Содержание к диссертации
Введение
I. Обзор литературы 7
1.1. Общая характеристика биологических свойств стрептококков 6
1.2. Классификация стрептококков и методы определения их серогрупповой принадлежности 11
1.3. Антигенная структура и факторы патогенности стрептококков 15
1.4. Этиологическое значение стрептококков в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных 22
II. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы.. 28
2.2. Результаты изучения частоты выделения стрептококков при различных патологических состояниях крупного рогатого скота 34
2.3. Сравнительная эффективность методов определения серо- групповой принадлежности стрептококков 40
2.4. Результаты изучения серогрупповой принадлежности стрептококков, выделенных от крупного рогатого скота 43
2.5. Изучение биохимических и культуральных свойств стрептококков 48
2.5.1. Результаты изучения патогенных свойств стрептококков на лабораторных животных 56
2.6. Результаты изучения свойств стрептококков, выделенных из воздуха помещений в скотоводческих хозяйствах КБР 60
2.7. Изучение патогенно-вирулентных свойств стрептококков... 65
3
2.7.1. Изучение патогенности стрептококков на телятах и коровах. 68 2.8. Результаты изучения антигенных и иммуногенных свойств
штаммов стрептококков в лабораторных условиях 71
2.8. Результаты производственного испытания экспериментальной
ПЭГ-вакцины против стрептококков 74
III. Обсуждение результатов собственных исследований 80
IV. Выводы 93
V. Практические предложения 95
VI. Список использованной литературы 96
VII. Приложения к диссертационной работе 112
- Общая характеристика биологических свойств стрептококков
- Этиологическое значение стрептококков в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных
- Результаты изучения частоты выделения стрептококков при различных патологических состояниях крупного рогатого скота
- Результаты изучения патогенных свойств стрептококков на лабораторных животных
Введение к работе
Актуальность. Для успешного развития животноводства необходимо предотвратить появление и распространение среди животных инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб отрасли. В последнее время в скотоводстве все большее распространение получают так называемые факторные инфекции, в этиологическом секторе которых, как правило, играют основную роль условно-патогенные микроорганизмы, к числу которых относят стрептококков. Убиквитарность стрептококков, широкое распространение в природе, наличие нескольких нозологических единиц, обусловленных ими, а также довольно частое обнаружение этих микроорганизмов при различных патологических состояниях крупного рогатого скота, требует всемерного изучения свойств, а также эпизоотологической и этиологической значимости различных видов стрептококков, разработки специфических средств и методов профилактики заболеваний, обусловленных ими. До сегодняшнего дня в ветеринарных лабораториях нет четкой дифференциации патогенных и непатогенных стрептококков, что препятствует определению их этиологического значения и установлению взаимосвязи между ними.
Анализ литературных источников по этой проблеме показывает несомненную роль стрептококков при маститах коров (Падегимас Т.И., Будкус A.B., 1970; Брагина Э.П., 1972 и др.), смешанных респираторных инфекций (Буй Тхань Тху, 1989; Мешев Э.М., 1993 и др.), энтерококковой инфекции телят (Панин А.Н., 1992), эндометритах коров (Чепуров К.П., Черкасова A.B., 1963 и др.). Тем не менее серогрупповая и видовая принадлежность возбудителей этих заболеваний все еще недостаточно изучены, что препятствует разработке точных методов диагностики, а также созданию эффективных специфических средств профилактики и лечения.
Целью данной работы являлось изучение эпизоотологического и этиологического значения стрептококков различных видов и серогрупп в инфекционной патологии молодняка и взрослого крупного рогатого скота.
В соответствии с этим перед нами были поставлены следующие задачи: изучить частоту выделения стрептококков при различных патологических состояниях крупного рогатого скота; изучить культуральные, биохимические свойства и серогрупповую принадлежность выделенных культур стрептококков; изучить патогенно-вирулентные свойства культур стрептококков, выделенных из разных органов крупного рогатого скота; изучить антигенные и иммуногенные свойства штаммов стрептококков в лабораторных и производственных условиях; испытать экспериментальную ПЭГ (полиэтиленгликоль) - вакцину против стрептококков в производственных условиях.
Научная новизна. Впервые в условиях Кабардино-Балкарской республики изучен видовой состав стрептококков, выделяемых от молодняка и взрослого крупного рогатого скота. Установлена этиологическая взаимосвязь между возбудителями стрептококкозов телят, маститов и эндометритов у коров. В сравнительном аспекте изучена специфичность и чувствительность реакции латексагглютинации (РЛА) для определения серогрупповой принадлежности стрептококков изолируемых от различных видов животных.
Теоретически обоснована и практически доказана необходмость включения антигенов стрептококков серогрупп В, С и Д в состав ассоциированных вакцин, создаваемых с целью профилактики смешанных инфекций животных. Испытана поливалентная ПЭГ-вакцина, включающая антигены стрептококков серологических групп В, С и Д.
Практическая ценность работы.
Разработана схема приготовления антигенов стрептококков серологических групп В, С и Д для гипериммунизации волов-продуцентов.
Испытана поливалентная ПЭГ-вакцина против стрептококковых инфекций крупного рогатого скота.
Подобраны штаммы стрептококков серогрупп В, С и Д для включения их в состав поливалентных вакцин.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на научно-практической конференции КБГСХА в 2000 году, а также на семинаре главных ветеринарных врачей районов КБР в 2001 году.
По результатам исследований опубликовано в печати 5 статей.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов собственных исследований, выводов, сведений об использовании полученных научных выводов, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 181 источников.
Положения, выносимые на защиту: частота выделения стрептококков из патологического материала от молодняка и взрослого крупного рогатого скота; серогрупповая и видовая принадлежность стрептококков, выделенных от крупного рогатого скота при различных патологических состояниях; патогенно-вирулентные свойства стрептококков, изолированных от крупного рогатого скота; результаты испытания вакцин, включающих антигены стрептококков серологических групп В, С и Д.
Общая характеристика биологических свойств стрептококков
НеппсИзоп (1975), НагсНеу (1985) отмечали у некоторых видов стрептококков фимбрии и три морфологических типа дополнительных нитевидных образований. Такие образования обнаруживаются и у 81г.руоепез (Р1зЬеШ, 1991). По данным ОгапсЫ (1985) у некоторых видов сапрофитных энтерококков обнаруживаются 1-5 жгутиков.
Состав клеточной стенки стрептококков характерен для грамположительных бактерий и представляет собой пентидогликан, к которому присоединяются различные углеводы, тейхоевая кислота и поверхностные протеиновые антигены (НапсИеу, 1972).
Клеточная стенка стрептококков всегда содержит глюкозамин и муреиновую кислоту. Рост стрептококков на плотной среде усиливается при добавлении крови, сыворотки или глюкозы. Колонии на кровяном агаре обычно небольшие (0,5-1,0 мм в диаметре) через 24 часа при 37С. При более длительном культивировании их величина не увеличивается.
Большинство видов стрептококков пигмента не образует, за исключением 81х а1ас11ае и некоторых энтерококков, которые могут проявлять желтое, оранжевое и красное окрашивание колоний. Рост в жидкой питательной среде быстро увеличивается при добавлении глюкозы, но резко снижается при уменьшении рН. В таких случаях хороший результат дает добавление в среду буферных систем (Todd-Hewitt, 1932). Рост на бульоне не отличается сильным разнообразием. Некоторые штаммы дают пристеночный зернистый рост без помутнения бульона - это чаще характерно для длинных цепочек. Другие штаммы имеют тенденцию к проявлению более диффузного роста. По мнению некоторых исследователей при продолжительном культивировании проявление роста зависит от разведения и ограниченности питания.
На кровяном агаре (3-гемолиз характеризуется узкой зоной просветления вокруг колонии, площадь которой зависит от особенностей штамма, а- гемолиз характеризуется проявлением вокруг колоний зеленоватой зоны без выраженных границ. Оба типа гемолиза зависят от состава основной среды, вида и концентрации крови. В США для изучения гемолитических свойств используют 5% кровяной агар с добавлением эритроцитов овец, в Великобритании - 5% эритроцитов лошади. В большинстве работ советских и российских исследователей, касающихся изучения гемолитических свойств стрептококков, используется кровяной агар с добавлением 5% эритроцитов барана (Гидельская, Л.М., 1951; Карташов В.М., 1970; Лямперт И.М.,1976; Вашакидзе М.Р., 1990; .МешевЭ.М., 1993 и др.).
Все стрептококки ферментируют углеводы с образованием молочной кислоты. Некоторые авторы (Frederichson, Buzze et.al,1997 г. и др.) отмечают, что при ферментации углеводов стрептококками может образоваться, помимо молочной, уксусная и муравьиная кислоты,, а также этиловый спирт и углекислый газ (С02). Стрептококки не синтезируют гем-небелковую часть гемоглобина и являются каталаза-отрицательными. Однако есть сведения (Wlittenbery, 1979), что некоторые представители Str.faecalis способны продуцировать каталазу или проявлять псевдокаталазную активность при росте в аэробных условиях в присутствии гемина (Weld J.T. 1985; Vilcek J. et.al., 1987; Xido-Dinghau, 1991).
Сложные питательные потребности стрептококков главным образом включают: аминокислоты, пептиды, пурины, пиримидины и витамины. Для оптимального роста в жидкой среде добавляют ферментируемые углеводы. По данным Wolin и др.(1969 г.), многие штаммы способны использовать соли аммония, как источник азота.
Температурный режим роста стрептококков весьма вариабелен. Пиаогенные стрептококки растут при температуре 20-40 С (оптимальная 37 С). Большинство стрептококков группы Д (энтерококки) могут расти при температуре 45С, а молочные стрептококки и Str.uberis растут также и при температуре 10 С. Энтерококки могут выдерживать также высокие (6,5%) концентрации NaCl и расти при рН 9,6 (Smith, 1993; Shotmuller H., 1993).
Некоторые стрептококки, включая большую часть стрептококков серогруппы А и некоторые штаммы S.agalactiae и S.mutans, растут в агаре с добавлением 40% желчи. (Э.М.Мешев,1993; Seelman M., 1954; Mc.Kereher, 1978; Hardie, 1985).
В работах многих авторов описываются активно вирулентные и умеренные фаги, способные продуцировать фаго-ассоциированный лизин, который действует на клеточные стенки стрептококков серогруппы А. Метод фаготипирования был описан и для стрептококков группы В (S.agalactiae) (Krause P.M., 1963; 1972; Stringer M., 1990 г.).
Многие стрептококки продуцируют бактериоцины, которые тормозят рост широкого спектра грамположительных бактерий (Bannister, 1980).
Большинство стрептококков чувствительны к широкому кругу антимикробных химиотерапевтических средств, включая пенициллин. Исключением из этого правила являются энтерококки, будучи сравнительно резистентными к бензилпенициллину, но сочетание пенициллинов с амино- гликозидами является эффективным при инфекциях, обусловленных и этими стрептококками. Анализ литературных данных позволяет считать, что в современной ветеринарной и медицинской практике отмечается тенденция увеличения антибиотикоустойчивых стрептококков, обусловленная повсеместным использованием этих препаратов. Многие антибиотико- устойчивые стрептококки можно выделять от животных в течение многих недель после прекращения применения антибиотика (Suckhotiratann и др.).
Экология стрептококков весьма и весьма обширна. Естественными нишами для них являются слизистые оболочки респираторного, пищеварительного и мочеполового тракта, а также кожа животных, птиц и человека. Они находятся также в молоке и молочных продуктах, в некоторых кормах, почве, воде (Munclt, 1982). Патогенные виды S.pyoqenes и S.agalactiae могут являться частью коменсальной флоры у бессимптомных носителей (Андреев Е.В., 1979; Ляшенко Ю.И., 1982; Апатенко В.М., 1990; Максимов Н.А, 1990; Facklom М., Wilkinson, 1980 и др.).
Этиологическое значение стрептококков в инфекционной патологии сельскохозяйственных животных
Средний слой клеточной стенки стрептококков состоит из группо- специфического полисахарида, а внутренний слой содержит мукопептид, придающий регидность клеточной стенке. Цитоплазма стрептококков и цитоплазматическая мембрана содержат антигенные субстанции не обладающие протективными свойствами (Беляков A.B. и др.,1978; Lancefield R.,1943).
Fishetty et.al.(1989) считают, что стрептококки в процессе инфекции могут претерпевать мутации. В результате ошибок в репликации ДНК возникают новые сочетания аминокислот в концевой части М-белка и других, способных изменяться поверхностных антигенов клетки. Такая "антигенная дезориентация", по мнению авторов, является одним из факторов патогенности стрептококковой клетки, позволяющей "ускользнуть" от иммунной системы хозяина.
Антигенные компоненты, имеющие существенное значение в классификации и диагностике, главным образом локализованы в клеточной стенке. Специфичность Str.pyogenes серогруппы А обусловлена наличием полисахарида многоразветвленной структуры, которая состоит из N-ацетил глюкозамина и рамнозы в молярном соотношении 1:2,47, молекулярный вес 8000. Иммунозащитный компонент полисахарида - это N-ацетилглюкозамин, локализованный в концевом положении молекулы. Энзимная и химическая деградация демаскирует субтерминальную рамнозную структуру, которая также антигенна и представляет иммунодетерминантную структуру "Группа А- вариант" полисахарида. По мнению Fox (1994) М-протеиновый тип антигена термостабилен, трипсиноустойчив и находится на поверхности клеточной стенки. Это основной фактор вирулентности, влияющий на резистентность микроорганизма к фагоцитозу и является точно определяющей типоспецифической субстанцией. Наличие пептидов в среде и отсутствие образования протеазы в среде располагают к его активному продуцированию. Изучение структуры М-протеина показало наличие Subunita, образованного повторяющимися ковалентными связями полипептидов, некоторые из них имеют идентичную аминокислотную последовательность в определенных частях. Например М-24-протеин состоит из 7 полипептидов с молекулярным весом 4000-5000 (Beachey и др.,1988). М-протеин содержит несколько иммунодоминантных групп некоторой степенью гетерогенности, локализованных между полипептидами. Существенным этапом в развитии инфекционного процесса является проникновение и распространение микробов в тканях организма хозяина, чему способствуют ферменты бактериальной клетки. Гемолитические стрептококки продуцируют гемолизины (стрептолизин О и S) и ферменты (гиалуронидазу, стрептокиназу, дифосфоропири - динуклеотидазу, дезоксирибонуклеазу, рибонуклеазу, протеиназу, амилазу, липазу). Некоторые из этих субстанций участвуют в метаболизме микробной клетки, другие являются факторами агрессии стрептококка, так как способствуют инвазии, токсически действуют на микроорганизм или подавляют его защитные механизмы. Ряд веществ обладает лейкотоксическим действием (дифосфоропиридинуклеотидаза, S-стрептолизин), что играет большую роль при стрептококковых инфекциях, так как основная защита организма против многих стрептококков осуществляется путем фагоцитоза. Стрептолизин -О инактивируется кислородом воздуха и вызывает гемолиз не на поверхности кровяного агара, а в толще его или в глубоких слоях бульона с эритроцитами. Редуцирующие вещества, содержащие сульфгидрильные группы, восстанавливают этот стрептолизин, который обладает антигенными свойствами. Обнаружение антител к стрептолизину О- показатель перенесенной стрептококковой инфекции (Лямперт И.М., 1973; Hardia, 1986) . Стрептолизин S- не разрушается кислородом воздуха и вызывает гемолиз на поверхности агара с кровью, который может быть усилен при добавлении в среду рибонуклеиновой кислоты. Стрептолизин S не обладает антигенными свойствами (Fox А., 1974). Основное действующее начало фактора распространения (Дюран- Рейнальс) - фермент гиалуронидаза, который гидролизирует гиалуроновую кислоту основного вещества соединительной ткани человека и животных и повышает ее проницаемость. Стрептококковая гиалуронидаза отличается в антигенном отношении от гиалуронидазы других микробов (Канарейкин В.М., Yansenl, 1996). Роль гиалуронидазы в стрептококковых инфекциях неясна. Наличие ее в культуре не является показателем патогенности и вирулентности, так как она обнаруживается в штаммах различных видов, иногда непатогенных, и присутствует в культурах, выделяемых от носителей (Fishetti M.V. 1993). У стрептококков серогруппы А скарлатинозный или эритрогенный токсин обнаружен Савченко И.М. в 1905 году (цит.по Лямперт И.М.). При иммунизации вакциной, содержащей этот токсин, получены явления, характерные для первого периода скарлатины. В нативном токсине содержатся две фракции: термолабильная, или истинный скарлатинозный токсин, и относительно термостабильная, которая обладает свойствами аллергена. Истинный эритрогенный токсин является протеином. Это экзотоксин стрептококка, который вызывает реакцию Дика у восприимчивых к болезни особей. Эритрогенный токсин является стрептококковым ядом. У кроликов, реагирующих на него в кожных пробах при подкожном или внутривенном его введении, возникает скарлатино- подобный синдром. От больших доз животные погибают. Очищенный эритрогенный токсин применяют для кожных проб с целью определения уровня антитоксического иммунитета. Единицей измерения токсина является кожная доза (КД), то есть наименьшее количество токсина, которое при внутрикожном введении в объеме 0,1 мл вызывает положительную реакцию Дика не менее чем у 60 % больных в первые 5 дней болезни.
Термостабильная фракция (аллерген) стрептококков - нуклеопротеид, к которому установлено постоянное нарастание чувствительности у больных. Чувствительность к этой фракции в кожных пробах повышена при ревматизме и других стрептококковых заболеваниях.
Результаты изучения частоты выделения стрептококков при различных патологических состояниях крупного рогатого скота
Результаты перечисленных тестов интерпретировали согласно "Определителю бактерий" (Вещеу, 1986). При определении видовой принадлежности стрептококков обращали внимание в первую очередь на серогрупповую принадлежность культур стрептококков в реакциях кольцепреципитации (РП) и латексагглютинации (РЛА).
Реакцию кольцепреципитации ставили по ЬапсеАеШ в модификации института эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи (1967). Для приготовления антигена суточную бульонную культуру стрептококка, выращенную при 37 градусах в 50 мл мясо-пептонного бульона с 1% глюкозы, центрифугировали в течение 20 мин. при 3000 об/мин, осадок обмывали большим объемом 0,85% раствора хлористого натрия, после чего ресуспендировали в 0,5 мл 0,2% соляной кислоты. Периодически встряхивая суспензию прогревали в кипящей водяной бане в течение 10-15 минут. Надосадочную жидкость, содержащую С-полисахарид, нейтрализовали 0,2% раствором гидрооксида натрия по бромтимолу синему. При этом жидкость имела зеленовато-желтый цвет, соответствующий рН - 7,0-7,2. Появляющийся после нейтрализации осадок удаляли центрифугированием и полученную прозрачную жидкость использовали в реакции.
Диагностические сыворотки для реакции кольцепреципитации готовили иммунизацией кроликов эталонными штаммами стрептококков серогрупп А, В, С, Б, в, и Н, полученными из ГКИ им.Л.А.Тарасевича и ВГНКИ. За три недели до иммунизации у кроликов из краевой ушной вены брали кровь и исследовали сыворотку на содержание нормальных антистрептококковых антител. Антиген для иммунизации кроликов готовили по методу Москалика Р.С.(1974), для чего суточную бульонную культуру стрептококка центрифугировали при 3000 об/мин, осадок трижды обмывали 0,85%-ным раствором хлорида натрия и готовили взвесь, содержащую 2 млрд.м.т. Полученную взвесь прогревали на водяной бане при 56 в течение 1,5 часов. Для второго цикла иммунизации кроликов антиген готовили таким же способом, но без прогревания на водяной бане.(живые стрептококки). Схема иммунизации кроликов включала два цикла иммунизации с интервалом в 1 месяц. В первом цикле иммунизировали кроликов в краевую вену уха инактивированным антигеном в объеме 1,0 мл один раз в неделю, четыре недели подряд с нарастающей концентрацией стрептококков - 2,4,8 и 16 млрд.м.т. Во втором цикле место введения антигена, его доза, количество инъекций и интервал между ними был таким же, как и в первом цикле, но в качестве антигена применялись живые микробные клетки. По этой схеме было гипериммунизирован 21 кролик, от которых получили диагностические сыворотки, дающие четкую положительную реакцию кольцепреципитации в разведении 1:2 с исходными референтными штаммами.
Реакцию кольцепреципитации ставили в капиллярах, наслаивая на группоспецифическую сыворотку равное количество соляно-кислого экстракта. Капилляры оставляли при комнатной температуре в течение 15-20 мин., после чего учитывали результаты реакции. При появлении на границе между антигеном и антисывороткой ясно выраженного кольца реакция считалась положительной, при расплывчатом кольце - сомнительной, а при отсутствии - отрицательной.
Реакцию латекс-агглютинации стрептококков ставили с использованием коммерческих диагностических диагностикумов ВВЬ и 81гер1;о1ех в соответствии с имеющимися инструкциями. При этом с кровяного агара (5% эритроцитов барана) после 18-24 часов культивирования снимали бактериологической петлей изолированную колонию стрептококка, суспендировали ее в 0,2 мл экстракта-энзима и прогревали на водяной бане при 37 в течение 30 минут. После этого к суспензии добавляли 1 мл 0,85%-го раствора хлорида натрия (рН 7,2). Затем 0,25 мл суспензии наносили на черную стеклянную пластину с наслоенными кружочками и добавляли к ней такое же количество нагруженной группоспецифическими антителами латексной суспензии. В случае положительной реакции через 1-2 минуты на стекле проявлялось четко выраженная агглютинация, которая могла быть мелкой или средней зернистости. Контролем реакции служил комплексный антиген приложенный к диагностикумам. Из культур стрептококков, выделенных из патологического материала были отобраны- штаммы для иммунизации животных. Антигены стрептококков готовили в соответствии с методикой, описанной в главе 2.7. Для проверки стерильности и безвредности полученных сывороток проводили высевы проб на питательные среды и подкожно вводили 3 белым мышам по 0,5 мл. от каждой исследуемой серии сыворотки.
Активность сывороток крови проверяли в тесте серозащиты белых мышей. Проверенные на стерильность и безвредность сыворотки прививали белым мышам внутрибрюшинно в объемах 0,15; 0,3; и 0,6 мл. Через 24 часа проводили заражение мышей внутрибрюшинным введением 31Л350 50 культур стрептококков различных серогрупп. Гипериммуные сыворотки считались активными, если они защищали от гибели не менее 80% зараженных мышей. На каждую пробу сыворотки брали по 10 белых мышей. Профилактические свойства экспериментальной ПЭГ-вакцины против стрептококковых инфекций проверяли в двух сериях опытов в 4-х скотоводческих хозяйствах Кабардино-Балкарской Республики.
Вакцину вводили стельным коровам подкожно не менее чем за 30 дней до предполагаемого отела двукратно с интервалом 7 дней. Были сформированы группы телят от привитых коров. У телят изучали активность сыворотки крови в течение 30 дней, а также изучали заболеваемость их различными болезнями. Сравнительную эффективность ПЭГ-вакцины проверяли на телятах 20-дневного возраста, которым двукратно вводили вакцину. В группах привитых животных изучена заболеваемость инфекционными болезнями.
Результаты изучения патогенных свойств стрептококков на лабораторных животных
Из 47 стрептококков серологической серогруппы С, изолированных от животных были патогенными для белых мышей 38 (80,1%), причем все культуры, выделенные из суставной жидкости телят, селезенки и крови при пупочном сепсисе вызывали гибель у 100% лабораторных животных. Выделенные из носовых смывов у клинически здоровых животных культуры этой серогруппы в большинстве были аналогичными, тогда как от больных животных - наоборот. Культуры, изолированные из матки были патогенными в 88,8%, из молока маститных коров - в 74,4%, из легких - в 75,0%, а из вагинальных смывов - только в половине случаев.
Все культуры стрептококков серогруппы Д, выделенные из суставной жидкости и селезенки телят были патогенными для белых мышей. Количество патогенных культур стрептококков этой группы составило: из носовых смывов клинически здоровых животных - 50,0%, больных - 66,6%, из маститного молока - 75,0%, из легких телят - 71,4%, из матки - 75,0%, крови - 50,0% и из влагалищных смывов - 60,0%.
В целом из 48 культур стрептококков серогруппы Д патогенными для белых мышей были 35 (72,9%) изолятов.
Из 18 изолятов стрептококков серогруппы в патогенными были 10 (55,5%). При этом все культуры, выделенные из селезенки павших телят были патогенными. Из 14 культур стрептококков других серогрупп лишь половина изолятов были патогенными для белых мышей. Обе культуры из носовых смывов клинически здоровых телят оказались апатогенными. Из 181 всех испытанных культур стрептококков 122 (64,4%) были патогенными для белых мышей. Наибольшее количество патогенных культур выделяли из селезенки и суставной жидкости - по 100%, легких - 73,3%, крови - 71,4% и маститного молока - 70,9%. Это позволяет косвенно судить об этиологическом значении стрептококков в заболеваниях, при которых эти культуры были изолированы. Нами был изучен видовой состав и некоторые свойства стрептококков, изолированных из воздуха помещений (коровников и телятников) в скотоводческих хозяйствах КБР: КДП им.Кирова Терского района, КСХА «Кабардей» Урванского района, КДП им.братьев Петровых Прохладненского района и КСХП «Кызбурун» Баксанского района. Выделение стрептококков проводили стандартным методом, с использованием селективных сред. Всего из воздуха помещений нами было изолировано 192 культуры стрептококков (87 - в коровниках, 105 - в телятниках), у которых определяли тип гемолиза и патогенность для белых мышей, определена серологическая и видовая принадлежность. Результаты этих исследований представлены в таблицах 17-19. Из 192 культур, выделенных из воздуха помещений (3-гемолиз на кровяном агаре (5% эритроцитов барана) проявляли 68 (35,4%) культур, а - гемолиз - 97 (50,5%) и не проявляли гемолиза 27 (14,0%) изолятов стрептококков. Из 87 культур, изолированных из воздуха в коровниках р-гемолиз проявляли 34 (39,0%), а— гемолиз - 44 (50,6%) и не проявляли гемолитических свойств 9 (10,3%) изолятов стрептококков, тогда как в телятниках (3- гемолитическими свойствами обладали 34 (32,3%), а- гемолитическими - 53 (50,4%») и не обладали гемолитическими свойствами 18 (17,1%) культур стрептококков. В различных хозяйствах соотношение стрептококков с разным типом гемолиза было примерно одинаковым и характеризовался преобладанием а— гемолитических стрептококков в телятниках. Так, в КДП им.Кирова Р и а— Гемолитические свойства стрептококков, изолированных из воздуха помещений гемолиз был отмечен у стрептококков, выделенных из воздуха в телятниках в 32,0 и 60,0% случаев соответственно. В коровниках это соотношение составляло 21,7 и 73,9% соответственно. Преобладание (3 - гемолитических стрептококков над а- гемолитическими было отмечено в коровниках КСХП «Кабардей» (47,6 и 42,8% соответственно), тогда как в телятниках количество выделенных из воздуха культур, проявляющих Р — гемолиз составляли 29,6%, а а- гемолиз проявляли 48,1%. При одинаковом количестве (3 - а— гемолитических стрептококков в коровниках КДП им. братьев Петровых нами отмечалась более высокая частота выделения а— гемолитических культур из воздуха телятников этого хозяйства (44,0% против 32,0%). Количество культур, не проявляющих гемолиза на кровяном агаре также было больше в воздухе телятников, чем в . воздухе коровников во всех хозяйствах и колебалось от 4,3 до 22,2%. В таблице 18 отражены результаты изучения патогенности культур стрептококков, изолированных из воздуха помещений коровников и телятников вышеуказанных хозяйств. Патогенность изучали в опытах на белых мышах в соответствии с методикой, описанной в главе 2.1. (Материалы и методы исследований). Патогенность для белых мышей изолятов стрептококков нами рассматривалась во взаимосвязи с их гемолитической активностью. В целом из 192 культур, изолированных из воздуха помещений 108 (56,2%) были патогенными для белых мышей, в том числе 47 (43,5%), из которых обладали р - гемолитической активностью, 55 (50,9%) - а- , и 6 (5,5%) не обладали гемолитической активностью.
