Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Особенности иммунного статуса у жителей Европейского Севера 10
1.2. Аутоиммунные процессы и их биологическая роль 14
1.3. Антитела к фосфолипидам и модифицированным липопротеинам 22
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 30
2.1. Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы 32
2.2. Методы исследования иммунной системы 37
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследовании 42
3.1 Частота обнаружения, содержание аутоантител в сыворотке крови жителей Европейского Севера 42
3.2. Содержание антифосфолипидных аутоантител в сыворотке крови подростков и взрослых 46
3.3. Содержание каталитических аутоантител в сыворотке крови подростков и взрослых 56
3.4. Характеристика активности иммунной системы 60
3.5. Корреляционные связи иммунологических парамметров 64
Заключение 76
Выводы 91
Практические рекомендации 93
Список литературы 94
- Особенности иммунного статуса у жителей Европейского Севера
- Антитела к фосфолипидам и модифицированным липопротеинам
- Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы
- Частота обнаружения, содержание аутоантител в сыворотке крови жителей Европейского Севера
Введение к работе
Актуальность темы. Появление аутоантител до сих пор не считается физиологическим процессом и признается признаком аутосенсибилизации и развитием аутоиммунных патологических процессов. Общепризнанно, что появление и нарастание их концентраций происходит при нарушении иммунорегуляции, в результате неэффективности супрессорнсго звена; в некоторых случаях аутосенсибилизация обеспечивается за счет перекрестных антигенов.
С появлением чувствительных методов исследования постепенно расширяется представление о спектре аутоантител и их концентрациях. Важным событием в развитии учения об аутоантителах является выделение каталитических аутоантител, полученных к переходным состояниям химических реакций и способных служить уникальным биокатализатором (S. Pauls, 1996; ГА Невинский и соавт., 2000).
Наиболее ярким примером каталитической активности аутоантител является их участие в гидролизе специфических белков. Вероятно, катализ вообще присущ Fab-фрагменту антител (Г.А. Невинский и соавт., 2001; СВ. Сучков и соавт., 2002).
Известно, что у лиц, родившихся и проживающих на Севере, содержания аутоантител выше, чаще регистрируется повышение их концентрации, наблюдается увеличение и расширение содержания специфичных аутоантител в зимний период (Л.К. Добродеева, 1989). Наличие аутоантител у практически здоровых людей свидетельствует о том, что образование их является физиологическим процессом (N.K Jerne, 1974). Естественно при этом возникают вопросы о их значимости.
Получение доказательств о физиологическом аутоантителообразовании имеет принципиальное значение и кардинально меняет представление о роли аутоантител. в развитии патологии. Мнение о том, что аутоантитела участвуют только в формировании деструктивных процессов путем антителозависимого цитолиза, вероятнее всего, не совсем объективно.
Аутоантитела, как любые другие антитела, имея происхождение от транспортных белков, едины в одном — они могут специфически, но обратимо связывать антигены, вызвавшие их образование.
Таким образом, аутоантитела вполне могут снижать функциональную активность ферментов, бологически активных веществ, извлекать из циркуляции транспортные формы метаболитов, блокировать экспрессию молекул на клетке и т. д.
Имеющиеся в литературе единичные сведения о влиянии возраста, неблагоприятных экологических факторов на содержание аутоантител побудили нас изучить наличие аутоантител не только у взрослых, но и у детей. В качестве предмета исследования были избраны аутоантитела, содержание которых у практически здоровых людей не изучалось ранее.
Цель и задачи исследования. Цель работы - выявить содержание и физиологическую роль антинуклеарных, антифосфолипидных и каталитических аутоантител в иммунорегуляторных процессах.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
Определить уровни содержания и частоту регистрации сывороточных аутоантител к фосфолипидам (кардиолипину, фосфатидил-серину, фосфатидил-инозитолу и фосфатидиловой кислоте, оЛПНП).
Определить уровни и пределы колебаний аутоантител к эластазе, катепсину G, цитоплазматическому антигену Jo -1.
Выявить взаимосвязь содержаний вышеперечисленных аутоантител, фенотипов лимфоцитов в периферической крови.
Установить взаимосвязь изучаемых в работе типов аутоантител с концентрациями провоспалительных цитокинов и реагинов.
Положения, выносимые на защиту. 1. Аутоантитела к фосфолипидам, рибонуклеопротеидам, катепсину и эластазе и повышенные их концентрации определяются у практически здоровых лиц. 2. Активизация синтеза аутоантител указанной специфичности у практически здоровых лиц и переключение их синтеза с IgM на IgG регламентируется повышенным содержанием в крови соответствующих антигенных детерминант. 3. Аутоантитела к фосфолипидам обеспечивают гомеостаз транспортных форм фосфолипидов в крови, аутоантитела к комплексу РНК вмешиваются в процессы транскрипции, путем изменения активности переноса тРНК и ферментов, участвующих в распознавании нуклеотидной последовательности.
Научная новизна работы. Впервые у практически здоровых людей определены уровни содержания и частота регистрации повышенных концентраций аутоантител к кардиолипину, фосфолипидам, фосфатидил-серину, фосфатидил-инозитолу, фосфатидиловой кислоте, против окисленных липопротеинов низкой плотности (оЛПНП), эластазе и катепсину G, а также спектр аутоантител к комплексу РНК (гистонам, SS-A и SS-B антигенам, гистидил-тРНКсинтетазе(.ю-І), топоизомеразе 1 (Scl-70)).
Впервые проведено изучение соотношения активности иммунных реакций и уровня перечисленных аутоантител.
Впервые установлено, что процесс аутоантителообразования, так же как и синтез антител на экзогенный антиген, связан с лимфопролиферацией, повышением количества активированных клеток, увеличением активности процессов дифференцировки иммунокомпетентных клеток и завершается повышением активности их апоптоза.
Впервые показано, что при использовании современного чувствительного метода и соответствующих реактивов аутоантитела выявляются всегда, стимуляция их синтеза определяется необходимостью связывания того или иного субстрата при увеличении его концентрации для элиминации, транспорта или блокады активности.
Научно-практическая значимость исследования. Материалы исследования позволили установить регуляторную роль аутоантител в совершенно различных процессах: в метаболизме липидов, нуклеиновых
кислот и каталитической способности. В работе показана высокая информативная значимость аутоантител для характеристики величины катаболического пула, индекса атерогенности липидов и эндогенной интоксикации. Эти данные могут быть теоретической основой для разработки критериев оценки уровня эндогенной интоксикации по концентрации и распределению веществ низкой и средней молекулярной массы в крови. В дальнейшем данные критерии могут быть использованы в качестве маркеров резистентности организма и для лабораторного скрининга донозологических состояний и их коррекции.
Результаты исследования рекомендуются региональным органам здравоохранения при оценке активности аутоиммунного - процесса в дифференциальной диагностике заболеваний аутоиммунного профиля.
Материалы диссертации рекомендуются для использования в учебном процессе на кафедрах биохимии, фармакологии и курсах переподготовки врачей факультета последипломного образования.
Результаты исследования используются врачами медицинской компании «Биокор» при проведении дифференциальной диагностики заболеваний и в качестве критерия эффективности лечебно-профилактических мероприятий (акт внедрения от 12.05.0005 г.).
Диссертационное исследование выполнено в Институте физиологии природных адаптации УрО РАН (Архангельск) в соответствии с планом НИР (номер государственной регистрации 01.2.00101811).
Апробация работы и публикации. Основные положения работы представлены на III Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996); на II национальной Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» ( Москва, 1998); наXVII съезд физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998); на симпозиуме «Аутоиммунные заболевания» (Москва, 1998); на Всероссийской конференции с международным участием «Проблемы экологии человека» (Архангельск, 2000); на конференции «Актуальные проблемы экологической физиологии человека на Севере» (Сыктывкар, 2001); на V конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002.); на II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергологии (Москва, 2004.); на Ш съезде иммунологов России (Екатеринбург, 2004); на симпозиуме с международным участием «Проблемы адаптации человека к экологическим и социальным условиям Севера» (Сыктывкар, 2004); на Всероссийской конференции с международным участием «Биологические аспекты экологии человека» (Архангельск, 2004); на Всероссийской конференции с международным участием «Геодинамика и геологические изменения в окружающей среде северных регионов» (Архангельск, 2004); на ХГХ съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004); на VIII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2004» (Санкт-Петербург, 2004).
По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследований, обсуждение), выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 13 таблицами и 7рисунками. Библиография включает 182 источника, из них 98 отечественных авторов и 84 зарубежных.
Особенности иммунного статуса у жителей Европейского Севера
Комплекс природно-климатических факторов, действующих на организм человека в условиях Севера, определяют как дискомфортный и суровый [9; 26; 37]. В общем благоприятная для жизни человека погода составляет не более 40% дней в году, коэффициент жесткости погоды по Бодману с учетом только ветрового и температурного режимов превышает критический уровень все зимние месяцы. Имеется достаточное число доказательств ингибирующего влияния холода, влажности, ветрового режима на клеточный и гуморальный иммунный ответ, неспецифические факторы защиты [19; 38; 48; 56; 33; 31; 30]. В данных климатогеографических условиях формируются физиологические особенности иммунных реакций, обеспечивающие постоянство внутренней среды в данных условиях. Так в сравнении с общепринятыми физиологическими нормативами, у северян при отсутствии изменения общего содержания лейкоцитов регистрируется снижение числа сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов на фоне повышения абсолютного количества лимфоцитов, причем снижение как относительного, так и абсолютного содержания нейтрофилов сопряжено с дефектами их фагоцитарной активности, осмотической устойчивости фагоцитов, а особенно в периоды повышения влажности [38; 25; 77; 63; 29]. Дефицит нейтрофильных лейкоцитов реализуется в результате укорочения продолжительности жизни циркулирующих в крови гранулоцитов, механизм данного явления связан с аутоантителообразованием [107]. Выявлено угнетение пролиферативных процессов со стороны моноцитарной системы у жителей Севера, тогда как изменение уровня дифференцировки не установлено [29]. Региональные нормативы иммунологических показателей у северян характеризуются низким содержанием Т- лимфоцитов за счет клеток, несущих рецепторы CD3 и CD5 на фоне значительных концентраций В лимфоцитов и IgM, а также снижением содержания сывороточного IgA [95; 31; 68]. Причем дефицит содержания Т-лимфоцитов формируется с течением времени и, являясь вторичным, среди детей встречается значительно реже, чем у взрослых, за счет резервов Т-лимфоцитов, клеток, еще не вовлеченных в иммунную реакцию. Гуморальный ответ характеризуется низкой активностью антител ообразования, что подтверждено относительно различных антигенов [33; 30]. В условиях Европейского Севера выявляется значительный уровень аутосенсибилизации, что проявляется в регистрации аутогемагтлютининов, лейкоагглютининов, аутоантител к тиреоглобулину и к dsDNA до 30% [29]. Наличие столь высокого уровня аутоантител у практически здоровых лиц, вероятно, служит проявлением активных метаболических процессов в организме, в частности перекисного окисления липидов [77; 75]. В литературных источниках существует достаточно много объяснений аутоиммунной перестройки в суровых северных условиях. По мнению Н.В, Васильева [17; 18], это могут быть микродеструктивные процессы в органах, подвергающихся функциональной перегрузке. Возможно, играет большую роль в этом процессе катаболический эффект глюкокортикоидов, резкое увеличение содержания в крови свободных жирных кислот [37; 65]. По мнению В.М. Шубика [93; 94], интенсивное образование противотканевых аутоантител связано с необходимостью нейтрализации токсических продуктов обмена. Изменения в соотношениях содержания в периферической крови Т — и В-лимфоцитов определяют более широкие возможности для аутосенсибилизации у жителей Севера [57].
Зависимость изменения ряда иммунных показателей также подтверждена корреляционным анализом. Так при дефиците тепла ниже содержание Т-лимфоцитов за счет клеток, не имеющих рецепторов CD4, CD5, CD8, CD 16, а выше концентрации сывороточных IgA. Выявлена обратная зависимость атмосферного давления и относительного содержания циркулирующих нейтрофилов, моноцитов и их фагоцитарной активности [30; 32]. Особое внимание уделяется в литературных данных вопросу об ультрафиолетовой радиации, как одному из мощных факторов внешней среды, действующих на организм. Однако интенсивность ее различна и зависит от географического расположения, местности, сезона года, времени суток и погоды. Для северных широт характерен контраст ультрафиолетовой радиации. В Архангельской области, где с ноября по февраль в связи с низким стоянием солнца над горизонтом и небольшой продолжительностью его сияния, количество биологически активного ультрафиолетового излучения так мало, что можно говорить об ультрафиолетовой полярной ночи, В весенне-летний период - наоборот, солнечная радиация, достигающая земной поверхности, содержит гораздо больше ультрафиолетовых лучей, чем в средних широтах, что обусловлено большой продолжительностью дня и значительным количеством рассеянного излучения [39]. Ультрафиолетовые лучи способствуют разрывам цепей ДНК в клетках организма, что в свою очередь способствует аутоантите л о образованию [83].
Среди множества неблагоприятных климатических факторов особого внимания заслуживает напряженность иономагнитной обстановки. На Севере Европейской территории России в течение года регистрируется до 180 магнитовозмущенных дней и около .140 дней с магнитными бурями, особенно значительное количество дней с магнитными бурями отмечается весной - 124 дня (на широте Архангельска), тогда как зимой и летом примерно одинаковое количество магнитовозмущенных дней - 86 и 85 соответственно; осенью 89. Наибольшая магнитовозмущенность наблюдается на геомагнитной широте равной 68 с.ш. (Архангельская область находится между 60-40с.ш. и 80-50 с.ш,). В магнитовозмущенные дни наблюдается снижение содержания в периферической крови Т-лимфоцитов с рецепторами CD3 [33; 31].
Антитела к фосфолипидам и модифицированным липопротеинам
Антитела к фосфолипидам (АФЛ) рассматриваются как патологические, действие которых направлено против основных компонентов клеточных мембран - фосфолипидов и, соответственно, против собственных клеток и тканей организма. Фосфолипиды могут быть отрицательно заряженными (фосфатиди л серии, кардиолипин), положительно заряженными (фосфатидилинозитол и фосфатидиловая кислота), нейтральными (фосфатидилхолин). Клеточные мембраны играют важную роль в инициации процессов свертывания крови. Фосфатидилсерии находится на внутренней поверхности тромбоцитов и клеточных мембран, эндотелия сосудов. При активации клеток фосфатидилсерин перемещается на поверхность клетки и принимает участие в формировании кровяного сгустка (тромба), входит в протромбиназный комплекс и играет физиологическую роль в коагуляции. Антитела к фосфолипидам (АФЛ) нарушают нормальное функционирование эндотелия кровеносных сосудов, вызывая васкулопатии (сужение сосудов) и образование сосудистых тромбов. Взаимодействие АФЛ с фосфолипидами представляет собой сложный феномен, в реализации которого важную роль играют так называемые кофакторы. Один из них - бета-2-гликопротеин, присутствующий в нормальной плазме и циркулирующий в ассоциации с липопротеинами (аполипопротеин Н). Он обладает естественной антикоагулянтной активностью. При АФС антифосфолнпидные антитела связываются эндотелием сосудов в присутствии бета-2-гликопротеина, стимулируют синтез фактора Виллебранда, индуцируют активность тканевого фактора эндотелиальными клетками, стимулируют процесс гемокоагуляции [101]. Высокий уровень антифосфолипидных антител характерен для антифосфолипидного синдрома (АФС), при котором поражаются сосуды сердца, головного мозга, почек, печени, надпочечников. У мужчин высокий титр антител к фосфолипидам часто сопровождается риском развития тромбоза вен, инфаркта миокарда, а у женщин - повторными выкидышами (чаще во 2 и 3 семестре беременности).
Некоторые фосфолипидные молекулы, в частности, фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин, обладают адгезивными свойствами. Они позволяют клеткам слипаться друг с другом, так, например, в плаценте из цитотрофобласта образуется синцитиотрофоблает, регулирующий питание плода. Изучение формирования синцития на культуре клеток трофобласта линии Be-Wo выявило, что моноклональные антитела к фосфатидилсерину (но не к кардиолипину!) ингибируют этот процесс in vitro. Более того, в плацентах пациенток с АФЛ и невынашиванием обнаруживают высокий уровень АФЛ класса IgM, связанных с синцитием. Блокирование клеточной адгезии антифосфолипидньши антителами нарушает процесс имплантации [103; 47].
Антитела к фосфолипидам клеток эндотелия сосудов нарушают равновесие между свертывающей и противосвертывающей системами в сторону образования тромбов. Подобные изменения микроциркуляции при беременности могут приводить к нарушению кровообращения также и в области плаценты и даже к отторжению плода. Кроме того, АФС может сопровождаться нарушением мозгового кровообращения с развитием инсульта, неврологической патологией, поражением кожи (сетчатое ливедо, кожные язвы) [176; 61].
У больных СКВ частота тромбозов значительно выше (40%), если в сыворотке обнаруживают антифосфолипидные антитела, по сравнению с 15% у больных, у которых эти аутоантитела отсутствуют. D.Triplett и соавт. [46] предложили возможные механизмы патогенетической активности антифосфолипидных антител: 1. На уровне эндотелиальной клетки: снижение синтеза простациклина -изменение функционального состояния тромбоцитов; нарушение функциональной активности тромбом одул ина - изменение активности регуляторных белков; снижение активности гепаринсульфата - снижение активности белкаС; увеличение экспрессии тканевых факторов - уменьшение уровня свободного белка S; изменение активности фактора активации тромбоцитов - ослабление функциональной активности антитромбина III, 2. На уровне нарушения фибринолитической активности: снижение высвобождения тканевого активатора плазминогена - ослабление синтеза или функциональной активности плацентарного антикоагулянтного белка. 3. Активация / повреждение эндотелия. 4. Увеличение синтеза факторов фон Виллебранда - нарушение функциональной активности естественных антикоагулянтов, обладающих кофакторной активностью (Ь2-ГП1 и др.); индукция синтеза антиидиопатических антител, имитирующих активность прокоагулянтных фосфолипидов. R. Roubey [164] создал модель событий, приводящих к образованию антифосфолипидных антител при АФС. На первом этапе происходит персистирующая активация эндотелиальных клеток и (или) тромбоцитов, что приводит к увеличению экспонирования прокоагулянтных (анионных) фосфолипидов. Затем белки плазмы (Ь2-ГП1, протромбин СА++), возможно, и другие, более высокого уровня компоненты и обладающие высокой активностью (сродством) к анионным фосфолипидам, связываются с липидной поверхностью. Предполагается, что Ь2-ГН1 обладает антикоагулянтной активностью, которая блокируется при связывании с антителами, что способствует развитию гиперкоагуляции. Поскольку при АФС могут поражаться кровеносные сосуды различного, фактически любого, калибра, клинические проявления этого синдрома чрезвычайно разнообразны. Так, в частности, описаны случаи поражения систем - центральной, сердечно-сосудистой, дыхательной, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой, эндокринной [163; 5]. M.Rosove и P.Brewer [162] выявили любопытную закономерность: если первым проявлением АФС был артериальный тромбоз, то в последующем в 100% случаев рецидив поражал артериальные сосуды, если первым был венозный тромбоз, его рецидив вероятен у 94% больных.
Краткая характеристика используемых в работе признаков, характеризующих состояние иммунной системы
Среди значительного числа жизнеобеспечивающих систем у человека система иммунитета выполняет защитную роль. Уникальность иммунной системы обеспечена ее функциональным многообразием: многочисленностью механизмов защиты, факторов резистентности, многоликостью реакций. Некомпенсируемые изменения в системе -количественные, качественные, нарушения баланса и взаимодействия приводят к истощению резервных возможностей и развитию патологии. Перед тем как перейти к собственно анализу иммунологической реактивности, кратко охарактеризуем признаки, отражающие состояние иммунной системы. Структурной единицей иммунной системы является лимфоцит; популяция лимфоцитов функционально неоднородна, В процессах созревания и дифференцировки лимфоцитов изменяется его рецепторный аппарат. Наличие на поверхности лимфоцита соответствующих молекул, дифференцирующих маркеров (Cluster Differentiation- CD), позволяет различать фенотипы лимфоцитов. CD3 представлен на функционально активных Т-лимфоцитах; в ассоциации с Т-клеточным рецептором способствует передаче сигнала активации в цитоплазму, участвует в регуляции синтеза и секреции IL-2, пролиферации и программированной гибели клеток-мишеней [73]. Участвует в передаче активационного сигнала внутрь клетки. CD4 экспрессируют Т-клетки (хелперы / индукторы), составляющие 45% лимфоцитов периферической крови; в периферической крови до 5% клеток несут одновременно маркеры CD4 и CD8, слабая экспрессия молекулы CD4 наблюдается на клетках макрофагально - моноцитарного ряда. С участием этого рецептора связывают секрецию IL-2, активацию антителозависимой и перфорин-зависимой цитотоксичности [119]. CD5 при альтернативной стимуляции клеток под действием адгезивных взаимодействий CD5 является лигандом CD72 - антигена В-лимфоцитов. CD5 выявляется на поверхности всех зрелых Т-клеток [49]. CD8 маркер субпопуляции супрессорных/цитотоксических Т-лимфоцитов. Цитотоксичность этих клеток осуществляется по перфорин- и Fas-зависимому пути [140]. При контакте с клеткой-мишенью CD8+ выступает в роли рецептора неполиморфных детерминант белков МНС класса I. CD10 маркер лимфопролиферации [49]. CD16 экспрессируется на нормальных киллерах, моноцитах, макрофагах и нейтрофилах; все лимфоциты, экспрессирующие этот маркер, обладают способностью к антител озависимой клеточной цитотоксичности [140]. Среди клеток периферической крови существует уникальная популяция CD3+CD16+, которая обладает антителозависимой клеточной цитотоксичностью, но у нее отсутствует активность натуральных киллеров [165]. Кроме CD 16 специфическим маркером нормальных или естественных киллеров является CD56 [111; 116]. CD22 экспрессируется В-клетками, является молекулой адгезии и может усиливать активационный сигнал на В-клетки [143]; экспрессия CD22 коррелирует с поверхностными IgM/IgD; уровень экспрессии повышается при активации клетки, после дифференциации активированных В-клеток в антителообразующие плотность этого рецептора снижается, с участием этого рецептора связывают непосредственное взаимодействие Т- и В-клеток [148], блокирование CD22 антителами ведет к снижению чувствительности этих клеток к антигенной активации [143]. CD25 маркер активации Т-лимфоцитов, рецептор IL-2. Экспрессия данного рецептора свидетельствует о пролиферативной реакции, индукции секреции иммуноглобулинов, усилении цитотоксичности [88]. CD95 является рецептором (Fas-рецептор) для фактора некроза опухоли альфа (TNF-a) и фактически метит клетку к программируемой гибели (апоптоз). Регулирует уровень пролиферации и созревания клеток, продолжительность их жизни [8; 140] и, как правило, в норме содержание CD95+ адекватно количеству пролиферирующих клеток, что обеспечивает иммунный гомеостаз. HLA DR антиген главного комплекса гистосовместимости класса II, выявляется на иммунокомпетентных клетках при их активации и является важнейшим компонентом взаимодействия клеток между собой [126; 1 72]. HLA-молекулы, экспрессируемые на поверхности мембраны, определяют функциональную активность иммунокомпетентных клеток, ассоциированную с такими параметрами, как уровень половых и стероидных гормонов [72]. В лимфоцитарной взвеси из периферической крови выявляют активированные Т-клетки фенотипа CD3+HLA DR+ (в норме около 10%), покоящиеся Т-клетки CD3+ HLA DR- и соответствующие В-лимфоциты (HLA DR+ CD3-; HLA DR- CD3-). При наличии каких-либо трансплантационных нарушений на фоне иммунодефицита полезно определение количества клеток фенотипа CD3+CD16- (в норме около 72%) и NK-клеток CD3-CD16+ (в норме около 10%). Для выяснения соотношений субпопуляций Т-клеток при вирусных инфекциях, аутоиммунных болезнях проводится оценка содержания и соотношения CD4+CD8- (в норме около 45 %) и CD4-CD8+ (в норме около 28 %) клеток. Содержание антител в сыворотке крови, иммуноглобулинов (Ig) различно в зависимости от их принадлежности к тому или иному классу. IgM являются макро-иммуноглобулинами, они не выходят за пределы сосудов, обеспечивают внутрисосудистую защиту, активно синтезируются в первые 7-Ю дней после воздействия антигена. У новорожденного их содержание в крови не превышает 0,2 г/л, уровень взрослого достигается к 5 годам; нормативы содержания в сыворотке крови 0,7-1,8 г/л. IgG сменяют синтез IgM, 70% их количества диффундирует в ткани, обеспечивая тканевую защиту, у новорожденного нормальное содержание данного класса Ig может достигать 12 г/л; уровень взрослого (7 - 24 г/л) формируется к 5 годам. IgA наиболее мобильны и активны в слизистых, коже, серозных оболочках, обеспечивают защиту барьерных тканей, участвуя в реакциях местного иммунитета; у новорожденного IgA практически отсутствуют, уровень взрослого (1,2 - 5,4 г/л) достигается только к 10 годам. IgE реагины - цитофильные антитела, большая часть их адсорбирована на клетках, в сыворотке содержание в норме не велико и, как правило, не превышает 0,5 г/л; при рождении их содержание минимально, в течение первого года жизни уровень IgE нарастает, в последующем содержание реагинов снижается до указанного уровня.
Частота обнаружения, содержание аутоантител в сыворотке крови жителей Европейского Севера
Изменения в соотношениях содержания в периферической крови Т и В лимфоцитов, тенденция к лейкопении, особенно на ранних этапах адаптационного процесса [57; 27; 14; 28] определяют более широкие возможности для аутосенсибилизации у жителей севера.
Принимая в качестве рабочей гипотезы, что аутоантитела являются действительно одним из регуляции гомео стаза, с целью детализации интенсивности антитело образования к структурным элементам ядра, определяли аутоантитела к двухспиральной JJHKfds-DNA), рибонуклеазам, к основному хромасомальному негистоновому белку, гистидил-тРНК синтетазе, а также к кардиолипину. Исследовали сыворотки взрослых жителей - 56 человек (42 женщины и 14 мужчин) в возрасте от 20 до 50 лет, проживающих в НАО (п. Каратайка).
Содержание аутоантител у ненцев изучено только в зимний период (табл. 2).
Как видно из представленных данных, концентрации антиядерных антител даже в средних результатах превышают верхний уровень физиологических границ (до 1 усл.ед.). Подобная ситуация касается антител к двухспиральной ДНК и всех остальных типов изучаемых аутоантител. Особенно велики средние концентрации аутоантител к двухспиральной ДНК, последние практически почти в два раза превышают концентрации антител к рибонуклеазам, фосфополипептидам, к основному хромасомальному негистоновому белку и гистидил-тРНК синтетаза. Сравнение содержания аутоантител у женщин и мужчин свидетельствуют, что у последних средняя концентрация антител к комплексу РНК, в том числе к фосфополипептидам, ядерным компонентам РНК негистоновой природы заметно выше. Так концентрация к антигену рибонуклеазы SS-A/Ro у мужчин составляет (4,0 ± 0,97усл.ед.), у женщин (1,64 ± 0}57усл.ед.), (р 0,01). Подобные различия касаются уровней SS-B/La у мужчин (3,95 ± 0,82 усл.ед), у женщин (1,56 ± 0,53усл.ед.), (р 0,01). Наиболее резкие различия в этом отношении устанавливаются у антител к Jo-1, известному как гистидил-тРНК синтетаза, у мужчин (3,55 ± 0,82 усл.ед.), у женщин (1,18 + 0,32 усл.ед.). Представляла интерес частота выявления указанных антител. В среднем антиядерные антитела, в концентрации, превышающей норму, выявлены в 57,14% случаев, в том числе у 59,52% женщин и 50% мужчин. Этот уровень в основном обеспечен выявлением двухспиральной ДНК у женщин 42,86% и у мужчин 42,86%. Средняя концентрация антиядерных антител (1Д7±0,49 усл.ед.) у взрослых жителей Архангельской области превышает верхний физиологический предел (до 1,0 усл.ед.) с частотой выявления повышенных уровней 57,14%» без существенных различий в зависимости от пола обследуемых. Концентрация аутоантител к двухспиральной ДНК(с1з-ОЫА) в среднем составила 81,52±0,71 МЕ/мл, с частотой выявления повышенных пределов содержания 42,8% без существенных различий среди мужчин и женщин. Содержание аутоантител к антигену рибонуклеазы (SS-A/Ro) у мужчин было выше и в среднем составило 4,35+0,97 усл.ед.; у женщин их концентрации были значительно меньше 1,64+0,57 усл.ед. Подобные различия установлены относительно содержания SS-B/La (соответственно 3,95±0,82 и 1,56±0,53 усл.ед.) и антител к Jo-1 (соответственно 3,55+0,82 и 1,18+0,32 усл.ед.).
Частота выявления повышенных концентраций антител к антигенам комплекса РНК (RNA) значительно ниже, чем аутоантител к ds-DNA, в пределах 10,7-12,5% без существенных различий от варианта антигенов, используемых в реакциях (табл.3).
Средние концентрации аутоантител к кардиолипину составили 25,41+0,72 Ед/мл с более высокими уровнями у мужчин (32,31+0,78 против 23,21±0,62 Ед/мл у женщин), повышенное содержание антикардиолипинов наблюдали у 28,6% обследованных без разницы частоты их выявления среди мужчин и женщин. Таблица З Частота регистрации (в %) повышенных концентраций антиядерных аутоантител в сыворотке крови взрослых лиц
Таким образом, в сыворотке крови взрослых людей, проживающих в Заполярье, довольно часто регистрируются аномальные уровни содержания антител к ds-DNA, РНК и ее продуктам, а также к кардиолипину. Частота регистрации повышенных уровней содержания указанных антител колеблется в пределах в зависимости от их спецификации от 11% до 60%. Наиболее часто регистрируются повышенные уровни содержания аутоантител к ds-DNA.
Повышенный уровень аутосенсибилизации в данном регионе подтверждается средними результатами концентрации изучаемых аутоантител. Полученные факты свидетельствуют на наш взгляд, что образование антител следует рассматривать в более широких рамках, как особый физиологический механизм метаболической регуляции. Этот механизм может принимать участие и в защитных функциях; в определенных случаях или у отдельных индивидов, и патогенные воздействия.
