Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Антибиотикорезистентность коснулась всех видов микроорганизмов и является основной причиной снижения эффективности антибиотикотерапии.
С появлением в медицинской практике антибиотиков и последующим формированием устойчивых к ним микроорганизмов возникала необходимость оценки антибиотикочувствительности возбудителей как ориентира для выбора препаратов [Лебедева М.Н., 1960, Навашин С.М., 1982].
Наиболее значимо проведение определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в отношении группы микробов, среди которых выделяется большое число антибиотикоустойчивых штаммов [Богданов М.Б., 2004]. Широкое их распространение, в свою очередь, сопровождается снижением эффективности антимикробной терапии.
В клинической практике наиболее часто врач вынужден назначать антибактериальный препарат эмпирически, до уточнения этиологии заболевания. Однако данные литературы указывают на значительные трудности при эмпирическом выборе адекватной антибактериальной терапии при инфекциях, вызванных, например, полирезистентными штаммами Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli или Klebsiella pneumoniae [Сидоренко С.В., 1998,Стецюк О.У., 2000].
Существующие современные методы определения чувствительности, несмотря на свои несомненные достоинства, не позволяют быстро и качественно проводить исследования на антибиотикочувствительность микроорганизмов в силу некоторых недостатков, основным из которых является, в первых, их длительность в среднем от 3 до 10 дней, что не позволяет своевременно начать и проводить адекватную индивидуальную специфическую терапию.
Во вторых, - невозможность оценить роль многих не культивируемых микроорганизмов в этиологии заболевания [Жемчугов В.Е., 2004], а так же тех, которые погибают на этапах доставки материала в лабораторию.
В третьих, трудоемкость и малая пропускная способность, громоздкость и/или дороговизна существующих экспресс методов.
В связи с этим врачи часто отказываются от проведения бактериологического исследования или начинают лечение антибиотиками до получения результатов чувствительности микроорганизмов к ним, что так же приводит к неудовлетворительным результатам лечения и развитию антибиотикорезистентности.
Для решения указанных проблем коллективом авторов кафедры микробиологии и госпитальной хирургической стоматологии разработан клинический оптический экспресс-метод лазерной флюоресцентной диагностики (ЛФД), позволяющий в экспресс режиме выявлять заболевания и процессы микробной природы на основе явления флюоресценции эндо- и экзогенных порфиринов бактерий. Разрабатываемые в настоящее время оптические методы диагностики отличаются высокой точностью, информативностью, имеют легко интерпретируемые результаты, позволяют их получать в короткие сроки. Среди таких методов следует назвать лазерную флюоресцентную диагностику.
Способность различных микроорганизмов флюоресцировать с различной интенсивностью при воздействии на них лазерного излучения – в зависимости от особенностей активности физиологических процессов – мы используем для оценки антибиотикочувствительности. Известно, что интенсивность флюоресценции зависит от ряда факторов, таких как длина волны возбуждающего излучения, квантовые и энергетические выходы, так же и от концентрации флюоресцирующего вещества, поэтому флюоресценция может быть применена для количественного анализа (Левшин Л.Б., 1994).
На основе регистрации динамики флюоресцентных показателей представляется возможным разработать метод определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Ранее в исследованиях Александрова М.Т., Пашкова Е.П., Морозовой О.А., Нестеровой М.В. был экспериментально обоснован экспресс-метод лазерной флюоресценции, позволяющий проводить индикацию микроорганизмов и диагностику патологических процессов микробной природы; были выявлены спектрально-энергетические характеристики 50 видов облигатно-анаэробных, факультативно-анаэробных и аэробных микроорганизмов и их ассоциаций.
Исходя из изложенного, мы поставили перед собой задачу обосновать возможность применения метода лазерной флюоресценции для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
Целью исследования является экспериментально-теоретическое и клинико-бактериологическое обоснование возможности использования метода лазерной флюоресценции для ускоренного определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.
В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:
-
экспериментально обосновать применение лазерной флюоресценции для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам;
-
провести сравнительную оценку метода лазерной флюоресценции и традиционных методов определения чувствительности микробов к антимикробным препаратам;
-
разработать алгоритм определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам методом лазерной флюоресценции;
-
определить возможность и перспективы применения метода лазерной флюоресценции для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам в медицине;
Положения выносимые на защиту:
-
На основании экспериментальных, микробиологических и спектрофотометрических исследований обосновано применение метода лазерной флюоресценции для ускоренного определения чувствительности микробов к антимикробным препаратам.
-
Метод лазерной флюоресцентной диагностики позволяет объективно проводить скрининг чувствительности различных бактерий и грибов рода Candida к антимикробным препаратам.
Научная новизна
Впервые обоснован экспресс-метод лазерной флюоресценции для ускоренного определения чувствительности микроорганизмов и их ассоциаций к антимикробным препаратам.
Впервые на основании выявленных закономерностей флюоресценции микроорганизмов разработаны критерии оценки подавления их роста антимикробными препаратами при помощи лазерной флюоресценции.
Практическая ценность работы
Полученные результаты работы привели к разработке ускоренного способа определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, что в свою очередь позволит проводить современные исследования для ранней диагностики и рациональной антибиотикотерапии патологических процессов микробной этиологии.
Использование разработанного метода в практическом здравоохранении позволит так же проводить микробиологический мониторинг устойчивости возбудителей в рамках системы эпидемиологического надзора и предупреждения распространения устойчивых форм микроорганизмов.
Основные положения работы доложены на:
1. 4-ой международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке», 23-25 мая 2003 года;
2. научной конференции отделения профилактической медицины РАМН «Современные проблемы химиопрофилактики и химиотерапии инфекций», г. Смоленск, 30 января 2004 год;
3. 6-ой международной конференции «Экология человека и природа», Москва-Плес, 5-11 июля 2004 года;
4. VII международном научном конгрессе «Современный олимпийский спорт и спорт для всех». Москва, 2004;
5. 2-ом съезде общества биотехнологов России, Москва, 13-15 октября 2004г;
6. I международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», Москва, 26-28 октября 2004;
7. апробация диссертации состоялась на заседании научно-методической конференции кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ММА им. И.М. Сеченова 14 июня 2006г. (протокол № 29).
По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ.
Результаты исследования внедрены в лабораторную и клиническую практику, учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии и кафедры госпитальной хирургической стоматологии ММА им. И.М.Сеченова.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ:
