Введение к работе
1. . 1.1. Актуальность проблемы.
Идентификация генетических факторов, ассоциированных с возникновением и развитием неоплазий, является одной из наиболее острых проблем современной молекулярной онкологии. Благодаря использованию молекулярно-биологических методов за последние 20 лет открыто несколько десятков генов, нарушения структуры и/или функции которых приводит к неопластической трансформации нормальных клеток и, таким образом, является причиной возникновения широкого спектра опухолей. Учитывая системный характер онкопатологий, в настоящее время при их исследовании возможен и наиболее целесообразен комплексный подход. Он подразумевает изучение наследственной предрасположенности и соматических нарушений генотипа, учет популяционно-генетических и эпидемиологических факторов, которые обусловливают формирование конкретной опухоли, характер ее прогрессии. Для развития злокачественной опухоли чаще всего необходимо накопление нескольких генетических нарушений (герминальных и/или соматических) [Hunter Т. 1991]. У больных раком легкого часто выявляются соматические мутации онкогенов семейств ras и туе [Spandidos D.A. et al. 1994]. Названные онкогены входят в группу ключевых генов, участвующих в передаче молекулярного сигнала в клетке и задействованых в процессах клеточного роста и дифференцировки [Hesketh R. 1994]. В тоже время в некоторых популяциях показана ассоциация между наличием в генотипе индивида определенных наследуемых аллелей протоонкогенов c-Ha-ras-1, mycH и риском возникновения либо характером прогрессии рака легкого [Vineis Р., Caporaso N. 1991]. Таким образом одновременное исследование герминальных и соматических особенностей названных генов у больных раком легкого представляет значительный интерес.
В настоящей работе изучался наследственный полиморфизм генов
c-Ha-ras-1, mycL1, а также некоторые соматические нарушения в локусе последнего из названных генов у одних и тех же пациентов с немелкоклеточным раком легкого и первично-множественными злокачественными новообразованиями (ПМЗН). (В составе последней группы отдельно анализировались пациенты, одной из опухолей в анамнезе которых фигурировала карцинома легкого). Неуклонный рост заболеваемости раком легкого в промышленно-развитых странах, сложность его ранней диагностики требуют интенсивных исследований в области молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с возникновением и прогрессией этой неоплазии.
1.2. Цель и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является молекулярно-биологический анализ различных аспектов полиморфизма локусов c-Ha-ras-1 и mycL1, некоторых других молекулярно-генетических маркеров, которые могут иметь значение при возникновении или прогрессии немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) и первично-множественных злокачественных новообразований (ПМЗН) человека.
Для этого предполагалось решить следующие экспериментальные задачи.
-
Создание банка ДНК, выделенных из биопсийных материалов, клеток периферической крови больных немелкоклеточным раком легкого и первично-множественными злокачественными новообразованиями.
-
Сравнительный анализ препаратов ДНК путем рестриктного картирования с помощью специфических молекулярных зондов.
-
Идентификация полиморфных аллелей генов c-Ha-ras-1 и m/cL1 как молекулярных маркеров, ассоциированных с клиническими параметрами заболевания:
а) гистологическим типом опухоли;
б) степенью распространенности метастатического процесса.
4. Исследование нарушений в локусе гена mycL1, а также в теломерном участке короткого плеча 1 хромосомы в опухолях больных немелкоклеточным раком легкого с помощью метода полимеразной цепной реакции.
. 5. Сопоставление данных молекулярно-биологического анализа структуры исследованных генов с традиционными клиническими показателями.
1.3. Научная новизна.
В настоящее время имеются работы по изучению полиморфизма протоонкогенов c-Ha-ras-1 и глусИ в связи с возникновением и прогрессией различных опухолей человека. Однако данные, полученные при обследовании пациентов различных этнических групп и популяций, не всегда совпадают. В частности это касается и немелкоклеточного рака легкого. В. настоящей работе впервые проведены комплексные исследования наследственного полиморфизма генов c-Ha-ras-1 и mycL1, а также некоторых соматических нарушений в локусе последнего гена у одних, и тех же больных немелкоклеточным раком легкого. При этом учитывались не только традиционные гистоморфологические и клинические характеристики опухолей, но и влияние канцерогенных факторов внешней среды, наследственная онкологическая отягощенность обследованных. Нами впервые показано, что наличие в геноме индивида "редкого" аллеля гена c-Ha-ras-1 может являться фактором риска возникновения аденокарцином легкого, а "общий" аллель а4 этого же гена ассоциируется с низкодифференцированными и высокометастазирующими опухолями, и таким образом является неблагоприятным прогностическим фактором НМРЛ человека.
Использованный метод тестирования микросателлитной нестабильности впервые введен в отечественную практику при изучении опухолей легкого. Его применение позволило показать, что наиболее
типичными соматическими нарушениями исследозанных микросателлитных маркеров короткого плеча 1 хромосомы при немелкоклеточном раке легкого является утрата гетерозиготности (30-40% информативных случаев). Однако, эти нарушения появляются относительно поздно в ходе прогрессии и могут свидетельствовать о длительном характере роста конкретной опухоли.
I.4. Практическая значимость работы.
Полученные данные могут послужить основой дальнейших исследований для выработки комплекса независимых молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с возникновением либо с характером прогрессии немелкоклеточного рака легкого человека. Использованный метод изучения микросателлитной нестабильности с успехом применяется для поиска новых участков генома, утрата которых приводит к возникновению определенных новообразований. В конечном итоге, тестирование подобных маркеров может использоваться в целях ранней диагностики неоплазии или при составлении индивидуального прогноза течения заболевания. В частности, при невозможности дифференциальной диагностики вновь возникшей первичной опухоли от метастаза предыдущего новообразования (от чего кардинально зависит тактика дальнейшего лечения) создание панели соматических нарушений ДНК, типичных для "ранних" этапов прогрессии определенного новообразования, может способствовать решению этой проблемы.
I.5. Апробация работы.
Диссертационная работа апробирована на совместной конференции лабораторий регуляции клеточных и вирусных онкогенов, молекулярной биологии вирусов, вирусного канцерогенеза, цитогенетики, методов скрининга канцерогенов НИИ Канцерогенеза ОНЦ РАМН 27 сентября 1996 года.
Материалы работы докладывались на 22 конференции ISOBM (Гронинген 1994), 9 Международном симпозиуме по профилактике и диагностике рака (Бостон 1994), I Съезде онкологов СНГ (Москва 1996). По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.
![Особенности клинического течения рака молочной железы в сочетании со злокачественными новообразованиями других локализаций [Электронный ресурс]](/i/i/4476/180547.png "Особенности клинического течения рака молочной железы в сочетании со злокачественными новообразованиями других локализаций [Электронный ресурс] Соколов Николай Юрьевич")
