Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12
1.1. Микробиологическая характеристика рода Bordetella 13
1.2. Лабораторная диагностика коклюшной инфекции 25
1.3. Современные методы молекулярно-генетических исследований бордетелл 38
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 49
2.1. Штаммы. Методы выделения и идентификации 49
2.2. Способы получения антигенов, гипериммунных сывороток и иммуноглобулинов 52
2.3. Серологические методы 53
2.4. Молекулярно-биологические методы 53
2.5. Методы статистического анализа 5 5
Глава 3. ХАРАКТЕРИСТИКА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИИ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ 57
Глава 4. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КОКЛЮША 64
4.1. Повышение эффективности бактериологического метода диагностики коклюшной инфекции 64
4.2. Разработка иммуноферментной тест-системы для ранней диагностики коклюша 74
4.2.1. Получение антигенов Bordetella pertussis. 74
4.2.2. Получение гипериммунных сывороток. 76
4.2.3. Получение иммуноглобулинов. 80
4.2.4. Получение специфических конъюгатов. 83
4.2.5. Отработка условий постановки реакции. 84
4.2.6. Модельные опыты. 87
4.2.7. Апробация тест-системы при клинических исследованиях. 89
Глава 5. МОЛЕКУЛЯРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕС1САЯ ХАРАКТЕРИСТШСА ШТАММОВ В. PERTUSSIS 92
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 112
ВЫВОДЫ 119
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 120
- Микробиологическая характеристика рода Bordetella
- Штаммы. Методы выделения и идентификации
- ХАРАКТЕРИСТИКА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИИ НА СОВРЕМЕННОМ ЭТАПЕ
- Повышение эффективности бактериологического метода диагностики коклюшной инфекции
- МОЛЕКУЛЯРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕС1САЯ ХАРАКТЕРИСТШСА ШТАММОВ В. PERTUSSIS
Введение к работе
Актуальность проблемы
Коклюш относят к числу управляемых инфекций. Уже в 1923 г. Madsen предпринял первую попытку вакцинации против коклюша, но достиг лишь снижения тяжести заболевания у привитых. Широкое применение противококлюшных прививок в результате создания эффективной вакцины стало возможным лишь в 50-е годы [2]. Это позволило существенно снизить заболеваемость и предупредить летальные исходы от коклюша. Тем не менее, массовая вакцинация не решила всех проблем, связанных с данной инфекцией. Даже в странах с высоким (95 % и более) уровнем привитости детей отмечаются вспышки заболевания, не связанные с естественным эпидемическим циклом [22, 23, 33, 69, 105]. По данным ВОЗ, в 2000 г. коклюш был зарегистрирован в 37 странах Европы из 51, в то время как в 1999 г. - в 31 стране. Наибольшее число заболеваний зарегистрировано в Нидерландах, Норвегии и Швеции (соответственно 4837, 3417 и 2705 случаев). Еще раньше, в начале девяностых годов XX века подъем заболеваемости отмечался также во Франции, Финляндии, США, Австралии.
В нашей стране вакцинация проводится с 1956 г., в Санкт-Петербурге - с 1959 г. Обязательная вакцинация детей позволила снизить заболеваемость в десятки раз. Так, в Санкт-Петербурге в 1958 г. ее показатель составил 710 на 100 тыс. населения, а в 1973 г. - 18,8. Практически не регистрировалась летальность от этого инфекционного заболевания. Однако в начале 90-х годов в результате необоснованно возросшего числа медицинских отводов детей от прививок вновь возник резкий подъем заболеваемости коклюшем; ее максимальный рост наблюдался в крупных городах РФ, в том числе Санкт-Петербурге. Пик эпидемического подъема заболеваемости коклюшем отмечен в 1994 г., ее показатель составил 32,6 на 100 тыс. населения в РФ, а в Санкт-
Петербурге - 143,2. В последующие годы были приняты меры по повышению уровня охвата прививками детей до 3 лет. Несмотря на высокий уровень привитости детей в Санкт-Петербурге в настоящее время (показатель составил 88,6 % в 2002 г.), заболеваемость в 4 раза превышает среднереспубликанскую.
Одной из проблем современного периода является вовлечение в эпидемический процесс привитых детей. По данным детской городской больницы № 5, в Санкт-Петербурге среди госпитализированных больных в 2001-2002 гг. привитые составили 38,9 %. В возрастном аспекте среди привитых детей 32,6 % составили дети 1-2 года жизни и 33 % - в возрасте 7-12 лет.
Учитывая возрастающую тенденцию распространения коклюша среди привитых детей, встал вопрос о необходимости изучения возможных генетических мутаций, и, как следствие, изменения биологических свойств В. pertussis, произошедших за период с начала проведения вакцинопрофилактики, что может являться причиной снижения эффективности вакцинации. В результате применения в последние годы молекулярно-генетических методов при исследовании В. pertussis иностранными исследователями было показано, что популяция В.pertussis имеет клональную структуру, и в годы, последовавшие за введением вакцинации, происходила клональная экспансия штаммов, отличных по профилям ДНК от довакцинальных [142]. Появление новых профилей ДНК в 80-е годы совпало с ростом заболеваемости в ряде стран [66]. Выявлены изменения в структуре генов, кодирующих синтез основных токсинов и адгезинов В. pertussis [98, 104, 105, 146]. Однако аналогичные исследования по изучению возможных генетических различий у «диких» и вакцинных штаммов в России не проводились. «Золотым стандартом» диагностики коклюшной инфекции остается бактериологическое исследование, при котором окончательный ответ
7 выдается через 5-7 суток. Подтверждаемость диагноза этим методом не превышает 25 %, что обусловлено рядом причин, в частности, недостаточной эффективностью бактериологического метода, а также поздней обращаемостью больных за медицинской помощью. В этой связи актуальным представлялся поиск путей повышения эффективности существующего метода бактериологической диагностики, а также разработка экспресс-метода, обеспечивающего ускоренное обнаружение возбудителя коклюша.
Цель исследования: Охарактеризовать геномный полиморфизм В. pertussis различного происхождения и повысить эффективность методов обнаружения возбудителя коклюша.
Задачи исследования:
Повысить эффективность бактериологического исследования и разработать иммуноферментную тест-систему для ускоренного обнаружения возбудителя коклюша.
Изучить молекулярно-биологические свойства В. pertussis, циркулирующих в Санкт-Петербурге в условиях вакцинопрофилактики.
Установить значение штаммов В. pertussis различных генотипов в увеличении числа заболеваний среди привитых.
Определить сходство и различия между штаммами В. pertussis, циркулирующими на территории изучения, и вакцинными.
Научная новизна работы.
Впервые в России в результате применения методов электрофореза в пульсирующем поле (ЭФПП) и секвенирования выявлены мутации в геноме В. pertussis и установлен генетический полиморфизм популяции
8 возбудителя коклюша.
Выявлены молекулярно-генетические различия «диких» и вакцинных штаммов В. pertussis.
Показано, что штаммы генотипов IVa и IVJ3 по частоте циркуляции преобладают на территории изучения; установлена их связь с ростом заболеваний среди привитых.
Впервые установлена генетическая неоднородность популяции В. parapertussis, новый вариант гена пертактина В. parapertussis 1.4а/2.8е зарегистрирован в GenBank, регистрационный номер AJ542533.
Разработана иммуноферментная тест-система для выявления возбудителя коклюша с использованием IL 1|3 в качестве иммуностимулятора для получения гипериммунных сывороток с высоким содержанием специфических антител.
Практическая значимость исследования.
Штаммы В. pertussis и В. parapertussis новых генотипных вариантов предложены в качестве тест-штаммов для мониторинга за бордетеллами и технологических целей.
Штамм В. pertussis 1.0.3 № 45 принят на депонирование в коллекцию ГИСК им. Л.А. Тарасевича в качестве тест-штамма для определения профиля штаммов В. pertussis методом ЭФПП (группа IVa), для секвенирования гена пертактина (тип 2) и гена S1-субъединицы коклюшного токсина (тип А). Штамму присвоен номер 272. Справка от 15.09.03 №01-33/3.
Штамм В. parapertussis № 34 принят на депонирование в ГИСК им. Л.А. Тарасевича в качестве тест-штамма для секвенирования гена пертактина В. parapertussis, штамму присвоен номер 271. Справка от 15.09.03 №01-33/2.
Штамм В. pertussis 1.0.3 № 35 был принят на депонирование в коллекцию ГИСК им. Л.А. Тарасевича как перспективный для получения гипериммунной антикоклюшной сыворотки, ему присвоен номер 273. Справка от 15.09.03 № 01-33/4.
Опыт оптимизации бактериологического исследования апробирован в ходе семинара «Эпидемиологический надзор за дифтерией и коклюшем в условиях вакцинопрофилактики», организованного Европейским региональным бюро ВОЗ 19-21.11.2003 г., г. Санкт-Петербург.
Изданы Методические рекомендации «Коклюш у привитых детей (клиническая и лабораторная диагностика)», утвержденные Комитетом по здравоохранению Администрации Санкт-Петербурга 18.09.2003.
Основные положения, выносимые на защиту:
Дополнительные факторы роста в питательных средах в сочетании с цефалексином и иммуноферментная тест-система существенно повышают эффективность лабораторной диагностики коклюша.
Популяция штаммов В. pertussis, циркулирующих в условиях вакцинопрофилактики, неоднородна по ЭФПП-профилям и структуре гена пертактина.
Определены различия между «дикими» и вакцинными штаммами. В. pertussis по ЭФПП-профилям, структуре генов пертактина и S1-субъединицы коклюшного токсина.
4. Штаммы генотипов IVa и IVJ3 преобладают в популяции В. pertussis,циркулирующей на территории изучения; показана их связь с заболеваниями у привитых.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и
10 Ленинградской области в 2001, 2002 гг.; Научной конференции Итало-Российского общества по инфекционным болезням «Проблема инфекции в клинической медицине» (г. Санкт-Петербург, 2002 г.); Третьей международной конференции, посвященной 80-летию института имени Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (г. Санкт-Петербург, 2003 г.); научных симпозиумах международной сети институтов Пастера (Париж, Франция, 1999 г.; Хошимин, Вьетнам, 2002 г.). Диссертация апробирована на заседании Ученого совета ФГУ «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Министерства здравоохранения Российской Федерации» 24.12.2003.
По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 4 статьи; аналитический обзор «Инфекционная заболеваемость в Северо-Западном Федеральном округе России. Совершенствование технологий эпидемиологического надзора и профилактики», г. Санкт-Петербург, 2001 г.; Методические рекомендации «Коклюш у привитых детей (клиническая и лабораторная диагностика)», г. Санкт-Петербург, 2003; 8 тезисов.
Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, 4 главы собственных исследований, заключение, выводы и список литературы. Список литературы содержит 151 источник, в том числе 17 - отечественных авторов и 134 - зарубежных. Работа иллюстрирована 26 таблицами, 11 рисунками.
Бактериологические исследования выполнены совместно с Н.Н. Зверякиной (ЦГСЭН в Выборгском районе Санкт-Петербурга), молекулярно-генетические исследования - совместно с N. Guiso, V. Саго,
С. Weber (Institut Pasteur, Paris, France), анализ эпидемиологических данных - совместно с В.Л. Семиотрочевым (Западный межрайонный ЦГСЭН в Санкт-Петербурге), анализ историй болезни - совместно с И.В. Бабаченко (Санкт-Петербургская педиатрическая медицинская академия).
Микробиологическая характеристика рода Bordetella
Возбудитель коклюша В. pertussis относится к роду Bordetella, включающему в себя также В. parapertussis, В. bronchiseptica, В. avium. В 1994-5 гг. появились публикации, в которых описывались новые виды бордетелл: В. holmesii, В. hinzii. В. pertussis вызывает заболевание у человека, В. bronchiseptica - главным образом, у домашних животных (у человека - в 0,1-0,5 % случаев), В. avium - у птиц. Ранее существовало представление о В. parapertussis как исключительно человеческом паразите, однако этот возбудитель был выделен у ягнят - здоровых и больных пневмонией [114]. В. holmesii (описано 15 штаммов) выделены из крови пациентов с синдромом иммунодефицита. В. hinzii — группа сходных с В. avium микроорганизмов, выделенных из респираторного тракта индюшек и цыплят, кроме того, 2 штамма были выделены из слюны и крови больного СПИДом [32, 134, 148].
Bordetella представляют собой мелкие (0,5-2,0 х 0,2-0,5 мкм) грамотрицательные коккобациллы. На плотных питательных средах образуют гладкие, влажные, выпуклые, ровные, блестящие колонии с жемчужным оттенком. Самые мелкие и наиболее длительно растущие колонии - у В. pertussis. Представители этого вида неподвижны, наименее активны ферментативно (вырабатывают оксидазу); их легко дифференцировать от других представителей рода Bordetella (табл. 1). В. parapertussis также неподвижна, вырабатывает ферменты тирозиназу и уреазу, но не образует оксидазу. Среди распространенных представителей бордетелл наиболее активна В. bronchiseptica: она подвижна, вырабатывает уреазу, оксидазу, утилизирует цитраты, переводит нитраты в нитриты. Кроме того, В. bronchiseptica, также как и В. parapertussis, менее требовательна в отношении питательных веществ, она растет на простом агаре, в то время как В. pertussis нуждается в сложных питательных средах. В. bronchiseptica и В. avium способны расти в фосфатно-солевом буфере, а также в пресной воде, которая теоретически может представлять собой фактор передачи [115].
К факторам патогенности В. pertussis относят, в первую очередь, коклюшный токсин (КТ). Это экзотоксин, протеин с Mm 117000 Да, состоящий из пяти структурных субъединиц (S1-S5), пронумерованных в порядке убывания их Mm и организованных в А-В структуру. Часть А (соответствует субъединице S1) обладает ферментативной активностью, катализирует АДФ-рибозилирование трансдуцина (белка мембраны клетки-мишени), который является частью системы, ингибирующей клеточную аденилатциклазу [18, 83]. Нарушение контроля функционирования аденилатциклазы приводит к накоплению цАМФ, что нарушает функцию клеток-мишеней. Участок В (состоит из субъединиц S2-S5) отвечает за присоединение токсина к рецепторам клеток-мишеней [133]. В организме хозяина КТ вызывает лимфоцитоз, сенсибилизацию к гистамину, повышает выработку инсулина, обладает высокой иммуногенностью. При определении иммунного ответа на различные антигены В. pertussis у пациентов с подтвержденным бактериологически диагнозом коклюша в парных сыворотках наиболее выраженной, особенно у детей до 1 года, наблюдается реакция на коклюшный токсин [50, 70, 101]. В экспериментах на мышах показана протективная роль токсина: после аэрозольного заражения у животных вырабатывались антитела класса G к коклюшному токсину (при минимальном уровне антител к другим антигенам В. pertussis), а после повторного заражения выздоровевших животных элиминация возбудителя происходила существенно быстрее, чем у мышей, иммунизированных бесклеточной вакциной, у которых на момент заражения преобладали антитела к гемагглютинину [121]. С коклюшным токсином связывают тяжесть заболевания и системные проявления. Однако в ряде работ указывается на присутствие практически всех признаков коклюша у больных паракоклюшем, при котором токсин не вырабатывается (отсутствие продукции токсина для исключения смешанной инфекции проверялось в эксперименте), единственным стабильным отличием паракоклюша от коклюшной инфекции является отсутствие лейкоцитоза [144].
Штаммы. Методы выделения и идентификации
За период 1998-2003 гг. изучено 194 штамма1, в том числе 115 штаммов В. pertussis и 10 штаммов В. parapertussis, выделенных в Санкт-Петербурге в указанный период. Также изучено 2 штамма В. pertussis и 3 штамма В. parapertussis, изолированных в России в 1960-1965 гг., 1 штамм В. pertussis, выделенный в 1989 г., а также 4 штамма, используемые при производстве отечественной вакцины АКДС (штаммы получены из коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича).
Референс-штамм В. pertussis № 18323 (эталонный штамм ВОЗ для контроля эффективности коклюшных вакцин) получен из коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича; референс-штаммы В. pertussis для электрофореза в пульсирующем поле получены из коллекции Unite des Bordetella (Centre National de Reference des Bordetelles), Institut Pasteur, Paris, France; эталонные штаммы В. pertussis № 39, 79, 143 для контроля качества питательных сред получены из коллекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича.
Выделение и первичная идентификация бордетелл из клинического материала проводилась в бактериологических лабораториях центров Госсанэпиднадзора, детской инфекционной больницы (ДИБ) № 3, детской городской больницы (ДГБ) № 5 и лаборатории бактериальных капельных инфекций НИИЭМ им. Пастера.
В качестве сред для выделения бордетелл использовали: казеиново-угольный агар (КУА) производства Научно-исследовательского института вакцин и сывороток (НИИВС), г. Санкт-Петербург; КУА производства научно-исследовательского технологического института антибиотиков и ферментов медицинского назначения (НИТИАФ), г. Санкт-Петербург; бордетелагар производства Государственного научного центра прикладной микробиологии, пос. Оболенск, Московская обл.
В качестве дополнительных факторов роста использовали сыворотку крупного рогатого скота и питательную среду 199 производства ООО «БиолоТ», г. Санкт-Петербург. В качестве ингибитора роста сопутствующей микрофлоры использовали пенициллин производства ЗАО «Брынцалов А», г. Москва, и Bordetella selective supplement (цефалексин), Oxoid, England.
Идентификацию В. pertussis и В. parapertussis с определением культурально-биохимических свойств проводили на основании общепринятых морфологических и биохимических тестов в соответствии с «Инструкцией по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше и паракоклюше» (МЗ СССР, 1984 г.).
Характеристика коклюшной инфекции на современном этапе
За сорокалетний период вакцинопрофилактики против коклюша заболеваемость существенно снизилась, тем не менее, массовая вакцинация не решила всех проблем, связанных с данной инфекцией. Следует отметить, что к 1999 г. показатель привитости детей в возрасте до 3 лет в Санкт-Петербурге составил 84,6 % против 35,7 % в 1992 г. Как следствие, снизилась заболеваемость, однако ее уровень в последнее десятилетие в 3-4 раза превышает средний показатель заболеваемости по РФ (рисЛ).
С целью установления возможных причин влияющих на активизацию эпидемического процесса коклюшной инфекции в Санкт-Петербурге, нами проведен многолетний анализ заболеваемости и обобщены данные микробиологических исследований в одном из районов Санкт-Петербурга с численностью населения 309641 человек, где периодические подъемы заболеваемости коклюшем совпадали с общим ее ростом в большинстве районов Санкт-Петербурга и на территории России. В период с 1986 по 2001 гг. отмечен рост заболеваемости коклюшем. За эти годы зарегистрировано 3 эпидемических подъема: в 1990-91 гг., 1993-94 гг. и 1999 г. с высокими показателями заболеваемости (96,6, 153,3 и 93,6 на 100 тыс. населения соответственно). За весь период наблюдения (16 лет) в течение 9 лет уровни заболеваемости были выше, а в течение семи лет - ниже, чем в среднем в Санкт-Петербурге (различия статистически значимы, р 0,05).
Продолжительность сезонной заболеваемости составила 8 месяцев: с июля по март следующего года. Наибольшее число больных приходилось на ноябрь и декабрь.
За 16-летний период наблюдения на территории района выделялись штаммы В. pertussis всех 3 известных сероваров: 1.2.3, 1.2.0, 1.0.3. Циклы циркуляции указанных сероваров равны четырем годам. В период 1998-2000 гг. у заболевших коклюшем детей чаще обнаруживали штаммы серовара 1.0.3 (в 57,3; 84,8; 85,4 % в 1998, 1999 и 2000 гг. соответственно), в остальных случаях - серовара 1.2.0; штаммы серовара 1.2.3 в указанный период не выделялись.
Повышение эффективности бактериологического метода диагностики коклюшной инфекции
«Золотым стандартом» диагностики коклюша был и остается бактериологический метод. В настоящее время показатель бактериологической подтверждаемости коклюша в ряде регионов России, в том числе в Санкт-Петербурге, не превышает 25 %. В значительной степени это связано с несвоевременным и неполным обследованием лиц с подозрением на коклюш, с нарушением правил забора и транспортировки материала, а также несовершенной рецептурой питательных сред. Целью данного исследования явилась оценка частоты высева В. pertussis в эксперименте при использовании различных питательных сред и повышение эффективности бактериологического метода диагностики коклюшной инфекции.
Для бактериологической диагностики коклюша используют казеиново-угольный агар (КУА) производства НИИВС, г. Санкт-Петербург - в дальнейшем обозначение КУА-1 и КУА производства НИТИАФ, г. Санкт-Петербург - в дальнейшем КУА-2. В последние годы предложена новая коммерческая среда бордетелагар производства ГМЦ прикладной микробиологии, пос. Оболенск, Московская обл. На первом этапе были получены исходные характеристики чувствительности трех указанных коммерческих питательных сред. Для этого готовили микробные взвеси трех эталонных штаммов В. pertussis (№ 39, 79, 143), содержащие 10 м.к./мл (по стандарту мутности ГИСК им. Л. А. Тарасевича). Из исходных взвесей готовили нисходящие десятикратные разведения, для посевов использовали концентрацию 104 м.к./мл. По 0,1 мл взвеси каждого штамма рассевали шпателем по поверхности чашек с плотными средами (по 6 чашек каждой среды на один штамм). Изучение колоний производили при визуальном осмотре и при микроскопии с увеличением 6Х. В соответствии с прилагаемыми инструкциями по применению сред, при данной концентрации микробной взвеси среды должны обеспечивать рост единичных колоний В. pertussis. Это также соответствует требованиям к качеству питательных сред, приведенным в Инструкции по бактериологическому и серологическому исследованиям при коклюше и паракоклюше (МЗ СССР, 1984 г.). Через 72 часа колонии В. pertussis на среде КУА-2 были видны только при микроскопии, в то время как на средах КУА-1 и бордетелагаре они определялись при визуальном осмотре (d=0,5 мм). Через 120 часов колонии на вышеуказанных средах достигали диаметра 0,5 мм, 1,0-1,2 мм и 1,0-1,5 мм, соответственно. Количество выросших на указанных средах колоний достоверно не отличалось. На всех трех средах колонии имели характерный вид: выпуклые, гладкие, блестящие, с ровными краями, серого цвета; и характерную маслянистую консистенцию. Однако только колонии, выросшие на бордетелагаре, имели характерный жемчужный оттенок, а при просмотре в стереоскопическом микроскопе от центра колоний отходил узкий луч света («хвостик»), что также является классическим признаком, характеризующим колонии В. pertussis. Колонии, выросшие на КУА-1 и 2, имели беловатый или желтоватый оттенок, и «хвостика» при просмотре в стереоскопическом микроскопе не отмечали. Таким образом, хотя качество всех трех сред отвечало требованиям, приведенным в инструкции, ростовые свойства бордетелагара оценивали выше.
Молекулярно-эпидемиологичес1сая характеристика штаммов в. Pertussis
До настоящих исследований в России молекулярно-генетическое изучение щтаммов В. pertussis и В. parapertussis не проводилось. Первая информация о штаммах, выделенных в Санкт-Петербурге в 1998-99 гг., была получена нами совместно с финскими специалистами на базе лаборатории Университета г. Турку, Национального института здравоохранения Финляндии (KTL). Было проведено секвенирование гена пертактина 10 штаммов. Обнаружено, что в циркулирующих штаммах представлены 3 основных типа гена ргп (1, 2 и 3), однако, в отличие от штаммов, выделенных в тот же период в Финляндии, у Санкт-петербургских чаще (50 % исследованных штаммов) встречался ргп 1 типа. Эти данные определили необходимость дальнейших работ в этом направлении, которые были проведены совместно с французскими учеными на базе лаборатории бордетелл Парижского института Пастера (руководитель - Nicole Guiso). В данном разделе нами представлены результаты изучения 74 штаммов В. pertussis (табл. 3): 67 из них выделены на территории Санкт-Петербурга в 1998-2000 гг., один штамм выделен в СССР в 1989 г., два штамма выделены в 60-е годы XX века и четыре штамма В. pertussis используются при производстве вакцины АКДС.
Из современных штаммов В. pertussis (табл. 19) 73 % принадлежали к серовару 1.0.3, остальные 27 % - к серовару 1.2.0. Штамм № 12, выделенный в 1989 году, относится к серовару 1.0.3, штаммы №№ 973 и 400, выделенные в 60-е годы - к серовару 1.2.3, а из четырех вакцинных штаммов два (№ 475 и № 39) относятся к серовару 1.2.3, № 305 - 1.2.0. и № 267 - 1.0.3. Все штаммы обладали типичными для своего вида культурально-морфологическими свойствами и биохимической активностью: при посеве на бордетелагар через 72 часа образовывали мелкие (1 мм) сероватые гладкие, выпуклые, влажные, маслянистые колонии, при окраске мазков по Граму выявлялись мелкие грамотрицательные коккобациллы.
