Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Роль нормальной микрофлоры и лизоцима в выборе пробиотических штаммов для профилактики аллергических заболеваний у студенческой молодежи (обзор литературы) 20
1.1. Значение микробиоценоза и лизоцима в механизмах врождённого иммунитета 20
1.2. Биологическое значение лактобацилл 33
1.3. Микробный фактор образования свободного гистамина 38
1.4. Подбор пробиотических штаммов лактобацилл 46
Глава 2. Диагностическая информативность факторов врождённого иммунитета у бактерионосителей Staphylococcus spp . 55
2.1. Оценка содержания лизоцима и гистамина в слюне бактерионоси-телей Staphylococcus spp. 55
2.2. Биоценоз слизистой оболочки носа и зева, содержание лизоцима и гистамина в группах риска аллергического ринита и атопического дерматита 61
2.3. Диагностическая информативность факторов колонизации микро-флоры слизистой носа и зева 69
Глава 3. Идентификация и лизоцимная активность лактобацилл при дисбактериозе кишечника в группах риска по аллергическим заболеваниям 73
3.1. Микробное сообщество и видовой состав лактобацилл при дисбак-териозе кишечника 73
3.2. Лизоцимная активность бактерий рода Lactobacillus, выделенных из кишечника исследуемых лиц группы риска по аллергическим забо-леваниям 76
Глава 4. Оптимизация выбора пробиотических штаммов лактобацилл для студенческой молодежи в условиях Севера 79
4.1. Кислотообразующая и сахаролитическая активность пробиотиче-ских штаммов рода Lactobacillus 79
4.2. Диаминооксидазная, лизоцимная и антагонистическая активность пробиотических штаммов рода Lactobacillus 80
4.3. Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием пробиотических штаммов лактобацилл 84
Заключение 90
Выводы 102
Практические рекомендации 103
Перспективы дальнейшей разработки темы 103
Список сокращений 104
Список литературы 105
- Микробный фактор образования свободного гистамина
- Биоценоз слизистой оболочки носа и зева, содержание лизоцима и гистамина в группах риска аллергического ринита и атопического дерматита
- Лизоцимная активность бактерий рода Lactobacillus, выделенных из кишечника исследуемых лиц группы риска по аллергическим забо-леваниям
- Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием пробиотических штаммов лактобацилл
Микробный фактор образования свободного гистамина
В связи со значительными техногенными изменениями среды обитания человека возникла проблема экологической патологии как следствие воздействия физических, химических, биологических факторов. [1,7, 163]
В соответствии с Законом ХМАО «Об охране окружающей природной среды и экологической защите населения автономного округа» разработка объективных методов индикации экопатологии и выработки подходов к профилактике данных расстройств у жителей Севера становится особенно актуальна. [67, 136]
В Сургуте формируются поколение населения, проживающие в условиях климатогеографической экстремальности и антрапогенных факторов промышленных городов на Севере. Основными источниками загрязнения окружающей среды в городах ХМАО - Югры являются промышленные и энергетические предприятия, транспорт. [51, 68]
Климато-географические и экологические нагрузки наиболее выражено прослеживаются в изменении состояние здоровья детей и подростков. Высокая чувствительность организма, находящегося в процессе развития, не только определяет состояние здоровья в настоящий момент, но и оказывает влияние на их дальнейшее развитие. [10, 118, 222]
Особенно актуальна эта проблема для здоровья в юношеском возрасте, в период онтогенетического развития между подростковым возрастом и взрослостью. В этом возрасте завершается физическое, в том числе половое, созревание организма. В психологическом плане главной особенностью данного возраста является вступление в самостоятельную жизнь, когда происходит выбор профессии, резко меняется социальная позиция. Эта группа населения относится к числу наименее социально защищенных, между тем как специфика возраста и учебного труда требует должных социально-экономических условий. [10, 134] Ослабленное чаще всего ещё до поступления в высшее учебное заведение состояние организма и психики, экологические проблемы, нерациональное питание, гиподинамия, невысокий в целом уровень валеологической культуры обусловливает то, что более половины студентов нездоровы, у многих - пограничные состояния различного порядка. [88, 134]
Кроме гуманитарного аспекта, выражающегося в самоценности здоровья, проблема имеет и чётко выраженную социально-экономическую сторону, поскольку здоровье - одно из обязательных условий полноценного выполнения человеком своих социальных, в т. ч. профессиональных, функций. Забота о здоровье студентов есть важнейшая задача в деле подготовки специалистов. Как заинтересованная сторона, учебные заведения должны выступать инициатором и организатором целенаправленной и эффективной работы по сохранению, реабилитации и приумножению здоровья студенческого контингента. [57, 134, 147]
Большинство исследователей рассматривают экологическую нагрузку как фактор, непосредственно влияющий на общую резистентность организма. В результате этого создаются условия для проявления агрессивности инфекционных агентов. [9, 48, 112, 113] Состояние факторов врождённого иммунитета является одним из ранних и чувствительных показателей вредного воздействия на организм факторов окружающей среды и может служить критерием риска развития заболеваний органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и других органов и систем. Особо следует выделить патологические состояния, проявления которых выражается расстройством иммунной системы, что ведёт к возникновению аллергической патологии, снижению устойчивости к инфекциям. [17, 135, 152,159, 240] В работе Сенцовой Т.Б. с соавт.[117] показано значение мукозального иммунитета и микрофлоры кишечника в патогенезе атопического дерматита у детей, а в работе Грачёвой Н.М.Г27] представлено состояние микробной экологии и слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта у больных аллергическими заболеваниями.
Другой важной проблемой изучения возможностей биологической индикации является возрастание антропогенного воздействия на окружающую среду, что неизбежно накладывает отпечаток на экологию самых различных биологических объектов, начиная с высших растений и животных и заканчивая представителями микромира. При этом микроорганизмы в силу относительной простоты своей организации и высокой степени интегрированности в процессы кругооборота веществ и энергии первыми реагируют на изменение качества среды обитания. В этих условиях разнообразные химические, физические и иные влияния становятся одними из ведущих антропогенно детерминированных факторов их «искусственной эволюции» в загрязнённых экосистемах[34] и воздействия вредных привычек. [88, 156, 218] Так приведены особенности дисбактериоза кишечника у жителей районов крупного промышленного города с различным уровнем техногенной нагрузки на примере жителей города Волгограда[106] и особенности микробиоценоза толстой кишки при дисбиотических нарушениях у жителей города Оренбурга. [20] В работе Кафарской Л.И. проведён глубокий анализ значения локального иммунитета кишечника. [53]
Накопленные к настоящему времени материалы позволяют иначе оценить существовавшие ранее представления об ингибирующем воздействии факторов внешней среды на жизнеспособность и патогенность микроорганизмов, как, например, микробные ингибиторы лизоцима.[18, 157]
Установлено увеличение сроков переживания ряда патогенных и условно-патогенных бактерий в объектах внешней среды в присутствии нефтепродуктов, пестицидов, гербицидов, хлорсодержащих дезинфектантов.[37] На фоне экологических последствий загрязнения окружающей среды нельзя недооценивать потенциал генетических изменений, вызванных воздействием малых и средних доз загрязнителей. Это сопровождается, не только сохранением, но даже усилением некоторых свойств микроорганизмов, значимых для инициации и развития инфекционного процесса, возможности образовывать биоплёнки. [71, 170]
Проведение мониторинга региональных особенностей биологических и молекулярно-генетических характеристик микрофлоры может расцениваться как одно из проявлений изменчивости возбудителей инфекционных заболеваний в антропогенно изменённой экосистеме или при особых климатогеографических условиях. [14, 29, 162, 174] В настоящее время большое количество работ посвящено подтверждению гипотезы К. Janeway об исключительной важности системы врождённого иммунитета в защите от патогенов и в реализации начальных стадий реакций адаптивного иммунитета. [24, 72] Иммунокомпетентные клетки распознают консервативные в эволюционном отношении молекулы, присущие одновременно большим систематическим группам микроорганизмов. Среди распознающих рецепторов системы врождённого иммунитета ключевая роль принадлежит То 11 -подобным рецепторам (TLR). После взаимодействия TLR с лигандом происходит активация сигнальных путей, в результате которой продуцируются эффекторные молекулы, такие, как цитокины, противомикробные пептиды и др. При скоординированном функционировании факторов врождённого иммунитета в большинстве случаев происходит элиминация патогена. Гиперактивация или угнетение механизмов врождённого иммунитета в свою очередь может вести к развитию патологического процесса. [66]
Исследования по оценке патологических состояний с точки зрения функционирования молекулярных механизмов врождённого иммунитета фактически начались совсем недавно.[58, 72]
Развитие большинства инфекций, с которыми встречается организм, начинается с проникновения патогенов через барьерные ткани, в том числе через слизистые оболочки. Слизистые оболочки, являясь физиологическим барьером, участвуют в развитии защитных реакций врождённого иммунитета в ответ на патогены, в инициации реакций адаптивного иммунитета, в формировании толерантности к комменсалам, а также в развитии патологических процессов (аллергии, острого и хронического воспаления и др.). Клетки (в том числе эпителиальные) слизистых оболочек рассматриваются в качестве одного из факторов врождённого иммунитета. [24, 72]
Биоценоз слизистой оболочки носа и зева, содержание лизоцима и гистамина в группах риска аллергического ринита и атопического дерматита
Микрофлора слизистой оболочки зева у студенческой молодежи характеризовалась меньшим количеством лиц с наличием КОЕ З/g микробных клеток на тампон как изолятов Staphylococcus spp. (32,3%), так и изолятов S. aureus (15,6%).
При сравнении сообщества микроорганизмов на слизистой оболочке носа и зева по показателю процентного сходства установлено, что сходство количественного участия популяций Staphylococcus spp. в образующихся биоценозах составляло 79,5%. шение моды, медианы и средней арифметической содержания лизоцима, а также коэффициента ассиметрии (А = 0,85) и эксцесса (Е = 0,6), величины которых характерны для выраженной ассиметрии с плосковершинным распределением, позволяют оценить характер распределения признака как правосторонняя асимметрия. Также возможно сделать заключение, что наиболее распространённым является показатель 2,4 мкг/мл (Мо), при этом половина исследуемых имели показатель содержания лизоцима свыше 3,4 мкг/мл и среднем уровне в группе 4,7 мкг/мл.
При сравнении полученных результатов с показателями содержания лизоцима у жителей той же возрастной группы города Оренбурга [17] установлено, что в условиях Севера этот показатель в 1,7 раза меньше (4,7 мкг/мл и 8,04 мкг/мл, соответственно).
Показатели концентрации гистамина в слюне, определяемые методом ИФА, характеризовались диапазоном от 0,0 до 8,3 нг/мл. Показатель средней арифметической составлял 2,0 нг/мл. Меньшими по абсолютной величине были показатель медианы (1,3 нг/мл) и показатель моды, равный 0,0 нг/мл. Вариационный ряд концентрации гистамина в слюне характеризовался значительной величиной коэффициента ассиметрии (0,95) и по показателю эксцесса характеризовался островершинным распределением (Е=2,9). Содержание гистамина в слюне, как и лизоцима, указывало на характер распределения признака также по признаку правосторонней асимметрии (Мо Ме М— 0 1,3 1,9). Наиболее распространённым был показатель содержания гистамин в слюне равный 0 нг/мл, в то время половина исследуемых имели показатель содержания гистамина свыше 1,3 нг/мл.
Показатели содержания лизоцима в слюне у бактерионосителей Staphylococcus spp. среди студенческой молодежи представлены в таблице 3. Из таблицы 3 следует, что наибольшее содержание лизоцима в слюне отмечено в группе бактерионосителей S. epidermidis без гемолитической активности (7,5±0,3 мкг/мл). У бактерионосителей вида S. epidermidis с гемолитической активностью содержание лизоцима в слюне значительно снижалось и составляло 4,4±0,2 мкг/мл (Р 0,05). Самое низкое содержание лизоцима отмечено у носителей S. aureus (3,3±0,2; Р 0,05).
Показатели концентрации гистамина в слюне имели отличную динамику. Самые низкие концентрации гистамина отмечены в группе бактерионосителей S. epidermidis без гемолитической активности (1,1 ±0,1 нг/мл) и значительно возрастали в группах бактерионосителей S. epidermidis с гемолитической активностью и S. aureus (2,1±0,1 нг/мл и 2,3±0,1 нг/мл, соответственно).
Соотношение величин концентрации лизоцима и гистамина для всей исследуемой группы студенчества составило 2,4, а для бактерионосителей S. epidermidis без гемолитической активности эта величина составляла 6,8 и существенно изменялась у бактериносителей S. epidermidis Hly+ и S. aureus (2,1 и 1,4, соответственно).
Расчёт коэффициента линейной корреляции (Пирсон-r) показал, что его величина - 0,9 указывает на сильную обратную связь концентрации лизоцима и гистамина в слюне.
Выраженная правосторонняя ассиметрия в рядах распределения лизоцима и гистамина при островершинном эксцессе для гистамина и плосковершинном для лизоцима определили необходимость дальнейшего исследования их взаимоотношения в слюне бактерионосителей с использованием метода сигмаль-ных отклонений. Профиль содержания лизоцима в группах бактерионосителей Staphylococcus spp. и диагностические коэффициенты уровня содержания лизоцима представлен в таблице 4.
Из таблицы 4 следует, что в группе бактерионосителей S. epidermidis, Hly у подавляющего большинства исследуемых лиц содержание лизоцима больше среднего показателя и в 40,6% случаев характеризовалось как «выше среднего», в 37,5% случаев как «высокое» и в 6,3% случаев как «очень высокое».
В группе бактериносителей S. epidermidis, Hly+ содержание лизоцима у исследуемых лиц находилось в диапазоне от -2G до +2G. Наибольшее число лиц носителей S. epidermidis с гемолитической активностью имели содержание лизоцима в пределах «ниже среднего» (в диапазоне -1G находилось 47,6% случаев) и «низкое» (в диапазоне -2G находилось 7,1% случаев).
Среди бактерионосителей S. aureus отмечено наибольшее число лиц с содержанием лизоцима в слюне в диапазоне «ниже среднего» (44,4%) и «низкое» (24,4%). Расчёт диагностических коэффициентов по методу последовательной диагностической процедуры, разработанной А. Вальдом [33], позволил получить наибольшие величины диагностического коэффициента в 6 баллов и 9 баллов при достоверной величине информативности (/равен 1,06 и 0,9, соответственно) для диапазона с содержанием лизоцима «ниже среднего» и «низкое» у бактерионосителей S. aureus. Диагностические коэффициенты в 4 балла и 6 баллов при статистически достоверной информативности (/ равное 0,9) указывают на диагностически значимое снижение содержания лизоцима у бактерионосителей S. epidermidis, Hly+.
Все показатели содержания лизоцима в слюне по профилю «выше среднего» имели диагностические коэффициенты со знаком «минус». Профиль содержания гистамина в группах бактерионосителей Staphylococcus spp. и диагностические коэффициенты уровня содержания лизоцима представлены в таблице 5.
Лизоцимная активность бактерий рода Lactobacillus, выделенных из кишечника исследуемых лиц группы риска по аллергическим забо-леваниям
По отношению к изолятам S. aureus, наиболее часто встречаемым при дисбактериозе кишечника, антибактериальный эффект лактобацилл значительно ни-же. Лактобактерии со средней антагонистической активностью составили 19,2-42,3% случаев, а высокая антагонистическая активность наблюдалась до 34,6% случаев.
Доля лактобацилл, оказывающая среднюю степень антагонизма на грампо-ложительную микрофлору, составила от 34,6% для L. plantarum 90Т-С4 до 42,3% случаев для L. helveticus NKJC и L. helveticus JCH. Лактобактерии с низкой степенью антагонизма составили от 38,5% до 46,3% случаев. Резистентность S. aureus к лактобактериям наблюдалась от 3,8% до 19,2% случаев. Необходимо отметить, что лактобациллы с наибольшими показателями лизоцимной активности (таблица 20) имели наибольший показатель среди штаммов с высокой антагони 83 стической активностью. Штамм L. helveticus ГРК-08 в более половине случаев (76,9% случаев) оказывал антагонистической эффект средней и высокой степени по отношению к S. aureus.
Важное значение в исследовании имели результаты определения индивидуальной резистентности каждого штамма S. aureus к определённому виду лак-тобацилл из числа проявивших устойчивость к действию комплекса антибиотических механизмов лактобацилл, поскольку ряд этих механизмов включает воздействие лизоцима, молочных кислот, веществ антибиотической природы, лак-тоцинов, перекиси водорода при различной степени их фенотипического проявления. [56] Из числа опытных штаммов S. aureus резистентность к лактобакте-риям установлена у 8 изолятов (30,8%).
Как следует из таблицы 22, каждый из 8 резистентных штаммов S. aureus, выделенных на предыдущем этапе определения резистентности, чувствителен к антибиотическому действию других штаммов лактобацилл. Наибольшая степень резистентности с условным показателем 0,7 проявилась у одного штамма, устойчивость которого наблюдалась к 4 из 6 исследуемых штаммов лактобацилл.
Обратил на себя внимание факт широкого разнообразия антагонистической активности определённого вида лактобацилл к различным изолятам S. aureus. Штаммы Lactobacillus helveticu ГРК-08 активны к 7 изолятам из 8 наиболее резистентных S. aureus, в то время как L. plantarum 90ТС-4 только к 3 изолятам, что определяет необходимость учитывать антибиотическую активность лактобацилл при персонифицированном подборе пробиотических штаммов.
Проведёнными исследованиями установлено, что штаммы лактобацилл имели различную степень выраженности диаминооксидазной активности. Антибактериальный эффект лактобацилл L. helveticus против Е. coli Н1у+ наблюдался у большинства исследуемых культур с преобладанием антагонизма средней и высокой степени. По отношению к изолятам S. aureus антибактериальный эффект лактобацилл выражен значительно ниже, что диктует необходимость подбора лактобацилл с учётом формирования резистентности региональных штаммов условно-патогенных микроорганизмов.
Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием пробиотических штаммов лактобацилл
Проведена коррекция нарушений нормальной микрофлоры в группах риска студенческой молодежи по аллергическим заболеваниям с использованием живых пробиотических штаммов. Показанием к проведению коррекции явились результаты клинико-бактериологических исследований, ранжированные по величине диагностической информативности (таблица 23).
Примечание: - Достаточная информативность показателей при 1т;п=0,5. Расчёт пороговой суммы диагностических коэффициентов показал, что при сумме ДК равной «плюс 13» допустимая доля ошибки не превышает 5,0%. Достижение пороговой суммы позволит вынести решение «показание» с прогнозируемым процентом ошибки.
Для повышения эффективности коррекции нарушений эубиоза слизистой оболочки носа и зева обосновано применение пробиотиков в форме приготовленных кисломолочных смесей как биологически активная добавка (БАД). Предварительно заквасочные культуры контролировались по биологическим характеристикам в соответствии с «МУК 4.2.2602-10. Система предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов. Отбор. Проверка и хранение производственных штаммов, используемых при производстве пробиотиков» [83] и назначались в каждом случае индивидуально с учётом антагонизма к выделенной от пациента микрофлоры.
Критериями отбора штаммов заквасочных культур явились показатели, в числе которых использовались наряду с общепризнанными и ранее рекомендуемыми показателями [139], так и обоснованные в настоящей работе: - определённые органолептические свойства продукта; - контролируемость показателя кислотности продукта в пределах 60-100Т; - количественное содержание живых микробных клеток в единице объёма продукта и время сквашивания молока; - биохимические свойства штаммов (ферментация углеводов, протеолитиче-ская, лизоцимная активность, диаминооксидазная активность); - определённая антагонистическая активность лактобацилл к выделенным от больных штаммам с различной степенью резистентности к антибиотикам.
Оценка эффективности пробиотических штаммов проводилось амбулаторно в трёх группах: контрольная группа (ГК) и две группы сравнения ГСдд и ГСдтд-В группе контроля (ГК, п=15) применяли пробиотики согласно прописи коррекции лактосодержащими препаратами «Лактобактерин», для изготовления которого используют микробную массу живых лактобацилл L. plantarum 8RA3 и L. plantarum 90ТС-4, лиофильно высушенных в защитной среде. Одна доза препарата содержит не менее 109КОЕ лактобацилл, препарат во флаконах содержит 5 доз.[25, 59,70]
Алгоритм коррекции лактосодержащими препаратами «Лактобактерин» заключается в том, что его применяют для нормализации микрофлоры кишечника при сниженном содержании лактобацилл. На четвёртый день от начала применения препарата показана уменьшающая избыточность роста микроорганизмов (убедительность доказательства С). «Лактобактерин» назначают внутрь, растворяя кипяченой водой комнатной температуры, за 40-60 мин. до еды. Дозы лакто-бактерина соответствовали возрастной группе от 15 лет и старше и составляли 6-10 доз или табл./сут. [6, 73]
В группах сравнения под наблюдением находилось 15 чел. из группы риска АД (ГСдд) и 16 чел. из группы АтД (ГСдтд). В этих группах сравнения применялась схема коррекции нарушений эубиоза с использованием подобранных про-биотических штаммов с определённой лизоцимной, диаминооксидазной и антагонистической активностью в виде кисломолочных смесей.
Коррекция по рекомендуемой нами схеме заключалось в назначении кисломолочной смеси в виде биологически активной добавки 1-2 раза в день по 100-150 мл утром и вечером.
Результаты оценивались клинически и подтверждались бактериологическими и биохимическими исследованиями, которые проводились до коррекции и после окончания курса (30 дней).
Критерием эффективности проводимой коррекции считали признаки нормализации микрофлоры слизистой носа и зева, а также содержание гистамина и лизоцима в ротовой жидкости, которые проходили на фоне снижения частоты жалоб и клинических симптомов. Эффективность проведения коррекции нарушений в состоянии микрофлоры представлены в таблице 24.
Данные таблицы 24 свидетельствуют, что показатели состояния микробиоценоза в контрольной группе и группах сравнения до коррекции имели общую тенденцию. После проведённой коррекции отмечены положительные сдвиги в нормализации микробиоценоза слизистой оболочки носа. Однако, уровень их эффективности значительно отличался.
Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием пробиотических штаммов лактобацилл
При исследовании микрофлоры кишечника на дисбактериоз лиц группы риска у всех диагностирован дисбактериоз. Оценка результатов каждого анализа на дисбактериоз по количеству отклонений от параметров эубиоза позволила установить, что изменения биоценоза по одному показателю отмечены в 14,3% случаев и по двум показателям в 19,0% наблюдений соответственно. Значительно увеличивалась доля лиц с изменениями микробиоценоза кишечника по трём показателям (30,2%). Наиболее часто у исследуемых лиц отмечены случаи с изменением эубиоза по четырём и более показателям (36,5% случаев). Уровень изменения биоценоза в среднем составил 2,9 на одного исследуемого, что значительно выше, чем аналогичные показатели в других регионах [66].
Проведённая оценка микробного сообщества и видового состава лактобацилл при дисбактериозе кишечника позволила установить, что среди исследуемых лиц с проявлением дисбактериоза кишечника по одному показателю преобладали случаи со сниженным количеством лактобацилл (ЛКБ, 33,3% случаев) и с повышенным содержанием Е. coli с гемолитической активностью (КПГ, 33,3% случаев). Реже отмечались результаты анализов с уменьшением количества типичных кишечных палочек и увеличением количества лактозонегативных кишечных палочек (КИТ 22,2% и КПЛН по 11,1% случаев).
При оценке числа случаев с проявлением дисбактериоза по двум показателям также установлено преобладание результатов со сниженным количеством лактобацилл (50,0%) и лиц с повышенным содержанием Е. coli с гемолитической активностью (41,7%). Нарушение эубиоза связано также с увеличением количества лактозонегативных Е. coli (25,0% случаев), грибов рода Candida (25,0%) в сочетании с уменьшением содержания бифидобактерий (16,7% случаев).
Наиболее часто изменения в видовом составе микробиоценоза кишечника в группе риска отмечены по трём и четырём показателям. Наряду с вышеперечисленными изменениями наблюдались результаты анализов с повышенным содержание кокковых форм микроорганизмов (КФМ, 21,7% случаев) и сниженным содержанием бифидобактерий (БФБ, 34,8% случаев). Повышенное количество клостридий отмечено в 8,7% случаев. У подавляющего большинства исследуемых лиц группы риска установлено сниженное количество лактобацилл (87,2%) на фоне снижения общего количества типичных Е. coli. При этом отмечается увеличение случаев идентификации Е. coli латозонегативных и Е. coli с гемолитической активностью. Учитывая установленный факт увеличения частоты штаммов Е. coli декарбоксилирую-щих субстрат гистидин при уменьшении их количества в кишечнике, а также при снижении ферментативной активности (Е. coli lac") и приобретении гемолитической активности (Е. coli Н1у+)[59, 66], следует указать на повышение доли гисти-диндекарбоксилирующих Е. coli в биоценозе кишечника у лиц групп риска.
Проведённые исследования микрофлоры кишечника позволили сделать вывод, что микробиоценоз кишечника в группах риска по круглогодичному аллергическому риниту и атопическому дерматиту характеризуются уменьшением количества и лизоцимной активности бактерий рода Lactobacillus (87,2% исследуемых лиц) на фоне увеличения атипичных Е. coli с декарбоксилирующей активностью. Наиболее часто идентифицируются представители вида/., delbrueskii (22,5%), L. casei и L. rhamnosus, реже выделяются L. brevis (11,3%), L. plantarum, L. trichodes. Представители вида L. acidophilus, характерные для нормальной микрофлоры человека, выделялись в единичных случаях (3,2%).
Из фенотипически идентифицированных штаммов лактобацилл наибольшей лизоцимной активностью обладали L.jensenii (1,91±0,06 мкг/мл), L.fermenum (1,47±0,05 мкг/мл), L. plantarum (1,35±0,04 мкг/мл). В группу со средней лизоцимной активностью входили L. rhamnosus (1,22±0,04 мкг/мл), L. delbrueskii (1,20±0,04 мкг/мл). У L. acidophilus лизоцимная активность составила 0,84±0,3 мкг/мл. Наименьшая лизоцимная активность отмечена у L. cellobiosus и L. согу-noformis (0,34±0,01 мкг/мл). Отсутствие лизоцимной активности наблюдалось у L. lactis.
Лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника при нарушении эубиоза по одному показателю составила 1,36±0,07 мкг/мл. По степени увеличения нарушения эубиоза в кишечнике отмечено значительное снижение лизоцимной активности лактобацилл. При нарушении эубиоза по двум показателям лизоцимная активность лактобацилл составила 0,95±0,05мкг/мл, а нарушение эубиоза по трём и четырём показателям сопровождалось уменьшением величины этого показателя до 0,77±0,04 мкг/мл и 0,79±0,04, соответственно (Р 0,05).
По мере нарастания нарушений эубиоза в кишечнике в биоценозе кишечника формируются условия способствующие значительному снижению лизо-цимной активности лактобацилл, которое служит основанием вывода о том, что увеличение степени нарушения микробиоценоза кишечника сопровождается снижением лизоцимной активности лактобацилл в 1,8 раза (Р 0,05), из которых в большинстве случаев (61,3% изолятов) преобладают штаммы с «низкой» и «ниже среднего» лизоцимной активностью.
При отборе перспективных штаммов микроорганизмов для приготовления пробиотиков, наряду с общепринятыми тестами такими как кислотообразование, сахаролитическая, протеолитическая активность, антагонизм[70,139] учитывали сочетание их с диаминооксидазной и лизоцимной активностью.
Среди исследованных штаммов лактобацилл, рекомендуемых для использования в качестве пробиотиков, установлен диаминооксидазный эффект с различной степенью выраженности. Согласно условию методического приёма, предусматривающего контроль уровня гистамина в питательной среде, после суточной инкубации отмечено выраженное уменьшение гистамина при культивировании штаммов L. helveticus ГРК-08, L. helveticus NKJC, L. helveticus JCH, L. casei KAA.
Определение антагонистической активности пробиотических штаммов на антибактериальный эффект к наиболее часто встречаемой при дисбактериозе Е. coli с гемолитической активностью наблюдался у исследуемых культур L. helveticus с преобладанием антагонизма средней (53,8-61,5% случаев) и высокой степени (15,4-38,5% случаев).
По отношению к часто встречаемым при дисбактериозе кишечника изоля-там S. aureus антибактериальный эффект лактобацилл значительно ниже. Лакто-бациллы со средней антагонистической активностью составили 34,6-42,3% случаев, а высокая антагонистическая активность наблюдалась до 15,4% случаев.
