Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. гуморальный противоопухолевый иммунитет при раке молочной железы 7
Гуморальный противоопухолевый иммунитет при раке молочной железы. (Общие положения) 7
Углеводные детерминанты опухолевых клеток 19
Муцины 21
Изменения углеводов муцинов при опухолях 25
Клиническое применение опухолеассоциированных углеводных антигенов 30
Иммунный ответ на углеводные антигены 35
Gal (Н-3 GlcNAc (Lec ) 39
ГЛАВА 2.Характеристика больных и методы исследования 42
Результаты собственных исследований 49
ГЛАВА 3. Субпопуляции В-лимфоцитов у больных раком молочной железы: Lec-специфичные В-клетки 49
ГЛАВА 4. Взаимосвязь субпопуляционного состава В-лимфоцитов с клиническими показателями и антительным ответом на Lec у больных первичным операбельным раком молочной железы 60
4.1. Показатели гуморального противоопухолевого иммунитета у больных первичным операбельным раком молочной железы : 60
4.2. Взаимосвязь наличия высокоаффинных к Lec В-лимфоцитов с субпопуляциями В-клеток 64
4.3. Взаимосвязь между уровнями MUC1 и антител к MUC1 (анти-Ьес) в сыворотке крови больных операбельным раком молочной железы 79
Глава 5. Антитела к Lec - детерминанте антигена MUC1 в сыворотке крови больных раком молочной железы на различных стадиях наблюдения и лечения 79
5.1. Взаимосвязь между концентрацией в крови опухоле-ассоциированного Антигена С А
5.3 Углеводная детерминанта MUC1 и специфическими показателями связывания Lec (другая углеводная детерминанта MUC1) сывороткой крови больных раком молочной железы (наличием антител к Lec) 82
5.2. Взаимосвязь наличия антител к Le с концентрацией иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови больных раком молочной железы 85
5.3. Взаимосвязь между уровнями анти-Еес и группами крови больных раком молочной железы 90
Заключение 96
Выводы: 101
- Гуморальный противоопухолевый иммунитет при раке молочной железы. (Общие положения)
- Изменения углеводов муцинов при опухолях
- Показатели гуморального противоопухолевого иммунитета у больных первичным операбельным раком молочной железы
- Углеводная детерминанта MUC1 и специфическими показателями связывания Lec (другая углеводная детерминанта MUC1) сывороткой крови больных раком молочной железы (наличием антител к Lec)
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Иммунные механизмы противоопухолевой защиты чрезвычайно многообразны. Главными эффекторами, осуществляющими цитотоксическое действие в отношении опухолевых клеток, считаются Т-киллеры (CD8+) и NK-клетки. T-лимфоцшы реализуют свое действие через распознавание посредством TCR (Т-клеточного рецептора) опухолеассоциированных пептидов в контексте молекул HLA на мембране злокачественных клеток. Поскольку иммунизация Т-клеток осуществляется профессиональными АПК (антигенпрезентирующими клетками), то большое внимание в современных исследованиях уделяется дендритным клеткам и вакцинам на их основе. Реализация цитотоксического действия примированных Т-киллеров возможна только в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих молекулы HLA-I класса. Напротив, действие NK-клеток возможно в отношении клеток с видоизмененными или утраченными молекулами HLA.
Т-клетки и NK-клетки не распознают углеводные детерминанты опухолевых клеток. Вместе с тем, значительная часть опухолеассоциированных антигенов - это углеводные (карбогидратные, отсюда аббревиатура СА) антигены. На их определении во многом основаны диагностика и мониторинг опухолевого процесса по сывороточным маркерам (СА 15-3, СА 125, СА 19-9 и т.д.). Углеводные детерминанты опухолевых клеток эффективно распознаются антителами - то есть эффекторами гуморального иммунитета.
В последние годы гуморальный иммунитет не изучался столь интенсивно, как клеточный иммунитет у больных раком молочной железы. Вместе с тем, накоплен большой фактический материал, указывающий на важную роль В-клеточного звена иммунитета у больных раком молочной железы:
1. В-лимфоциты так же, как и Т-лимфоциты инфильтрируют опухолевую ткань и характеризуются функциональной активностью, проявляющейся в формировании фолликулоподобных структур со светлыми центрами.
2. В-клетки, инфильтрирующие ткань молочной железы, олигоклональны, могут иметь специфичность к опухолеассоциированным антигенам.
3. У части больных раком молочной железы отмечается массивная плазмоклеточная инфильтрация опухоли, иммуноглобулины этих клеток олигоклональны, часть клонов специфична к опухолевым антигенам.
4. В эксперименте внутривенное введение небольшого числа раковых клеток иммунным животным не сопровождается развитием опухоли. Эти клетки эффективно элиминируются антителопосредованными иммунными механизмами.
5. При наличии микрометастазов рака молочной железы в костном мозге выявляются кластеры плазматических клеток.
6. Существуют опухолеассоциированные углеводные детерминанты (выявляемые антителами LU-BCRU-G7), экспрессия которых клетками рака молочной железы ассоциирована с неблагоприятным прогнозом. Учитывая их высокую иммуногенность и возможность индукции специфического антительного ответа, эти молекулы могут явиться потенциальными мишенями противоопухолевой иммунотерапии.
Все выше сказанное дает основание для проведения исследований В-клеточного звена иммунитета на современном уровне с учетом углубленного субпопуляционного состава и клональности В-лимфоцитов, а также плазмоцитов крови и костного мозга, оценки наличия специфических антител к опухолеассоциированным детерминантам в сыворотке крови больных.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Характеристика показателей В-клеточного звена иммунитета у больных раком молочной железы.
ЗАДАЧИ ;j Охарактеризовать субпопуляции и клональность В-клеток периферической крови у больных раком молочной железы. vGal P 1-3 GclNAc в сыворотке крови больных и здоровых доноров. t/Дїзучить особенности связывания опухолеассоциированного дисахарида Gal (3 1-3 GclNAc В-клетками у больных раком молочной железы. Сопоставить показатели гуморального иммунитета с клинико-морфологическими характеристиками рака молочной железы.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Впервые детально изучены субпопуляции В-лимфоцитов периферической крови больных раком молочной железы. Особенностью иммунофенотипа В-лимфоцитов у больных раком молочной железы в сравнении с донорской группой является более высокая экспрессия антигена CD23. В 67% случаев рака молочной железы среди В-лимфоцитов крови присутствуют высокоаффинные к Lec В-клетки, которые включают 2 популяции - CD5+ и CD5-. Выраженный антительный ответ на Lec наблюдается у 30% больных раком молочной железы. Высокие титры анти-Lec антител находятся в реципрокных взаимоотношениях с сывороточными уровнями опухолеассоциированного антигена СА 15-3 и практически не наблюдаются при высоких концентрациях маркера. У больных с высокими титрами анти-Le0 отмечаются повышенные концентрации сывороточного IgM.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ
Полученные в работе результаты могут иметь практическую значимость как для клинической онкоиммунологии, так и для онкологии.
Значимость для онкоиммунологии определяется тем, что разработан алгоритм для более точной оценки содержания анти-Ьес специфичных В-клеток в периферической крови больных раком молочной железы. Отличием этих клеток от В-лимфоцитов, неспецифически связывающих Lec за счет галектинов, является высокая аффинность и экспрессия антигена CD5.
Результаты работы позволили уточнить роль В-клеточного звена в противоопухолевом иммунитете у больных раком молочной железы. Выделены группы больных с наличием антительного ответа на опухолеассоциированный антиген Gaipi-3GclNAc. Случаи с отсутствием гуморальной иммунной реакции на опухолеассоциированный дисахарид могут рассматриваться как группа больных, подлежащих дальнейшему изучению на предмет возможной иммунизации (вакцинации) или адоптивной терапии соответствующими моноклональными антителами.
Гуморальный противоопухолевый иммунитет при раке молочной железы. (Общие положения)
Иммунные механизмы противоопухолевой защиты чрезвычайно многообразны. Главными эффекторами, осуществляющими цитотоксическое действие в отношении опухолевых клеток, считаются Т-киллеры (CD 8+) и NK-клетки. Т-лимфоциты реализуют свое действие через распознавание посредством TCR (Т-клеточного рецептора) опухолеассоциированных пептидов в контексте молекул HLA на мембране злокачественных клеток. Поскольку иммунизация Т-клеток осуществляется профессиональными АПК (антигенпрезентирующими клетками), то большое внимание в современных исследованиях уделяется дендритным клеткам и вакцинам на их основе. Реализация цитотоксического действия примированных Т-киллеров возможна только в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих молекулы HLA-I класса. Напротив, действие NK-клеток возможно в отношении клеток с видоизмененными или утраченными молекулами HLA.
Т-клетки и NK-клетки не распознают углеводные детерминанты опухолевых клеток. Вместе с тем, значительная часть опухолеассоциированных антигенов - это углеводные (карбогидратные, отсюда аббревиатура СА) антигены. На их определении во многом основаны диагностика и мониторинг опухолевого процесса по сывороточным маркерам (СА 15-3, СА 125, СА 19-9 и т.д.). Углеводные детерминанты опухолевых клеток эффективно распознаются антителами — то есть эффекторами гуморального иммунитета.
В последние годы гуморальный иммунитет не изучался столь интенсивно, как клеточный иммунитет у больных раком молочной железы. Вместе с тем, накоплен большой фактический материал, указывающий на важную роль В-клеточного звена иммунитета у больных раком молочной железы.
В-лимфоциты так же, как и Т-лимфоциты инфильтрируют опухолевую ткань и характеризуются функциональной активностью, проявляющейся в формировании фолликулоподобных структур со светлыми центрами.
Медуллярный рак молочной железы - это уникальная разновидность инфильтративного протокового рака, характеризующаяся выраженной лимфоидной инфильтрацией и более благоприятным прогнозом. Характерным признаком данной формы рака является выраженная лимфоплазмоцитарная инфильтрация (Ridolfi et al., 1977), а также повышенный апоптоз опухолевых клеток. Опухолевые зоны инфильтрированы активированными CD8+ Т-цитотоксическими гранзим В-позитивными лимфоцитами, которые разрушают опухолевые клетки путем апоптоза (Yakirevich et al., 2002). На мембране апоптотических раковых клеток экспрессируется (3-актин, который распознается гуморальной иммунной системой. Фрагменты актина обнаруживаются также в ткани рака молочной железы. Анализ лимфоплазмоцитариых клеток, инфильтрирующих медуллярный рак молочной железы, показал, что они продуцируют олигоклональные IgG, специфичные, в основном, к р-актину.
Таким образом, гуморальный иммунный ответ, направленный против антигенов клеток медуллярного рака молочной железы, не является опухолеспецифическим, по своей природе он ближе к аутоиммунным реакциям (Hansen et al., 2001). Разумеется, оценить клиническое значение подобной инфильтрации и продукции антител к антигенам апоптотических раковых клеток чрезвычайно сложно. Большее значение имеет, по видимому, сам феномен апоптоза, присущий медуллярному раку молочной железы. В любом случае, гуморальный иммунный ответ направлен у данной категории больных лишь к апоптотическим клеткам, что явно недостаточно для элиминации опухоли.
Отсутствие специфичности к антигенам опухолевых клеток IgG-антител, продуцируемых интратуморальными В-лимфоцитами, показано при инфильтрирующем протоковом раке молочной железы (Coronella et al., 2002). В-лимфоциты формировали структуры типа фолликулов, содержащих фолликулярные дендритные клетки и зародышевые центры, которые в отличие от зародышевых центров лимфатических узлов не имели темной зоны (в темной зоне зародышевых центров лимфатических узлов сосредоточены центробласты активно делящиеся клетки, в которых происходят соматические гипермутации). Интересно отметить, что имела место продукция антител IgG класса, более 60% которых были клональны (от 4 до 11 клональных групп). Установлено, что клоны В-лимфоцитов происходили из общего предшественника, то есть имели место соматические гипермутации и селекция наиболее аффинных клонов в ткани рака молочной железы.
К аналогичным выводам пришли Nzula et al. (2003). Авторы показали, что В-лимфоциты в ткани рака молочной железы подвергаются антиген-управляемой пролиферации, соматическим гипермутациям и аффинному созреванию in situ. Эти клетки родственны по происхождению не только в пределах одного скопления В-лимфоцитов, но и в различных скоплениях, то есть мигрируют в ткани рака молочной железы. Кластеры В-лимфоцитов не имели типичных признаков фолликулярных центров - мантии, светлой и темной зон зародышевых центров. Вместе с тем присутствовали все компоненты, необходимые для антиген-управляемой пролиферации и созревания клеток в зародышевом центре - Т- и В- / лимфоциты, CD21-позитивные фолликулярные дендритные клетки. Тканевые кластеры В-лимфоцитов с подобной организацией имеют место при синдроме Шегрена, ревматоидном артрите, а также в тимусе больных миастенией гравис (Stott et al., 1998; Randen et al., 1995; Sims et al., 2001).
Факт того, что в большинстве случаев гуморальный иммунный ответ IgG-класса развивается на нормальные дифференцировочные антигены клеток, энзимы, рецепторы в случаях их эктопической экспрессии на мембране, гиперэкспрессии или мутаций многократно подтвержден. Интерес к гуморальному иммунитету при раке обусловлен еще и тем, что антитела являются наиболее быстро растущим классом лекарственных средств (Carter, 2001; Glennie et al., 2003). В настоящее время 8 антител используются для лечения опухолей в США и еще 24 проходят клинические испытания I/II фазы (Carter et al., 2004). Все эти антитела относятся к IgG-классу. При раке молочной железы из числа этих антител используются или проходят клинические испытания следующие: анти-Нег2 - герцептин (трастузумаб), омнитарг (пертузумаб); CD 152 (CTLA4) - MDX-010; EpCam (антиидиотипическая вакцина) - IGN-101.
Изменения углеводов муцинов при опухолях
Периферические углеводные антигены часто изменяются при! синтезе гликолипидов и гликопротеинов: в аденокарциномах. В : целом, содержание углеводов в опухолях уменьшено по сравнению с нормальными тканями. Например, было показано, что количество всех, пяти типов Сахаров; муцинов толстой кишки было снижено при раке толстой кишки и составило около 50% от их количества в неизмененной ткани= органа. Уменьшение- касается; как общего количества, так и длины цепей олигосахаридов.
Что касается к опухолеспецифичных антигенов.
Аберрантная экспрессия антигенов группы крови, в том числе Lewis-антигенов, отмечается при многих злокачественных новооб ачественных изменений, то их можно отнести к 5 категориям: Г. увеличение количества различных антигенов по сравнению5 с нормальными тканями. 2. появление новых антигенов в норме присутствующих в фетальных тканях (онкофетальных антигенов). 3. экспрессия антигенов, схожих с антигенами группы крови. 4. делеция антигенов, в норме экспрессируемых тканями, что может привести к проявлению предшествующих или внутренних антигенных структур. 5. синтез уникальных разованиях: опухоли легких (Jordon et al., 1989), толстой кишки (Hanish et al., 1992, Cooper et al., 1991), желудка (Sakamoto et al., 1989, Singal et al., 1990) и почек (Cordon-Cardo et al., 1989). Приведем пример изменения антигенов, связанных с группами крови, при колоректальном раке. У плода антигены А, В, Н, Lea и Leb экспрессируются на протяжении всей толстой кишки, однако все они, кроме Lea, исчезают в дистальном отделе толстой кишки после рождения. Эти антигены появляются вновь при аденомах и карциномах, возникающих в дистальном отделе толстой кишки (Yuan et al., 1985). Наоборот, исчезновение в норме встречающихся А, В, Н, Leb-антигенов часто случается при возникновении опухоли в проксимальном отделе толстой кишки, а исчезновение Lea- при опухоли дистального отдела толстой кишки. Н-антиген, являющийся предшественником А и В - антигенов, обнаруживается в 90% случаев рака толстой кишки, когда А и В- антигены не экспрессируются. В дополнение, может наблюдаться экспрессия А, В, Н и Leb-антигенов несоответствующих группам крови больных. Эти изменения более специфичны для неопластических процессов, и не наблюдаются при гиперпластических полипах.
Экспрессия несоответствующих группе крови антигенов также описана при аденокарциномах желудка, поджелудочной железы (Itzkowits et al.,1987), гепатоцеллюлярном раке (Okada et al., 1987), раке мочевого пузыря, полости рта (Orntoft et al., 1989, Mandel et al, 1992) и яичников (Metoki et al., 1989). Индивидуумы, имеющие генотип «секретеров» (Sese/ SeSe) экспрессируют желудочный муцин с фенотипом Lea" Le +. Дисплазия или рак желудка часто приводят к экспрессии несоответствующего Lea- антигена у этих индивидуумов. Утрата АВН-антигенов при раке легкого коррелировала с метастатическим потенциалом опухоли и, соответственно, с худшим прогнозом (Matsumoto et al., 1993), однако, эта взаимосвязь не была подтверждена в другом исследовании (Gwin etal.,1994).
Синтез новых олигосахаридов также характерен для аденокарцином. Сиалирование или фукозилирование 1 типа каркасной цепи приводит к появлению СА 50 антигена и sialosyl-Lea антигена, известного как СА 19-9 (Magnani et al., 1982). Эти антигены обнаружены на гликолипидах и гликопротеинах целого ряда аденокарцином, однако их секреция (в циркуляцию или панкреатический сок) осуществляется в составе муцинов. В отличие от нормальной ткани толстой кишки экспрессия sialosyl- Lea антигена увеличивается при гиперпластических и аденоматозных полипах и при большинстве опухолей толстой кишки, независимо от их локализации и диффсренцировки. Но экспрессия sialosyl- Lea не коррелирует со стадией, плоидностью ДНК или прогнозом больных колоректальным раком. Большинство опухолей желудка, поджелудочной железы, эндометрия экспрессируют sialosyl- Lea антиген, тогда как при аденокарциномах молочной железы он обнаруживается редко.
Опухолеспецифические изменения углеводных антигенов 2 типа каркасной цепи описаны при аденокарциномах гастроинтестинального тракта, молочной железы и легких. Каркасные цепи 2 типа синтезируются как единичные или повторяющиеся неразветвленные структуры с высокой экспрессией при карциномах толстой кишки, печени и легких и отсутствуют или экспрессируются в незначительной степени в соответствующих нормальных тканях.
Короткие цепи Lex -детерминант экспрессируются в неизмененной слизистой толстой кишки с уменьшением градиента от проксимального к дистальному концу и отсутствуют в норме в ткани поджелудочной железы. Экспрессия этих антигенов повышается при колоректальном раке и особенно при раке поджелудочной железы. Дифуколизированные и сиалированные Lex атигены также редко экспрессируются в нормальном кишечнике и поджелудочной железе, но встречаются в большом количестве при аденоматозных полипах, раке толстой кишки и поджелудочной железы. Difucosyl- Lex считается одним из главных опухолеспецифичных эпитопов. Экспрессия этих антигенов в аденоматозных полипах коррелирует с более высоким потенциалом злокачественносит. Обнаружение Difucosyl- Lex в болыдинсиве гиперпластических полипах показало, что этот антиген может также экспрессироваться при гиперпластических процессах слизистой, которые не считаются предраковыми.
Показатели гуморального противоопухолевого иммунитета у больных первичным операбельным раком молочной железы
В предыдущей главе (глава 3) нами подробно изучены субпопуляции В-лимфоцитов у больных первичным операбельным раком молочной железы. Установлено, что у большинства больных (85%) присутствует популяция В-лимфоцитов, способная специфически связывать дисахарид Gal(51-3GlcNAc (Lec), высокоаффинные В-клетки с большим числом рецепторов к Gal(31-3GlcNAc (Lec) на мембране лимфоцитов выявлялись у 67% больных, что в целом соответствует частоте экспрессии антигена при раке молочной железы. Пропорция высокоаффинных Galpl-3GlcNAc (Ьес)-специфичных клеток среди В-лимфоцитов была невелика (0,6 - 3,9%, Me - 0,9%).
В настоящем разделе мы попытаемся проанализировать, существуют ли взаимосвязи между наличием (уровнями) Gaipi-3GlcNAc (Ьес)-специфичных В-лимфоцитов и клиническими характеристиками рака молочной железы, уровнями MUC1 (антиген, в структуре которого присутствует детерминанта Gal(31-3GlcNAc), концентрацией иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови и некоторыми другими показателями.
Клиническая характеристика больных раком молочной железы в зависимости от наличия и уровней Ьес-связывающих лимфоцитов.
Исследование проведено у 21 больной операбельным раком молочной железы. Высокоаффинные к Gal(31-3GlcNAc (Lec) В-лимфоциты выявлены у 14 из 21 больной (67%). Клиническая характеристика больных во взаимосвязи с наличием и процентом Ьес-специфичных В-клеток представлена в таблице 4.1.1.
Разумеется, данные, полученные на ограниченной выборке больных, не могут в полной мере отразить клинико-иммунологические взаимосвязи. Обращает на себя внимание вдвое более высокая частота опухолей малого размера (ТІ) в группе пациенток с наличием высокоаффинных В-клеток, 28,6% и 14,3% соответственно, с другой стороны индекс ТЗ отмечен в одном случае в каждой группе. При оценке сопряженности признаков взаимосвязи между ними не отмечено (р 0,05).
Сравнение антительного ответа с наличием метастазов в регионарных лимфатических узлах - индекс N - (таблица 4.1.3) отчетливо показывает на то, что при наличии гуморального ответа метастазы в лимфоузлах обнаруживаются значительно реже (64,3% и 85,7%), различия не достоверны, требуется анализ на больших группах пациентов.
Взаимосвязь наличия у больных раком молочной железы высокоаффинных к Lec В-клеток с наличием метастазов в лимфатические узлы (индекс N)
Средний возраст пациенток с наличием высокоаффинных к Lec В-клеток и без таковых не различался (55,7 ± 2,6 и 58,9+5,3 соответственно, р=0,5)
Проведение сопоставлений в зависимости от гистологического типа опухоли в данной группе пациенток было невозможным ввиду малого количества случаев инфильтративного долькового рака (2 случая).
Наличие высокоаффинных В-клеток не имело прямой ассоциации с повышенными уровнями антител к Lec (OD 2,0) в сыворотке крови больных, таблица 4.1.4
Напротив, при наличии высокоаффинных В-клеток высокие уровни антител определялись вдвое реже, чем при их отсутствии (21,4% и 42,9%, р = 0,3).
Уровни связывания антител к Lec с субстратом, оцененные методом ELISA на основании оптической плотности (ОД, см. главу «Материалы и методы»), достоверно не различались в группах больных с наличием и отсутствием высокоаффинных В-клеток: 1,64+0,16 и 1,73+0,22 соответственно, р = 0,76.
Сравнение средних уровней иммуноглобулинов в сыворотке крови в зависимости от наличия или отсутствия высокоаффинных В-клеток не выявило достоверных различий: для IgM 204,4+42,5 и 235,6±54,3, р = 0,76; для IgG 210,7+19,3 и 229,3+26,9, р = 0,58; для IgA 176,4±21,8 и 192,7+32,9, р = 0,68. Не выявлено ассоциации между наличием высокоаффинных к Lec В-клеток и повышением или снижением концентрации иммуноглобулинов различных классов (таблицы 4.1.5-4.1.7).
Как было отмечено в главе 3, наряду с анализом связывания Gal(H-3GIcNAc с В-лимфоцитами нами подробно изучен субпопуляционный состав В-клеток. Эти исследования проведены у 30 женщин (21 больная раком молочной железы и 9 -группа сравнения /6 доноров, 3 пациентки с мастопатией/).
На первом этапе анализа мы оценили наличие корреляционных связей между уровнями (процент) Lec -связывающих В-клеток и их субпопуляций (высокоаффинные, CD5-позитивные) с другими популяциями В-лимфоцитов, различающихся по иммунологическим маркерам (таблица 4.2.1.). Анализ проведен в целом по группе 30 женщин.
углеводная детерминанта MUC1) и специфическими показателями связывания Lec (другая углеводная детерминанта MUC1) сывороткой крови больных раком молочной железы (наличием антител к Lec)
Анализ, проведенный у первичных операбельных больных раком молочной железы и у здоровых женщин, позволил установить своего рода реципрокные взаимоотношения между концентрацией в сыворотке крови опухоле-ассоциированного гликопротеина MUCl (СА 15.3) и антителами к одной из его углеводных детерминант (Gal(51-3GlcNAc). Концентрация СА15.3 у больных раком молочной железы была достоверно выше, чем в норме, а уровни антител, напротив, - достоверно ниже.
Для того, чтобы оценить, насколько эта тенденция отражает некую закономерность или полученные данные являются всего лишь случайным совпадением, мы провели дополнительные исследования у 81 больной раком молочной железы на различных стадиях наблюдения и лечения, в том числе, при прогрессировании заболевания и высокими уровнями СА 15.3 в сыворотке крови пациенток. Диагноз во всех случаях был морфологически верифицирован. Продолжительность заболевания на момент исследования составила от 1 мес. до 17 лет: у 15 (18,5%) больных - свыше 5 лет, у 26 (32,1%) - от 2 до 5 лет, у 13 (16%) -от 1 до 2 лет, у 21 (25,9%) - менее года, у 6 (7,4%) продолжительность заболевания не уточнена. У всех этих больных были одновременно изучены как концентрация MUC1 (СА 15.3) в сыворотке крови, так и антитела к углеводной (Gaipi-3GlcNAc) детерминанте этой молекулы.
В анализируемой группе концентрация MUC1 (СА 15.3) находилась в диапазоне 5,70 - 585,2 Ед/мл, средн. - 49,39 Ед/мл. Уровни анти Lec (ОД) составили от 0,52 до 3,21 (средн. - 1,65). Взаимоотношения между этими двумя показателями характеризовались обратной корреляционной связью (R = - 0,131), которая, однако, не являлась достоверной (р = 0,19). Интересно, что в группе первичных операбельных больных раком молочной железы анализируемые признаки находились в положительной (недостоверной) корреляционной связи (R = 0,202, р = 0,379). Аналогичная ситуация имела место в контрольной группе (R = 0,406; р = 0,318). Следует отметить, что как в контрольной группе, так и в группе больных операбельным раком молочной железы ранних стадий концентрации СА 15.3 были у большинства больных в нормальном диапазоне. Единственной переменной, по существу, являлись уровни анти-Ьес, следовательно, проведение корреляционного анализа по указанным признакам в этих группах, возможно, не является корректным. Весьма вероятно, что уровни анти-Ьес взаимосвязаны (отрицательная корреляция) с концентрацией маркера в сыворотке крови в группе пациенток, находящихся под наблюдением на различных стадиях рака молочной железы, в том числе при прогрессировании.
Нормальные концентрации СА 15.3 в сыворотке крови имели место у 59 пациенток, повышенные - у 22. Сравнение этих 2 групп по уровням анти-Ьес в сыворотке крови выявило интересные закономерности. Отмечены достоверно более высокие значения анти-Ьес (ОД) в группе больных с нормальным содержанием СА 15.3, в сравнении с группой больных, у которых уровни маркера были повышены: 1,76 ± 0,08 и 1,36 ± 0,1 соответственно, р = 0,004. (Таблица 5.1.1).
В группе пациенток с достаточно высокими уровнями анти-Le0 (ОД 2,0; 25 больных) в сыворотке отмечены значительно более низкие значения маркера СА15.3, чем у больных с низкими и средними значениями анти-Ьес ( 2,0; 56 больных): среднее 29,99 ± 9,3 и 58,05 ±13,1 соответственно. Однако в этом случае различия между группами были не достоверны, р = 0,08.
Как видно из представленных данных, повышение уровней СА 15.3 в основном ассоциируется с достаточно низким связыванием Lec сывороткой крови пациенток. Наиболее наглядно взаимосвязь между двумя показателями иллюстрирует анализ сопряженности признаков с оценкой достоверности по критерию Хи-квадрат. Эти данные представлены в таблице 5.1.2.
Как видно из представленных данных, при наличии высоких уровней связывания Lec сывороткой крови больных лишь в трех случаях (12%) отмечено повышение СА15.3 в сыворотке крови больных (61,2; 72,1; 242,2). Частота случаев повышения маркера в группе сравнения почти в 3 раза выше (34%). Взаимосвязь между признаками высоко достоверна (р=:0,034).
Полученные данные хорошо согласуются с классическими данными по гуморальному иммунитету из области инфекционной иммунологии. При развитии гуморального иммунного ответа на тот или иной патоген или токсин нарастание титров антител сопровождается снижением уровня антигена в крови за счет клиренса комплексов антиген-антитело. При отсутствии выработки антител концентрация антигена в крови может оставаться высокой. Нейтрализующей способностью обладают в основном пентамерные антитела IgM-класса. В рассматриваемом случае антигеном является дисахарид (в составе высокомолекулярного гликопротеина), и весьма вероятный сценарий иммунного ответа состоит в продукции IgM.
Мы не располагали возможностью оценить анти-Le0 активность в зависимости от класса иммуноглобулинов. Вместе с тем, у больных анализируемой группы были определены концентрации иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови. Концентрация иммуноглобулинов в сыворотке крови определена у 80 больных данной группы.
Мы сопоставили концентрации сывороточных иммуноглобулинов различных классов с уровнями анти-Le0 активности. Получены весьма интересные закономерности. Данные относительно иммуноглобулинов класса М представлены в таблице 5.2.1.
![Значение биохимических показателей в комплексной диагностике и мониторинге метастазирования в кости рака молочной и предстательной желез [Электронный ресурс]](/i/i/4427/199270.png "Значение биохимических показателей в комплексной диагностике и мониторинге метастазирования в кости рака молочной и предстательной желез [Электронный ресурс] Пашков Михаил Витальевич")
