами и власоедами. По данным А.М. Титаренко (2000), И.Е. Рогозиной (2004, 2005), Т.С. Катаевой (2009) и др. в последние годы отмечена тенденция к увеличению распространения арахноэнтомозов плотоядных. Это связано с повышением поголовья собак и кошек, увеличением популяции бродячих животных (источников инвазии), содержанием собак и кошек на низком уровне ветеринарного обслуживания.
В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; инокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при паразитировании клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции. При высокой степени инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета. Иксодиды являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.) (Непоклонов А.А. с соавт., 1983; Тимофеев Б.А., 1992).
На протяжении многих лет основными методами борьбы с эктопаразитами животных остается применение химических средств. Начиная с 1950-х годов массовое использование химических инсектоакарицидов способствовало появлению резистентных популяций вредных насекомых и клещей (Brown A.W.F., 1976; Рославцева С.А., 1988; Сальникова О.Г., Яровая Н.В., 2011).
Актуальной задачей для ветеринарных специалистов является разработка
новых препаратов, а также поиск иной стратегии применения существующих
инсектоакарицидных средств, в результате чего свести к минимуму
формирование устойчивых популяций эктопаразитов. Для интенсификации
борьбы с арахноэнтомозами животных необходимо применять
комбинированные препараты с разным механизмом действия, что уменьшит развитие лекарственной устойчивости, повысит эффективность обработок,
сократит кратность обработок, снизит затраты, уменьшит токсичность воздействия на животных.
Комбинации препаратов с разным механизмом действия не только более надежны, но и уменьшают развитие лекарственной устойчивости. Привыкание у насекомых приводит к снижению эффекта при длительном использовании препаратов. Поэтому целесообразна ротация различных средств с определенной периодичностью. Обработки животных обязательно сочетают с применением регуляторов роста и размножения насекомых для их уничтожения в окружающей среде (Стринадкин П.С., Андричук Б.В., Домацкий Н.И., 1982; Богданов М.Р., Мигранов М.Г., 1994; Дьяченко Ю.В., Водянов А.А., 1997; Грапов А.Ф., 1999; Енгашев С.В., Ларионов С.В., 2002; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Ноздрин Г.А. и др., 2003).
Для расширения ассортимента отечественных средств, эффективных и
безопасных в применении, на базе института гельминтологии (ВИГИС)
разработан новый препарат с инсектоакарицидным действием «Инсакар».
Изначально было предложено 4 композиции препарата с различным
качественным и количественным составом активных компонентов
(бензилбензоат, фипронил, пирипроксифен). По результатам ранее проведенных исследований в лабораторных условиях выделили композицию-4 (с последующим названием «Инсакар плюс»), которая показала выраженную острую акарицидную активность и продолжительное остаточное действие в течение 30 дней. Кроме того, выделили композицию-1 (с последующим названием «Инсакар»), которая также обладала продолжительным остаточным действием в течение 30 дней, но 100% гибель клещей при первом контакте с обработанной поверхностью наступала на порядок дольше (Арисов М.В. и др., 2011). В исследованиях М.В. Арисова (2010, 2011) были представлены данные о высокой инсектицидной эффективности обеих композиций препарата при энтомозах собак.
На первом этапе нашей работы было определение более эффективной, безвредной и экономичной композиции из ранее выделенных двух препаратов с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов: инсакар, содержащий в качестве действующих веществ фипронил 9%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты; инсакар плюс, содержащий в качестве ДВ бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% и вспомогательные компоненты.
Цель и задачи исследований. Цель работы – на основе
экспериментальных исследований определить более эффективную,
безвредную и экономичную композицию из двух препаратов «Инсакар» и
«Инсакар плюс» с различным качественным и количественным содержанием
активных компонентов, а также изучить фармако-токсикологические свойства и
лечебно-профилактическую эффективность выбранного препарата при
арахноэнтомозах плотоядных животных.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
- на основании фармако-токсикологических исследований и оценки
сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и
«Инсакар плюс» определить более безвредную, эффективную и экономичную
композицию;
- изучить аллергизирующие и имунотоксикологические свойства
препарата;
- изучить овоцидное действие препарата в лабораторных условиях;
- изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата при
арахноэнтомозах плотоядных животных;
- разработать схему и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных
животных препаратом «Инсакар».
- разработать инструкцию по применению капель инсектоакарицидных
«Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.
Научная новизна. По результатам доклинических и клинических исследований двух препаратов выделен препарат «Инсакар плюс», показавший лучшую эффективность.
Изучены фармако-токсикологические свойства препарата «Инсакар плюс», результаты которых позволили научно обосновать безвредность препарата для животных в терапетических и повышенных дозах. Изучена лечебно-профилактическая эффективность препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных. Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар плюс».
Разработана Инструкция по применению капель инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных.
По результатам исследований получен патент на изобретение РФ № 2456982 от 27 июля 2012 года «Инсектоакарицидное средство для лечения плотоядных животных».
Практическая значимость. Дано научно-практическое обоснование применения в ветеринарии нового инсектоакарицидного препарата «Инсакар». Разработаны схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных препаратом «Инсакар».
Разработана и утверждена на Ученом Совете ГНУ «ВИГИС» Инструкция по применению капель инсектоакарицидных “Инсакар” при арахноэнтомозах плотоядных животных (протокол №7 от 29.09.2011).
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях Ученого Совета ВИГИС 2011-2013 гг.; на научно-практических конференциях ««Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (г. Москва, 2011; 2012 гг.).
Личный вклад диссертанта. Представленная диссертационная работа
является результатом 3-летних научных исследований автора. Работа по
проведению фармако-токсикологических исследований и оценки
сравнительной инсектоакарицидной эффективности препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» и изучению лечебно-профилактической эффективности
препарата «Инсакар плюс» при арахноэнтомозах плотоядных животных выполнены автором самостоятельно.
Схема и способы лечения арахноэнтомозов плотоядных животных
препаратом «Инсакар», Инструкция по применению капель
инсектоакарицидных «Инсакар» при арахноэнтомозах плотоядных животных
разработаны совместно с научным руководителем. Диссертация выполнена
под научным руководством доктора ветеринарных наук, ведущего научного
сотрудника лаборатории иммунологии ГНУ «Всероссийский научно-
исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина»
Россельхозакадемии, Арисова Михаила Владимировича, который оказывал
научно-методическую помощь при проведении исследований, анализе
полученных данных. Статьи, написанные в соавторстве, включают не менее
80% материалов в исследованиях аспиранта.
Основные положения, выносимые на защиту:
- сравнительная оценка препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» по
фармако-токсикологическим и инсектоакарицидным свойствам;
результаты исследований аллергических и иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»;
результаты изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях и лечебно-профилактической эффективности при арахноэнтомозах плотоядных животных;
Меры борьбы и новые инсектоакарициды при арахноэнтомозах плотоядных в современной ветеринарной практике
Настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; инокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при покусах или персистенции клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции; при обильной инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета; являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.). Согласно исследованиям многих ученых: И.Г.Галузо (1948), М.Н.Костина (1990), В.И.Ильященко (1993), C.B.Енгашев, C.B.Ларионов (2001), И.А.Архипов, Й.Ц.Борзунов, В.И.Шайкин (2002), В.Н.Жуленко, М.И.Рабинович, ГА.Таланов (2002), С. А.Веденеев (2003, 2004), О.В.Головнина (2007), A.A.Зверев, С.А.Шемякова, В.Е.Абрамов (2008), O.Л.Куликова, A.B.Симонов, С.Е. Моргутов (2009), A.M.Данилова, Д.Б.Полутов, М.А.Улизко (2009), С.Н.Завиваев (2010) для проведения лечебно-профилактических мероприятий против паразитарных заболеваний необходимо принимать во внимание цикл развития и степень контагиозности паразита, а также потенциальную его возможность сохранять жизнеспособность в окружающей природной среде. Для борьбы с акарозами плотоядных применяют различные схемы лечения. Саркоптоз, отодектоз, нотоэдроз и др. лечат, как правило, акарицидными средствами. При лечении демодекоза в схему лечения включают комбинацию активных компонентов: акарицид, антисептическое средство и антибактериальный препарат. В зависимости от предпочтений ветеринарного врача дополнительно назначают синтетические глюкокортикоиды, препараты для регенерации тканей и иммуностимуляторы.
В качестве действующего вещества в акарицидных препаратах обычно используют амитраз, дорамектин, мелбемицин, моксидектин, циперметрин, ивермектины и т.д.
В середине 20 века определенные успехи в борьбе с эктопаразитами были достигнуты при применении хлорированных углеводородов, фосфорорганических, карбаматных соединений, синтетических пиретроидов (Baker D.W., 1948; Орлов Н.П., 1951; Давлетшин А.Н., Тихомиров С.М., Кошевко Ю.В., 1996; Солопов Н.В., Латкина Е.И., 2001). Подобные вещества обладают выраженным нейротоксическим действием. Однако, наряду с высокой акарицидной активностью, у многих из них выявлена высокая токсичность на организм теплокровных животных.
В работах Н.И. Домацкого, В.Н. Дядечко (1974) отмечена хорошая эффективность бензилового эфира бензойной кислоты при лечении отодектоза песцов. Препарат применяли в виде 15%-ной эмульсии на вазелиновом масле и 6% водной эмульсии однократно. В результате авторы отмечают, что 15% эмульсия показала лучший результат и, кроме этого, проявила овоцидную активность.
S.H. Weibroth, С. Wiehelmsen, М. Powell, 1974 для лечения отодектоза применили ошейники, содержащие вапон.
В борьбе с арахноэнтомозами широкое применение нашли препараты на основе циодрина. В работах М.А. Симецкого (1980), М.А.Симецкого, Л.А. Руденко (1984) показана высокая эффективность и безвредность препарата акродекс на основе циодрина. Эффективность циодрина изучена А.Н Давлетшиным (1980), в исследованиях которого циодрин показал лучшую эффективность по сравнению с другими препаратами: пликтрана, гетерофоса, винилфосфата, дифоса.
Хорошие результаты в борьбе с отодектозом были достигнуты при применении авермектина и ивермектина (Yazwinski Т.А., Pote L., Tilley W. et al.,1981; Foreyt WJ., 1991; Непоклонов А.А. и др., 1996). Авермектины продукты жизнедеятельности актиномицетов Streptomyces avermictiles.
Ивермектин - полусинтетический авермектин, отличается меньшей токсичностью для теплокровных, лучшей растворимостью и большей стабильностью при той же широте спектра и интенсивности противопаразитарного действия. Авермектин и ивермектин обладают широким спектром действия на членистоногих и гельминтов. Положительные результаты ивермектина при лечении псороптозов, саркоптозов, демодекоза, отодектоза и др. акарозов и энтомозов были получены в исследованиях многих ученых (Кербабаев Э.Б., Стринадкин П.С., Метелица А.К., Аксенова Н.И., 1985; Майоров А.И., Верета Л.Е., 1987; Чучина Т.В., Бардасова О.Г., Поп В.П., Мухалятшин В.Ц., 1988; Ильященко В.И., 1992; Roncalli R.A., 1984; Scheidt V.J., Medeau L., Seward R.L., Schwartzman P.M., 1984; Kopczewski A., Malczewski A., 1984; Pros J.H., Kanout A.G., 1985; Mouka J., Hartmannova В., Konrad J., 1987; Ojak Z., 1987; Malecki G., Bolcerak J., 1988). Кроме этого по данным В.И.Ремеза, Л.3.Золотухиной, Ю.П. Овсянниковой (1989), Л.Н. Скосырского (1994), G.R.Egerton, L. Sewal, B.L. Robin (1984) при применении ивермектина не отмечено побочных явлений у кропного рогатого скота, свиней, кроликов, собак.
В последующем на основе авермектинов были разработаны химически модифицированные препараты - дорамектин, эприномектин, селамектин, моксидектин. Полученные препараты были менее токсичны для теплокровных, имеют лучшую очистку и легче переносятся животными. Высокая активность авермектинов против членистоногих и нематод при малой концентрации послужила толчком для производства сотен препаратов для ветеринарии и агрономии. Большая часть ветеринарных препаратов в качестве действующего вещества содержит полусинтетический ивермектин - это: Ивомек, Иверсект, Ивермек, Баймек, Цевамек, Иверген, Бимектин, Пандекс, Ивертин, Новомек, Гиподастин и др. (Mrozik H., Eskola P., Linn B.O. et al., 1989; Fisher M.Н., 1990).
По данным Ф.А.Волкова, М.Н.Корешков (1995) препарат цидектин на основе моксидектина показывае хороший терапевтический эффект. В России, по данным Сивкова Г.С., Скосырских Л.Н., Гришаевой Н.А., Полянской О.В. (1997), был разработан аверсект, который в форме мази проявил хороший терапевтический эффект при демадекозе сабак.
В США и в Европе D.J. Shanks et al. (2000) получили 100 %-ную эффективность селамектина при спонтанном отодектозе кошек и собак в дозе 6 мг/кг накожно однократно или двукратно с ин- тервалом 30 сут.
Сравнительная оценка фармако-токсикологических и инсектоакарицидных свойств препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс»
В первые сутки, после введения препаратов, гибель животных отмечали при больших дозах препаратов (6000 – 7500 мг/кг массы тела), в то время малые дозы не вызывали гибели мышей. Однократное введение препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс» в больших дозах вызывало общее угнетение, судорожные явления, мыши зарывались в подстилку и вскоре отмечали гибель. В последующие двое суток гибель отмечали от доз 3750 – 5250 мг/кг. Максимальная переносимая доза, при которой не отмечали гибели животных, была 3000 мг/кг для обоих препаратов. При введении «Инсакара» в дозе 4500 мг/кг и «Инсакара плюс» в дозе 3750 мг/кг отмечено начало гибели мышей. Абсолютно смертельной дозой для белых мышей составила: «Инсакар» - 7500 мг/кг, «Инсакар плюс» – 6750 мг/кг массы тела (таблица 1, 2). При вскрытии павших животных были выявлены патологоанатомические изменения, свойственные острому отравлению: брыжеечные сосуды кровенаполнены, увеличена печень и селезенка, на слизистой желудка и кишечника геморрагические воспаления. Следует отметить, что после трех суток падежа мышей не отмечено, но общее состояние у некоторых мышей оставалось неудовлетворительным в течение 5 дней. В дальнейшем клиническое состояние нормализовалось.
Таким образом, ЛД50 «Инсакара» при введении внутрь для мышей с учетом стандартной ошибки составила 5937,5±225,3 мг/кг, ЛД50 «Инсакара плюс» - 5125±226 мг/кг (рис. 1), что дает основание отнести данные препараты к 4 классу токсичности – малоопасные по ГОСТ 12.1.007-76.
Токсичность фармакологических средств исследуют при нескольких путях введения, причем необходимо использовать тот путь, при котором показана терапевтическая активность рекомендуемого препарата. «Инсакар» и «Инсакар плюс» разработаны для борьбы с блохами, вшами, власоедами и клещами (иксодовыми, хейлителлами) собак и кошек. Препараты используют путем топикального (точечного) нанесения на кожу. В связи с этим провели исследование острой токсичности препаратов при накожном применении.
В течение всего срока наблюдения в первой опытной группе не отмечали изменений внешнего вида и нарушений видимых физиологических функций. В группах, где наносили препараты в дозах 8 и 10 мл наблюдали признаки интоксикации по истечении 1-3 суток (тремор, судороги, взъерошенность). В течение 10 суток в двух группах пали по одной крысе, в третьей группах пали две крысы опыта 1 и три опыта 2. Для достижения 100%-го эффекта было невозможно ввиду требуемых больших доз препаратов (таблицы 3,4). Важным свойством для проявления хронических интоксикаций является способность вещества накапливаться (кумуляция или накопление вещества и суммировать свое действие, т.е. кумуляция действия). Кумулятивные свойства присущи многим веществам и зависят от физических и химических свойств препарата. Сущность кумулятивного действия заключается в том, что вызванная им реакция остается и вызывает в организме необратимые изменения, а последующий эффект суммируется с предыдущим.
Для определения эффекта кумляции первоначальная доза препаратов составляет 0,1 от ранее установленной однократной ЛД50 – «Инсакар» 593,75 мг/кг или 0,0396 мл/гол 30%-ного водного раствора; «Инсакар плюс» 512,5 мг/кг или 0,0342 мл/гол 30%-ного водного раствора. Для удобства введения препаратов внутрь мышам и последующих расчетов, незначительно округлили значения первоначальных доз, которые составили: «Инсакар» 600 мг/кг или 0,04 мл/гол 30%-ного водного раствора; «Инсакар плюс» 525 мг/кг или 0,035 мл/гол 30%-ного водного раствора.
Учитывая суммарную дозу (ЛД50 – многократная) препаратов «Инсакар» и «Инсакар плюс», определили коэффициент кумуляции, который составил 2,68 и 2,55 соответственно (рис. 3). По классификации веществ по кумулятивным свойствам, исследуемые препараты относятся к группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.
Изучение иммунотоксических свойств препарата «Инсакар плюс»
Изучение действия препарата на клеточное звено иммунитета предполагает использование тестов, дающих представление о функциональной активности Т-лимфоцитов. К таким реакциям относится реакция гиперчувствительности замедленного типа, которая направлена на определение способности различных препаратов, влиять на продукцию сенсибилизированных лимфоцитами медиаторов разнонаправленного действия, вовлекающих клетки в системы мононуклеаров (фагоцитов) в иммунный ответ, или наоборот, тормозящих миграцию. РГЗТ подтверждает наличие клеточнозависимого иммунитета. В основе этого процесса лежит иммунологическая специфическая реакция между АГ и Т-лимфоцитами. Через 24 часа после разрешающей инъекции определили массу опытной (Мо) и контрольной (Мк) лап, по результатам которых вычислили индекс реакции ГЗТ (ИР) вычисляли для каждой мыши по формуле: ИР= Мо – Мк/ Мк. (таблицы 18, 19, 20, 21) В результате исследований установлено, что индекс стимуляции (ИС) у животных первой группы составил 9,45, во второй – 9,79, а в контроле 10,18. Полученные данные позволяют заключить, что препарат «Инсакар плюс» не угнетает Т-клеточное звено иммунной системы (рис. 8).Приведенные данные показывают, что накожное однократное применение испытуемого препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной терапевтической дозах не вызывает изменение интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Титр гемагглютининов в сыворотке крови животных, получивших различные дозы испытуемого препарата, не отличался от такового в контроле. На толерантность гуморального иммунного ответа к действию испытуемого препарата в испытанных дозах указывают также индексы действия препарата, равные 1,01 и 0,98 (таблица 25, рис. 9). Препараты, не обладающие овоцидной активностью, не могут обеспечить эффективного лечения животных, пораженных арахноэнтомозами, так как, уничтожая имагинальные стадии эктопаразитов, через определенное время заболевание возобновляется из-за появления личинок и имаго из сохраненных яиц клещей и насекомых.
В опытах по изучению овоцидного действия препарата использовали яйца иксодовых клещей. Препарат при помощи пульвелизатора (ручного) наносили на все яйца. Тестом овоцидного действия препарата являлось отсутствие развившихся из яиц личинок в опытах и нормальное развитие в контроле.
В результате изучения овоцидного действия препарата «Инсакар плюс» в лабораторных условиях было выявлено, что препарат обеспечивает гибель яиц клещей на 100 % (таблица 26).
Для подтверждения эффективности препарата «Инсакар плюс» с января по ноябрь 2011 - 2013 годах провели широкие производственные испытания в различных ветеринарных учреждениях г. Москвы и Московской области. Всего было подобрано и обработано 100 собак и 100 кошек разного возраста и пород, пораженных арахноэнтомозами.
1. Определение эффективности препарата проводили на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород в ветеринарном кабинете «Анимонда». Всего было обработано 7 собак, больных саркоптозом; 6 собак и 11 кошек, больных отодектозом; 5 кошек, больных нотоэдрозом; 3 собаки, зараженных Demodex canis. Препарат наносили однократно (при демодекозе двукратно) накожно на пораженные участки с захватом по периферии до 1-2 см здоровой кожи в дозе 1,5 мл/ 2-10 кг (собаки) и 1 мл/ 3 кг (кошки) массы тела. При отодектозе в каждую ушную раковину больным животным с внутренней стороны закапывали по 3 капели / 1 кг веса с последующим легким массажем, сложив ушную раковину пополам. При применении препарата не отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.
Через 15 суток после обработок при клиническом и акарологическом исследовании опытных животных отмечали полное выздоровление.
2. В ветеринарной клинике «Беланта» исследования проводили с февраля по ноябрь 2011 года на спонтанно зараженных собаках и кошках разного возраста и пород. Всего было подобрано: 10 собак, зараженных Sarcoptes scabiei; 8 собак и 17 кошек, зараженных Otodectes cynotis; 11 кошек, зараженных Notoedres cati; 5 собак, зараженных Demodex canis. Диагноз, а также эффективность препарата подтверждали результатами микроскопии соскобов, взятых с пораженных участков.
Изучение профилактической эффективности препарата «Инсакар плюс» при иксодидозах собак
Арахноэнтомозы плотоядных животных распространены повсеместно: встречаются на всех материках, где обитают плотоядные животные, они имеют широкий ареал, и проникают вслед за человеком и животными во всё новые места обитания. Наиболее распространенные арахнозы плотоядных животных это саркоптоз, нотоэдроз, отодектоз (так называемые чесоточные заболевания) и демодекоз. К паукообразным принадлежит и группа иксодовых клещей - наружных паразитов животных, зарегистрированных в качестве биологических переносчиков кровепаразитов (пироплазмы) собак. Возбудители арахнозов относятся к постоянным паразитам, а иксодовые клещи - к временным, нападающим на собак для кровососания (питания) только в теплый период года. Немало важную роль в развитии кожных заболеваний играют энтомозы - блохи, вши и власоеды (Галузо И.Г., 1950; Беклемишев В.Н., 1955; Бердыев А., 1981; Непоклонов А.А., Брюшинина Г.Г., Ивашкова Е.И., 1983; Алексеев А.Н., 1985; Водянов А.А., 1986; Василевич Ф.И., 1986; Кербабаев Э.Б., 1998; Mueller R.S., 2007; Титаренко А.М., 2000; Рогозина И.Е., 2004, 2005; Катаева Т.С., 2009 и др.).
В настоящее время в ветеринарной практике используется большое количество ветеринарных препаратов с инсектицидным и акарицидным действием. Необходимость применения данных препаратов связано с тем, что заболевания, вызываемые насекомыми и клещами, инвазивны и причиняют значительный ущерб здоровью животных: кровососущие насекомые, клещи, блохи при укусах вызывают беспокойство и стресс; онокулируя при укусе биологически активные вещества и, выделяя продукты жизнедеятельности, они вызывают раздражение, воспалительную, аллергическую реакцию, токсикоз; при покусах или персистенции клещей травмируется кожа, нарушается ее целостность, открываются ворота инфекции; при обильной инвазии возможно развитие анемии, истощение, снижение иммунитета; являются переносчиками опасных инфекций и инвазий (пироплазмоз, эрлихиоз, боррелиоз и т.д.). Инсектоакарициды, которые включают одно действующее вещество, как правило, не имеют достаточной эффективности. Овоциды, назначаемые в моно режиме, не дают полной уверенности, что взрослые паразиты не производят яиц. Комбинации из ингредиентов с разным механизмом действия не только более надежны, но и уменьшают развитие лекарственной устойчивости. Привыкание у насекомых приводит к снижению эффекта при длительном использовании препаратов. Поэтому целесообразна ротация различных средств с определенной периодичностью. Обработки животных обязательно сочетают с применением регуляторов роста и размножения насекомых для их уничтожения в окружающей среде (Стринадкин П.С., Андричук Б.В., Домацкий Н.И., 1982; Богданов М.Р., Мигранов М.Г., 1994; Дьяченко Ю.В., Водянов А.А., 1997; Грапов А.Ф., 1999; Енгашев С.В., Ларионов С.В., 2002; Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Ноздрин Г.А. и др., 2003). Для расширения ассортимента отечественных средств эффективных и безопасных в применении, на базе института гельминтологии (ВИГИС) разработан новый препарат с инсектоакарицидным действием «Инсакар». Изначально было предложено 4 композиции препарата с различным качественным и количественным составом активных компонентов (бензилбензоат, фипронил, перипроксифен). По результатам ранее проведенных исследований в лабораторных условиях выделили композицию 4 с последующим названием «Инсакар плюс», которая показала выраженную острую акарицидной активностью и продолжительное остаточное действие в течение 30 суток. Кроме того, выделили композицию 1, с последующим названием «Инсакар», которая также обладала продолжительным остаточным действием в течение 30 суток, но 100% гибель клещей при первом контакте с обработанной поверхностью наступала на порядок дольше (Арисов М.В. и др., 2011). На первом этапе нашей работы было определение более эффективной, безвредной и экономичной композиции из ранее выделенных двух препаратов с различным качественным и количественным содержанием активных компонентов: инсакар, содержащий в качестве действующих веществ фипронил 9%, пирипроксифен 2%, гвоздичное масло и вспомогательные компоненты; инсакар плюс, содержащий в качестве ДВ бензилбензоат 20%, фипронил 5%, пирипроксифен 2% гвоздичное масло и вспомогательные компоненты. При разработке и изучении ветеринарного препарата необходимо в первую очередь исследовать реакции, возникающие в организме животных под влиянием изучаемого лекарственного средства. Целесообразность передачи нового препарата в практику, а также возможные области его применения могут быть полностью выяснены только в результате количественной и качественной оценки разных сторон его фармакотоксикологичесих эффектов. Одним из основных задач, возникающих при изучении токсического действия препарата – это выявление побочных нежелательных эффектов и исключение отдаленного действия на животных и человека (Беленький М.Л., 1963; Кост Е.А., 1975; Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А., 2001).
Изучена острая токсичность препаратов при введении в желудок. ЛД50 «Инсакара» при введении внутрь для мышей с учетом стандартной ошибки составила 5937,5±225,3 мг/кг, ЛД50 «Инсакара плюс» - 5125±226 мг/кг. Параметры острой токсичности, установленные в опыте на мышах, служили основанием для подбора доз в опытах по определению острой накожной токсичности на крысах. Токсичность фармакологических средств исследуют при нескольких путях введения, причем необходимо использовать и тот путь, при котором показана терапевтическая активность рекомендуемого препарата. «Инсакар» и «Инсакар плюс» разработаны для борьбы с блохами, вшами, власоедами и клещами (иксодовыми, хейлителлами) собак и кошек. Препараты используют путем топикального (точечного) нанесения на кожу. В связи с этим провели исследование острой токсичности препаратов при накожном применении. Следует отметить, что в опытах по определению острой накожной токсичности использовали только крыс, так как на мышах данные исследования провести не удалось из-за больших доз исследуемых препаратов. ЛД50 «Инсакара» при накожном нанесении для крыс составила 47666 мг/кг, «Инсакара плюс» - 41833 мг/кг. По гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76) в соответствии с установленными параметрами ЛД50 при введении внутрь для мышей и кожной токсичности для крыс препараты «Инсакар» и «Инсакар плюс» относятся к 4 классу токсичности – малоопасные.
