Введение к работе
Актуальность проблемы. Онкологические заболевания занимают второе место по причине смертности в мире после сердечно-сосудистых заболеваний (Трапезников и Аксель, 1999) и представляют собой одну из паиболсе актуальных проблем здравоохранения. Согласно современным представлениям, важную роль в процессе канцерогенеза играют гены-супрессоры, подавляющие опухолевый рост. Поиск таких генов является важным этапом в изучении механизмов возникновения и развития раковых заболеваний. Для поиска генов-супрессоров проводят картирование областей ДНК, подверженных делениям в раковых клетках и исследуют подавление роста опухоли под действием фрагментов ДНК из этих районов.
Делении и хромосомные перестройки, происходящие в злокачественных новообразованиях человека, затрагивают многие хромосомы (Mitclman et al., 1997; Mertcns et al., 1997; Fujii et al., 1998; Ingvarsson et al., 1998). В некоторых видах эпителиальных опухолей, таких как светлоклеточная карцинома почки и во всех видах рака легкого в наибольшей степени повреждается короткое плечо хромосомы 3 (Kok et al., 1997; Ullmann et al., 1998). Делении в области короткого плеча хромосомы 3 также обнаружены в опухолях многих других органов: молочной железы, шейки матки, желудка, прямой кишки, яичпиков и мочевого ігузьгря (Kok et al., 1997; Su et al., 1998). Высокая частота потери гетерознготпости в некоторых районах хромосомы Зр, обнаружение гомозиготных делеций в этих же районах, а также проявляемая ими опухолеподавляющая активность позволяют предположить, что короткое плечо хромосомы 3 содержит гены, инактивация или изменение функции которых является
Kpri intvvK/Ш C*j \j ції il сім. В її а * GrCuvj v П^-лміОріл-Л niuvu puniu и vw33ti \* ~hxhyi іш iw^iuijiui"
гшече хромосомы 3 проводится интенсивный поиск генов, вовлеченных в развитие рака почки, легкого, молочной железы, шейки маїкм и друї их органов.
Цель и задачи пселсдовяпия. Цель данной работы состояла в детальном анализе потери гетерозиготпости на коротком плече хромосомы 3 человека при раке почки, легкого, молочной железы и шейки матки для выявления участков локализации потенциальных гепов-супрессоров, обпшх и специфичных для этих типов рака.
В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:
провести детальный анализ потери гетсрозиготности в 20 локусах короткого плеча хромосомы 3 человека в тотальной ДНК из образцов рака почки, рака легкого, рака молочной железы и рака шейки матки (всего 164 образца);
сравнить характер аллельных потерь в четырех типах эпителиального рака и определить участки, наиболее подверженные делениям;
определить возможную корреляцию между частотой потери гетерозиготности и клиническими и гистологическими параметрами опухолевых образцов.
Научная новпзпа работы. В данной работе впервые проведен сравнительный анализ нестабильности короткого плеча хромосомы 3 человека с использованием плотной панели микросатсллитных маркеров (20 полиморфных локусов) в
эпителиальных опухолях четырех разных локализаций. Полученные данные позволили впервые в сопоставимых условиях сравнить степень аллельных изменений иа коротком плече хромосомы 3 в разных типах рака и значимость рада критических районов хромосомы Зр для поиска гспов-супрессоров опухолевого роста. Показано, что в опухолях почки и легкого преобладают более протяженные аллельные делении и частота потерь гетерозиготности в большинстве локусов в два раза выше, чем в опухолях молочной железы и шейки матки. Это различие позволило предположить участие дополнительных генетических элементов на хромосомы Зр в патогенезе рака почки и легкого. В результате анализа частот потерн гетерозиготности на хромосоме Зр определены новые локусы-кандидаты для генов-супрессоров опухолевого роста, в том числе общий локус для трех форм эпителиальной нсоплазии, который был локализован вблизи маркера D3S2409 в районе Зр21.31. Для рака почки и рака легкого показала корреляция гистопатололпеских параметров опухоли с протяженностью аллельных Зр-делеций.
Практическая ценность работы. Исследование потери гетерозиготности в
микросателлитных локусах в четырех типах эпителиального рака позволило выявить
ряд участков на хромосоме Зр, которые могут быть местами локализации генов-
супрессоров. Эти данные могут явиться основой для дальнейших исследований с целью
идентификации генов, вовлеченных в развитие и прогрессию раковых заболеваний. В
настоящее время по результатам работы проводится отбор РАС-клонов,
принадлежащих к найденным локусам-кандидатам. Применение
высокоинформативных микросателлитных локусов в качестве тестов может быть перспективным дтГл доклинической диагностики и іірсгїїч.і*цд*ишііія разВи&схл заболевания. Клонирование новых генов-супрессоров открывает возможности его применения в генной терапии.
Апробация работы. Диссертационная работа была представлена на заседании Секции молекулярной биологии Ученого Совета ГУЛ «ГосНИИ генетика» от 22 декабря 1999 г. Результаты настоящей работы докладывались на ежегодных конфереіщиях Государственной Подпрограммы «Геном человека» (Москва, Черноголовка, 1996, 1997, 1998, 1999 гг.), на конференциях ГУЛ «ГосНИИ генетика» (1996, 1997 гг.), на конгрессах международной организации по изучению генома человека HUGO (Гейдельберг, 1996 г.; Турин, 1998 г.; Брисбэйн, 1999 г.; Ванкувер, 2000 г.), на конференциях европейского сообщества по изучепию генетики человека ESHG (Лиссабон, 1998 г.).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, включая две статьи и тезисы докладов и сообщений на международных конференциях.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания используемых материалов и методов, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 120 страницах машинописного текста и содержат .15 таблиц и 8 рисунков.
