Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Современный уровень знаний о раково-тестикулярных генах 11
1.1. Основные характеристики раково-тестикулярных генов 12
1.2. Раково-тестикулярные гены и их экспрессия в гематологических опухолях 17
1.3. Характеристика раково-тестикулярных генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME 19
1.4. Опыт использования методов иммунотерапии для лечения онкогематологических заболеваний 42
1.5. Некоторые представления о регуляции экспрессии раково-тестикулярных антигенов 43
1.6. Возможность использования раково-тестикулярных антигенов в качестве мишеней для иммунотерапии 48
1.7. Диагностическое значение экспрессии раково-тестикулярных генов при гемабластозах 50
1.8. Заключение 50
Глава 2. Материалы и методы исследования 52
2.1. Исследованные больные 52
2.2. Клеточные линии и методика их культивирования 53
2.3. Здоровые доноры 53
2.4. Выделение геномной ДНК для определения мутации JAK2V617F 53
2.5. Системы для определения мРНК целевого гена в исследуемых образцах 54
2.6. Предварительная подготовка клеточного материала к выделению общей РНК 55
2.7. Выделение РНК 56
2.8. Получение кДНК 56
2.9. Проверка специфичности работы систем 57
2.10. Проведение количественной полимеразно-цепной реакции в реальном времени 57
2.11. Обработка экспериментальных данных 58
2.12. Проверка воспроизводимости результата 58
2.13. Методы статистического анализа полученных данных 59
Глава 3. Результаты 60
3.1. Активность раково-тестикулярных генов HAGE и SLLP1 в клетках крови здоровых доноров 60
3.2. Экспрессия раково-тестикулярных генов в клетках крови у больных в дебюте ХМЛ и Ph’-негативных хМПЗ 60
3.3. Экспрессия раково-тестикулярных генов в крови и костном мозге больных хроническим миелоидным лейкозом, получающих терапию Иматинибом 61
3.4. Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных острым промиелоцитарным лейкозом 62
3.5. Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных с диагнозом диффузная В-крупноклеточная лимфома 65
3.6. Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных с диагнозом лимфома Ходжкина 66
3.7. Экспрессия раково-тестикулярных генов у больных с диагнозом фолликулярная лимфома 68
3.8. Экспрессия раково-тестикулярных генов в клетках линий К562 и WI38 69
3.9. Экспрессия раково-тестикулярных генов в клеточных линиях меланомы 69
Глава 4. Обсуждение 71
4.1. Экспрессия раково-тестикулярных генов HAGE и SLLP1 у здоровых доноров 71
4.2. Профиль экспрессии раково-тестикулярных генов GAGE1, HAGE, NY-ESO-l, MAGEAl, PASD, SCP1, SLLP1, SEMG1, SPANXA1, SSX1 и FRAME у больных ХМЛ и хМПЗ 71
4.3. Значение величины уровня экспрессии генов FRAME и PML/RARa в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза 74
4.4. Прогностическая значимось уровня экспрессии гена HAGE в дебюте диффузной В-крупноклеточной лимфомы 77
4.5. Результат исследования профиля экспрессии раково-тестикулярных генов в у больных с диагнозом лимфома Ходжкина 77
4.6. Влияние уровня экспрессии гена FRAME у больных фолликулярной лимфомой 77
4.7. Особенности активности раково-тестикулярных генов в клеточных линиях К562, WI-38 и семи линий меланомы 78
4.8. Заключение 81
Глава 5. Выводы 84
Список сокращений 85
Список литературы 87
- Опыт использования методов иммунотерапии для лечения онкогематологических заболеваний
- Клеточные линии и методика их культивирования
- Экспрессия раково-тестикулярных генов в клетках крови у больных в дебюте ХМЛ и Ph’-негативных хМПЗ
- Прогностическая значимось уровня экспрессии гена HAGE в дебюте диффузной В-крупноклеточной лимфомы
Опыт использования методов иммунотерапии для лечения онкогематологических заболеваний
Впервые иммунотерапия опухолей была применена на практике более ста лет назад. Вильям Коли, хирург, специалист по удалению опухолей, вводил токсин Коли больным, страдающим от онкологических заболеваний [1]. Систематически различные способы противоопухолевой иммуновакцинации применяются с начала 60х годов. С тех пор были достигнуты большие успехи в понимании механизмов процессинга и презентации антигенов, и лабораторные исследования позволили добиться настоящего прорыва в сфере иммунотерапии опухолей. Применяется широкий спектр методов: от инженерии моноклональных антител до открытия новых и регуляции презентации известных антигенов. Но, несмотря на такие успехи, за исключением рекомбинантных моноклональных антител, таких как Ритуксимаб (направленные против CD20), и Алентузумаб (действуют против CD52), иммунотерапия опухолей не оказывает значительного влияния на повседневное лечение больных гематологическими опухолями, находящихся в клиниках. Столь медленное внедрение иммунотерапии в арсенал практически применяемых методов лечения опухолей связано с тем, что положительные эффекты, наблюдаемые в лаборатории, не всегда воспроизводятся непосредственно при клинических испытаниях. Основные трудности возникают при попытках проведения активной противоопухолевой иммунизации, так как не всегда удается применить данный подход в связи с трудоемкостью создания индивидуальной вакцины. Например, для проведения идиотипической вакцинации с целью лечения B-клеточных злокачественных опухолей необходимо для каждого больного исследовать уникальную структуру гена, кодирующего иммуноглобулиновый рецептор, который экспрессируется в опухолевой клетке. В этой главе изложена информация о возможностях, открывшихся в связи с обнаружением раково-тестикулярных антигенов. Показано, какое влияние они оказывают на развитие знаний об иммунологии опухолей и обсуждаются трудности, с которыми могут столкнуться исследователи и клиницисты, не располагая объективными данными о свойствах раково-тестикулярных генов.
Основные характеристики раково-тестикулярных генов Сперматогенез осуществляется в семенных канальцах, представляющих собой функциональную единицу семенной железы. Результатом эффективного сперматогенеза является образование активных сперматозоидов у мужчин [2]. В течение дня в организме взрослого мужчины формируется свыше 100 миллионов сперматозоидов. Этот процесс осуществляется непрерывно с момента наступления полового созревания в возрасте 12-14 лет, и под влиянием фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов гипофиза продолжается в течение десятков лет [2-4]. Рецептором к фолликулостимулирующему гормону обладают только клетки Сертоли, расположенные в эпителии семенников [5-7]. Клетки Лейдинга, расположенные в промежуточном пространстве между семенными канальцами, в ответ на стимуляцию лютеинизирующим гормоном вырабатывают тестостерон и эстрадиол-17 [8-11]. Активность гипофиза, в свою очередь, регулируется тестостероном и эстрадиолом, а также гормонами, вырабатываемыми гипоталамусом, и в результате сложных функциональных взаимосвязей формируется система, известная как гипоталамно-гипофизарно-гонадная ось [12 17]. Гормональные и детальные морфологические изменения, происходящие в эпителии семенников, были подробно описаны уже 80 лет назад [18]. Однако на сегодняшний день остаются малоисследованными молекулярные и биохимические механизмы регуляции процессов сперматогенеза [18-25]. При описании протекания сперматогенеза различают несколько стадий: (1) самоподдерживающее митотическое деление сперматогониальной стволовой клетки и сперматогониев, (2) митотическая пролиферация и дифференцировка сперматогония в сперматоциты I и II порядка, (3) мейотическое деление сперматоцита II порядка, (4) сперматогенез (трансформация круглых сперматидов в вытянутые), и (5) созревание, сопровождающиеся выходом сперматозоида в семенной канал [26, 27]. Схема, описывающая развития половых клеток, поддерживаемых клетками Сертоли, выстилающими слизистую оболочку семенного канала, выглядит следующим образом.
Tunica propria состоит из базальной мембраны (содержащей в основном коллаген типа IV) и слоя коллегановых волокон I типа, под которым находятся перитубулярные миоидные клетки (миофибробласты) и тянется лимфатический сосуд [28]. Кроме того, с внутренней стороны гемато-тестикулярного барьера эпителий семенника разделён на апикальный и базальный отсеки. Гемато тестикулярный барьер формируется за счёт образования между клетками
Сертоли комплекса плотных и щелевых контактов, демосом и ещё одного специализированного клеточного контакта, характерного только для семенников. Эта ультраструктура создаёт внутри организма гемато-тестикулярный барьер, внутри которого в изоляции от собственной иммунной системы осуществляются процессы сперматогенеза [29]. Фазы митотического деления I и II, и последующее созревание сперматозоидов происходит в специфическом микроокружении, названным адлюминальным компартментом [30].
Изоляция этой иммунопривилегированной зоны поддерживается не только пассивно, с помощью плотных клеточных контактов [31]. Клетки Сертоли несут на своей поверхности Fas-лиганд для запуска процессов апоптоза у лимфоцитов, случайно оказавшихся рядом. Кроме того, клетки Сертоли выделяют интерлейкины и интерфероны, затрудняющие развитие иммунного ответа в окрестностях семенных канальцев [32-34].
Клеточные линии и методика их культивирования
Иммунотерапия является идеальным подходом к излечению для пациентов, страдающих от онкогематологических заболеваний. Пересадка аллогенных гемопоэтических стволовых клеток убедительно показывает наличие действия трансплантанта, направленного против опухоли: что опухолевые клетки чувствительны к цитотоксическому действию Т-лимфоцитов, полученных от донора. Если подходящие опухолевые антигены будут подобраны в оптимальных клинических условиях, иммунотерапия станет высокоэффективной и практически нетоксичной. Текущие успехи, достигнутые в области молекулярной биологии, дают клиницистам возможность проводить тщательный мониторинг пациентов с различными онкогематологическими заболеваниями для выявления минимальной остаточной болезни. Можно применять иммунотерапию в случае пациентов с минимальной остаточной болезнью, выявляемой в пределах чувствительности диагностических методов. Скорее всего, в данной ситуации иммунотерапия будет наиболее успешной, и это нужно изучить. Теоретически, применение иммунотерапии в такой обстановке приведёт к значительному усилению действия Т-лимфоцитов против опухолевых клеток в условиях in vivo. К несчастью, до сегодняшнего дня иммунотерапия применялась в основном для тех пациентов, которые ранее получали интенсивный курс химиотерапии, и уже развили резистентность к ней. К сожалению, работа иммунной системы таких пациентов уже была сильно нарушена. Таким образом, отсутствие видимого успеха иммунотерапии не является неожиданностью.
Некоторые представления о регуляции экспрессии раково-тестикулярных антигенов Экспрессия большинства генов находятся под контролем целого комплекса факторов, таких как последовательность ДНК, гистонов и специфических транскрипционных стимуляторов или супрессоров. На экспрессию генов оказывают влияние метилирование ДНК и посттрансляционные модификации, затрагивающие аминокислотную последовательность гистонов. Эти процессы изменяют структуру хроматина, и приводят его к такому состоянию, при котором транскрипция подавляется [189]. Кроме этого, к активации генов может приводить метилирование и ацетилирование специфических аминокислотных остатков в молекулах гистонов.
В здоровых клетках большинство нуклеотидных пар CG находятся в деметилированном состоянии. В то же время ДНК таких клеток содержит в себе длинные последовательности, на всём протяжении которых динуклеотиды CG метилированы. Метилирование таких последовательностей приводит к запрету транскрипции гена. Правда, наблюдаются исключения из этого правила. CG пары в последовательностях большинства Х-хромосомных генов метилированы [190-191]. Также характер метилирования генов зависит от тканеспецифичности. Например, CG пары гена в мезенхимальных клетках могут быть метилированы, а в клетках эпителия те же самые последовательности деметилированы [192, 193]. В метилировании молекулы ДНК задействовано три специальных метилтрансферазных фермента (DNMTs). В качестве донора метильных радикалов эти ферменты используют молекулу S-аденозин-метионина [194]. Все три метилтрансферазных фермента блокируются работой ДНК деметилирующих агентов, таких как азацитидин. Эти компоненты внедряются в ДНК делящихся клеток, и необратимо ингибируются активность DNMTs, тем самым предотвращая метилирование пар CG.
Кроме функций, связанных с метилировнаием, DNMTs взамодействуют с рядом белков, поддерживающих гистоны в состояниях, регулирующих транскрипцию ДНК [189]. Среди таких белков известны ферменты, диацетилирующие гистоны (HDAC) и белки, удаляющие метильный радикал с CG пар (MBD1, MBD2).
В целом, прогрессирование опухолей связано со снижением общего уровня метилирования геномной ДНК [195]. Снижение общего уровня метилирования в геноме трансформированных клеток начинается задолго до клинических проявлений рака [196 197]. Гипометилирование приводит к экспрессии многих опухоль-ассоциированных антигенов, среди них встречаются и РТА. При прогрессировании рака уровень метилирования только понижается, что приводит к активации всё новых опухоль-ассоциированных антигенов.
Исследование антигенов семейства MAGE позволили выяснить, что гипометилирование играет ключевую роль в регуляции экспрессии РТА [198]. Другие работы демонстрируют прямую зависимость между деметилированием промоторов РТА и их последующей экспрессией. Было замечено, что при терапии опухолей ДНК деметилирующим агентом, 5-азацитидином, уровень метилирования ДНК падает, и это запускает экспрессию РТА [157, 199]. Оказалось, что регуляция гена, чей промотор деметилирован, осуществляется посредством взаимодействия этого промотора с белком MeCP2 [79, 80] Несмотря на тесную связь между гипометилированием ДНК и экспрессией генов, очевидно, что существуют и другие факторы, регулирующие экспрессию РТА. Например, опухолевые клетки, выделенные при раке толстого кишечника, не экспрессируют РТА, хотя последовательность их геномной ДНК в целом гипометилирована. Это наблюдение позволило предположить, что экспрессия РТА контролируется так же и другими, вторичными факторами.
Сейчас стало о том, что запуск экспрессия гена SPAN-Xb в клетках миеломы контролируется IL-7 и GM-CSF [80]. Если промотор гена SPAN-Xb метилирован, клетки миеломы при обработке IL-7 и/или GM-CSF остаются SPAN-Xb-негативными. При обработке клеток миеломы 5-азацитидином промотор гена SPAN-Xb деметилируется. После этого IL-7 и/или GM-CSF успешно запускают экспрессию гена SPAN-Xb.
Подобным образом обработка 5-азацитидином клеток хронического лимфоидного лейкоза деметилирует промотор гена SEMG1. Экспрессия этого гена в последующем активируется IL-4 и IL-6 [200].
Кроме внеклеточных стимулов, таких как деметилирующие агенты, важную роль в спонтанной активации экспрессии РТГ могут играть и внутриклеточные факторы.
Движущей силой онкогенеза во многих случаях (исключая гормональный канцерогенез) могут быть геномные события. Установлено, что причиной развития ХМЛ, большинства случаев эритремии и значительной доли случаев эссенциальной тромбоцитемии являются мутации, приводящие к появлению в стволовой кроветворной клетке перманентно активных тирозинкиназ.
Экспрессия раково-тестикулярных генов в клетках крови у больных в дебюте ХМЛ и Ph’-негативных хМПЗ
В отличие от первичных больных, у пациентов с диагнозом ХФ, ФА и БК ХМЛ и получающих лечение Иматинибом, профиль экспрессии РТГ клеток крови и костного мозга более сложный. Кроме наблюдаемого повышения уровня экспрессии КГТ PRAME наблюдается спонтанная активация экспрессии генов GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, SCP1, SEMG1, SPANXA1 и SSX1.
Интересно, что при ХФ ХМЛ в костном мозге пациентов экспрессировались гены NY-ESO-1 и SCP1, активные в ранних стадиях сперматогенеза. Ген MAGEA1 экспрессируется в развивающихся герминогенных клетках до тех пор, пока они не завершат мейотическое деление. На низком уровне в крови одного больного с диагнозом ФА ХМЛ экспрессировался ген MAGEA1. Гены GAGE1 и SEMG1, чьи транскрипты были обнаружены в стадиях ФА и БК, но не в ХФ ХМЛ, в норме экспрессируются в поздних стадиях сперматогенеза. Однако ген SSX1 экспрессирующийся в БК ХМЛ, активен только в сперматогониях и сперматоцитах, выполняя функцию репрессора транскрипции.
Чем длиннее срок заболевания, тем больше генетических изменений накапливается в популяции лейкемических клеток. Результаты сравнения активности нескольких тысяч генов при различных стадиях ХМЛ показали, что состояние общего профиля экспрессии генов соответствует не трём клиническим фазам заболевания, а только двум. Изменения в уровнях экспрессии генов наступают в начале ФА ХМЛ, и предшествуют увеличению числа бластных клеток (Radich et al., 2006). Наши результаты демонстрируют экспрессию множества РТГ при ФА и БК ХМЛ при низкой частоте активации РТГ в ХФ, что укладывается в контекст феномена, открытого Radich et al. Активация промоторов РТГ может происходить одновременно с другими молекулярными событиями, предшествующими переходу заболевания из ХФ в ФА.
Формированию того или иного фенотипа всегда предшествует экспрессия тех или иных генов. Мы рекомендуем проводить молекулярный мониторинг ХМЛ не только по признаку экспрессии гена BCR-ABL, но и исследовать профиль экспрессии РТГ PRAME и других генов. Выявление таких маркеров, как мРНК генов GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, SCP1, SEMG1, SPANXA1, SSX1 и PRAME в клетках крови или костного мозга больных стадии ХФ ХМЛ будет свидетельствовать о скорой трансформации заболевания в ФА и БК. Эти маркеры можно использовать для контроля успешности проведённой аллогенной трансплантации костного мозга, актуальность которой имеет значение и сегодня [209].
Хотя функции белков, кодируемых РТГ, сейчас изучены мало, имеются данные об их участии в регуляции процессов созревания сперматогональной клетки. Последствия экспрессии РТГ при злокачественных заболеваниях в точности предсказать невозможно, но мы полагаем, что их активация дополнительно дестабилизирует клеточный геном, и только способствует эволюции ХМЛ.
Опубликовано множество обзорных работ, в которых обозначена возможность применения некоторых РТГ в качестве мишени для иммунотерапии онкогематологических заболеваний [100]. Но ещё не было совершено ни одного исследования профиля экспрессии РТГ по стадиям протекания ХМЛ. Мы показали, что из восьми самых обсуждаемых РТГ свойства только одного гена PRAME предоставляют возможность создания специфической вакцины, которая может подойти многим больным с диагнозом ФА и БК ХМЛ. РТГ PRAME обладает свойствами «хорошего» опухолевого антигена, а именно – с высокой частотой экспрессируется при онкозаболеваниях, и неактивен в нормальных соматических клетках.
Что же касается остальных РТГ, то случаи их активации слишком редки, чтобы отдавать высокий приоритет их исследованию в рамках иммунтерапии ХМЛ. Наиболее высоким уровнем экспрессии среди них отличается ген NY-ESO-1, но его активность наблюдалась всего у одного из 85 исследованных больных. Задача создания специального иммунотерапевтического препарата, направленного против эпитопов белка NY-ESO-1, вновь приобретёт актуальность в случае возможности производства дешёвых индивидуальных лекарств.
В литературе накоплены сведения о том, что экспрессия гена PRAME, участвующего в процессе сперматогенеза, в случаях солидных опухолей говорит об агрессивном характере опухолевого процесса и снижением выживаемости больных [210]. Но при рассмотрении острых миелоидных лейкозов, и особенно, острого промиелоцитарного лейкоза, отметили, что активность этого гена, а именно - количественная характеристика его экспрессии, каким-то образом связана с более благоприятным исходом болезни [211].
В настоящее время информация о связи PRAME с регуляторными путями клетки неполна. По этой причине можно только приближённо судить о вероятной причине положительного влияния этого маркера на прогноз заболевания при ОПЛ. Возможно, имеет место эффект участия белка PRAME в метаболизме ретиноевой кислоты: клетки, в которых происходит его синтез, очень чувствительны к воздействию ретиноидов [210]. Указано, что белок PRAME способен связываться с комплексом RAR. Мы предполагаем, что при связывании PRAME конкурирует с другими молекулами репрессоров транскрипции. И чем больше молекул белка PRAME внутри клетки, тем сильнее может быть выражен эффект конкуренции. В результате лейкемическая клетка становится более чувствительной к терапии ретиноидами.
В работе Santamaria et al. [205] для определения количественной характеристики уровня экспрессии гена PRAME использовался метод СТ, отличающийся не высокой точностью. Используя специфические праймеры и зонды, мы не смогли обнаружить следы мРНК в клетках крови здоровых доноров, хотя Santamaria et. al. сообщают, что им это удалось. Для создания надёжного положительного контроля мы использовали материалы большой референсной группы, и показали, что лишь у немногих больных, несмотря на онкогематологические расстройства, в кроветворной ткани происходит активация FRAME.
Прогностическая значимось уровня экспрессии гена HAGE в дебюте диффузной В-крупноклеточной лимфомы
В нашей работе использовался более совершенный метод определения уровня экспрессии генов, который позволил точнее охарактеризовать три группы линий клеток меланомы. При этом, несмотря на независимую разработку систем для измерения уровня экспрессии РТГ MAGEA1 и NY-ESO-1 мы получили сходные результаты. Но, в отличие от методов, которыми оперировали Михайлова и др., мы смогли оценить уровень экспрессии гена MAGEA1 и NY-ESO-1 не полуколичественно, а в точности до нескольких сотен молекул в пробе, содержащей 100 000 клеток. Однако в исследовании Михайловой и др. определён уровень экспрессии многих представителей семейства генов MAGE, в то время как мы исследовали свойства единственного представителя всего семейства. Известно, что гены группы MAGE находятся в одном локусе, и их многие исследователи отмечают их коэкспрессию, указывая на то, что многие (или даже все гены) семейства контролируются одним промотором. Таким образом, мы выбрали для исследования только одного представителя, освободив возможность для исследования других РТГ, не родственных семейству MAGE. Согласно экспериментальным наблюдениям и статистическому расчёту, культуры клеток были можно разделить на две группы. Признаки первой группы – множественная активность РТГ в совокупности с их высокими уровнями экспрессии, характерны для линий mel IL, mel Hn, mel Ibr и mel Kor. Интересно, что Михайлова и др. определи линии mel Ibr и mel Kor как низкодифференцированные. С другой стороны, линии mel P, mel Si и mel Mtp, по нашим данным, характеризуются в целом более низкими уровнями экспрессии РТГ и меньшей частотой их активации. Но по данным Михайлова и др. линия mel Mtp является низкодифференцированной, линия mel P умереннодифференцированной, и линия mel Si высокодиффенецированной. Классификация по степени дифференцировки, проведенная Михайловой и др., основана на таких признаках, как клеточная морфология и экспрессия дифференцировочных антигенов меланомы, позволила разделить линии на три группы. Другая классификация, основанная исключительно на уровнях экспрессии множества РТГ, выделяет только две группы среди этих линий.
Высокий уровень экспрессии генов оказался характерным для двух низкодифференцированных и двух умереннодифференцированных линий. В то же время более низкий уровень экспрессии РТГ выявлен у низко-, умеренно- и высокодифференцированных линий. Следует отметить, что разделение на три группы по признаку уровня экспрессии и частоты активации РТГ оказался невозможным в силу статистической недостоверности полученных результатов.
Таким образом, мы получили данные о том, что для низкодифференцированных клеток меланомы характерен как высокий, так и более низкий уровень экспрессии РТГ. При этом у высокодифференцированной линии обнаружен достоверно более низкий уровень экспрессии РТГ, чем у низкодифференцированных линий. Поскольку для человека, страдающего от меланомы, низкодифференцированные опухолевые клетки являются плохим прогностическим фактором, может иметь значение и профиль экспрессии РТГ.
Для подтверждения этого вывода требуется провести работу по определению профиля экспрессии РТГ в клеточных образцах, полученных непосредственно от больных, и не прошедших ни единой стадии культивирования.
Наши результаты открывают широкие возможности для использования транскриптов раково-тестикулярных генов SP17, GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME для первичной диагностики и последующего мониторинга некоторых хронических и острых форм онкогематологических заболеваний.
Мы показали сходство на молекулярном уровне впервые выявленных случаев хронических миелопролиферативных заболеваний и хронического миелоидного лейкоза. Мы выявили молекулярные различия между хронической фазой и фазой акселерации и бластным кризом при хроническом миелоидном лейкозе. Активация экспрессии генов GAGE1, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SPANXA1, SSX1 и PRAME в хронической фазе хронического миелоидного лейкоза может быть первым предвестником трансформации заболевания в терминальную стадию.
Мы определили, что в дебюте заболевания В-клеточными лимфомами (диффузная В-крупноклеточная лимфома, лимфома Ходжкина и фолликулярная лимфома) профиль экспрессии раково-тестикулярных генов GAGE1, HAGE, NY-ESO-1, MAGEA1, PASD1, SCP1, SEMG1, SLLP1, SPANXA1, SSX1 и PRAME очень разнообразен, и целом является практически индивидуальным для каждого больного. С другой стороны, несмотря на это разнообразие, для диффузной В-крупноклеточвной лимфомы уровень экспрессии гена И AGE в клетках костного мозга удалось установить в качестве прогностического фактора. Для фолликулярной лимфомы в качестве важного прогностического установлен высокий уровень экспрессии гена PRAME в лимфатических узлах.
Ещё никем в мире не сообщалось, что существует онкологическое заболевание, при котором с такой с частотой, близкой к 100% рассмотренных случаев, экспрессируется какой-либо представитель из группы раково-тестикулярных генов. Согласно нашим результатам всех исследованных РМ/Ж4Да-положительных больных острым промиелоцитарным лейкозом в костном мозге экспрессируется ген PRAME. Интересно, что, несмотря на высокую агрессивность, присущую острому промиелоцитарному лейкозу, в дебюте заболевания совершенно не характерна множественная экспрессия РТГ. Это говорит о существовании некого высокоспецифичного механизма, срабатывающего при остром промиелоцитарном лецкозе, и приводящем к экспрессии РТГ PRAME.
Важно отметить, что экспрессия гена PRAME была либо очень интенсивной, сопоставимой с уровнем экспрессии изоформ гена PML/RARa, либо наблюдалась на низком уровне относительно химерного гена. Во втором случае, – при низком уровне экспрессии, у больных с высокой частотой развивался гематологический рецидив заболевания. Этого достаточно, чтобы рекомендовать определение уровня экспрессии гена PRAME у вех больных в дебюте острого промиелоцитарного лейкоза.
Мы исследовали клеточные линии, в частности, линии клеток меланомы. Показано, что множественная экспрессия РТГ больше характерна для линий, охарактеризованных ранее как низко- и умереннодифференцированные, но не высокодифференцированные. В случае высокодифференцированных линий, наблюдался существенно более низкий уровень экспрессии генов при меньшем количестве активированных генов.
