Содержание к диссертации
Введение
Глава I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Краткая историческая справка и вопросы систематики эймерий. Краткая характеристика географических условий и климата Кубы 6
1.2.Характеристика объекта исследования 9
І.3.Симптомокомплекс, патогенез, патологоанатомическая картина эймериоза цыплят 15
1.4.Современное состояние вопроса иммунитета и иммунопрофилактики при эймериозе цыплят 20
Глава. 2 ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ ОБ АНТИКОКЦИДИЙНЫХ ПРЕПАРАТАХ.
2.1. Лечебно-профилактические мероприятия. при. эймериозах кур
Глава 3 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ 45
Глава 4 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
4.1. Характеристика Е. tenella /кубинский. штамм/ 53
4.2. Определение вирулентности /кубинский штамм/ 84
4.3. Изучение иммуногенного свойства штамма Eimeria tenella 86
4.4. Сравнительная оценка антикокцидийных свойств ардшона-25 и стенорола при экспериментальном эймериозе цыплят 87
4.5. Оценка стенорола и ардинона-25 в зависимости от срока заражения цыплят 91
4.6. Влияние ардинона-25 и стенорола на формирование иммунитета к эймериозу у цыплят 94
Глава 5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 97
ВЫВОДЫ 104
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 106
- Краткая историческая справка и вопросы систематики эймерий. Краткая характеристика географических условий и климата Кубы
- Лечебно-профилактические мероприятия. при. эймериозах кур
- МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ
- Характеристика Е. tenella /кубинский. штамм/
Краткая историческая справка и вопросы систематики эймерий. Краткая характеристика географических условий и климата Кубы
Возбудителями эймериозов кур являются паразитические простейшие организмы, которые относятся к типу Erotozoa, классу Spoorozoa, подклассу Coccidiomorpha » отряду Ooccidiida подотряду Elmiriida , семейству Eimiriidae , роду Eimeria (Хейсин Е.М., 1967).
Впервые эймерий у кур обнаружил s. Rivoita в 1878 году. Массовое заражение цыплят эймериозом наблюдал в 1891 году Railliet et Luoet . Они впервые описали паразита, обнаруженного в слепых отростках кишечника и вызвали первое экспериментальное заражение цыплят. Исследованному простейшему дали название Coecidium tenella . В 1909 году Fautham Н.В, включил этот вид в род Eimeria и назвал его Eimeria tenella»
В СССР первые исследования по эймериозу кур проведены В.Л.Якимовым и Й.Г.Галузо в 1929 году.
Первые целенаправленные работы по эймериозам опубликовал Tyzzer Е, в 1929 году, в которых он характеризовал специфичность кокпидий кур, их морфологические особенности, основные типы жизненного цикла: подробное описание размеров ооцист, спор, величины шизонтов, мерозоитов, макрогаметоцитов, места локализации паразитов, время споруляции и сроки предлатентного периода. Помимо этого, исследователь также описал три новых вида кокпидий: Eimeria mitis, Е. maxima, Е. aeervulina.
В 1930 году Johson w. привел данные по описанию двух новых видов ізймерий: в, necatrix, Е, proecox.
В 1938-42 гг. Levine Р» зарегистрировал у кур еще два новых вида: В. hagani , В» brunetti В 1964 году Edgar S», Seibold 0, описали новую кокцидию Е. mivatі.
Первые систематические изучения эймерий и эймериоза кур в Республике Куба относятся к периоду промышленного развития птицеводства в Республике - это начало 70-х годов (Perez R. 1970; Carbonell М 1972; Olazabal Е., Cruz м, 1975)
Республика Куба расположена на 1600 островах кубинского архипелага. Самый большой из островов - остров Куба, который находится в тропической зоне между 70 и .73 северной широты и
- 8 74 и 85 восточно долготы. Протяженность береговой полосы 1250 гая., подвергающаяся действию пассатов северо-западного направления зимой и западного и северо- западного летом.
Климат тропический, пассатный, с ярко выраженным дождливым сезоном - с мая по октябрь. Средняя температура в феврале +22,1 С, в августе +27,6С. Минимальная температура не нижн +1С, максимальная достигает +38,6С в тени. Годовая суша осадков на равнинах 700-2200 мм. в горах до 2200 мм. В сезон дождей наблюдается два максимума: июньский соответствует периоду зенитальных дождей", октябрьский связан с прохождением тропического фронта, на линии которого возникает разрушительные урагаїш, захватывающие, главным образом, западные районы Кубы. Сухой сезон продолжается с ноября по апрель и наиболее ярко выражен на равнинах юга.
Островная конфигурация, протяженность и наличие теплого Гольфстрима определяют незначительную амплитуду годовых термальных изменений, без существования известных четырех времен года, а выделение жаркого дождливого и менее жаркого сухого периодов года. Относительная протяженность и их дождевые отличия находятся в зависимости от зон высокого давления, антициклона Северной Атлантики (Академия Наук Кубы и СССР, IS70).
Лечебно-профилактические мероприятия. при. эймериозах кур
Сульфаниламидные препараты. Важным этапом в развитии хи-миопрофилактики кокцидиозов явилось открытие сульфаниламидов. Впершеьеуіпе P.P. (1939) практически применил сульфаниламидные препараты для борьбы с кокцидиозами птиц.
Levine P.P. (1941, 1943, 1945), Wehr Е.Е. ,Farr М.М. (1945) установили, что добавление сульфагуанидина в коря в 0,5-1 % концентрации оказывает заметное кокоцидиостатическое действие на эндогенные стадии развития Е. tenella и Е. necatrix
Ряд авторов (Hawkins Р.А. , (I943),Horton-Smith 0.(1948, 1953), Davies S.P.M. , Kendall S.B. , (1954) и др.) с успехом применяли 0,2 % водный раствор натриевой соли сульфадимезина.
Йлюшечкин Ю.П. (1965), Заринь Р.К. (1966) показали хороший терапевтический эффект сульфадимезина при кокцидиозах.
Йлюшечкин Ю.П. (1965) установил, что цыплята, которым вводили сульфадимезин в дозе 30 мг на голову через 72 часа после заражения клинически не переболевали кокцидиозом и не выделяли ооцист кокцидий.
По мнению GeisslerH. (1958) наиболее эффективными сульфаниламидными препаратами при кокцидиозах кур являются сульфадимезин и сульфахиноксалин.
Эффективность сульфахиноксалина при кокцидиозе птиц показали Delaphon et al.(I947), Harwood P.D. , Stunz D.I.(1953), Siegmanan 0. (I956),Horton-Smith C, bong P. (1956) и другие.
WaXetzky E.,Hughes CO. (1946), Keser J.S. (1948) сообщают, что для получения хорошего терапевтического действия при кокцидиозе необходимо как можно раньше достигнуть высоких концентраций сульфаниламидов в крови птиц, однако, показано, что при длительном применении сульфаниламидов у птиц появляются симптомы отравления. Pranks J.P.(I947),Horton-Smith С (1948) и Gerriets Е. (1962), применяя сульфаниламидную терапию отметили токсическое явление у птиц.
Для профилактики отравления птиц Horton-SmithQ.,Boylond (1946) рекомендуют применять сульфаниламидные препараты не более 7 дней подряд. Clarke ЙЦЬ. (1962, 1964) предложил для профилактики и лечения кокцидиоза птиц препарат дарвисул - смесь 0,001 % ди-авердина и 0,008 % сульфахиноксалина по отношению к корму. Сочетание сульфахиноксалина и диавердина позволило не только снизить токсичность сульфахиноксалина, но значительно повысить его кокцидиостатическую активность при заражении птиц различными видами кокцидий.
Metroveck М.., Baurnfeind J. (1967) в опытах, проведенных на 1669 цыплятах, показали, что сульфанилметаксин обладает высокой химиотерапевтической активностью против всех патогенных видов кокцидий при применении его в 0,05 % концентрации с питьевой водой. Он хорошо задерживается тканями, медленно выделяется из организма и проявляет слабую токсичность.
Ахаев Г.А. с соавт. (1982) использовали в целях профилактики химкокцид с дайметоном при кокцидиозе кур. В корм цыплятам с первого дня опытного заражения вводили: 5 дней химкокцид в дозе 0,007 %, 5 дней - дайметон (сулфамонометоксин) в дозе 0,05 % к корму, чередуя их в течение 30 дней. Падеж в опытной группе (I) был 2,8 %, а в зараженном контроле (П) 47,1%, средняя живая масса одной головы подопытной группы 419 г, а в контрольной незараженной 414 г. В 45-и дневном возрасте всех цыплят заразили 700 тыс ооцист. В течение 20 дней в I и П группах падежа не было, а в Ш пало 61,4 %. Данная схема обеспечивает у цыплят формирование иммунитета к этой болезни.
Материал и методы исследования
Работу проводили на кафедре паразитологии им. В.Л.Якимова, научно-исследовательской лаборатории сельскохозяйственной протозоологии Ленинградского ветеринарного института и в сельскохозяйственном институте Баямо, провинция Гранма, Республика Куба. В экспериментах использованы 755 цыплят гибрид брой-лер-6, которых получали в суточном возрасте из инкубатора племенной птицефабрики. Цыплят выращивали в лабораторных условиях, исключающих их инвазирование эймериями извне. Для исследования использовали полевой штамм Elmeria tenella , который выделяли из слепых отростков кишечника цыплят, полученного от спонтанно зараженных эймериями цыплят в научно-исследовательской станции сельскохозяйственного института Баямо, а также антикокцидийные препараты: стенорол (галофугинон), арденон-25, полученные во Всесоюзном Государственном научно-контрольном институте ветеринарных препаратов.
Характеристика препаратов: :Стеноролі (галофр"инон) бром --гидрохлоробром-7, синтезировала фирма Roussel-Uclaf во Франции. Его применяют в 0,05$ к корму против всех видов кок-цидий кур и индеек. Активное вещество препарата было выделено из алкалоидов естественного продукта азиатского растения Di-chxoa Febrifuga Lour В каждом кг стенброла содержится 6 г галофугинона. Стенорол термостабилен. Ардинон-25 приготовлен в ВЕЛ3 - премикс широкого спектра действия, содержит 25$ действующего начала (ампролиума). С профилактической целью препарат используют в доза 0,05 % к корму в течение 7-Ю недель, с ле- чебной - из расчета 0,12 % в течение 4-5 суток.
Получение и концентрация ооцист. С целью получения большого количества ооцист цыплят 15-дневного возраста, выращенных в условиях, исключающих спонтанное заражение их эймериями, заражали по 5000 спорулированных ооцист. Одцисты эймерий от зараженных цыплят собирали в течение первых трех суток патентного периода. Существует несколько методик получения ооцист эймерий из фекальных масс или непосредственно из тканей кишечника. В зависимости от целей использования ооцист, требуется и определенная степень их обработки.
В наших экспериментах использовали флотационный метод -- согласно ГОСТ 25383-82 (Тимофеев Б.А. и др., 1982), который заключается в следующем: помет, содержащий неспорулированные ооцисты кокцидий, заливали водопроводной водой в соотношении 1:3, размешивали в миксере и фильтровали через один слой марли. Фильтрат помещали в 100 мя центрифужные стаканы и центрифугировали при 2000 об./мин. в течение 2 минут. Надосадочную жидкость сливали и к осадку добавляли концентрированный раствор поваренной соли, тщательно перемешивали с помощью стеклянной палочки и снова центрифугировали при 2000 об/мин. в течение 2 минут. Надосадочную жидкость, содержащую ооцисты, собирали в мерные однолитровые стаканы, которые доливали водопроводной водой в соотношении 1:10, отстаивали в течении суток. Затем жидкость осторожно сливали, а оставшиеся в осадке ооцисты эймерий помещали в колбу и заливали 2 % раствором бихромата калия. Для споруляции ооцисты эймерий помещали в термостат на 4-5 суток при +26-(+28)С и взбалтывали 3-4 раза в день.Процесс сгруляции ооцист ;эймерий определяли через 2-Зсуток путем под- счета в мазке первых попавшихся 100 ооцист. После окончания спорудирования суспензию с ооцистами эимерийг. сохраняли с уровнем жидкости, не превышающим 5-7 см и не больше 500 тыс. ооцист в мл, в холодильнике при температуре 4-6С. Культуры ооцист в колбах периодически стряхивали для лучшей аэрации. Такие ооцис-ты использовались в наших экспериментах.
Характеристика Е. tenella /кубинский. штамм/
Объект нашего исследования - Е. tenella» доставлен автором этой диссерта ционной работы из провивуции Гранма, Республики Куба. Приступая к изучению этого паразитического простейшего, мы не располагали данными по его жизненному циклу, а также ничего не было известно о морфологии стадий развития жизненного цикла возбудителя как на световом, так и на электронномик-роскопическом уровне.
Было известно, однако, что промышленное птицеводство в провинции Гранма несет большие экономические потери от эимериоза кур. При этом кубинские специалисты считают, что большая роль в этих потерях принадлежит одному из самых патогенных видов -- Е. tenella . Известно также, что несмотря на затраты больших усилий и средств на борьбу с эймериозами, эймерии все еще остаются постоянной угрозой птицеводству и малейшее ослабление лечебно-профилактических мероприятий ведет к массоввому заболеванию и гибели птиц, значительному экономическому ущербу в Республике Куба.
В этой связи, несомненно, представляло интерес и практическую важность изучение патогенного возбудителя болезни птиц в Республике Куба (провинция Гранма) - Е. tenella , выяснение его дизненного цикла развития - экзогенные и эндогенные стадии, а также морфологические особенности паразита на разных эндогенных стадиях развития при исследовании в световом и электронном микроскопе. Знание объекта, в должной степени ответственного за экономический ущерб, позволит целенаправленно, научно обоснованно разрабатывать лечебно-профилактические мероприятия.
А. Жизненный цикл Е. tenella . Изучаемые паразитические простейшие - эймерий, развивались в одном хозяине - цыплятах, от спорулированной до неспорулированной ооцисты, последняя выделялась во внешнюю среду. Жизненный цикл их подразделялся на три фазы: спорогония, шизогония и гаметогония, как было описано в более ранних работах на примерах других штаммов Е. tenella (Tyzzer et al. 1932; Gill et Ray, 1957; Е.М.Хейсин, 1967). Спорогония ооцист происходила вне организма цыплят во внешней среде и их по-праву относят к экзогенным стадиям развития эймерий.
Эндогенное развитие внутри организма цыплят начиналось со стадии зрелой ооцисты, прошедшей спорогонию, инокулированной $4т be . Из ооцисты выходили спорозоиты, которые проникали в эпителиальные клетки слизистой оболочки слепых отростков кишечника. С этой инвазионной стадии происходило внутриклеточное развитие эймерий, которое характеризовалось бесполым множественным размножением (шизогонией) и половым процессом - гаметогони-ей.
Процесс шизогонии был зафиксирован у изучаемого нами штамма Е. tenella через 18 ч. после заражения цыплят ооцистами, который характеризовался одноядерным шизонтом или трофозоитом. Затем, в результате продолжающегося процесса шизогонии, происходило резкое увеличение количества паразитов в организме зараженного хозяина. Бесполое размножение эймерий продолжалось до 132 ч., хотя на 5-6-е сутки у зараженных цыплят уже отмечали начало развития половых стадий паразита - макро- и микрогамето цитов.
