Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 11
1.1 Роль свободнорадикального окисления в патогенезе заболеваний глаз 11
1.2 Система антиоксидантной защиты глаза. Применение антиоксидантных препаратов в офтальмологии 27
Глава II. Материал и методы исследования 35
2.1. Методы клинических исследований в эксперименте 35
2.2. Методы биохимических исследований в эксперименте 39
2.3. Методы гистологического исследования 44
2.4. Методика анализа материала и вычислительные средства 44
Глава III. Обоснование эффективности препарата тримексидин в лечении экспериментального гемофтальма 45
3.1. Клиническое течение экспериментального гемофтальма 45
3.2. Экспериментальное изучение влияния препарата тримексидин на гемодинамику глаза и орбиты 58
3.3. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований сыворотки крови при экспериментальном гемофтальме 69
3.4. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований слезной жидкости при травматическом гемофтальме 78
3.5. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований влаги передней камеры при экспериментальном гемофтальме 87
3.6. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований тканей глазного яблока при экспериментальном гемофтальме 96
Глава IV. Обоснование эффективности препарата тримексидин в лечении экспериментального увеита 102
4.1. Клиническое течение экспериментального увеита 102
4.2. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований при экспериментальном увейте 112
4.3. Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным гистологического исследования тканей глазного яблока при экспериментальном увейте 134
Заключение 142
Выводы 150
Практические рекомендации 152
Указатель литературы 153
- Роль свободнорадикального окисления в патогенезе заболеваний глаз
- Экспериментальное изучение влияния препарата тримексидин на гемодинамику глаза и орбиты
- Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований тканей глазного яблока при экспериментальном гемофтальме
- Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным гистологического исследования тканей глазного яблока при экспериментальном увейте
Роль свободнорадикального окисления в патогенезе заболеваний глаз
История открытия свободных радикалов (СР) и изучения их роли в биологических системах берет начало с 30-х годов прошлого века. В настоящее время известно более 8500 СР, которые оказывают различное влияние на живой организм и образуются в нем в результате естественного метаболизма кислорода или как промежуточные продукты окислительно-восстановительных процессов в обмене липидов, гормонов, лекарственных препаратов. Отличительной чертой веществ, относящихся к классу СР, является наличие на их внешней орбите атома или молекулы свободного неспаренного электрона, который обуславливает выраженную тенденцию вступать в химическую реакцию с целью достижения стабильности. Большое значение имеет способность СР взаимодействовать с молекулами клеточных мембран и разрушать их путем развития целого каскада реакций свободнорадикального окисления (СРО) [1,38,89,174].
СР регулируют ключевые моменты трансдукции и важнейшие внутриклеточные процессы, включая фосфорилирование белков, передачу генетической информации, активацию факторов транскрипции ДНК и клеточной пролиферации. Установлена роль СР в регуляции сосудистого тонуса, микробицидном действии фагоцитов [63,94,157,177]. Процессы образования различных факторов роста, синтез металлопротеинов и простагландинов (ПГ) также стимулируются повышенной продукцией СР [106,116,155]. В настоящее время наиболее изученными СР являются: супероксидный радикал ОгХсупероксид анион-радикал, диоксид), гидроксильный радикал ОН , синглетный кислород, перекись водорода Н2О2.
Известно, что в норме до 5% от всего потребляемого организмом кислорода превращается в супероксидные радикалы [153].
Гидроксильный радикал является наиболее реакционным и «вредным», оказывает цитотоксическое, мутагенное действие в условиях активации процессов СРО, может реагировать с любой молекулой без предварительного распознавания и разрушать ее внутренние связи [170,185]. При развитии СРО гидроксильный радикал вызывает повреждение ДНК, фибронектина, альбумина, белков системы комплемента [80,129,187,188].
Образование СР возможно путем различных химических реакций: реакции окисления с переносом электрона; распада молекул, содержащих слабую ковалентную связь; радиолиза; фотолиза; термолиза [137].
Ряд авторов полагает, что некоторые продукты естественного метаболизма, в частности, оксид азота (NO), обладают свойствами как про-, так и антиоксидантов [148]. В 1992 г. оксид азота был признан молекулой года, а в 1998 г. за открытие биологической роли NO группе американских ученых была присуждена Нобелевская премия [139]. Оксид азота является свободным радикалом, образующимся в результате преобразования гуанидиновой группы L-аргинина под действием фермента NO-синтазы. В присутствии супероксидного радикала NO превращается в пероксинитрит (ONOO"), обладающего довольно выраженными окислительными свойствами [184]. Способность оксида азота отдавать неспаренный электрон и участвовать в реакциях восстановления обуславливает его антиоксидантную активность в реакции хелатного соединения со СР [120,133,186]. Доказано, что в сетчатке оксид азота играет роль мощного антиоксиданта за счет стабилизации клеточных мембран астроцитов и митохондрий, обладает сосудорасширяющими, антиагрегационными, антитромбогенными свойствами, а также влияет на иммунитет, повышая активность макрофагов и нейтрофилов, обладает антимикробной, противоопухолевой активностью и улучшает проводимость нервных импульсов [9,49,176]. Источником эндогенного оксида азота в организме являются роговица, конъюнктива, эпителий хрусталика, эндотелий сосудов цилпарного тела и сетчатки [102].
Большинство авторов считают, что главным источником СР в организме служит дыхательная цепь митохондрий. Согласно митохондриальнои теории старения основной причиной возрастных изменений организма является мутация ДНК митохондрий под действием СР, приводящая к нарушению энергетического обмена клетки. Возрастные изменения митохондрий коррелируют с уменьшением показателя Пастера и накоплением лактата из-за уменьшения активности тканевого дыхания [149].
СР играют важную роль в процессе клеточного апоптоза. Апоптоз -универсальный биологический механизм, проявляющийся нарушением целостности мембран, сморщиванием клетки, распадом белка и ДНК, что обеспечивает обновляемость организма и поддержку нормального функционирования систем и органов. При дисбалансе процессов СРО апоптоз приводит к реализации повреждающего действия СР на клеточном уровне [138].
Значительный катализирующий эффект на процессы СРО могут оказывать большие концентрации ионов металлов (особенно двух- и трехвалентного железа, ионов меди), резкие изменения концентрации ионов кальция, а также сдвиги рН среды [178,185].
В живом организме СР вступают в следующие типы реакций: 1) взаимодействие с липидами, белками и нуклеиновыми кислотами; 2) защитные ферментные реакции; 3) реакции с веществами, дезактивирующими СР (акцепторами). Цитотоксическое действие СР направлено на индукцию процессов СРО в биологических мембранах, повреждение мембрансвязывающих белков, инактивацию ферментов и повреждение ДНК клеток [23,24,107,122,136,167].
В норме процессы СРО строго регулируются системой антиоксидантной защиты, которая функционирует на уровне молекул, клеток, тканей, органов и организма в целом, поддерживая равновесие гомеостаза [38,47,55,66]. Антиоксиданты - это полифункциональные соединения, которые в зависимости от механизма действия подразделяются на антирадикальные ингибиторы, взаимодействующие с органическими радикалами; антиокислители, разрушающие перекиси; хелаторы, связывающие катализаторы окисления (ионы металлов); тушители, инактивирующие возбужденное состояние молекул [42].
В последние годы для описания дисбаланса в системе СР и антиоксидантной защиты стал применяться термин «окислительный стресс», отражающий преобладание процессов СРО в организме и развитие различных заболеваний [19,47,159]. Развитие окислительного стресса может наблюдаться на уровне клеток, тканей или организма в целом [175,180].
Окислительные процессы с участием СР являются неотъемлемым звеном существования высших форм живых организмов. Однако многие вопросы регуляторной функции СР, их взаимодействия с антиоксидантами, физиологической и патологической роли все еще остаются спорными [5].
Еще в 70-80х годах прошлого века D. Harman [130] и Н.М. Эмануэль [97] выдвинули предположение об участии СР в процессе старения организма. Важнейшими свойствами СР являются цитотоксичность, атерогенез и канцерогенез, которые реализуются через молекулярные механизмы повреждения мембран, ферментов и нуклеиновых кислот и имеют огромное значение в развитии патологических состояний [121]. С возрастом в организме нарушается естественный баланс между образованием СР и антиоксидантной защитой, что приводит к активному повреждению макромолекул, в частности, мембран фосфолипидов. Происходит повышение концентрации белков с карбонильной группой, гидрофобных и гликированных белков, окисленного метионина на фоне уменьшения активности ферментов антиокислительной защиты [8,28,183].
В настоящее время роль СРО доказана в патогенезе более чем 100 заболеваний и патологических состояний, многие из которых связаны с неблагоприятным воздействием внешней среды или строго ассоциируются с возрастом [47].
Известно, что развитие многих глазных заболеваний: возрастной макулярной дегенерации (ВМД), глаукомы, катаракты, псевдоэксфолиативного синдрома, диабетической ретинопатии, увеитов, внутриглазных кровоизлияний, симпатической офтальмии также связано с процессами СРО [8,9,14,18,68,89,91,108,113,114,118,119,145,155].
Роль СРО и повышенного образования СР в патогенезе катаракты впервые установлена на примере сенильной и радиационной катаракты [25]. В развитии помутнений хрусталика при радиационной катаракте имеют место две фазы: первая связана с общим усилением процессов СРО в сыворотке крови и увеличением концентрации восстановленного глутатиона в хрусталике; во второй происходит снижение уровня восстановленного глутатиона и смещение факторов антиокислительной активности в сторону окисления [11,14,86,119].
Экспериментальное изучение влияния препарата тримексидин на гемодинамику глаза и орбиты
Имеющиеся в литературе сведения о кровоснабжении глаза кролика представлены в разделе «Материалы и методы исследования».
В результате выполненного анализа трехмерной реконструкции сосудистой системы глаза и орбиты кролика, и на основании литературных данных была разработана схема кровоснабжения глазного яблока кролика (Рис.14). Сопоставление этой схемы с полученными результатами ультразвукового исследования в режиме ЦДК и ЭК дает возможность более точно идентифицировать сосуды в ретробульбарном пространстве и избежать артефактов (Рис. 15, 16).
В аксиальной плоскости сканирования идентифицировали задние короткие цилиарные артерии (ЗКЦА), если сосудистая структура визуализировалась вблизи заднего полюса глаза и параллельно ему, при этом поток крови был направлен в сторону глаза (Рис. 17, 18). Сосудистые потоки, которые отмечались латеральнее задних коротких цилиарных артерий по ходу прямых мышц идентифицировали как задние длинные цилиарные артерии (ЗДЦА) (Рис. 19, 20). При проведении аксиальной плоскости сканирования через задний полюс глаза в проекции зрительного нерва определяли центральную артерию сетчатки (ЦАС) и центральную вену сетчатки (Рис. 21, 22).
Постоянный поток крови, расположенный у вершины орбиты на расстоянии около 0,4 см от заднего полюса глаза идентифицировали как глазную артерию. Для точного определения глазных артерий сравнивали место визуализации потока крови с проекцией зрительного нерва. Если поток крови располагался кнутри от зрительного нерва, то его определяли как верхнюю глазную артерию (ВГА), если кнаружи - как нижнюю глазную артерию (НГА). При измерении ультразвукового допплеровского спектра кровотока анализировали следующие показатели: максимальную систолическую скорость кровотока (Vs), конечную диастолическую скорость кровотока (Vd), среднюю скорость кровотока (Vm), индекс резистентности или сосудистого сопротивления (RI), пульсационный индекс (PI). Для каждого животного регистрировали допплеровскии спектр кровотока и значения выбранных показателей. Определение параметров кровотока в сосудах глаза и орбиты проводили у кроликов 1А, 1В и 1С групп в 1-е сутки после введения аутокрови в стекловидное тело и контрольной группы. По всем гемодинамическим параметрам статистически достоверных различий у этих животных не отмечалось (р 0,05). Исходя из этого, сравнение параметров кровотока проводили до и после лечения. После статистической обработки полученных данных были установлены параметры средних показателей кровотока сосудов глаза и орбиты у здоровых кроликов, представленные в табл. № 1, 2.
Состояние кровотока глаза и орбиты кроликов изучали спустя 2 недели после применения тримексидина в виде глазных инъекций. После проведения курса лечения отмечали увеличение систолической скорости кровотока в ЦАС, ЗКЦА, ЗДЦА на 30% по сравнению с предыдущими данными. Систолическая скорость кровотока в ВГА и НГА изменялась незначительно, но превышала показатели до лечения на 15% (р 0,001). Отмечали наибольшие изменения диастол ической скорости кровотока, которая возрастала в ЦАС в 2 раза, в ЗКЦА - в 2,4 раза, в ЗДЦА - в 1,6 раза, в ВГА - в 2,3 раза и в НГА - в 1,6 раза по сравнению с первоначальными показателями. Данный факт свидетельствует о более быстром прохождении крови по сосудам и ускорении кровообращения, что препятствует развитию венозного застоя. При исследовании средней скорости кровотока, которая является наиболее постоянной характеристикой допплеровского спектра кровотока, отмечалось ее увеличение на 25% в ЦАС, ЗКЦА и ЗДЦА (р 0,01). В ВГА и НГА после применения тримексидина средняя скорость кровотока превышала исходные данные на 20% (р 0,001). Положительная динамика этого показателя свидетельствовала об ускорении кровообращения в сосудах глаза и орбиты и увеличении количества крови, протекающей через глазное яблоко за единицу времени.
После проведения курса терапии тримексидином наблюдали изменения индекса резистентности, который снижался в ВГА и НГА на 30%, в НАС в 1,4 раза, ЗКЦА и ЗДЦА в 1,8 раза по сравнению с исходными показателями (р 0,001). Изменение индекса резистентности свидетельствовало о снижении периферического сопротивления кровотока и большем кровенаполнении органа. Также отмечались изменения со стороны пульсационного индекса, который уменьшался в ЦАС в 1,5 раза, в ЗКЦА, ЗДЦА, ВГА и НГА в 2 раза по сравнению с исходными данными (р 0,001). Динамика пульсационного индекса под влиянием применения тримексидина показала улучшение эластичности стенки сосудов глаза и орбиты.
Количественные характеристики кровотока в сосудах глаза и орбиты соответствовали изменениям качественных показателей объемного кровотока с трехмерной ангиореконструкцией сосудистых потоков. Проведение исследования кровотока после применения тримексидина показало обогащение карты потоков, расширение сосудистого русла и увеличение объема крови в сосудах глаза и орбиты.
Таким образом, современные ультразвуковые методы исследования позволяют изучить строение глаза и орбиты в двухмерном и трехмерном режиме, получить параметры глазного кровотока. Особенностью исследования допплеровского спектра кровотока у кроликов является более четкая визуализация потоков крови в энергетическом режиме и возможность более детального исследования в режиме трехмерной реконструкции. Это позволило изучить кровоток в сосуде на протяжении и оценить направление хода сосуда, анатомическое расположение сосудов и их взаимоотношение с другими орбитальными структурами. Следовательно, ЦДК и ЭК с трехмерной ангиореконструкцией являются более информативными методами исследования орбитального кровотока. Сравнительная трехмерная ангиреконструкция дает представление об объемной скорости кровотока и степени кровенаполнения сосудов, позволяет провести анализ кровоснабжения выбранной структуры и сравнить эффективность применения вазоактивных препаратов в условиях эксперимента.
Применение препарата тримексидин приводит к увеличению систолической, диастолической и средней скорости кровотока в сосудах глаза и орбиты, при этом максимально изменяется диастолическая скорость кровотока, что является признаком ускорения кровообращения в органе. Можно предположить, что положительное влияние тримексидина на резорбтивные процессы в стекловидном теле частично обусловлено интенсификацией кровотока и, как следствие, метаболических процессов в глазном яблоке. Эти изменения касаются в большей степени сосудов среднего калибра (НАС, ЗКЦА, ЗДЦА) по сравнению с сосудами крупного калибра (ВГА, НГА). Снижение показателей индекса резистентности и пульсационного индекса является проявлением положительного влияния препарата тримексидин на периферическое сопротивление кровотоку, сосудистый тонус и эластичность кровеносных сосудов. Эти изменения можно расценить как благоприятные, поскольку исключается возможность венозного застоя, экссудативных явлений и обеспечивается быстрая циркуляция крови.
Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным биохимических исследований тканей глазного яблока при экспериментальном гемофтальме
Определение концентрации продуктов СРО и факторов антиоксидантной защиты в тканях глаза имеет важное значение в экспериментальном исследовании. Это связано, во-первых, с возможностью оценить течение патологического процесса непосредственно в месте его развития, а не по косвенным изменениям биохимических показателей сыворотки крови, слезной жидкости и влаги передней камеры; во-вторых, с отсутствием возможности проведения подобных исследований при лечении глазной патологии у человека.
Результаты биохимических исследований ткани сетчатки у кроликов с гемофтальмом на 15-е сутки эксперимента представлены в табл. № 21. Как видно из таблицы, показатели концентрации белка, ТБК-активных продуктов и гидропероксидов у животных, получавших тримексидин, практически совпадали с таковыми в группе контроля (р 0,05). Различия в уровне белка, ТБК-активных продуктов и гидропероксидов в 1А, 1В и 1С группах оказались статистически недостоверными (р 0,05). Таким образом, к концу исследования при лечении тримексидином биохимические показатели сетчатки соответствовали параметрам нормы. Эти изменения свидетельствовали о благоприятном течении экспериментального гемофтальма без признаков вторичных осложнений.
Активность АОА в сетчатке превышала данные интактного контроля в 1А и 1В группах в 3 раза, в 1С группе - в 2,8 раза (р 0,001). Уровень ГПО у кроликов, получавших тримексидин, превышал норму в среднем по группам в 1,6 - 1,8 раза (р 0,001). Статистически достоверных различий в активности ГПО в 1А, 1В и 1С группах не отмечалось (р 0,05). Активность СОД в сетчатке при лечении тримексидином была выше нормы в среднем в 2 раза (р 0,001). Достоверных различий в содержании СОД в 1А, 1В и 1С группах не наблюдалось (р 0,05). Высокая активность факторов антиоксидантной защиты в ткани сетчатке при лечении тримексидином свидетельствует о ретинопротекторном действии препарата и коррелирует с отсутствием вторичной альтерации тканей при рассасывании гемофтальма.
В ID группе, получавшей эмоксипин, концентрация белка в сетчатке превышала данные нормы в 1,28 раз, ТБК-активных продуктов - в 1,88 раз (р 0,001). Уровень гидропероксидов в ID группе превышал показатели интактного контроля в 1,3 раза (р 0,01). Показатель АОА при лечении эмоксипином был выше данных интактного контроля в 1,46 раз (р 0,001). Активность ГПО в ID группе превышала интактный контроль на 20%, СОД-на 18%) (р 0,01). Следовательно, при лечении эмоксипином в тканях глаза отмечался более высокий уровень белка и продуктов СРО и менее выраженная активность факторов антиоксидантной защиты, чем при применении тримексидина. Изменения биохимических показателей соответствовали умеренно выраженному повреждению тканей глаза у кроликов, получавших эмоксипин и признакам неполного рассасывания внутриглазного кровоизлияния.
Наибольшие различия биохимических показателей ткани сетчатки с группой контроля определялись в IE группе. Концентрация белка в сетчатке превышала норму в 1,38 раза, ТБК-активных продуктов - в 2,7 раза и гидропероксидов - в 1,78 раза (р 0,001). Такие изменения происходили на фоне угнетения естественной антиокислительной активности в IE группе: уровень АОА, ГПО и СОД практически совпадал с данными интактного контроля (р 0,05). Дисбаланс между уровнем образования СР и активностью факторов антиоксидантной защиты свидетельствовал об истощении антиокислительных резервов сетчатки и неблагоприятном течении патологического процесса с альтерацией тканей глаза. Резкий сдвиг в биохимических показателях соответствовал картине выраженного фиброзного перерождения СТ и развитию в 2 случаях тракционной отслойки сетчатки. Биохимические показатели стекловидного тела у кроликов с гемофтальмом на 15-й день исследования представлены в табл. № 22. У кроликов, получавших тримексидин, уровень белка в СТ превышал норму в среднем по группам в 6,3 раза, ТБК- активных продуктов - в 2,7 раза (р 0,001). Концентрация гидропероксидов при лечении тримексидином была в 1,2 раза выше данных группы контроля (р 0,01). Различия показателей содержания белка, ТБК-активных продуктов и гидропероксидов в 1А, 1В и 1С группах оказались статистически недостоверными (р 0,05). Относительно более высокое, по сравнению с сетчаткой, содержание белка и продуктов СРО в стекловидном теле объясняется тем, что именно стекловидное тело является «органом-мишенью» при развитии экспериментального гемофтальма. Активность АОА у кроликов при лечении тримексидином была выше данных интактного контроля в среднем в 1,7 раза, ГПО - в 1,5 раза, СОД - в 2,7 раза (р 0,001). Статистически достоверных различий показателей АОА, ГПО и СОД в 1А, 1В и 1С группах не было (р 0,05). Высокое содержание факторов антиоксидантной защиты в СТ объясняется его ролью «антиоксидантного буфера» по отношению к сетчатке. Биохимические показатели тканей глаза кроликов, получавших тримексидин, коррелировали с низким уровнем повреждения СТ и практически полной резорбцией гемофтальма.
В ID группе, получавшей эмоксипин, концентрация белка была выше данных интактного контроля в 8,6 раза, ТБК-активных продуктов - в 4,6 раза и гидропероксидов - в 1,95 раза (р 0,001). Уровень факторов антиоксидантной защиты АОА и ГПО в ID группе практически соответствовал данным группы контроля (р 0,05). Активность СОД в СТ при лечении эмоксипином превышала норму в 1,3 раза (р 0,001). Таким образом, при лечении эмоксипином в тканях глаза отмечался более высокий уровень белка и продуктов СРО, чем при назначении тримексидина. Изменения биохимических показателей соответствовали умеренному повреждению тканей глаза и фиброзу СТ у кроликов, получавших эмоксипин.
Максимальные различия биохимических показателей СТ с группой контроля наблюдались в IE группе. Концентрация белка в IE группе превышала норму в 18,46 раза, ТБК-активных продуктов - в 5,4 раза и гидропероксидов - 3,9 раза (р 0,001). Показатели АОА и СОД в стекловидном теле кроликов IE группы и группы контроля были практически одинаковыми (р 0,05). Уровень ГПО в IE группе был в 1,47 раз ниже нормы (р 0,001). Резкое увеличение содержания белка и продуктов СРО в стекловидном теле свидетельствовало о вероятном срыве естественной регуляции реакций окисления и активном повреждении тканей глаза. Такой дисбаланс между уровнем образования СР и активностью факторов антиоксидантной защиты свидетельствовал об истощении антиокислительных резервов стекловидного тела и неблагоприятном течении патологического процесса.
Полученные нами биохимические показатели сетчатки и стекловидного тела у интактных кроликов подтверждают данные литературы о высокой антиоксидантной активности стекловидного тела, которое по результатам наших исследований превышает АОА сетчатки в 5,5 раз, уровень ГПО - в 3 раза. Следовательно, это подтверждает предположение о важной роли антиокислительной системы стекловидного тела в защите сетчатки от повреждения СР при различных видах патологии глаза.
Таким образом, клиническое течение экспериментального гемофтальма, результаты биохимических исследований сыворотки крови, слезной жидкости, влаги передней камеры и тканей глаза свидетельствуют о высокой антиоксидантной активности препарата тримексидин и его более высокой эффективности по сравнению с эмоксипином в терапии внутриглазных кровоизлияний при его парабульбарном и субконънктивальном введении, как в стандартной, так и в половинной дозе..
Обоснование эффективности препарата тримексидин по данным гистологического исследования тканей глазного яблока при экспериментальном увейте
Гистологическое исследование проводили у животных с увеитом на 15-й день эксперимента. Для изготовления гистологических препаратов отбирали по 6 энуклеированных глаз из 2А и 2В групп, которые подвергали специальной обработке (см. главу «Материалы и методы»). Подготовленные препараты микроскопировали и оценивали степень воспалительных изменений тканей глазного яблока.
Степень выраженности воспалительного процесса в оболочках глаза оценивали согласно следующим критериям:
1) состояние перилимбальной конъюнктивы;
2) характер инфильтрации рубца;
3) выраженность спаечного процесса в зоне нанесения травмы;
4) участие пигментного эпителия и дендроцитов в воспалительной реакции;
5) участие лимфоидных, плазматических и эпителиальных клеток в формировании рубца;
6) состояние сетчатки.
В гистологических препаратах животных 2В группы, не получавших лечения, в месте нанесения травмы определялся выраженный клиновидный рубец с активной инфильтрацией фибробластами. В передней камере глаза наблюдали образование широкой спайки, отложение экссудата на цилиарных отростках и миграцию пигментных клеток радужки к месту нанесения травмы (Рис. 33).
В перилимбальной зоне отмечались диффузная инфильтрация вокруг сосудов, формирование выраженного иридокорнеального рубца с участием пигментных клеток, макрофагов, фибробластов, склероцитов, эндотелиальных клеток и стромы конъюнктивы. Число пигментных клеток составляло 20 п/з (Рис. 34). В перилимбальной конъюнктиве определялась массивная субэпителиальная периваскулярная инфильтрация. Инфильтрат состоял из плазмоцитов, лимфоцитов и макрофагов. Перилимбальный инфильтрат занимал как эпителиальный, так и субэпителиальный слои конъюнктивы.
При исследовании ткани радужки и цилиарного тела отмечалось нарушение ее нормальной структуры, пролиферация и миграция меланоцитов в зону повреждения, число которых составляло 10 п/з (Рис. 35).
Этот процесс сопровождался образованием дефектов в пигментном эпителии и нарушением его нормальной целостной структуры (Рис. 36).
При микроскопическом исследовании срезов сетчатки во всех препаратах имело место изменение правильного расположения слоев сетчатки с развитием экссудативных явлений преимущественно во внутреннем плексиформном слое и слое ганглиозных клеток (Рис. 37). Во всех препаратах 2В группы наблюдалось отслоение ретинального пигментного эпителия от сетчатки.
В препаратах 2А группы, получавшей тримексидин, в месте нанесения травмы отмечалось формирование тонкого рубца с участием фибробластов, склероцитов и эндотелиальных клеток, миграции клеток пигментного эпителия отсутствовала. Инфильтрация рубца была выражена умеренно (Рис. 38).
В перилимбальной зоне наблюдалось умеренная инфильтрация конъюнктивы, состоявшая из плазмоцитов и лимфоцитов. Более выраженная инфильтрация была в эпителиальном слое конъюнктивы (Рис. 39).
При гистологическом исследовании нормальная структура ткани радужки была сохранена во всех препаратах, отсутствовали пролиферация пигментного эпителия и миграция меланоцитов в зону повреждения. Воспалительная инфильтрация в строме радужки не наблюдалась. Число меланоцитов составляло 4 п/з (Рис. 40).
Слой пигментного эпителия был полностью сохранен, отсутствовала миграция клеток (Рис. 41).
При микроскопическом изучении сетчатки отмечалась полная сохранность ее структуры, вакуолизация слоев происходила при изготовлении препаратов (Рис. 42). Отслоение ретинального пигментного эпителия от сетчатки отмечалось в 2 из 6 препаратов. Данное наблюдение подтверждает наличие у тримексидина ретинопротекторных свойств.
Результаты гистологического исследования свидетельствуют о развитии более выраженного воспалительного процесса переднего отрезка глаза у кроликов с увеитом, не получавших лечения и минимальном проявлении воспалительной реакции при лечении тримексидином. Кроме того, гистологическое исследование подтверждает наличие у препарата ретинопротекторных свойств.
Таким образом, полученные результаты клинических исследований свидетельствуют о высокой эффективности препарата тримексидин. Применение тримексидина резко снижает активность воспалительного процесса, уменьшает сроки развития увеита и выраженность основных симптомов, препятствует переходу заболевания в хроническую форму и развитию вторичных поствоспалительных осложнений.
Клинические симптомы в динамике коррелировали с изменениями биохимических показателей СРО и антиоксидантной защиты в сыворотке крови, слезной жидкости, влаге передней камеры и тканях глаза. Отмечалось подавление образования белка, СР и повышение активности факторов антиоксидантной защиты во всех биологических материалах. Данные гистологического исследования свидетельствуют о минимальном проявлении воспалительной реакции при лечении тримексидином.
Доказана эффективность применения нового антиоксидантного препарата тримексидин в лечении экспериментального увеита, что позволяет рекомендовать данный препарат для апробации в клинике при лечении воспалительных заболеваний переднего отрезка глаза.
