Содержание к диссертации
Список сокращений 6
Введение 7
ГЛАВА 1. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны и кишечни
ка у больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с 12
постхолецистэктомическим синдромом. {Обзор литературы)
1.1. Микрофлора пищевода, желудка и кишечника у здоровых лю-
) і 12
дей.
Микрофлора пищевода 12
Микрофлора желудка 12
Микрофлора двенадцатиперстной кишки 16
Микрофлора кишечника 16
Дисбиоз как токсико-инфекционный процесс 19 1J2. Микрофлора ЭГДЗ больных с патологией ЖВП 23
Микрофлора пищевода, желудка и двенадцатиперстной 23 кишки у больных хроническим холециститом
Особенности микрофлоры пищевода, желудка и двена- 29 дцатиперстной кишки у больных ЖКБ
Особенности микрофлоры пищевода, желудка и двена- 33 дцатиперстной кишки у больных ПХЭС
Микроэкология кишечника при хроническом холецисти- 34 те, ЖКБ и после холецистэктомии
1.3. Пути коррекции дисбиотических нарушений 35
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 42
Характеристика исследуемого материала 42
Выделение и идентификация микроорганизмов 43
Методы идентификации выделенных микроорганизмов 45
Методики определения факторов патогенности микроорганизмов 53
2.4.1. Методика определения лецитиназной и гемолитической 53
активности
Методика определения оксидоредуктазной активности 53
Методика определения уреазной активности микроорга- 54 низмов
Методика определения микробных протеаз 54
Методика определения нуклеазной активности микроорга- 55 низмов
2.4.6. Определение цитотоксичности микроорганизмов 56
Определение антагонистической способности микроорганизмов 56
Определение антилизоцимной активности микроорганизмов 57
Методика определения адгезивной способности микроорганизмов 58
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам 59
Методика определения способности микроорганизмов к образова- 61 нию биопленок
2.10. Методика определения чувствительности микроорганизмов к со- 62
ляной кислоте и желчи
Определение чувствительности к соляной кислоте 62
Определение чувствительности к желчи 62
Методика определения аутоагрегации микроорганизмов. 63
Методика определения поверхностной гидрофобности микроор- 63 ганизмов.
2. 13. Методика определения способности микроорганизмов к коагре- 63
гации.
2.14. Методика бактериологического исследования кала на дисбакте- 64
риоз кишечника
2.15. Статистическая обработка материала 67
ГЛАВА 3. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны и кишечни- 68
ка здоровых и больных людей
3.1. Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны здоровых лю- 68
дей
3.1.1. Микробиоценозы пищевода здоровых людей 6 8
Микробиоценозы желудка здоровых людей 69
Микробиоценозы 12-перстной кишки здоровых людей 71
3.2. Микробный пейзаж слизистой оболочки пищевода у больных 74
хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и перенесших
холецистэктомии
3.3. Микрофлора слизистой оболочки желудка при хроническом холе- 78
цистите, желчнокаменной болезни и после холецистэктомии
3.4. Микробиоценозы слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки 83
у больных с хроническим холециститом, ЖКБ и ПХЭС
3.5. Микрофлора кишечника у больных XX, ЖКБ и ПХЭС 89
ГЛАВА 4. Факторы патогенности микроорганизмов эзофагогастродуоде- 93
нальной зоны у здоровых и больных хроническим холециститом, ЖКБ и
перенесших холецистэктомию
4.1. Спектр ферментативной активности микрофлоры слизистой обо- 93
лочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у здоровых
Спектр ферментативной активности микрофлоры слизистой обо- 96 лочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у больных хроническим холециститом, ЖКБ и ПХЭС
Взаимоотношения микроорганизмов ЭГДЗ между собой 103
Адгезивная способность микроорганизмов 103
Способность к формированию биопленок 104
Чувствительность микроорганизмов к желчи и соляной кислоте 107
Аутоагрегация микроорганизмов 112
Поверхностная гидрофобность микроорганизмов 112
4.9. Коагрегация микроорганизмов 113
ГЛАВА 5. Чувствительность микроорганизмов, выделенных из СО эзофа- 118
гогастродуоденальной зоны больных XX, ЖКБ и ПХЭС
Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам 118
Антимикробная активность хитозана 122
5.3. Чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к 125
пробиотическим штаммам лактобактерий
Обсуждение результатов 129
Выводы 148
Практические рекомендации 150
Список литературы 151
СЛИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛА — антилизоцимная активность
ДПК - двенадцатиперстная кишка
ЖВП - желчевыводящие пути
ЖКБ - желчнокаменная болезнь
ЖКТ — желудочно-кишечный тракт
ПХЭС - постхолецистэктомический синдром
СО - слизистая оболочка
СОЖ - слизистая оболочка желудка
СОП - слизистая оболочка пищевода
УПМ - условно-патогенные микроорганизмы
XX - хронический холецистит
ХЭ - холецистэктомия
ЭГДЗ - эзофагогастродуоденальная зона
Введение к работе
Актуальность проблемы
Желчнокаменная болезнь (ЖКБ) и ее начальная стадия хронический холецистит (XX) в настоящее время относятся к числу наиболее распространенных заболеваний, которые считают «болезнью века» или «болезнью цивилизации». По данным различных авторов, желчнокаменная болезнь выявляется у 15-36% людей старше 40 лет и имеет неуклонную тенденцию к росту (Григорьев П.Я., 2002; Bellows C.F. et al., 2005; Ильченко А.А., 2006). В нашей стране частота выявления ЖКБ в зависимости от региона колеблется от 5 до 20%. По распространенности она занимает 3-е место после сердечнососудистых заболеваний и сахарного диабета (Дадвани С.А., 2000; Лейшнер У., 2001). По данным Департамента здравоохранения Москвы распространенность ЖКБ составляет 3000, а число холецистэктомии 7000 в год на 100000 населения (Ильченко А. А., 2002; Лазебник Л.Б., 2003). В России ежегодно выполняемые холецистэктомии занимают второе место среди всех операций, проводимых населению, уступая лишь числу аппендэктомий. ЖКБ нередко приводит к временной, а может быть даже к стойкой утрате трудоспособности, в связи с чем эта проблема приобрела важное социально-экономическое значение (Ильченко А.А., 2006).
Холелитогенез представляет собой длительный многостадийный процесс, в котором периоду камнеобразования предшествуют изменения физико-химического состава желчи, происходящие под воздействием различных факторов (Binette J.P., 2000; Schirmer B.D., 2005). Важную роль в развитии заболевания и в образовании конкрементов играют микроорганизмы (Зубарева Н.А., 1999; Черкасов В.А., 2003; Ljungh А., 2002). Многочисленными исследованиями установлено, что среди микроорганизмов, выделяемых из желчного пузыря больных холециститом и ЖКБ, ведущее место занимают условно-патогенные энтеробактерии (Tejero А., 1990; Ohdan Н., 1993; Petakovic G., 2002; Нао W.L., 2004; Mukaiya М., 2005). В литературе имеются
данные о роли Helicobacter pylori в развитии данной патологии (Blaser М. J., 1998; Silva СР., 2003; Fallone С. А., 2003). Есть сведения о проведенных микробиологических и гистологических исследованиях стенки желчного пузыря у больных ЖКБ (Кудря Е.В., 2002).
Известно, что в литогенезе, наряду с метаболическими нарушениями в гепатоцитах, важное место занимают внепеченочные факторы и, в первую очередь, функциональные и структурные изменения кишечника. Изменения в билиарной системе, в свою очередь, усугубляют и поддерживают кишечную дисфункцию. По данным ряда авторов условно-патогенные энтеробактерии колонизируют желчевыводящие пути вследствие транслокации из толстого кишечника на фоне дисбиотических нарушений (Валышев А.В.,1997; Sartor R.B., 1998; Van Егресшп K.J., 2003; Скворцова Т.Э., 2007). В.М. Бондаренко (2003) считает широкое распространение дисбиозов одним из важнейших факторов, определяющих наблюдаемое в настоящее время увеличение частоты и тяжести острых и хронических заболеваний, в частности пищеварительного тракта.
Однако при дуоденогастральном рефлюксе, наличие которого отмечается у 73% больных с патологией желчного пузыря, происходит заброс желчи в желудок и даже в пищевод, что может влиять на состав их микрофлоры (Бабак О.Я., 2000). Достоверных сведений о составе и количестве микроорганизмов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) у больных XX, ЖКБ и перенесших холецистэктомию по поводу ЖКБ в литературе не найдено, и в связи с этим возникает необходимость проведения дальнейшего детального изучения состояния мукозной микрофлоры верхних отделов ЖКТ при указанной патологии.
Изучение микробиоценозов желудочно-кишечного тракта при данной патологии способствует познанию этиопатогенеза и разработке новых терапевтических схем лечения, т.к. на фоне широкого применения антибиотиков возникает проблема резистентности микрофлоры к антибактериальным препаратам, что осложняет дальнейшую терапию. Не выяснена причастность
H.pylori и ассоциаций микроорганизмов мукозной микрофлоры в развитии дисбиотических нарушений ЖКТ при хроническом холецистите, желчнокаменной болезни и после холецистэктомии.
Отсутствуют данные о признаках, ассоциируемых с патогенностью и персистенцией условно-патогенных микроорганизмов, а также сведения об их антибиотикочувствительности. В связи с этим представляет интерес структура микробного пейзажа и необходимость коррекции дисбиотических расстройств у этой категории пациентов, что определило цель и задачи нашего исследования.
Цель исследования:
На основе комплексного многомерного подхода изучить характер микробиоценозов слизистой оболочки эзофагогастродуоденальной зоны у здоровых и у больных с хроническим бескаменным холециститом, желчнокаменной болезнью, а также перенесших холецистэктомию, выявить факторы патогенносте и персистенции выделенных микроорганизмов и определить чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам и лактосодержащим пробиотикам.
Задачи исследования:
Выявить качественный и количественный состав мукозной микрофлоры пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки у здоровых людей, больных хроническим холециститом, желчнокаменной болезнью и с по-стхолецистэктомическим синдромом.
Оценить выраженность дисбиотических нарушений верхних отделов ЖКТ при исследуемой патологии и сравнить ее со степенью дисбакте-риоза кишечника.
Установить у выделенных микроорганизмов наличие признаков патогенности и персистенции.
Оценить способность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от больных, к формированию биопленок.
5. Определить чувствительность выделенной условно-патогенной микрофлоры к антибактериальным препаратам и пробиотическим штаммам лактобацилл для разработки критериев возможного применения в схемах профилактики и лечения у больных с патологией желчевыводящих путей.
Научная новизна исследования
Впервые при изучении микробиоценозов пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки и кишечника у больных с хроническим некалькулез-ным холециститом и желчнокаменной болезнью, а также с постхолецистэк-томическим синдромом выявлено увеличении спектра УПМ и их количества.
Установлено, что условно-патогенные бактерии, выделенные из слизистой оболочки верхних отделов ЖКТ у больных, характеризуются наличием цитотоксической, протеолитической, гемолитической, лецитовителазной, РНК-азной, ДНК-азной и антилизоцимной активностью, что свидетельствует об их потенциальном участии в поддержании воспалительного процесса.
Частота встречаемости и степень выраженности дисбиотических нарушений мукозной микрофлоры пищевода, желудка и ДПК у больных людей сопровождается дисбактериозом кишечника разной степени выраженности.
Впервые изучена чувствительность всей выделенной из эзофагогаст-родуоденальной зоны условно-патогенной микрофлоры, доминирующей в этиологии хронического холецистита и ЖКБ, к антибактериальным препаратам, хитозану и к пробиотическим штаммам лактобацилл.
Практическая значимость исследования
Полученные данные о чувствительности выделенной из пищевода, желудка и 12-перстной кишки микрофлоры к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективного антимикробного средства для антимикробной терапии.
Показана перспективность использования хитозана в комплексной терапии XX, ЖКБ и ПХЭС.
Выявлено, что проводимая при данной патологии антимикробная терапия усугубляет дисбаланс микробиоценоза верхнего отдела пищевари-
11 тельного тракта, что требует проведения дополнительной коррекции нарушенной нормальной микрофлоры.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены: на V конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 19-22 мая 2008 г.), где была получена золотая медаль РАМН за лучшую научную работу, на совместном заседании Тверских региональных обществ микробиологов, эпидемиологов, паразитологов с инфекционистами и иммунологами 11 февраля 2009 года, на расширенном заседании кафедр факультетской терапии, внутренних болезней педиатрического факультета, фундаментальной и клинической фармакологии, инфекционных болезней, гистологии с эмбриологией, биологии 1 апреля 2009 года.
Автором самостоятельно проведены все бактериологические исследования. Биопсийный материал был предоставлен ассистентом кафедры факультетской терапии ТГМА к.м.н. С.Н. Базловым, врачом-эндоскопистом г.б. №4 г.Твери А.П. Барашковым.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. У больных хроническим холециститом, желчнокаменной болез
нью и с постхолецистэктомическим синдромом мукозная микрофлора пище
вода, желудка и ДПК изменяется как по спектру, так и по количеству и фак
торам патогенносте, что соответствует определению дисбактериоз.
Условно-патогенная микрофлора, выделенная от больных XX, ЖКБ и ПХЭС, обладающая факторами патогенносте, проявляет высокую поверхностную гидрофобность, высокую степень аутоагрегации, коагрегации с грам+, грам- микроорганизмами и дрожжеподобными грибами и выраженную способность к образованию биопленок.
Микроорганизмы, выделенные из слизистой оболочки ЭГДЗ, проявляют разную степень чувствительности к лактосодержащим пробиотикам и высокую чувтвительность к пищевому хотозану и к антибактериальным пре-
паратам: ампициллин, гентамицин, кларитромицин, офлоксацин, норфлокса-цин, ципрофлоксацин и оксациллин.
Объем и структура диссертации
Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов, методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Работа изложена на 177 стр. машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками, 16 таблицами. Библиографический указатель включает 246 наименований из них 126 отечественных и 120 зарубежных источников литературы.
Похожие диссертации на Микробиоценозы эзофагогастродуоденальной зоны у больных с патологией желчевыводящих путей
![Экспериментально-клиническое обоснование применения коолагеназы КК при травмах глаз и патологии слезоотводящих путей [Электронный ресурс]](/i/i/4247/203404.png "Экспериментально-клиническое обоснование применения коолагеназы КК при травмах глаз и патологии слезоотводящих путей [Электронный ресурс] Мунирова Лариса Нарбутовна")
