Введение к работе
1. Актуальность проблемы
Среди всех онкологических заболеваний детского возраста более 1/3 составляет острый лейкоз (ОЛ), из которых около 802 представляет острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ). Современная химиотерапия наиболее эффективна при этой форме лейкоза [Махонова Л. А., 1973; Владимирская Е. Б., 1979, 1991; ДурНОВ Л.А..И соавт., 19913. Однако известен ряд факторов, существенно повышающих частоту рецидивов заболевания, к которым безусловно следует отнести нарушения метаболизма кобаламинов при ОЛ [Мясищева H.R, 1972-, 1990]. При прогностически неблагоприятньк вариантах ОЛЛ детей обнаружено сниженное содержание кобаламинов в бластных клетках крови и костного мозга, а также меньшая чувствительность к терапии [Мясищева а а и соавт., 19873. Вследствие снижения синтеза кобаламиновых коферментов в кроветворных клетках возникают растройства нормального кроветворения, пищеварительной, иммунной и нервной систем. Нарушение функциональной активности белков, транспортирующих экзогенные кобаламины в цитоплазму, составляет важное звено в этиопатогенезе различных заболеваний. Поэтому актуально изучение системы транспорта кобаламинов в кроветворные клетки. Транспортным белком плазмы, ответственным за поступление предшественников кобаламиновых коферментов в клетки, является транскобаламин-11 (Tell) [Hall С.A., Finkler А.Е., 1965; 1967]. Известно, что генетический дефект синтеза ТсII обуславливает нежизнеспособность-детей с нарушением гемопоэтических и иммунологических функций в результате сниженного поступления кобаламинов в кроветворные клетки [Frater-Schroder М. ,1979;Hitzig V. Н. et al, 1979;Rosenblatt D. S. , Cooper B. A., 1987-, Иегер Л. ,1990]. Проявлением нарушенного обмена Toll в организме взрослого человека является также значительное увеличение его концентрации в плазме при патологических состояниях, связанных с интенсивной пролиферацией клеток воспалительных, аутоиммунных и некоторых злокачественных заболеваниях, включая лейкозы взрослых [Rachmilewitz В. et al, 1971; Rachmilewitz В. ,1979; Iensen Н. С. et al, 1983; RanaK.S. et al, 1987].
Поступление кобаламинов в цитоплазму происходит в результате связывания транскобаламином-П кобаламина плазмы и взаимодействия этого комплекса с ТсІІ-рецептором (ТсІІ-рц) поверхностной мембраны клетки. Таким образом, кобаламин плазмы, а также Тс II плазмы крови и его специфический рецептор на поверхностной мембране клетки составляют основные биохимические пока-
- 4 -затели системы транспорта кобадаминов кровью. Известно, что концентрация кобаламинов в плазме при ОЛЛ часто снижена. Сниженное содержание кобаламинов в кроветворных клетках детей с ОЛЛ может быть обусловлено недостаточностью синтеза ТсП-рц поверхностной мембраны лейкозных клеток или изменением функциональной активности транспортного белка плазмы крови Сійсидева ER и соавт., 1987]. Предыдущими исследованиями, действительно, выявлена неоднозначность экспрессии ТсП-рц поверхностной мембраны лейкоаных клеток у детей с ОЛЛ [Мясищева ЕЕ ,1990; Орешкин А.Е. 1990; Мясищева ЕЕ и соав., 1993]. Однако, данные по Tell маемы крови детей с ОЛ, до проведения настоящего исследования в литературе отсутствовали. Вместе с тем, даже при нормальном уровне кобаламинов плазмы в условиях недостаточности Тс II в кроветворные клетки не поступает необходимого количества кобаламинов для нормальной жизнедеятельности. Нарушения в системе кроветворения вызывают сопряженные изменения иммунологического статуса и влияют на эффективность терапии. Поэтому для выяснения причин сниженного поступления кобаламинов в цитоплазму необходимы были исследования функциональной активности Тс II плазмы крови у детей с ОЛЛ.
Цель и задачи исследования Цель работы:
Изучение функциональной активности белка плазмы крови -транскобаламина II у детей с ОЛ, важного биохимического показателя системы транспорта кобаламинов кровью. Задачи исследования:
-
модифицировать биохимический метод количественного анализа Тс II плазмы крови для исследования у детей с ОЛ.
-
Количественная оценка транспортного белка-ТсII плазмы крови детей при нормальном состоянии кроветворения и с ОЛ.
III.Сравнительный анализ функциональной активности Тс II, содержания кобаламинов плазмы и числа ТсП-рц поверхностной мембраны лейкозных клеток у детей с ОЛЛ.
IV. Оценка эффективности системы транспорта кобаламинов кровью у детей с ОЛЛ.
Научная новизна работы
Впервые у детей с ОЛ и в группе детей относительного контроля методом электрофореза с использованием радиоактивного циа-
- 5 -нокобаламина исследовано содержание белка плавмы крови - тран-кобаламина-11, ответственного за поступление в кроветворные клетки предшественников кобаламиновых коферментов, необходимых для нормального гемо- и лимфопозза.
Для идентификации транскобаламина II среди кобаламинсвязы-ваюшда белков плазмы крови впервые был применен метод его избирательной сорбции с использованием суспензии мембран зрелой плаценты человека, рецепторы ворсин которой имеют специфичность и высокое сродство связывания Тс II плазмы.
Установлено, что Тс II плазмы является важным внеклеточным фактором регуляции экспрессии его специфических рецепторов на поверхностной мембране лейкозных клеток у детей с ОЛ.
Впервые на основе оценки эффективности системы транспорта кобаламинов в клетки крови у детей с ОЛЛ показана необходимость индивидуального подхода для выявления звена повреждения и выбора схемы метаболической коррекции нарушенного обмена кобаламинов в организме ребенка с помощью витамина В12 или кобаламиновых коферментов.
Научно-практическое значение работы
Адаптированный к клиническим исследованиям комплексный метод количественной оценки Тс II может быть применен при различных заболеваниях, включая заболевания кроветворной системы, а также для изучения синтеза и секреции Tell in vitro в клетках разного гистогенеза.
Получена количественная оценка белка плазмы крови - Тс II у детей с ОЛ. Нормальное содержание ТсII в плазме крови детей (относительный контроль) находиться в пределах 640 - 1100 пМ. При ОЛЛу детей выявлена нормальная (770-1100 пМ), сниженная (330-600 пМ) и повышенная (1200-1650 пМ) концентрация.
Количественная оценка Тс 11 плазмы у детей с ОЛ восполнила недостающее звено в оценке эффективности системы транспорта кобаламинов в кроветворные клетки. Полученные данные обосновывают необходимость метаболической коррекции при нарушениях обмена кобаламинов у детей с ОЛ. Это перспективно для улучшения иммунологического статуса детей и повышения эффективности лечения, учитывая необходимость кобаламиновых коферментов для пролиферации и созревания кроветворных клеток.
- б -
Публикации и апробация работы
Основные материалы диссертации изложены и обсуждены в 6 печатных работах. Диссертация апробирована и рекомендована к еащите на совместной научной конференции лабораторий эндогенных модифицирующих факторов канцерогенеза, биохимии опухолей, иммунологии онкогеиных вирусов НИИ канцерогенеза, группы метаболической коррекции НИИ детской онкологии и гематологии ОВД РАМН 19 июня 1997г.
Структура диссертации
Похожие диссертации на Функциональная активность белка плазмы крови транскобаламина-11 у детей с острым лейкозом
