Введение к работе
Актуальность темы. Меланома кожи является одной из агрессивных форм злокачественных опухолей, обладающей высокой потенцией местного роста, регионарного метастазирования, способностью к диссеминации по коже, множественному метастазированию. Развитие метастазов в лимфатической системе наблюдается в 70% случаев меланомы. Обычно поражаются печень, легкие, мозг и костная ткань. Именно метастазирование на ранних стадиях обусловливают высокую смертность и неэффективность терапии данного заболевания.
Несмотря на достижения последних десятилетий, лечение меланомы кожи остается крайне трудной проблемой. У каждого десятого больного меланому выявляют в IV стадии, когда уже имеет место инвазия и метастазирование, и методом лечения является химиотерапия с использованием дакарбазина, производных нитрозомочевины и платины. Эффективность такой терапии остается низкой из-за высокой резистентности клеток меланомы и/или быстрой индукции множественной лекарственной устойчивости при воздействии противоопухолевых препаратов.
Среднегодовой темп прироста заболеваемости меланомой в мире составляет около 5% (в США – 4%, в России – 3,9%) и может считаться одним из самых высоких среди всех злокачественных опухолей, после рака легкого. Ежегодно в нашей стране выявляется около 8000 пациентов с диагнозом меланома кожа.
Диссеминированная меланома кожи считается практически инкурабельным заболеванием. При использовании химиотерапии выживаемость больных с метастазами меланомы варьирует от 6 до 12 мес., а 5-летняя выживаемость составляет только 5%
Небольшие успехи химиотерапии послужили стимулом к созданию и изучению комбинирования ее с цитокинами. В клинических исследованиях лечебную активность показали интерлейкин-2 (ИЛ-2), -интерферон (-ИФН), фактор некроза опухоли альфа (ФНО-). Изучение роли цитокинов в лечении злокачественных новообразований является одним из современных направлений в онкологии.
Среди новых препаратов ФНО большой интерес представляет отечественный рекомбинантный человеческий препарат фактора некроза опухоли альфа – альнорин.
Таким образом, представляет интерес углубления знаний о механизмах гибели опухолевых клеток in vitro при комбинировании химиотерапии с цитокинами, получение экспериментальных доказательств свидетельствующих о повышении эффективности терапии.
Целью работы является изучение in vitro эффективности комбинирования альнорина с химиопрепаратами в усилении цитотоксического действия противоопухолевых препаратов и индукции ими апоптоза в клеточных линиях меланом.
Задачи исследования:
-
Определить чувствительность клеточных линий меланом к цитотоксическому действию химиопрепаратов in vitro.
-
Оценить эффективность комбинирования альнорина с химиопрепаратами в клетках меланом.
-
Оценить лекарственно-индуцированный апоптоз в сочетании с альнорином на клеточных линиях меланом с применением современных методов регистрации апоптоза.
-
Исследовать влияние фактора некроза опухоли- (альнорин) на экспрессию в клетках меланом маркера апоптоза СD95 и белков – продуктов генов, регулирующих апоптоз: bcl-2 и bax.
Научная новизна. Впервые установлена in vitro различная чувствительность клеток меланом, происходящих от различных больных, к цитотоксическому и апоптозиндуцирующему действию противоопухолевых препаратов, применяемых в терапии меланомы – дакарбазину (DTIC), кармустину (BCNU), нидрану (ACNU) и аранозе. Впервые продемонстрировано усиление фактором некроза опухоли- – отечественным препаратом альнорином - чувствительности клеток меланом к цитотоксичности этих препаратов. Показана способность фактора некроза опухоли- в сочетании с противоопухолевыми препаратами усиливать индукцию ими апоптоза в клетках меланом. Впервые показано, что противоопухолевое действие химиопрепаратов in vitro осуществляется в два этапа: при начальном контакте клеток с препаратами в течение первых 24 часов от 40 до 80% клеток погибает без признаков апоптоза, и лишь в последующие 24-48 часов выявляется апоптотичская гибель оставшихся клеток. Получены данные о различной экспрессии в клетках белков генов - регуляторов апоптоза.
Научно-практическая значимость. Полученные экспериментальные данные могут лечь в основу повышения эффективности противоопухолевой химиотерапии меланомы фактором некроза опухоли (альнорином).
За время выполнения работы в отделении химиотерапии и комбинированного лечения злокачественных опухолей уже получены первые результаты об увеличении безрецидивной и общей выживаемости больных, получавших стандартную терапию после предварительного лечения альнорином.
Апробация работы. Апробация диссертационной работы состоялось 27 января 2012г. на совместной научной конференции лаборатории клинической иммунологии опухолей, лаборатории иммунологии гемопоэза, отделения химиотерапии и комбинированного лечения злокачественных опухолей, отделения биотерапии опухолей НИИ клинической онкологии, лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФБГУ «РОНЦ имени Н. Н. Блохина» РАМН.
Материалы работы были представлены на 19-м Международном противораковом конгрессе ICACT (Париж, 2008г.), на V съезде онкологов и радиологов СНГ (Ташкент, 2008 г.), на 20-м Международном противораковом конгрессе ICACT (Париж, 2009г.), на XIV Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И.Иоффе (Санкт-Петербург, 2011), на 9-м совместном заседании международного общества по исследованию интерферона и цитокинов ICS/ISICR (Флоренция, 2011 г.).
Публикации. По материалам работы опубликовано 12 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 129 источников, из которых 15 отечественных и 114 зарубежных авторов. Работа изложена на 128 страницах машинописного текста, иллюстрирована 16 таблицами и 35 рисунками.
