Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. В связи с интенсивным развитием методов иммунодиагностики и иммунотерапии онкологических больных стала очевидной важность изучения клеточных механизмов противоопухолевого иммунитета и молекулярных механизмов клеточной гибели. В последние годы появляется все больше данных о функциях тромбоцитов, прямо не связанных с тромбообразованпем. Тромбоциты могут вызывать цитолиз эндотелиальных клеток и аутолопгшых красных клеток крови, а также обуславливать IgE-, IgG-, цнтокин - зависимую цптотокспчность в отношении простейших. Аналогично Т-лимфоцитам, моноцитам, и другим клеткам иммунной системы, тромбоциты способны оказывать цитотокспческое действие на злокачественные клетки. Тромбоциты человека обладают высокой специфической пптотоксической активностью в отношении клеток линии ACL. На мембране этих опухолевых клеток были обнаружены рецепторы к адгезивному домену тромбоспондпна . Эндогенные иммуномо-дуляторы — интерлейкины, лимфокпны, рецепторы которых обнаружены на мембранах тромбоцитов, могут влиять не только на адгезию и агрегацию тромбоцитов, но и на их цитотокспческне свойства. Фактор активации тромбоцитов (PAF), стимулирующий высвобождение биологически активных веществ из секреторных гранул кровяных пластинок, вызывает увеличение пптотоксической активности тромбоцитов в концентрациях от 1(Г12М до 1(Г6М.
Тромбоциты способны в отсутствии антител оказывать цитотокспческое действие на клетки перевиваемых линий меланомы и аденокарциномы почки. При этом супернатант активированных тромбоцитов токсичен для опухолевых клеток.
Было показано, что активированные тромбином тромбоциты, также как и неактивированные проявляют цптотокспческий эффект по отношению к клеткам лпнпп К-562. В отличие от цитолиза, обусловленного неактпвн-рованнымп тромбоцитами, для которого требуется прямой контакт между тромбоцитами и клетками - мишенями, цитолиз клеток К-562 активированными тромбином тромбоцитами происходит без прямого межклеточного контакта.
Данные, полученные при электронно - микроскопическом исследовании показали, что тромбоциты, адсорбированные на поверхности опухолевых клеток - мишеней, изменяют свою ультраструктуру, включая гипертрофию аппарата Гольджп, увеличение секреторных гранул и скопление их в области контактной зоны (подобно Т-лимфоцитам).
Ингибиторы протеаз способны оказывать влияние на цптотоксическпй эффект тромбоцитов.
Это позволяет предположить, что тромбоциты способны продуцировать и высвобождать медиаторы белковой природы, способные окалывать цито-токсическое действие на злокачественные клетки.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Выделение цитотоксических белков тромбоцитов человека и изучение механизма гибели клеток - мишеней под действием активированных тромбоцитов и полученных из них белковых фракций.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В работе впервые показано, что белковые фракции, выделенные из тромбоцитов, способны оказывать цптотокспческоо действие на клетки линии аденокарциноми легких. Определены молекулярные массы цитотоксических белков, содержащихся в этих фракциях, и их цитотоксическая активность. Для белка молекулярной массы 14 кДа определена N-концевая аминокислотная последовательность и показана уникальность его структуры. Впервые проведены исследования по изучению механизма гибели клеток линии ACL под действием тромбоцитов человека и цитотоксических белков тромбоцитов и показано, что при этом детектируемая фрагментация ДНК отсутствует.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Полученные результаты значительно расширяют имеющиеся представления об эффекторах противоопухолевого иммунитета и механизмах цитотокснческого действия тромбоцитов, роли цитотоксических белков в реализации цитотокснческого эффекта тромбоцитов и механизмах цитолиза опухолевых клеток - мишеней под действием тромбоцитов и цитотоксических белков эффекторов иммунной системы.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Результаты настоящей работы были представлены на межлабораторных семинарах Института бпо-органическоп химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН и Московского фпзико - технического института, а также на межлабораторной конференции НИИ Клинической онкологии РАМН. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 122 страницах машинописного текста п состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения п списка цитируемой литературы, включающего 94 ссылки.
