Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Функциональная характеристика нейтрофилов периферической крови больных раком яичников и доноров 50
1.1. Характеристика функций нейтрофилов периферической крови больных раком яичников до лечения 51
1.2. Функции нейтрофилов у больных раком яичников в первые сутки после операции 53
1.3. Функции нейтрофилов у больных раком яичников на седьмые сутки после операции 54
1.4. Функциональная характеристика нейтрофилов периферической крови больных раком яичников стадии заболевания без асцита и с асцитом 55
1.5. Экспрессия дифференцировочных антигенов нейтрофилов периферической крови у больных раком яичников 57
1.6. Выявление корреляционных связей между показателями адгезии к пластику, поглотительной способности и экспрессией антигенов нейтрофилов периферической крови 58
ГЛАВА 2. Сравнительный анализ функций нейтрофилов крови больных с опухолями молочной железы в зависимости от стадии заболевания 74
ГЛАВА 3. Характеристика функций нейтрофилов периферической крови онкологических больных при хирургическом лечении
3.1. Функции нейтрофилов у онкологических больных до операции 82
.3.2. Функции нейтрофилов у онкологических больных, получавших в периоттерационном периоде нейпоген 85
ГЛАВА 4. Функциональное состояние нейтрофилов крови больных раком яичников и раком легкого в процессе химиотерапии
4.1. Изучение функций нейтрофилов крови у больных раком яичников 96
4.2. Исследование функций нейтрофилов крови у больных раком легкого 99
ГЛАВА 5. Исследование функций нейтрофилов периферической крови гематологических больных
5.1. Функциональное состояние зрелых нейтрофилов крови больных хроническим миелолейкозом 119
5.2. Функции нейтрофилов у больных миелодиспластическими синдромами 126
Обсуждение результатов 150
Заключение 177
Выводы 180
Литература 184
- Характеристика функций нейтрофилов периферической крови больных раком яичников до лечения
- Функции нейтрофилов у онкологических больных, получавших в периоттерационном периоде нейпоген
- Изучение функций нейтрофилов крови у больных раком яичников
- Функциональное состояние зрелых нейтрофилов крови больных хроническим миелолейкозом
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Нейтрофилы крови наряду с другими иммунокомпетентными клетками играют важную роль в противоопухолевом надзоре. Стало традиционным связывать формирование противоопухолевого иммунитета с иммунными механизмами, в которых участвуют лишь макрофаги, Т - и В-лимфоциты [83, 106]. Явно недооценивается тот факт, что нейтрофилы, самая объемная часть лейкоцитов, являются индикаторами разнообразных нарушений гомеостаза. Нейтрофилы образуют первый барьер на пути проникновения в организм различных патогенных агентов. При этом они оказывают не только антителопосредованную цитотоксичность на прикрепившиеся к эндотелию трансформированные клетки, но также способны вступать в контакт с клетками опухоли, которые мигрируют в сосудистое русло [83, 97]. Имеются сведения о важной роли нейтрофилов при раннем метастазировании рака [400]. Более того, отторжение опухоли в некоторых случаях может быть связано только с инфильтрацией ее нейтрофилами [129].
Экспериментальные данные и теоретические разработки послужили основой для изучения функций нейтрофилов у онкологических больных. За последние годы появились единичные сообщения, свидетельствующие о снижении молекул адгезии (CDllb и CD 18) на нейтрофилах периферической крови онкологических больных [22, 328]. Посредством молекул адгезии нейтрофилы прилипают к эндотелию, мигрируют в ткани для осуществления основной функции - фагоцитоза бактерий, иммунных комплексов, трансформированных клеток, в т.ч. клеток опухоли.
Явление адгезии нейтрофилов обеспечивается наличием в плазматической мембране комплекса семейства лейкоцитарных интегринов.
6 Наиболее важным для фагоцитарного процесса являются три гетеродимера,
состоящие из общей [5-цепи (CD 18) и трех а-цепей (CD1 la, CD1 lb, CD1 lc).
Публикуемые материалы по исследованию адгезии нейтрофилов крови у онкологических больных чрезвычайно редки. В отечественной литературе данные по этой проблеме практически отсутствуют. При этом депрессия адгезивной способности нейтрофилов в процессе злокачественного роста рассматривается некоторыми авторами как фактор, благоприятствующий распространению опухоли [240, 241].
Среди многочисленных функций нейтрофилов одной из важнейщих является фагоцитоз. Сложный процесс фагоцитоза является многоэтапным и включает, в частности, процесс распознавания, киллинга или поглощения фагоцитирующих объектов. Одним из универсальных методов оценки поглотительной способности нейтрофилов является «латекс-тест», в котором используются стандартные полистироловые частицы латекса. Метод позволяет оценить способность нейтрофилов вступать в межклеточный контакт с чужеродными объектами или поглощать их. Контакт с трансформированными клетками чаще всего происходит через Fc-, CR1, CR3—рецепторы нейтрофилов. В качестве контрецепторов могут служить молекулы адгезии из семейства иммуноглобулинов (1САМ-1,-2,-3).
За последние годы появились работы, свидетельствующие о возможном участии ІСАМЗ (CD50) антигена в лизисе опухоли. Акцент сделан на роли этого этого антигена в адгезии иммуннокомпетентных клеток к опухоли. Следовательно, исследование функции поглощения чужеродных объектов и экспрессии рецепторов на нейтрофилах у онкологических больных является чрезвычайно актуальным.
Целью работы явилось выявление нарушений функционального состояния нейтрофилов, оценка их значимости у онкологических больных.
7 Задачи исследования:
Отработать комплекс методов для выявления функциональных нарушений нейтрофилов крови у онкологических больных.
Оценить нарушения функций нейтрофилов крови у онкологических больных в зависимости от стадии заболевания и локализации опухоли.
Изучить функциональные показатели нейтрофилов крови онкологических больных в раннем послеоперационном периоде и выявить их взаимосвязь с инфекционными осложнениями.
Оценить влияние гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на функциональное состояние нейтрофилов крови у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде. Провести корреляционный анализ изменений функций нейтроф)илов и частоты инфекционных осложнений в послеоперационном периоде.
Исследовать функциональное состояние нейтрофилов крови онкологических больных на фоне химиотерапии.
Проанализировать функциональное состояние зрелых нейтрофилов крови больных хроническим миелолейкозом в зависимости от стадии заболевания, в процессе современной терапии.
7. Сравнить функциональную активность нейтрофилов крови больных миелодиспластическими синдромами в зависимости от варианта заболевания.
Научная новизна работы.
Проведено комплексное исследование функций нейтрофилов периферической крови у 424 больных злокачественными новообразованиями. Впервые установлена тесная корреляционная связь между адгезией нейтрофилов к пластику (или чужеродной поверхности) и экспрессией молекул адгезии CD1 lb, CD18.
Получены новые данные, свидетельствующие о снижение функции адгезии нейтрофилов крови у большинства первичных больных злокачественными новообразованиями различных локализаций.
Отмечена у больных раком молочной железы зависимость уровня снижения функции адгезии нейтрофилов от стадии заболевания. Выявлена зависимость функции адгезии нейтрофилов от клинического течения заболевания больных ХМЛ: снижение показателей до лечения у первичных больных в хронической стадии заболевания, восстановление в процессе терапии при полной гематологической ремиссии и резкое снижение - при прогрессировании заболевания.
В группе первичных больных ХМЛ в хронической стадии с прогностически неблагоприятными гематологическими признаками отмечено резкое снижение способности нейтрофилов прилипать к пластику и экспрессии молекул адгезии CD lib, CD 18 на нейтрофилах по сравнению с группой больных с благоприятными гематологическими признаками.
Впервые показана зависимость степени адгезии нейтрофилов больных МДС от варианта миелодиспластических синдромов, более низкие показатели отмечены в группах больных с прогностически неблагоприятными ФАБ-вариантами (РАИБ и РАИБ-Т).
Впервые установлено восстановление адгезивной функции у первичных больных раком легкого с регрессией опухоли в процессе химиотерапии, включающей препарат нитруллин.
Впервые обнаружили тесную корреляцию между экспрессией CD50 антигена (ICAM-3) на нейтрофилах, экспрессия которого усиливается на активированных нейтрофилах, и общим числом нейтрофилов способных поглощать частицы латекса.
Практическая значимость
Методы исследования функции адгезии нейтрофилов могут быть рекомендованы:
1) Для мониторинга в процессе терапии с целью оценки эффективности
лечения.
2) Для прогнозирования клинического течения заболевания наряду с
другими прогностически неблагоприятными признаками у больных
ХМЛ.
3) Для первичного скрининга с целью выявления групп риска.
Определение функционального состояния нейтрофилов (латекс -тест и
спонтанная агрегация) до операции и в раннем послеоперационном периоде у онкологических больных может служить дополнительным прогностическим критерием ранних послеоперационных гнойно-септических осложнений. «Латекс-тест» может быть рекомендован для диффференциальной диагностики ХМЛ и лейкемоидной реакции при различных гнойно-септических процессах наряду с определением активности щелочной фосфатазы нейтрофилов.
Основные положения, выдвигаемые на защиту,
У первичных больных злокачественными новообразованиями: раком легкого, раком пищевода, раком желудка и раком яичников, до проведения специфического лечения, выявляются значительные нарушения адгезии нейтрофилов, сопровождающиеся снижением экспрессии молекул адгезии CD1 lb, CD18.
Существует зависимость снижения функции адгезии нейтрофилов от стадии заболевания у больных РМЖ.
У первичных больных раком легкого (Ш стадии), с положительным клиническим эффектом после первого курса химиотерапии, функция адгезии нейтрофилов восстановилась почти до показателей контрольной группы.
4. У нелеченных больных ХМЛ в хронической стадии заболевания,
выявлено достоверное снижение показателей адгезии нейтрофилов к
пластику, поглотительной способности, экспрессии CD lib, CD 18, CD 16,
CD95 антигенов. Более глубокие изменения обнаружены у пациентов с
прогностически неблагоприятными гематологическими признаками.
5. У больных ХМЛ при достижении полной гематологической ремиссии
отмечено восстановление показателей адгезии к пластику, поглощения
частиц латекса, экспрессии CD lib, CD 18 антигенов и нормализация
активности миелопероксидазы и щелочной фосфатазы. Напротив, при
прогрессировании заболевания показатели адгезии нейтрофилов
продолжали резко снижаться, функция поглощения усиливалась,
активность миелопероксидазы оставалась высокой.
6. У больных миелодиспластическими синдромами уровень снижения
показателей адгезии нейтрофилов к пластику и экспрессии антигена
CD1 lb зависел от варианта заболевания. Значительное снижение функции
адгезии нейтрофилов отмечено у больных с прогностически
неблагоприятными ФАБ - вариантами РАИБ и РАИБ-Т.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Диагноз через лабораторию» (Москва, 1993); на международном симпозиуме «Современные проблемы панмиелопатий у детей: акцент сделан на миелодиспластический синдром» (Москва, 1994); на V съезде специалистов по лабораторной диагностике России (Москва, 1995); на симпозиуме «Лабораторная медицина, тенденции и перспективы» (Москва, 1997); на симпозиуме «Лабораторная диагностика и лекарственная терапия» (Москва, 1998); на симпозиуме «Клиническая лаборатория на пороге XXI века, синтез традиций и новаций» (Москва, 1999); на симпозиуме «Национальные дни лабораторной медицины» (Москва, 1999); на I Съезде анестезиологов-реаниматологов Узбекистана с международным участием на тему «О
11 применении нейпогена для профилактики и лечения послеоперационных гнойно-септических осложнений в торакальной онкохирургии» (Ташкент, 1999г.); на научной конференции по проблемам профилактики и лечения в современной онкологии на тему «Роль нейпогена в профилактике и лечении послеоперационных гнойно-септических осложнений в торакальной онкологии» (Томск, і 999); на симпозиуме "Принципы и способы лабораторного обеспечения внебольничной помощи и актуальные проблемы лабораторной медицины" (Москва, 2001). Выступления с лекциями на кафедре клинической лабораторной диагностики института повышения квалификации ФУМБ и ЭП МЗ РФ (1997-2002 гг.). Подготовка специалистов лечебных и научных учреждений на рабочих местах по клинической лабораторной диагностике. Объем и структура работы.
Диссертация изложена на 225 стр. машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, 5 глав собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, содержащего 143 отечественных и 288 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована 39 таблицами и 17 рисунками. Место выполнения работы.
Работа выполнена в клинико-диагностичекой лаборатории (заведующая д.м.н. Зубрихина Г.Н.) научно-исследовательского института клинической онкологии Российского Онкологического Научного Центра им. Н.Н.Блохина Российской академии медицинских наук (директор- член. корр. РАМН, проф. Давыдов М.И.).
Иммунологические исследования проводили: в лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей (руководитель д.м.н., проф. Барышников А.Ю.) и в лаборатории клинической иммунологии НИИ клинической онкологии РОНЦ им Н.Н.Блохина (заведующая лабораторией -д.м.н., проф. Кадагидзе З.Г.).
Характеристика функций нейтрофилов периферической крови больных раком яичников до лечения
Характерной особенностью больных РЯ был абсолютный и относительный нейтрофилез до лечения. Почти у половины (13 из 25) больных отмечалось увеличение относительного числа нейтрофилов, у остальных (12) число нейтрофилов приближалось к верхней границе нормы (табл.2). Колебания показателей были от 59% до 84 %. У доноров колебания составили от 47,4% до 71 %. В среднем число нейтрофилов было достоверно выше (Р 0,001), чем у доноров и составило 72,4±1,3%. Абсолютное число нейтрофилов увеличено у 8 из 25 больных, у большинства (16) число нейтрофилов было в пределах нормальных величин, у одной снижено до 1,8х109/л. Колебания абсолютных чисел нейтрофилов были от 1,8 до 8,8x109/л, в группе контроля - от 2,3 до 5,5x109/л. В среднем по группе 4,7±0,07х109/л, а у доноров 3,7±0,06х109/л (Р 0,05).
Исследование адгезивной способности нейтрофилов у больных РЯ выявило у большинства (20) из них снижение этой функции, показатели были от 35 до 54%, у 5 обнаружено менее 35% клеток, способных к адгезии (14,3 -29,6%). Среднее значение величины адгезии нейтрофилов больных РЯ было равно 45,6±3,2%, а в контроле соответственно 72,3±0,9% (Р 0,001). В абсолютных величинах снижение адгезивной способности нейтрофилов у больных РЯ до лечения отмечено у 10, резкое снижение (менее 1,0х109/л) -у 4 из них. В среднем по группе показатели составили у больных 2,1+0,2x10 /л, у доноров 2,5±0,06х109/л.
Анализ показателей спонтанной агрегации нейтрофилов у больных РЯ до лечения выявил существенное отклонение от данных контроля, однако достоверной значимости не получено, так как колебания показателей средних коэффициентов спонтанной агрегации были значительными, от 26 до 169 усл. ед. у больных; у доноров - 89-137 усл. ед, в среднем по группе средний коэффициент агрегации составил 81,9±7,1 усл. ед, у доноров 113,5+1,9 усл.ед (р 0,05).
Анализ показателей поглотительной (табл.3) способности нейтрофилов выявил достоверное (Р 0,001) увеличение фагоцитарного индекса при максимальной инкубации (ФИбОмин), по сравнению с контрольной группой (93,8±2,8% и 82,4±2,2% соответственно). ФИ60 мин имел максимальное значение (100%) больше, чем у половины (12) больных. У 10 из 22 больных поглотительная способность нейтрофилов была в пределах нормы как на начальных, так и поздних этапах фагоцитоза.
На начальных этапах инкубации (ФИ5) поглотительная способность оказалась сниженной у 11 из 22 больных. В среднем этот показатель составил 12,9±2,2, что ниже, что в контроле (17,3+2,2), но статистической значимости не получено (Р 0,05).
Таким образом, у части больных РЯ до лечения выявлено замедление фагоцитарной активности на начальных этапах и повышение ее через бОмин у большинства из них. Показатель активности миелопероксидазы (МРХГ) нейтрофилов в контрольной группе составил в среднем 0,13±0,58 усл.ед. с колебаниями от -8,5 до +8,7. У больных РЯ до лечения этот показатель был 2,7+1,6 (Р 0,05). Значения MPXI больных варьировали в более широких пределах, чем в контроле (-11, 7 - +19,3).
Функции нейтрофилов у больных раком яичников в первые сутки после операции
В раннем послеоперационном периоде (1-е сутки) у большинства (11 из 16) больных отмечался лейкоцитоз и нейтрофилез. Показатели адгезии нейтрофилов, как и до лечения, оставались сниженными и в среднем по группе составили 54,4+4,2% с колебаниями от 37,8 до 82,6%. Увеличение абсолютного числа адгезии нейтрофилов было выявлено у 15 из 16 больных РЯ, при этом значительное увеличение отмечено у 9 из них.
Спонтанная агрегация в первые сутки варьировала от 32 до 192 усл.ед. и в среднем составила 102,4±10,6 (Р 0,05). Индивидуальный анализ средних коэффициентов агрегации показал, что у большинства она осталась без изменений, у отдельных больных повысилась или даже снизилась (4). В первые сутки после операции (табл.3), как и до лечения, оставалась сниженной активность нейтрофилов в начальной фазе фагоцитоза (ФИ5мин=10,5±1,9% и ФЧ5мин=2,2±0,02). Через 60 мин. инкубации в относительных величинах индекс поглощения оказался ниже (88,4+3,2%), чем до лечения и приближался к показателю контроля. В то же время в абсолютных значениях число поглощенных частиц нейтрофилами было увеличено, особенно это касается абсолютного показателя (АФЧбОмин), который оказался почти в два раза выше исходного и в 3 раза по сравнению с данными группы сравнения. При анализе индивидуальных показателей, как и до лечения, у 10 больных они оказались в пределах нормы при начальных, так и поздних этапах инкубации. У 5 больных на начальных этапах инкубации был снижен один из показателей (ФИ5мин или ФЧ5мин) и только у 3-х больных отмечено снижение обоих показателей на начальных этапах инкубации. На поздних этапах инкубации все показатели были или на верхней границе нормы, или повышены, особенно в абсолютных величинах. Отсюда, скорость поглощения, выражающаяся показателем КФЧ, у 5 больных оказалась резко сниженной (0,07-0,11).
Активность миелопероксидазы нейтрофилов у большинства (10) пациенток так же, как и до операции, была в пределах нормальных колебаний, у 3-х она была значительно выше нормы, у 2-х- оказалась сниженной.
Функции нейтрофилов у онкологических больных, получавших в периоттерационном периоде нейпоген
Для повышения резервных возможностей кроветворения с целью предотвращения возможных гнойных осложнений части больным вводили препарат неипоген (филграстим), представляющий собой гранулоцитарно-колониестимулирюший фактор (Г-КСФ).
Обследовано 20 больных: рак легкого 8, рак пищевода 8, рак кардиального отдела желудка 2, неходжкинская лимфома желудка 1, рак печени 1. Неипоген вводился в дозе 5мкг/кг веса в день накануне операции и в 1-3 сутки после операции. В первые сутки после введения нейпогена (рис.12 и табл.15) наблюдался значительный выброс нейтрофилов, который в среднем по группе составил 19,5+1,2x109 /л с колебаниями от 5,8 до 40,5x109 /л, в относительных величинах 90,0±1,7%. Абсолютные показатели НФ были достоверно выше, чем в группе больных в 1 сутки после операции без применения нейпогена (Р 0,01). У одного больного РЛ число нейтрофилов не увеличилось (до операции - 5,75, 1 сутки после операции нейтрофилов=5,8 х109 /л) и у одного (РП) отмечено лишь незначительное увеличение (до 8,0 х109 /л).
Одновременно с увеличением числа нейтрофилов отмечалось снижение показателей адгезии нейтрофилов в относительных величинах более значительное, чем у больных без применения нейпогена (Р 0,05). В среднем число прилипших к пластику клеток составило в 1 сутки после введения нейпогена 34,5+2,3% с колебаниями от 16,3 % до 51,7 %. Число больных с очень низкими показателями адгезии нейтрофилов (менее 35 % прилипших клеток) в группе больных с применением нейпогена было 11 (из 19 чел.), а в группе онкологических больных без использования нейпогена 9 из 28 (Р 0,05).
Число больных РЛ (6 чел.) и РП (3 чел.) и РЖ (2 чел) в группе с очень низкими показателями адгезии оказалось приблизительно одинаковым.
Таким образом, в 1 сутки после операции отмечался значительный выброс нейтрофилов из костного мозга в ответ на стимуляцию Г-КСФ, однако большинство нейтрофилов не было способно выполнять важную функцию прилипания, необходимую для выхода нейтрофилов в ткани. В абсолютных показателях число способных к адгезии нейтрофилов составило 7,0±0,08х109/л, что было выше, чем в группе больных без применения нейпогена (4,2+0,6x10 9/л), Р 0,02. В последующие 3-5 суток число нейтрофилов снижалось, составляя в среднем по группе 12,6+1,6x10 9/л со значительными колебаниями внутри группы (3,6-27x109 /л). Показатели адгезии оставались на низких цифрах: 30,2+2,4% с колебаниями от 19,7 до 51,5%. В абсолютных показателях (рис.12) их количества снизилось и было таким же (3,0+0,6x109/л), как в группе больных без введения нейпогена (р 0,05).
В 1 сутки после введения нейпогена фагоцитарная способность нейтрофилов в среднем по группе возрастала как в первые минуты инкубации ФИ5мин=21,3±3,5%, так и в поздние сроки, особенно заметно увеличивалось абсолютное число способных к фагоцитозу нейтрофилов. Однако у части больных (5 чел.) ФИ5мин и ФЧ5мин оказались сниженными, и у двух из них через 60 мин. инкубации индексы ФИбОмин и ФЧбОмин оставались низкими, составляя ФИбОмин =38 и 40%, и ФЧбОмин =3,8 и 5,9 соответственно. В последующем (3-5 сутки поле введения) относительные фагоцитарные индексы по-прежнему оставались высокими, а абсолютные с уменьшением числа нейтрофилов снижались, приближаясь к норме.
В 1 сутки после введения нейпогена не отмечено заметного повышения активности миелопероксидазы (MPXI) в среднем по группе (MPXI =1,9±2,7), однако внутри группы показатели активности колебались в широких пределах: от -30,1 до +15,5; со значительным снижением активности у 3 больных (MPXI ниже - 8,5), и значительным повышением у 5 больных (+9,0 - + 15,5). В последующие сутки активность МП снижалась (МРХ1=-0,9+2,8 усл.ед.) с колебаниями от- 40,8 до +19,5 усл.ед., преобладали больные с отрицательными показателями МП (11 из 18 чел.), однако только у 3 больных показатели выходили за пределы нормы.
Введение нейпогена - гранулоцитарного колониестимулирующего фактора приводит к значительному выбросу нейтрофилов из костного мозга в периферическую кровь со сниженной способностью к адгезии клеток в относительных показателях. Однако, абсолютные значения показателей адгезии и фагоцитарная активность в начаие поглощения (ФИ5), причем как в относительных, так и абсолютных цифрах, были достоверно выше, чем в группе больных не получавших нейпоген.
Таким образом, у большинства больных до лечения, независимо от локализации опухоли (РЛ, РП и РЖ), выявлено достоверное снижение адгезивной способности неитрофилов. Несмотря на удаление основной массы опухоли, функция адгезии оставалась сниженной у большинства больных РЛ, РП и РЛ. Не выявили различия между показателями адгезии у больных с гнойно-септическими осложнениями и без них. При этом известно, что у неонкологических больных при развитии воспалительной реакции функция адгезии резко усиливается. Это скорее всего говорит о значительном снижении резервных возможностей неитрофилов. Известно, что иммунная система онкологических больных работает с большим напряжением. Все виды традиционной противоопухолевой терапии, в том числе и хирургическое лечение, оказывают выраженное угнетающее воздействие на неполноценную иммунную систему онкологического больного.
Так, у ослабленных больных РЛ, РП и РЖ с исходно низкими показателями фагоцитарной активности, наряду со сниженной адгезивной функцией и слабой активностью миелопероксидазы в НФ, чаще, чем у больных с нормальными показателями, отмечаются гнойные осложнения.
Введение гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (нейпогена) приводило к значительному выбросу неитрофилов из костного мозга в периферическую кровь со сниженной способностью к адгезии клеток в относительных показателях. Однако абсолютные значения адгезивной способности и фагоцитарная активность в начале поглощения (ФИ5), причем как в относительных, так и абсолютных цифрах, были достоверно выше, чем в группе больных не получавших неипоген. И как результат этого, ни у одного из больных, которым вводили неипоген, в послеоперационном периоде не возникли гнойно-септические осложнения. Достоверное различие развития осложнений у больных, получавших и не получавших неипоген, может свидетельствовать о благоприятном влиянии его на кроветворение.
Изучение функций нейтрофилов крови у больных раком яичников
Обследовали 12 больных раком яичников (РЯ) HI-IY стадии, в динамике (44 исследования), в процессе XT. Возраст женщин от 32 до 70 года (в среднем 52,4±1,8). До XT всем больным проведена циторедуктивная операция. Были изучены адгезивная, поглотительная способность и активность миелопероксидазы.
Схема лечения: паклитаксел 175 мг/лґ в/в капелъно 3- часовая инфузия -1 день; цисплатин - 75 мг/м в/в капелъно -11 день; 6 курсов лечения с интервалом 3 недели.
До лечения у больных РЯ число лейкоцитов (6,4±0,1х10 9/л) и число нейтрофилов (4,2+0,05x10 9/л) было в пределах нормы (табл.16). После очередного курса XT количество лейкоцитов не восстанавливалось до исходного уровня, причем эти изменения нарастали с каждым последующим курсом. К началу 5 курса XT наблюдалось значительное угнетение лейкопоэза, число нейтрофилов составляло 1,8±0,6х109/л (Р 0,05). Через 1-6 месяцев после окончания лечения отмечалось восстановление числа нейтрофилов до 2,9±0,7х109/л, однако, показатель был ниже исходной величины.
Адгезия нейтрофилов до начала лечения была достоверно (Р 0,01) ниже нормы и составила 52,2+3,3% и 2,2+0,1 х10 9/л. В процессе терапии она начала снижаться и к концу III курса был равна 48,0+8,4%, к концу лечения продолжала падать- 37,2+9,1% (1,4+0,07 х109/л), через 1-6 мес. адгезия нейтрофилов возрастала и достигла исходного уровня (52,43±6,26%), в абсолютных величинах - (2,3±0,02х109/л).
Фагоцитарная активность нейтрофилов при часовой инкубации сохранялась на высоком уровне на протяжении всех курсов лечения. ФИ60 колебался от 80 до 96,%, ФЧ60, изначально выше нормальных значений (17,5+0,9), несколько снижалась в процессе терапии (14,8±0, 6), однако через 1-6 мес. возвращалась к исходно высокому уровню: ФИ60 94,0+4,8 % и ФЧ 16,8±2,45 (табл.17).
Такие же изменения выявлены и в отношении активности миелопероксидазы (МРХІ): до начала терапии индекс МП в 5 раз превышал значение этого показателя в норме и составил 5,5±3,4 усл.ед.; в процессе лечения значительно снижался и после 5-6 курсов составил -1,±0,41 усл.ед.. Через 1-6 мес. вновь возрастал (4,9±1,1 усл.ед.).
Напротив, на начальных этапах фагоцитоза отмечено значительное снижение ФИ5, ФЧ5 и как следствие этого резкое замедление скорости поглощения, причем с каждым последующим курсом эти изменения нарастали. Не отмечено значительного восстановления скорости поглощения при контрольном обследовании после проведения 6 курса XT, и даже спустя 3- 6 месяцев после окончания лечения она оставалась сниженной.
Проанализированы функции нейтрофилов в динамике в зависимости от эффекта лечения, так в процессе XT отмечена полная регрессия опухоли у 7 женщин, частичная регрессия у 20, прогрессирование выявлено у 6 пациенток. Количество лейкоцитов, абсолютное и относительное число нейтрофилов было примерно одинаковым во обеих группах (табл.18). Функция адгезии, которая оставалась низкой как у больных с частичной, так и полной регрессией опухоли, у больных с прогрессированием заболевания была значительно увеличена, в половине случаев (3) отмечена гиперадгезивность нейтрофилов. При этом у одной пациентки резкое усиление адгезивности нейтрофилов выявлено еще до лечения и сохранялось на всех этапах обследования (с 1 по 6 курс XT). У другой больной показатели адгезии резко возросли к последнему курсу лечения.
Показатели поглотительная способность нейтрофилов (табл.19) у больных как с полной;так и с частичной ремиссией были близки контрольным цифрам. У больных с прогрессированием заболевания выявлено резкое снижение фагоцитарной активности на начальных этапах фагоцитоза (ФИ5 и ФЧ5), и как следствие этого замедление скорости поглощения. Причем этот показатель (КФЧ) оказался в 5 раз ниже, чем в контроле (0,25±0,02) и составил 0,05±0,01 (Р 0,001) Показатели активности МП были в пределах нормы в обеих группах (табл. 19)
Из группы больных РЯ с регрессией опухоли, обследованных в динамике, мы выделили больных с умеренной нейтропенией (ниже 2,0 х 10 9/л) и пациенток с нормальными показателями нейтрофилов (табл.20).
У больных с нейтропенией выявили более низкие показатели адгезии в абсолютных значениях. Фагоцитарная активность при начальной инкубации и скорость поглощения была значительно выше, чем у пациенток с более высокими цифрами нейтрофилов (табл.21). Активность миелопероксидазы была примерно одинаковой. За счет значительного снижения количества нейрофилов в объеме крови, все абсолютные показатели оказались достоверно снижены.
Таким образом, у больных РЯ III-IY стадии до проведения XT, отмечалось снижение адгезивных свойств и усиление фагоцитарной активности нейтрофилов. В процессе XT, на фоне значительного угнетения лейкопоэза, выявлено достоверное снижение показателей адгезии и небольшое (до нормальных величин) - фагоцитарной активности и миелопероксидазы нейтрофилов.
В зависимости от эффективности терапии функция адгезии, которая оставалась низкой как у больных с частичной, так и полной регрессией опухоли, у больных с прогрессированием заболевания была значительно увеличена, а у 50% (3 из 6) больных отмечена гиперадгезивностъ нейтрофилов. При этом у одной пациентки резкое усиление адгезивности выявлено еще до начала лечения и сохранялось на всех этапах обследования (с 1 по 6 курс XT). У другой больной показатели адгезии резко возросли к последнему курсу лечения. У пациенток с прогрессированием заболевания выявлено резкое снижение фагоцитарной функции на начальных этапах фагоцитоза (ФИ5 и ФЧ5), и как следствие этого, замедление скорости поглощения, причем этот показатель оказался ниже, чем в контроле в 5 раз.
Функциональное состояние зрелых нейтрофилов крови больных хроническим миелолейкозом
Цель работы- изучить функциональные особенности нейтрофилов на различных этапах клинического течения ХМЛ: в хронической стадии до лечения, в процессе терапии, при достижении гематологической и цитогенетичекой ремиссии, при прогрессировании заболевания.
Проведено исследование адгезии к пластику, спонтанной агрегации, поглотительной способности, определение активности миелопероксидазы, щелочной фосфатазы и экспрессии дифференцировочных антигенов- CD lib, CD18, CD16, CD50, CD95, CD34 на нейтрофилах крови у 55 больных ХМЛ: 14 больных в хронической стадии до лечения и 27 больных в процессе терапии, 11 больных в стадии акселерации, 3- в стадии бластного криза. Возраст больных от 20 до 60 лет (в среднем 54,5+1,7). М -24; Ж -31.
Диагноз установлен на основании клинических, морфологических и цитогенетических критериев. У всех больных при цитогенетическом исследовании обнаружена Ph-хромосома во всех метафазах. Больные получали разные схемы лечения: миелосан, гидроксимочевина в комбинации с веллфероном или интроном А, монотерапия (интрон А), интрон А в сочетании с малыми дозами цитозин- арабинозида. В динамике обследовано 9 больных. В качестве контроля использовали периферическую кровь 70 практически здоровых людей.
Проведено исследование функций нейтрофилов у 14 первичных больных ХМЛ в хронической стадии до начала лечения (мужчин - 5, женщин-9), в возрасте от 19 до 60 лет (средний возраст - 41,4±1,7 года). Число лейкоцитов в этой группе больных было высоким, колебалось в пределах от 28,5 до 360,0 х 120 91 л. Среднее значение более чем в 20 раз превышало показатели контроля и составило (120,0±25,0) х 109/л. Гемограмма была представлена нейтрофилами разной степени зрелости.
Число зрелых нейтрофилов (палочкоядерных и сегментоядерных форм) было относительно сохранным и в среднем составляло 56,5±3,1 %, небольшое снижение их числа выявили у 42,8% (6 из 14). Однако, за счет значительного увеличения количества лейкоцитов в циркулирующей крови, абсолютные цифры нейтрофилов, превышали норму в десять и более раз у всех больных (рис. 15, табл.30)
Среднее значение адгезии (47,3±1,6 %) было достоверно ниже (B d),01), чем в группе контроля. Колебания были от 38,6 % до 59,5 %. Снижение выявлено у 11 из 14 (78,5 %) пациентов, при этом у 3 из 14 (21, 5%) адгезия была на нижней границе нормы.
Средний коэффициент спонтанной агрегации был также снижен и составил 82,6±22,6 у.ед, но достверного различия не получено, так как снижение показателя выявлено только у половины больных. СК колебался в широких пределах от 1 до 217 усл.ед. Функция поглощения исследована у 12 больных (табл.31). Фагоцитарные индексы при минимальной инкубации (ФИ5 и ФЧ5) существенно не отличались от контроля. При максимальной инкубации выявлено значительное снижение ФИ60 у 7 из 12 (58,3 %) пациентов. ФЧ60 было снижено почти у всех (11 из 12) больных, с колебаниями показателей от 2 до 10,4, а у доноров от 9,3 до 17,3 частиц латекса на один нейтрофил. Средние показатели ФИ60 составили 56,1 ±3,6 %, ФЧ60-7,3±0,1, это значительно ниже, чем в контроле (Р 0,01). Выявлены низкие фагоцитарные индексы, однако скорость поглощения была высокой, что нашло отражение в показателе КФЧ, он был достоверно выше, чем в контроле и составил 0,42±0,03.
Активность МП и ЩФ была исследована у 6 больных. У большинства из них МП оказалась высокой и в среднем по группе составила 11,8±3,0 усл.ед. Не выявлено тесной корреляционной связи показателей МП с числом лейкоцитов и молодых форм нейтрофилов (г =0,27).
Отмечено резкое снижение активности ЩФ (6,0±2,6 усл.ед). Значительное снижение выявлено у 4 из 6 (66,6%) больных. У двух пациентов ЩФ оказалась сохранной, показатели СЦК были на нижней границе нормы.
Исследование экспрессии антигенов на нейтрофилах с помощью МКА, проведенное у 8 больных, выявило снижение показателей почти всех исследуемых антигенов. Экспрессия CDllb+ была снижена у 6 из 8 (75%), у двух пациентов она оказалась в пределах нормы. Среднее значение было достоверно ниже, чем в контроле и составило 48,2±6,8%. Отмечена тесная корреляционная связь между функцией адгезии нейтрофилов и экспрессией рецептора CDllb+ (г=0,67). Такие же закономерности получены и при анализе антигена CD18 (г=0,72). Средний уровень составил 37,8±4,7%, что достоверно ниже, чем в контроле (табл.32.). Экспрессия антигена CD 16 оказалась сниженной у всех больных. Среднее значение составило 36,6+8,2% (Р 0,02). Напротив, низкие показатели экспрессии антигена CD50 (ICAM3) определялись только у половины больных, у остальных они были нормальными и в среднем по группе (61,4±16,7%) различие оказалось недостоверным по отношению к контролю (Р 0,05). Особо следует указать на значительное снижение экспрессии антигена CD95, средний показатель которого был равен 5,1±1,4% (Р 0,001), это ниже, чем в контроле (57,8±6,6) более чем в 10 раз.
Экспрессия антигена CD34 определялись у всех больных в хронической стадии, при этом процент выявляемых CD34+ клеток был небольшим и составил 3,2±1,7%. Экспрессия антигена CD34 коррелировала (г=0,87) с числом бластных клеток (3,4±1,6%) в гемограмме.
Основываясь на нескольких предложенных ранее прогностических моделях, ряд авторов [28, 132] предложили так называемую систему стадирования и прогнозирования заболевания. Согласно этой модели из первичных больных в хронической стадии заболевания была выделена группа пациентов (4 из 14) с неблагоприятными гематологическими [1,28,] признаками (уровень лейкоцитов более чем 200 х 10 9/л, число незрелых нейтрофилов более 20 %, число тромбоцитов более 700 х 109 /л. увеличение базофилов более 7 %, число бластных клеток более 3%).
У больных с неблагоприятными гематологическими признаками выявлены (табл.33,34,35, рис. 14) более низкое число зрелых нейтрофилов, резкое снижение адгезии к пластику, ослаблена фагоцитарная функция. Так, ФИ60 составил 29,3+5,4 %, а ФЧ60 было равно 4,6±0,3, что почти в два раза ниже, чем у больных с благоприятными признаками. Отмечено резкое снижение экспрессии CDllb, CD18, CD50 и CD95 антигенов у больных данной группы 6,9±5,1%, 1,2±0,5%, 11,1+10,7% и 2,4+0,2% соответственно по сравнению с показателями больных с благоприятными признаками 5 8,1 ±8,6 %, 56,2+14,2%, 86,6±6,5 % и 5,7+0,5 % соответственно.
