Введение к работе
Актуальность проблемы. Рак предстательной железы (РПЖ) относится к числу наиболее значимых и распространенных заболеваний нашего времени. Cреди причин смерти мужчин от опухолей, РПЖ занимает второе место после рака легких [Лопаткин Н.А.,2002]. Настораживающей является выраженная тенденция роста заболеваемости во многих странах, в том числе и России. Одновременно отмечается рост смертности от этой болезни [Бухаркин Б.В., 2003].
Для РПЖ характерно раннее метастазирование, чаще всего гематогенным путем в кости таза и позвоночник. Применяемые методики отбора больных, включающие пальцевое ректальное исследование, определение простатического специфического антигена (ПСА), трансректальное ультразвуковое исследование простаты, пункционную биопсию с гистологическим исследованием и определением степени злокачественности по Глиссону, в большом числе наблюдений не позволяют адекватно оценить стадию заболевания и биологический потенциал рака простаты, характеризующего способность опухоли к метастазированию. Раннее выявление процесса диссеминации её необходимо для правильного выбора лечебной тактики, в том числе при отборе пациентов на радикальное хирургическое лечение, при решении вопроса о назначении адъювантной терапии до и после него. Также это важно для мониторинга состояния больных.
С 1992 года разрабатывается методика применения обратно транскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) для определения циркулирующих в крови клеток опухоли предстательной железы, основанная на определении мРНК простатического специфического антигена [Moreno J.G., 1999]. В зарубежной литературе предложено называть обнаруженные в крови раковые клетки солидных опухолей гематогенными микрометастазами [Pelkey T.J., 1996]. Проведены исследования, подтверждающие возможность использования данной методики как для предоперационной диагностики стадии процесса, так и послеоперационного выявления рецидива [Katz A.E., 1994]. Имеются данные о применении реакции для первичной диагностики РПЖ [Bostwick D.G., 1998]. Предложено использовать данную методику для изучения возможности гематогенной диссеминации клеток рака простаты после лечебно-диагностических процедур, проводимых на предстательной железе [Cama C., 1997]. В России систематичеких исследований в этом направлении нет. Результаты опубликованных зарубежных исследований противоречивы. Для практического применения методики клиницистами необходимо продолжить исследования в этой области.
Целью настоящего исследования является изучение клинического значения выявления клеток рака простаты в периферической крови с помощью ОТ-ПЦР, специфичной мРНК ПСА, а также исследование возможности гематогенной диссеминации при проведении лечебно-диагностических манипуляций на предстательной железе.
Нами сформулированы следующие задачи исследования:
провести экспериментальный анализ и оптимизацию имеющихся методик ПСА-специфичной ОТ-ПЦР периферической крови для использования их при дальнейших клинических исследованиях;
изучить чувствительность и специфичность выбранного метода и взаимосвязь результатов ОТ-ПЦР с традиционными диагностическими и прогностическими критериями при исследовании пациентов без заболеваний простаты, с фоновыми и предраковыми заболеваниями, а также РПЖ;
сопоставить динамику изменения результатов ОТ-ПЦР крови и уровня ПСА на фоне гормонального лечения и без него при динамическом наблюдении больных РПЖ;
провести анализ влияния лечебно-диагностических процедур (биопсии простаты, массажа простаты, радикальной простатэктомии, трансуретральной резекции простаты) на результат ОТ-ПЦР исследуемых пациентов.
Научная новизна. Впервые в России проведено исследование по выявлению циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР для мРНК ПСА. Проведена оптимизация и анализ чувствительности нескольких методик ОТ-ПЦР с применением четырех групп ПСА-специфичных праймеров. Установлено, что выбранная методика обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью, является сравнительно недорогостоющей и технически доступной.
На клиническом материале показана высокая чувствительность и специфичность метода, взаимосвязь его результатов с уровенем ПСА, степенью дифференцировки первичной опухоли, её размером, наличием поражения регионарных лимфатических узлов и отдаленных метастазов.
Установлена возможность выявления циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР у пациентов с отсутствием метастазов по результатам традиционных методов исследования.
При обследовании пациентов с подозрением на рак простаты установлена возможность попадания простатических клеток в кровеносное русло при простатической интраэпителиальной неоплазии высокой степени (ПИН-2).
Впервые продемонстрирована возможность гематогенной диссеминации после массажа простаты, а также после биопсии простаты, радикальной простатэктомии (РПЭ), трансуретральной резекции простаты (ТУР) у пациентов с ПИН-2 и раковой трансформацией.
Практическая ценность работы. Апробирована и оптимизирована высоко чувствительная и специфичная методика выявления клеток рака простаты в крови с помощью ОТ-ПЦР, позволяющая установить процесс гематогенной диссеминации в более ранние сроки по сравнению с традиционными методами диагностики метастазов. Результаты исследования могут использоваться для индивидуальной оценки метастатического потенциала опухоли а также риска развития РПЖ при наличии ПИН-2. Показана возможность временной гематогенной диссеминации после проведения биопсии простаты, ТУР, масажа простаты и радикальной простатэктомии, что является обоснованием для более строгих показаний при планировании подобных процедур.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Методика выявления циркулирующих в крови клеток рака простаты с помощью ОТ-ПЦР специфичной мРНК ПСА является высоко чувствительной и специфичной, а также коррелирует с традиционными диагностическими и прогностическими критериями РПЖ, что подтверждает ее клиническое значение.
2. У больных раком простаты методика позволяет выявлять процесс метастазирования на раннем этапе и может применяться для ранней диагностики процесса диссеминации рака предстательной железы.
3. У больных с подозрением на рак предстательной железы методика может применяться для оценки риска развития диссеминированного рака простаты.
Апробация работы. Результаты исследований доложены на X Российском съезде урологов (Москва, 2002); III съезде биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002); Научно-практическом симпозиуме «Технологии генодиагностики в практическом здравоохранении» в рамках Международной конференции «Геномика, протеомика и биоинформатика для медицины» (Москва, 2002); конференции «Онкологическая урология: от научных исследований к клинической практике (современные возможности диагностики и лечения опухолей предстательной железы, мочевого пузыря и почки» (Москва, 2004); III конференции молодых ученых с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004); II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2005); XI съезде Российских урологов (Москва, 2007), а также неоднократно обсуждались на научно-практических конференциях кафедрах урологии и биохимии ММА им. И.М.Сеченова. Апробация работы состоялась на совместном заседании кафедры урологии и кафедры биохимии ММА им. И.М.Сеченова 23 мая 2008 года.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 123 страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации и список цитированной литературы, включающий 190 источников (20 отечественных, 170 зарубежных). Работа иллюстрирована 15 рисунками и 34 таблицами.
