Содержание к диссертации
Стр.
СПИСОК ПРИНЯТЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ 6
ВВЕДЕНИЕ 8
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 17
ГЛАВА 1. БИОГЕННЫЕ АМИНЫ (НЕИРОГОРМОНЫ) И ИХ РОЛЬ В 17
МЕХАНИЗМЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПРО- И ЭУКАРИОТ
Роль биогенных аминов в регуляции жизнедеятельности 17 прокариот
Биогенные амины в иммунопатогенезе инфекционных 29 болезней
Модулирующее действие биогенного амина серотонина на 35 процессы формирования адаптивного иммунитета
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 42
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 42
Материалы 42
Методы исследования 44 2.2.1. Микробиологические методы исследования 44
Культивирование микроорганизмов в присутствии 44 серотонина
Приготовление бактериальных взвесей и смешанных 45 культур
Морфометрия бактериальных клеток, колоний чумного 46 микроба
Электрофоретическое разделение цельно-клеточных лизатов 47 исследуемых культур в полиакриламидном геле (SDS - PAGE)
Определение содержания ДНК в микробных клетках 48 методом проточной цитометрии
Проточно-цитофлуориметрический мониторинг экспрессии 49 антигенов Y. pestis, детектируемых коммерческим препаратом иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих чумных адсорбированных
Иммуносерологические методы исследования (РНГА, 50 РТНГА, ТИФА, иммуноблоттинг)
Иммунологические методы 51
Выделение иммунокомпетентных клеток из крови и органов 51 биомоделей
Выделение суммарной фракции лейкоцитов из крови 52 человека и биомодельных животных
Определение апоптотических и пролиферирующих 52 эукариотических клеток
Цитофлуориметрический мониторинг состояния хроматина 54 и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, клеток перитонеального экссудата
2.2.3.5. Определение напряженности иммунитета 55
2.2.4. Статистические методы 56
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ СЕРОТОНИНА НА СКОРОСТЬ РОСТА, 57
ПЕРЕРАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПО КЛЕТОЧНОМУ ЦИКЛУ (СОДЕРЖАНИЕ ДНК), МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЧУМНОГО МИКРОБА В УСЛОВИЯХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА ПЛОТНЫХ И ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Влияние серотонина на динамику роста, морфометрические 57 показатели Y. pestis EV НИИЭГ и его изогенных производных с различным плазмидным составом на плотных и жидких питательных средах в условиях культивирования при 28 С и 37 С
Проточно-цитофлуориметрический мониторинг относительного 67 содержания ДНК в клетках Y. pestis EV НИИЭГ и его изогенных производных с различным плазмидным составом в условиях культивирования при 37 С на питательных средах в присутствии серотонина
Изучение возможности применения серотонина для выделения 73 чумного микроба бактериологическим методом из исследуемого материала, контаминированного посторонней микрофлорой
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ СЕРОТОНИНА НА ЭКСПРЕССИЮ 79
ПОВЕРХНОСТНЫХ АНТИГЕНОВ И ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИИ ПРОФИЛЬ БЕЛКОВ Y. PESTIS С РАЗЛИЧНЫМ ПЛАЗМИДНЫМ СОСТАВОМ
Изучение влияния серотонина на экспрессию поверхностных 79 антигенов (капсульного антигена чумного микроба ФІ, активатора плазминогена) клетками Y pestis EV НИИЭГ и его изогенного производного Y. pestis КМ216 (pPst+) в процессе культивирования в жидкой питательной среде
Изучение влияния культивирования на питательных средах с 84 серотонином на электрофоретический профиль белков Y. pestis
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ СЕРОТОНИНА НА РАЗВИТИЕ 90
ИНДУЦИРОВАННОГО ИЕРСИНИЯМИ АПОПТОЗА И ПРОЛИФЕРАЦИЮ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК IN VITRO
5.1. Изучение in vitro модулирующего действия серотонина на 91
развитие индуцированного Y. pestis апоптоза и пролиферацию
лейкоцитов крови биомодели (мыши BALB/c)
5.2. Изучение в модельной системе in vitro влияния серотонина на 93
развитие индуцированного Y. pestis, Y. pseudotuberculosis,
Y.enterocolitica апоптоза и пролиферацию лейкоцитов крови
человека
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ IN VIVO ВЛИЯНИЯ СЕРОТОНИНА НА 103
ПРОЦЕССЫ ПРОЛИФЕРАЦИИ И АПОПТОЗА, РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ИММУНОФАГОЦИТАРНОЙ СИСТЕМЫ БИОМОДЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ ВАКЦИНАЦИИ Y. PESTIS EV НИИЭГ, КАПСУЛЬНЫМ АНТИГЕНОМ ЧУМНОГО МИКРОБА
Изучение in vivo влияния серотонина на процессы 104 пролиферации и апоптоза эукариотических клеток в условиях вакцинации Y. pestis EV НИИЭГ
Влияние серотонина на состояние ядерного хроматина и 108 лизосомального аппарата иммунокомпетентных клеток биомоделей
в условиях иммунизации Y. pestis EV НИИЭГ
6.3. Изучение влияния серотонина на состояние ядерного 112
хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, клеток
перитонеального экссудата экспериментальных животных в
условиях иммунизации капсульным антигеном чумного микроба
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 119
ВЫВОДЫ 130
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 132
СПИСОК ПРИНЯТЫХ ОБОЗНАЧЕНИИ И СОКРАЩЕНИЙ
АДФ - аденозиндифосфат
АО - акридиновый оранжевый
АТФ - аденозинтрифосфат
БСА - бычий сывороточный альбумин
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЗФР - забуференный физиологический раствор
кДа - килодальтон
КОЕ — колониеобразующая единица
М - моль
мкМ - микромоль
нм - нанометр
РНГА - реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации
РТНГА - реакция торможения непрямой гемагглютинации
УФ - ультрафиолет
Ф1 - капсульный антиген чумного микроба - «фракция I»
ЦНС - центральная нервная система
DCL - Dosis certae letalis
Fra+ — способность к синтезу капсульного антигена «фракция I» и
образованию капсулы
LD5o - доза, летальная для 50% животных
NTS - блокирующий буфер
PAGE - полиакриламидный гель
pCad - 45-47 МДа плазмида, определяющая температурную зависимость
роста иерсинии от ионов кальция, синтез V антигена и белков внешней
мембраны (Yops - Yersinia outer membrane proteins)
pFra - 60-65 МДа плазмида, кодирующая синтез капсульного антигена
«фракция I» и «мышиного токсина»
Pgm - признак пигментсорбции
Р1а — активатор плазминогена, определяющий фибринолитическую и
плазмокоагулазную активности возбудителя чумы
pPst - 6 МДа плазмида, кодирующая синтез пестицина, активатора
плазминогена и определяющая иммунность к пестицину
RAPD — однопраймерная ПЦР с использованием универсальных праимеров
SDS - додецилсульфат натрия
Введение к работе
Существование на территории России и многих стран мира природных очагов чумы, а также угроза применения возбудителя чумы в качестве агента биотерроризма диктуют необходимость углубленных исследований иммунопатогенеза чумной инфекции с целью создания современных, надежных средств и методов её диагностики, лечения и профилактики [Онищенко Г.Г. и др., 2004, 2006; Clarke R.A., 1999, Richard J.L., Grimes D.E., 2008].
Инфекция является одной из форм взаимодействия микро- и макроорганизма с нарушением биологического баланса в сторону усиления влияния микроорганизмов, начальные этапы механизма развития которой состоят из внедрения возбудителя, его размножения и распространения за пределы первичного очага, инициации и реализации защитных реакций организма хозяина, таких как фагоцитоз, воспаление, апоптоз, формирование адаптивного иммунитета [Зигангирова Н.А., Гинцбург А.Л., 2004; Медуницын Н.В., 2004; Симбирцев А.С., 2005].
До настоящего времени исследование фундаментальных и прикладных аспектов нейроэндокринной регуляции различных функций животных и человека в процессе адаптации к меняющимся условиям жизнедеятельности макроорганизма, в том числе в условиях инфекционного и вакцинального процесса, было направлено на изучение их роли и значимости в обеспечении функционирования жизненно важных систем многоклеточного организма, включая систему защиты от патогенов (естественный и адаптивный иммунитет). Вопрос о том, что патогенные микроорганизмы могут непосредственно реагировать на нейроэндокринное окружение организма хозяина и использовать для ускорения своего развития продуцируемые макроорганизмом в ходе защитной реакции биологически активные вещества (биогенные амины - нейромедиаторы, нейрогормоны) ранее практически не рассматривался.
В последние годы интенсифицировались исследования по изучению триггерных молекулярных механизмов взаимодействия патогена с организмом хозяина, в том числе возможности использования микроорганизмами эндогенных биологически активных веществ макроорганизма для ускорения собственного
развития на начальных этапах инфекционного процесса. Формируется новое междисциплинарное направление - микробная эндокринология, изучающее фундаментальные и прикладные аспекты нейроэндокринной регуляции взаимодействия про- и эукариот [Олескин А.В. и др., 2000; Стадников А.А. и др., 2002; Lyte М., 2004; Voigt W. et al., 2006].
Установлено, что бактерии имеют фрагменты молекул, аналогичные связывающим сайтам некоторых естественных физиологически активных веществ организма хозяина, таких как инсулин, гонадотропин, кальмодулин. Белки Escherichia coli и Yersinia enterocolitica перекрестно реагируют с тиреотропином. Выявлен стимулирующий эффект стрессорных гормонов на рост патогенных штаммов Е. coli и синтез адгезина К99, шига-подобных токсинов I и II, показана зависимость транскрипции генов, кодирующих секрецию III типа и синтез флагелл у энтерогеморрагичсских и энтеротоксигенных Е. coli от эпинефрина (адреналина) и норэпинефрина (норадреналина), синтезируемых в клетках хозяина [Пинчук Л.М.,1992; Lyte М. et al., 1997; Burton C.L. et al., 2002; Visidou I. et al., 2004; O'Donnell P.M. et al., 2006].
В этой связи, большой интерес представляет серотонин (5-окситриптамин), который принадлежит к группе биогенных аминов: азотистых оснований, возникающих в организме при декарбоксилировании аминокислот и обладающих чрезвычайно сильной активностью, благодаря высокой способности их к конформационным изменениям, к соединению с макромолекулами, к переносу электронов и протонов [Белжеларская С.Н., Саттон Ф., 2003].
Серотонин является нейромедиатором, медиатором воспаления и аллергических реакций, обладает выраженным иммуномодулирующим действием, является одним из компонентов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза [СидоркинаА.Н. и др., 2005; Щуковская Т.Н., 2008]. В организме серотонин присутствует во всех иммунокомпетентных тканях, ЦНС, селезенке, печени, почках. В тромбоцитах серотонин накапливается при их прохождении по сосудам желудочно-кишечного тракта, в энтерохромафинных . клетках которого синтезируется [Стручко Г.Ю., 1997; Симоненков А.П., Федоров В.Д., 2002; Hellstrand К., Hermodsson S„ 1987; Sternberg Е.М. et al., 1987; Kvetnoy I.M., 2002].
В отечественной и зарубежной литературе имеются сведения о взаимодействии серотонина с аппаратом клеточного деления, способности серотонина комплексировать с ДНК про- и эукариот, с нуклеозидами и нуклеотидами, ингибировать процессы перекисного окисления липидов в клеточных мембранах, непосредственно взаимодействуя с перекисными радикалами [Бурлакова Е.Б. и др., 1992; Helene С. et al., 1971].
Установлено, что серотонин ускоряет рост культур Е. coli, Rhodospirillum rubrum, Candida gidlliermondii, Streptococcus faecalis, вызывая сокращение лаг-фазы, стимулирует формирование биопленки у Е. coli и плодовых тел у миксобактерий [Страховская М.Г. и др., 1991, 1993; Олескин А.В. и др., 1998(6)]. Комбинация антибиотиков с психотропными препаратами - селективными ингибиторами транспорта серотонина через ионный канал, приводит к появлению чувствительности у полиантибиотикорезистентных штаммов [Munoz-Bellido J.L. et al., 2000].
Как известно, особенностью течения инфекционного процесса при чуме является расстройство гемостаза, проявляющееся в виде диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови (ДВС-синдрома), важное значение в развитии которого имеет агрегация тромбоцитов, активным инициатором которой является серотонин, а также продуцируемый чумным микробом активатор плазминогена (Pla protease), синтез которого детерминируется плазмидой пестициногенности. Активатор плазминогена является видоспецифическим антигеном, имеющим диагностическую значимость, а также специфическим поверхностным рецептором клеток чумного микроба к фибриногену [Дятлов И.А., Филиппов А.Ф., 1990; Понукалина Е.В., 1990; Захаров А.В., 1991; Кутырев В.В., 1992; Perry R.D., Fetherston J.D., 1997].
Интегральным показателем, характеризующим изменения эукариотических клеток под воздействием инфекционного агента является соотношение количества клеток на разных стадиях клеточного цикла, включая стадию их запрограммированной гибели (апоптоз). Активация процессов апоптоза происходит под действием факторов вирулентности патогенных микроорганизмов и приводит к элиминации ключевых, обладающих защитными функциями, клеток организма хозяина, таких как лимфоциты, моноциты, нейтрофилы [Weinrauch I.,
Zychlinsky A., 1999; DeLeo F.R., Hinnebusch B.J., 2005; Marketon M.M. et al., 2005; Parrino S. et al., 2007]. Механизмы индукции апоптоза представителями рода Yersinia находятся на стадии исследования [Fields К., Straley S.,1999; Weinrauch Y. et al., 2002; Zhang Y., Bliska J.D., 2003]. He изучено in vitro и in vivo влияние биогенных аминов, в том числе серотонина, на развитие индуцированного 7. pestis и другими представителями рода Yersinia (7. enterocolitica, Y. pseudotuberculosis) апоптоза эукариотических клеток.
Также отсутствуют сведения о возможном влиянии серотонина, присутствующего в месте проникновения чумного микроба в организм хозяина, на размножение клеток Y. pestis, перераспределение по клеточному циклу (относительное содержание ДНК), профиль синтезируемых им белков, экспрессию диагностически значимых поверхностных антигенов (капсульного антигена чумного микроба Ф1, активатора плазминогена), патогенные и иммуногенные свойства чумного микроба, способствующих поддержанию оптимальных условий развития инфекции.
На данный момент также отсутствуют какие-либо сведения о возможности применения серотонина в схеме лабораторной диагностики чумы для повышения эффективности выделения возбудителя чумы из исследуемого материала как контаминированном, так и не контаминированном сопутствующей микрофлорой.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - изучить влияние серотонина на рост, электрофоретический профиль белков, экспрессию поверхностных антигенов чумного микроба, а также индуцированный апоптоз и пролиферацию иммунокомпетентных клеток.
ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Изучить влияние серотонина на скорость роста, перераспределение по
клеточному циклу (относительное содержание ДНК), морфометрические
характеристики 7. pestis EV НИИЭГ (pFra+, pCad+, pPst+) и его изогенных штаммов
7. pestis КМ218 (pFra", pCad", pPst"), 7. pestis KM216 (pFra", pCad", pPst*) в условиях
культивирования на плотных и жидких питательных средах.
2. Оценить возможность применения серотонина для повышения
эффективности выделения возбудителя чумы бактериологическим методом из
исследуемого материала, контаминированного сопутствующей микрофлорой.
3. Изучить влияние серотонина на экспрессию диагностически значимых
поверхностных антигенов (капсульного антигена чумного микроба ФІ, активатора
плазминогена) и электрофоретический профиль белков Y. pestis с различным
плазмидным составом в условиях культивирования на питательных средах.
4. Провести сравнительный анализ влияния серотонина на развитие
индуцированного Y pestis и другими представителями рода Yersinia
{Y.pseudotuberculosis, Y. enterocolitica,) апоптоза лейкоцитов крови человека в
модельной системе in vitro.
5. С применением проточной цитофлуориметрии изучить in vivo влияние
серотонина на процессы апоптоза и пролиферации иммунокомпетентных клеток,
состояние ядерного хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови,
перитонеальных макрофагов биомодели (мыши BALB/c, нелинейные белые мыши)
в условиях иммунизации Y. pestis EV НИИЭГ, а также различными препаратами
капсульного антигена чумного микроба ФІ.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
Впервые установлено, что серотонин стимулирует накопление биомассы Y. pestis EV НИИЭГ и бесплазмидного штамма Y pestis КМ218 на ранних стадиях развития культур, индуцирует по данным проточной цитофлуориметрии увеличение числа клеток с интенсивной ДНК-флуоресценцией для Y. pestis EV НИИЭГ в 2 раза, для Y.pestis КМ218 -в 1,8 раза.
Получены новые сведения о влиянии серотонина на выделение чумного микроба из исследуемого материала, контаминированного посторонней микрофлорой. Показана эффективность применения серотонина на начальном этапе бактериологического исследования на чуму. С применением серотонина разработан способ выделения Y. pestis бактериологическим методом из исследуемого материала, контаминированного сопутствующей микрофлорой, включая объекты внешней среды, позволяющий сократить до 24 ч сроки биологического накопления возбудителя чумы и увеличить число колониеобразующих единиц чумного микроба. Новизна исследований подтверждена патентом на изобретение «Способ выделения чумного микроба бактериологическим методом из исследуемого материала (варианты)»
(положительное решение на выдачу патента от 16 оісгября 2008 г. по заявке №2007142840/13(046910), приоритет от 19.11.2007).
Показано влияние серотонина на экспрессию видоспецифических антигенов чумного микроба (капсульного антигена чумного микроба Ф1, активатора плазминогена), детектируемых с помощью коммерческих препаратов иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих чумных адсорбированных. Обнаружено увеличение процентного содержания клеток с повышенной интенсивностью свечения.
Впервые выявлен ингибирующий эффект серотонина на синтез чумным микробом полипептида с молекулярной массой 22 кДа, участвующего в формировании поверхностного заряда клеток_и_проявлении адгезивных свойств, в условиях культивирования на агаре Хоттингера рН 7,2 при 28 С в течение 24 ч.
Впервые in vitro и in vivo с применением проточно-цитофлуориметрического метода цитологического анализа установлено непосредственное участие серотонина в механизмах модуляции индуцированного Y. pestis и капсульным антигеном чумного микроба (Ф1) апоптоза, изменений состояния ядерного хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, перитонеальных макрофагов биомодели. Серотонин в концентрации 10 "5 М в первые 6 ч замедляет in vitro развитие индуцированного Y. pestis апоптоза лейкоцитов крови интактных биомоделей, что создает благоприятные условия для роста и размножения чумного микроба в организме хозяина и связано с влиянием антигенов, синтезируемых при 37 С, в первую очередь капсульного антигена (Ф1). В иммунном организме модулирующее действие серотонина проявляется лишь через 24 ч и имеет противоположную направленность.
Впервые получены новые данные о влиянии биогенного амина серотонина на развитие апоптоза лейкоцитов крови человека, индуцированного различными представителями рода Yersinia (Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica). Серотонин оказывает модулирующее действие на распределение лейкоцитов по клеточному циклу, изменяя соотношение в крови клеток, находящихся на стадиях апоптоза и пролиферации. Характер выявленных изменений зависит от вида иерсиний и их серовара.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
Результаты исследований были использованы при разработке методических рекомендаций «Организация работы и обеззараживание материала, содержащего возбудитель чумы при проведении исследований методом проточной цитофлуориметрии», которые одобрены Ученым советом РосНИПЧИ «Микроб» (протокол № 6 от 12.12.2008 г) и утверждены директором ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб».
Разработанный нами «Способ выделения чумного микроба бактериологическим методом из исследуемого материала (варианты)» (положительное решение на выдачу патента от 16 октября 2008 г. по заявке № 2007142840/13(046910), приоритет от 19.11.2007 г.) внедрен в работу специализированной лаборатории препаратов против чумы и др. ООИ ГИСК им. Л.А. Тарасевича (акт внедрения патента в НД утвержден директором ФГУН ГИСК им. Л.А. Тарасевича академиком Н.В. Медуницыным от 26.11.2008).
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. Биогенный амин серотонин в концентрации Ю-5 М оказывает
стимулирующее влияние на рост чумного микроба на стандартно используемых
для его культивирования жидких и плотных питательных средах [бульон и агар
Хоттингера рН 7,2; агар Хоттингера рН 7,2, содержащий лизированную кровь (1%)
и генцианвиолет (1:100000-1:200000)], индуцирует, по данным проточной
цитофлуориметрии, увеличение числа клеток с интенсивной ДНК-
флуоресценцией.
2. С применением серотонина разработан способ выделения Y. pest is
бактериологическим методом из исследуемого материала, контаминированного
сопутствующей микрофлорой, включая объекты внешней среды, который
позволяет увеличить число КОЕ чумного микроба в 1,5-5,5 раза и значительно
сократить (до 24 ч) сроки биологического накопления возбудителя чумы из
нативного материала.
3. Выявлен ингибирующий эффект серотонина на синтез полипептида с
молекулярной массой 22 кДа клетками Y. pestis EV НИИЭГ, Y. pestis КМ218 и
Y.pestis КМ216 в условиях культивирования на агаре Хоттингера рН 7,2 при 28 С в
течение 24 ч.
В модельной системе in vitro серотонин в концентрации 10" М оказывает модулирующее действие на развитие апоптоза лейкоцитов крови человека, индуцированного различными представителями рода Yersinia (Y. pestis, Y.pseudotuberculosis, Y. enter ocoliticd). Характер выявленных изменений зависит от вида иерсиний и их серовара.
Установлено, что примирование серотонином биомоделей (мыши BALB/c, нелинейные белые мыши) до иммунизации Y. pestis EV НИИЭГ, различными препаратами капсульного антигена чумного микроба (ФІ) влияет на характер развития процессов апоптоза и пролиферации иммунокомпетентных клеток, состояние ядерного хроматина, лизосомального аппарата лейкоцитов крови, перитонеальных макрофагов, интенсивность и направленность которых зависят от вида иммунизирующего препарата.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Исследования проведены в рамках плановых НИР: 006-3-01 «Разработка и усовершенствование унифицированных методов оценки безопасности вакцинирующих иммунобиологических препаратов против особо опасных инфекций» (№ госрегистрации 01.200.11150); 019-3-03 «Изучение взаимодействия чумного микроба с клетками крови в модельных системах in vitro» (№ госрегистрации 01.2.00306526); НИР «Изучение роли биомолекул возбудителей особо опасных инфекционных заболеваний (чумы и холеры) в контроле апоптоза (запрограммированной гибели) эукариотических клеток» (2004 г.), являвшейся составной частью научно-исследовательской работы «Изучение роли биомолекул возбудителей опасных инфекционных заболеваний в контроле апоптоза (запрограммированной гибели) эукариотических клеток» (ОФИ-6), выполнявшейся в рамках ФЦНТП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники» на 2002-2006 годы, Блок I «Ориентированные фундаментальные исследования», раздел «Технологии живых систем», подраздел «Защита от патогенов» (Договор № 105-3/04 от 05.11.04 г. к госконтракту № 01.035.11.1535 от 05.11.04г.).
Материалы диссертационной работы были доложены и представлены на: Международных конференциях «Saratov Fall Meeting: Workshop on Optical Technologies in Biophysics & Medicine IY» (Саратов, 2002-2003); Всероссийской
научно-практической конференции «Медицинская микробиология XXI век» (28-30 сентября 2004 г., Саратов); на IX съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (26-27 апреля 2007 г., Москва); на VIII Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ» (25-26 сентября 2007 г., Саратов); IX Межгосударственной научно-практической конференции «Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-участников Содружества независимых Государств» (30 сентября-2 октября 2008 г, Волгоград); научно-практических конференциях РосНИПЧИ «Микроб» «Итоги и перспективы фундаментальных и прикладных исследований в институте «Микроб» (Саратов, 2003-2008).
ПУБЛИКАЦИИ
По материалам диссертации опубликовано 15 работ, их них статей в рекомендованных ВАК изданиях - 4.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 147 отечественных и 150 зарубежных источников. Объем диссертации составляет 159 страниц машинописного текста. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 11 таблицами.
