Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 6
1 1 Вторичные повреждающие факторы на примере тяжелой черепно-мозговой ткани 10
1 2 Роль мембранных повреждений в патогенезе сочетанной ЧЛТ 13
1.3 Использование перфторан в клинике 17
Часть вторая
Глава 2 Клиническая характеристика больных методы исследования 22
2 1 Общая клиническая характеристика больных 22
2 2 Принципы базовой интенсивной терапии тяжелой ЧМТ 26
2 3 Методы исследования 2
Глава 3 Динамика вторичных повреждающих факторов в процессе базовой терапии в раннем восстановительном периоде черепно-лицевой травмы 32
3.1 Клиническая характеристика пострадавших I группы 32
3 2 Показатели системной гемодинамики и церебрального перфузионного давления
3 3 Показатели кислородного снабжения организма 38
3.4 Показатели активности перекисного окисления липидов, антиоксидантных систем и сіруктурно-функциональньїх свойств мембран эритроцитов 43
Глава 4 Влияние перфторана на вторичные повреждающие факторы при ишемически-гипоксическом повреждении тканей экспериментальные исследования
4.1 Влияние перфторана на морфологию полнослойных кожных лоскутов (как модели ишемически-гипоксического поражения тканей )52
4 2 Влияние перфторана на биохимические параметры изолированного полнослойного кожного лоскута 77
3.4 Влияние перфторана на активность ПОЛ, ферментативной антиоксидантной системы крови в эксперименте 84
4.6 Экспериментальное изучение влияния перфторана на параметры центральной гемодинамики при внутривенном введении перфторана Клинические исследования 90
4 7 Влияние перфторана на показатели активности ПОЛ, антиоксидантных систем и структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов у пострадавших с тяжелой черепно-мозговой травмой 95
4 8 Состояние кровотока у пациентов с хронической критической ишемией нижних конечностей и возможности его оптимизации 99
4 9 Влияние перфторана на параметры центральной гемодинамики 105
4 10 Влияние внутривенного введения перфторана на кровоток у здоровых людей и больных с патологией челюстно-лицевой области 107
Заключение 112
Выводы 116
Практические рекомендации 117
Литература
- Роль мембранных повреждений в патогенезе сочетанной ЧЛТ
- Показатели системной гемодинамики и церебрального перфузионного давления
- Влияние перфторана на биохимические параметры изолированного полнослойного кожного лоскута
- Экспериментальное изучение влияния перфторана на параметры центральной гемодинамики при внутривенном введении перфторана Клинические исследования
Введение к работе
Актуальность исследования. Лечение пострадавших с тяжелыми травмами лицевого скелета, сопровождающихся травматическим повреждением головного мозга, представляет собой сложную проблему, требующую объединения усилий специалистов различного профиля - стоматологов, че-люстно-лицевых хирургов, нейрохирургов, реаниматологов, офтальмологов Недостаточно эффективная восстановительная терапия в раннем посттравматическом периоде не препятствует развитию гипоксических и воспалительных осложнений. Поиск новых технологий восстановительной терапии тяжелой сочетанной черепно-лицевой травмы (ЧЛТ) , очевидно, должен базироваться на патогенетическом анализе процессов первичных и вторичных повреждений головного мозга. Первичные повреждения обусловлены непосредственным механическим воздействием в момент травмы и практически не зависят от организации и уровня медицинской помощи. Вторичные повреждения, являющиеся реакцией организма на травму, во многом зависят от качества оказания ургентной помощи и эффективности ранней восстановительной терапии (В.Г.Башкатова и др., 1998; В.А.Розанов и др., 1998; Л.Н.Хлуновский и др., 1999; С.В.Царенко, 2000, 2003; Е.Бабаян и др., 2005; Andrew et al., 2000, 2005; Bramiett et al., 2004; Engel et al., 2005; Nelson, 2005; Sanchez-Olmedo et al., 2005 и др.). В результате ухудшаются исходы лечения, в частности, исходы реконструктивных и пластических операций на челюст-но-лицевой области (Д.А.Трунин, 1998; Т.Т.Фаизов, 1998; В.Н.Соколов, 2001; Adams et al., 2000; В.Н.Соколов, 2001; Elmani et al., 2002; Crover et al., 2003; Linnau et al., 2003).
Анализ данных литературы позволили предположить, что препаратом выбора, который мог бы обеспечить купирование «вторичных» повреждающих факторов, может явиться перфторан, представляющий собой эмульсию перфторуглеродов (ПФУ). В работах последних лет появились данные о том,
- в дальнейшем для краткости - ЧЛТ
что реологические(Яайкоуа et al., 2004) и цитопротекторные эффекты (В.В.Мороз и др., 2005)могут наблюдаться вне связи с кислородотранспорт-ными свойствами перфторана при использовании существенно меньших доз препарата. В совокупности с данными А.Б. Гапеева и др. (1995) Д.Г.Шехман и др. (1999) о торможении перфтораном in vitro праймированных стимулированных формирмиристилацетатом нейтрофильных лейкоцитов и о способности перфторана подавлять развитие вирусов в гиперактивированных макрофагах (Войтенков и соавт., 2003), можно предположить, что перфторан может оказывать противовоспалительное действие.
Изучению возможности повышения эффективности восстановительной терапии в раннем посттравматическом периоде ЧЛТ посвящено данное исследование.
Цель исследования. Оптимизация восстановительный терапии в ранний посттравматический период ЧЛТ для сокращения сроков подготовки пострадавших к реконструктивным операциям путем воздействия на основные патогенетические звенья вторичного повреждения тканей перфтораном.
Задачи исследования. 1. Оценить эффективность действия базовой терапии в ранний восстановительный период ЧЛТ на следующие функциональные системы: состояние центральной гемодинамики; кислородный бюджет организма; активность перекисиого окисления липидов (ПОЛ) и ан-тиоксидантных систем (АОС) в мембранах эритроцитов.
Выявить основные патогенетические факторы, обуславливающие развитие вторичных повреждающих факторов в раннем восстановительном периоде ЧЛТ.
Выявить роль окислительной модификации мембран эритроцитов в развитии гипоксического поражения тканей в раннем восстановительном периоде ЧЛТ.
В эксперименте выявить и сравнить патоморфологические и биохимические характеристики изолированного кожного лоскута при его сохранении в 0,9% растворе натрия хлорида и перфторане, в частности, на динамику
воспаления, альтерации и репаративных процессов в ране. Установить эффективность действия перфторана на динамику окислительной модификации мембран клеток.
5. Оценить противоишемическую активность малых доз перфторана в ранний восстановительный период ЧЛТ, в частности, действие на тяжесть окислительной модификации мембран клеток и параметры местного и системного кровотока, как основных факторов вторичного повреждения тканей. Научная новизна. Впервые установлено, что прирост концентрации внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) в плазме крови является клинически важным критерием, коррелирующим не только с накоплением продуктов ПОЛ и активностью АОС в мембранах, но и с уровнем бодрствования пациентов (как критерием тяжести состояния пострадавших).
Установлено, что окислительная модификация мембран эритроцитов на фоне достаточной оксигенации гемоглобина выступает в качестве лимитирующего фактора доставки кислорода.
На патофизиологических моделях, воспроизводящих ишемическое поражение тканей и раневой процесс, показано, что использование малых доз перфторана замедляет развитие патологических изменений в ишемизирован-ных тканях, что выражается в более продолжительной по времени сохранности их структур, ускоряет процессы регенерации и дифференциации структур ткани за счет уменьшения выраженности и длительности периода вторичной альтерации.
У пациентов с ЧЛТ обнаружено, что введение перфторана в малых дозах, не влияющих на кислородную емкость крови, способствует снижению активности ПОЛ и АОС в мембранах, оказывает цитопротекторное действие, что сопровождается улучшением состояния больных.
В клинических исследованиях и на патофизиологических моделях показано, что малые дозы перфторана улучшают системный и местный кровоток на фоне снижения периферического сопротивления сосудов, не вызывая синдрома «обкрадывания». Получены свидетельства облегчения доступности
местного циркуляторного русла для эритроцитов после местного внутритканевого введения перфторана. Показано, что перфторан может оказывать независящее от газообмена, воздействие на активность клеточных элементов и тканевых регуляторов, контролирующих течение воспалительной реакции и заживления. Получены свидетельства противовоспалительного и ранозаживляющего действия малых доз перфторана.
Практическая значимость исследования. Положительные корреляционные связи между концентрацией продуктов ПОЛ в мембранах, ВЭГ в плазме крови и уровнем бодрствования пострадавших, позволяет использовать концентрацию ПОЛ и ВЭГ в качестве критерия адекватности проводимой терапии и для объективной лабораторной оценки клинического состояния пострадавших.
Показано, что однократное внутривенное введение малых доз перфторана порядка 1,5-2 мл на кг массы тела оказывает цитопротекторное действие за счет оптимизации структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов (как модели клетки) и повышения ее стабильности. Впервые обнаружено, что малые дозы перфторана избирательно увеличивают системный и местный кровоток на стороне поражения на фоне снижения общего периферического сопротивления сосудов. Предлагается использовать перфторан в дозе 1-2 мл/кг в качестве ранозаживляющего и противовоспалительного средства.
Внедрение результатов работы. Методика лечения пострадавших с ЧЛТ внедрена в практику отделений стоматологии и анестезиологии и реанимации военного госпиталя № 359 ПУрВО (Оренбург), отделения реанимации и отделения хирургии больницы Научного центра РАН (Пущино). Основные положения диссертации включены в лекционный курс для аспирантов и магистрантов Института экспериментальной и теоретической биофизики РАН, аспирантов и ординаторов ЦНИИС, для аспирантов и магистрантов Пущинского государственного университета.
Апробация материала. Результаты исследования доложены на: III научно-практической конференции «Современные методы обеспечения безопасности трансфузий» (Ханты-Манссийск, 2004); II Всероссийской научно-практической конференции «Критические состояния в акушерстве и неонатологии» (Петрозаводск, 2004); X международной конференции челю-стно-лицевых хирургов и стоматологов (СПб, 2005); VI и VII научно-практических конференциях врачей ПУрВО (Оренбург, 2005, 2006); заседаниях Федерации анестезиологов-реаниматологов (Челябинск, 2006) и Краснодарского края (Краснодар, 2007); конференции молодых ученых (Пущино, 2006); семинарах лаборатории энергетики биологических систем ИТЭБ РАН (2006, 2007); заседаниях медико-биологической секции Ученого совета ИТЭБ РАН (Пущино, 2006, 2007), международном конгрессе стоматологов и челю-стно-лицевых хирургов (Стамбул, Турция, 2007). Работа апробирована на заседании медико-биологической секции Ученого совета ИТЭБ РАН (2007)
Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и включает в себя: введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследований, 2 главы собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 35 рисунков и 22 фотографиями. Библиографический список из 323 источника, из них 240 отечественные. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 2 - в журналах, рекомендованных ВАК.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту. 1. В раннем восстановительном периоде ЧЛТ выявлена длительная симпато-адреналовая стимуляция и нарастание тканевой гипоксии, сопряженные с развитием тяжелого окислительного стресса, проявляющегося на уровне мембран клеток.
2. Интенсивность окислительного стресса и степень повреждения эритроцитов, коррелируют с концентрацией в плазме ВЭГ. Эти показатели про-
гностически значимы для оценки эффективности восстановительной терапии в раннем посттравматическом периоде ЧЛТ.
Под воздействием перфторана замедляется развитие патологических изменений в трансплантированном кожном лоскуте (как модели ишемиче-ского повреждения ткани), что выражается в более продолжительной сохранности структур кожи и подкожно-жировой ткани, способствует ускорению процессов регенерации и дифференциации структур за счет сокращения длительности и интенсивности периода вторичной альтерации.
Внутривенное введение малых доз перфторана, не влияющих на кислородную емкость крови, может тормозить ключевые процессы тканевого повреждения - снижает активность стресс-реал изующих систем., уменьшает окислительную модификацию мембран, улучшает системный и локальный кровоток в тканях, отек тканей.
Роль мембранных повреждений в патогенезе сочетанной ЧЛТ
Структурной единицей биологической мембраны является фосфоли-пидный бислой, в котором углеводородные цепи молекул фосфолипидов находятся в жидком состоянии, а сами фосфолипиды образуют бислой, в который встроены молекулы белков, способные передвигаться вдоль мембраны (Willmore, Triggs, 1991). Движение молекул различных веществ, растворенных в липидной фазе мембран, перемещение подвижных участков молекул фос-фолипидов в мембране (т.е. говоря иными словами, возможность выполнения мембраной своих функций) подчиняется законам диффузии и зависит от того свойства среды, непосредственно окружающую данную молекулу в мембране, которое называется микровязкостью (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972). В доступной нам литературе за последние 15 лет нам попалось только несколько работ, посвященных состоянию микровязкости мембран при кар-диальной патологии, выполненные в НИИ биохимии при Ростовском государственном университете (И.А.Горошинская и др., 1993; В.В.Внуков и др., 1995; П.П.Кваша и др., 1995; Милютина Н.П. и др., 1995), работ же, посвященных данному вопросу при сочетанной ЧЛТ нами не было обнаружено ни в одной поисковой системе.
Взаимодействие активных форм кислорода со структурно-связанными липидами приводит к повреждению биологических мембран. В свою очередь нарушение структуры мембран, в том числе и лизосомальных, способствует усилению процессов аутолиза и, как следствие, дезорганизации практически всех сторон метаболизма (Barber, Shires, 1996). Неконтролируемое нарастание протеолиза вызывает инактивацию ферментов и пептидных гормонов, извращает их функциональную роль. Высвобождение фосфолипаз способствует усугублению повреждения липидной части мембран (Hsiang et al., 1997), замыкая, таким образом, еще один порочный круг в патогенезе ЧМТ.
Еще один аспект этой проблемы - генерирование активных форм кислорода нейтрофилами, что играет важнейшую роль в повреждении тканей (М.В.Биленко, 1989; М.Симонович и др., 1997; Koczorowski et al., 1995). По мнению Rose et al. (1997) нормальная фагоцитарная функция лейкоцитов осуществляется только с участием активных форм кислорода и состояние ее тесно связано с возможностью легких «исполнять» нереспираторные функции (Keskil et al., 1994; Hudome et al., 1997). В лейкоцитах существует специ альная метаболическая система, которая целенаправленно продуцирует свободные радикалы. В ответ на воздействие бактерий (или некоторых химических веществ) происходит резкое возрастание скорости образования супероксидных анион-радикалов и одновременно с резким увеличением потребности в кислороде, что в свою очередь приводит к увеличению генерации кислорода. Этот процесс происходит очень быстро, в связи с чем он получил название «респираторного взрыва» (Hudome et al., 1997; Rose et al., 1997; Shohami et al., 1997). Поступающие во внеклеточное пространство активные формы кислорода играют роль своеобразных фагов - расщепляют альтерни-рованнные молекулы, субцеллюлярные компоненты и клетки, что способствует очищению зоны воспаления от детрита.
В нормальных условиях уровень активных форм кислорода контролируется ферментами антиоксидантной системы (АОС). При патологических состояниях, сопровождающихся угнетением АОС проявляется повреждающее действие активных форм кислорода. Продукты ПОЛ стимулируют образование хемоатрактантов лейкоцитов, что приводит к усилению их миграции и последующей активации с развитием системной воспалительной реакции (Kochilas et al., 1997). Granger ct al. (1998) считает, что все повреждающие факторы при гипоксии (снижение рОг в клетках, метаболический ацидоз, арахидоновый каскад, гиперкальциемия, активация протеолиза, активация лейкоцитов и т.д.) вовлечены либо в процесс образования активных форм кислорода, либо высвобождаются в результате взаимодействия кислородных радикалов с биомембранами.
Таким образом, гипоксия и последующая реоксигенация запускают каждая свою отдельную группу цитотоксических процессов, но при этом, будучи взаимосвязанными, взаимообусловленными и взаимоподдерживающи-мися, в целом они могут рассматриваться как гипоксически-реоксигенационное повреждение (Kirsch et al., 1992; Bagenholm et al., 1996; Shohami et al., 1997; Zimmerman et al., 1998). По мнению авторов «гипоксия и последующая реоксигенация - это две стороны одного и того же процесса, ведущего к активации ПОЛ», т.е. на стадии гипоксии в тканях накапливаются активаторы ПОЛ, происходит восстановление переносчиков дыхательной цепи, но активации ПОЛ как таковой не происходит из-за дефицита кислорода. Его поступление в ткани при последующей оксигенации (в результате успешной сердечно-легочной реанимации, к примеру) вызывает резкое усиление всех свободно-радикальных процессов вообще и ПОЛ в частности.
Важнейшие компоненты каскада патологических процессов, присущие периоду рециркуляции и реоксигепации для головного мозга представляются в настоящее время таким образом:
1. Образование свободных радикалов; их основное действие на фоне угнетенного энергетического метаболизма- новая волна деструкции мембран организма (Fortune et al., 1994; Gosse et al., 1997; K.Guluma, 2002).
2. Окисление арахидоновой кислоты по липо-, оксигеназным путям с появлением БАВ, воздействующих на микроциркуляцию вообще и в головном мозге в частности, частично обладающих свойствами свободных радикалов (Feuerstcin et al., 1997; Hsiang et al., 1997; N.P.Hailer et al., 2005).
3. Повторное перераспределение ионов кальция, приводящее вместе с действием свободных радикалов к повреждению ДНК, белоксинтезирующих систем и появлению патогенных белков (Doppenberg et al., 1997; Kampfl et al., 1997; J.Guo, 2003).
4. Угнетение активности Na+- насоса в связи с ингибиторным действием на Ыа+-К+-АТФ-азу и изменения структурно-функциональных свойств липидного слоя мембран (Ю.А.Зозюля и др., 2000).
Показатели системной гемодинамики и церебрального перфузионного давления
Представлены данные клини ко-лабораторного обследования І I выживших пострадавших I группы, получавших базовую медикаментозную терапию. Средний койко-день в реанимационном отделении составил 2l,8±l,4 суток. Длительность коматозного состояния составила 15,5±0,3 суток. Распределение пострадавших по тяжести состояния (при поступлении), возрасту, полу представлено в таблицах 4 и 5. В качестве критерия тяжести состояния пострадавших принято состояние сознания, что соответствует принятому стандарту . Фаза умеренной клинической декомпенсации (оценка по шкале ком Глазго-Питтсбург составила от 14 до 8 баллов; уровень бодрствования - оглушение/сопор) наблюдалась у 10 пациентов (50,0%), в этой группе умер 1 человек (5,0%). Фаза грубой клинической декомпенсации (оценка по шкале ком Глазго-Питтсбург составила от 7 до 4 баллов; уровень бодрствования - умеренная кома/глубокая кома) отмечена у 10 пациентов (50,0%), в этой группе умерло 7 человек (35,0%).
Из 20 пострадавших у 16 (80,0%) причиной травмы было дорожно-транспортное происшествие, у 1 (5,0%) - бытовая травма, и у 3 (15,0%) кри - отраслевая научно-техническая программа С.09 «Чсрспно-моіговая травма» (1986-1990 гг) JJ минальная травма. Сопутствующая закрытая ЧМТ была диагностирована у 17 пострадавших (85,0%), открытая - у 2 (10,0%), проникающая - у 1 (5,0%).
У всех пострадавших были диагностированы ушибы головного мозга тяжелой степени различной локализации (полушарные, базальные, теменно-височные отделы головного мозга). Ком премирующая ЧМТ наблюдалась в 9 случаях (эпидуральная гематома - у 3 пострадавших (15,0%), субдуральная - у 4 (20,0%), внутримозговая - у 1 (5,0%), множественные - у 1 (5,0%). У 18 пострадавших (85,0%) имелись линейные и/или оскольчатые переломы свода черепа, из них у 7 (35,0%) - с переходом на основание черепа. Из числа пострадавших 12 человек (60,0%) поступили в стационар в состоянии алкогольного опьянения различной степени тяжести.
Анализ причин выраженной гипоксии и факторов, ответственных за ее развитие при черепно-лицевой травме (ЧЛТ) показал, что центральная гемодинамика мобилизуется с первых минут посттравматического периода по гиперкинетическому типу (таблица 6). В дальнейшем величины прироста минутного объема кровообращения (МОК), от уровня нормальных значений статистически значимо не отличаются (рис. 1).
Высокий уровень производительности миокарда обеспечивался за счет частоты сердечных сокращений (ЧСС), величина которой во все сроки обследования превышала норму более чем на 50,0% (рис. 2). Вероятностными причинами тахикардии являются гиперкатехоламинемия и диэнцефально-катаболический синдром (диагностированный у всех пациентов), гипертермия - средняя температура у пациентов с базовой терапией в течение всего срока наблюдения составила 39,4±1,2С.
Регистрирующаяся у пострадавших во все сроки исследования артериальная гипертензия (уровень среднего артериального давления (АДср) во все сроки превышал норму более чем на треть) может быть следствием усугубления гипоксии и вторичной ишемии головного мозга за счет нарастания отека головного мозга (рис. 3). Это предположение подтверждается данными компьютерной томографии (КГ), проведенной нами у пациентов в динамике с I по 7 сутки посттравматического периода, которые свидетельствуют об увеличении зоны пониженной плотности у выживших пациентов. Отек головного мозга в этой подгруппе этих пострадавших носил преимущественно локальный характер, охватывая в основном зоны повреждения и перифокаль-ную, у части пациентов имел тенденцию к расширению зон.
Во все сроки исследования потребность в кислороде превышала норму более чем в 2 раза, что отражает степень активации стресс-реализующей симпато-адреналовой системы (рис. 4).
С первых суток посттравматического периода отмечена тенденция к нарастанию общего периферического сопротивления (ОПС) и к 7 суткам посттравматического периода ОПС превышала последний в среднем на 25% (рис. 5).
Влияние перфторана на биохимические параметры изолированного полнослойного кожного лоскута
В данном разделе исследовалось влияние перфторана на изолированную из организма ткань полнослойного лоскута кожи, когда исключаются воздействия, обусловленные влиянием препарата на кровоток и доставку кислорода, а также на реакции иммунной системы, протекающие в условиях целостного организма. Фармакологическая обработка и сохранение изолированного лоскута в жидкой среде - неизбежные процедуры предоперационной подготовки лоскута к трансплантации. Нами было использовано две среды: изотонический раствор хлорида натрия и перфторан. По приросту массы лоскута оценивалась степень его отека в сравниваемых средах. По изменению концентрации глюкозы, лактата и пирувата оценивали степень ишемического повреждения тканей. По изменению конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида - степень выраженности свободно-радикальных окислительных процессов.
Материал и методы исследования. Эксперимент выполнен на 20 крысах-самцах линии «Wistar» массой тела 280-300 г. Под внутрибрюшин-ным наркозом (доза калипсола 14,8±0,4 мг/100 г веса) произведен забор лоскутов со спины животного размером 30x30 мм в пределах кожи, подкожной клетчатки. Лоскуты помещали в 0,9% раствор натрия хлорида (контрольная группа; п=10) или в перфторан (основная группа; п=10). Объем среды составлял 500% к массе лоскутов. Время инкубации составляло 1, 3, 5, 24 часа. От лоскутов отбирали пробы весом 1 г сразу после забора тканевого материала (до экспозиции в физиологическом растворе или в перфторане) и после контрольного времени инкубации.
Пробу растирали в ступке с кварцевым песком (масса песка в 2 раза превышала массу тканей) и суспензировали в 4-кратном количестве среды для гомогенизации (305 мМ 0,1% раствор трилона X и 10 мМ трилона Б в биди-стиллированной воде). Гомогенат центрифугировали 10 мин при 3000 g. В супернатанте определяли содержание общего белка биуретовым способом наборами фирмы «Диакон-Синтеко» (РФ), глюкозы - наборами фирмы «Диа-ком Диасис» (РФ), лактата и пирувата - с помощью ферментативных наборов фирмы Boehringer Manheim GmbH (Германия). В осадке определяли содержание малонового диальдегида (МДА) по метолу Стальной и Горишвили (1977) в реакции с тиобарбитуровой кислотой. После осаждения белка и определения МДА в безбелковом супернатанте, осадок промывали последовательно в 10 мл воды, затем 40% и 96% этилового спирта. Затем добавляли 2,5 мл 0,4 М NaOH и нагревали при температуре 100С. В жидкости определяли содержание общего белка и МДА с калибровкой на 1 г растворимого в щелочи белка.
Цель работы: оценить влияние перфторана на степень ишемии тканей и активации ПОЛ. Результаты исследования и обсуждение.
Проведенные исследования показали более выраженное нарастание массы лоскутов при экспозиции в 0,9% растворе натрия хлорида по сравнению с перфгораном (рис.13). В течение экспозиции масса лоскутов в обеих группах достоверно превышала таковую до экспозиции. В итоге она достоверно превышала исходную массу на 44,3 % в контроле при сохранении лоскута в физиологическом растворе (р 0,001), и на 19,6 % массу лоскута, сохраняемого в перфторане (р 0,01). Следовательно, у лоскутов, сохраняемых в перфтора-не, выраженность отека существенно меньше, чем при сохранении в физиологическом растворе, являющегося обычно используемого для сохранения лоскутов перед трансплантацией.
Экспериментальное изучение влияния перфторана на параметры центральной гемодинамики при внутривенном введении перфторана Клинические исследования
Цель исследования: изучить гемодинамические эффекты перфторана и его компонентов при внутривенном введении у спонтанно гипертензивных крыс генетической линии «SHR-SP». Исследование выполнено на базе Клиники животных Филиала Института Биоорганической химии РАН (Пущино) под руководством к.б.н. А.Н. Мурашова при участии Е.А.Туховской. Спонтанно гипертензивные крысы были выбраны в качестве объекта в связи с тем, что они намного чувствительнее, чем крысы линии Wistar к изменению объема циркулирующей крови и любым оперативным вмешательствам. Кроме того, у части больных, которым планировалось введение перфторана с лечебной целью, было обнаружено значимое и стабильное повышение артериального давления. Это послужило основанием для выбора в качестве патофизиологической модели животных, имеющих генетическую предрасположенность к гипертензии.
Материалы и методы. Эксперимент выполнен на 31 самце крыс линии «SHR-SP» в возрасте 17 месяцев и старше. Животных распределяли по группам рандомизацией, используя в качестве критериев начальный вес тела, возраст и уровень артериального давления крыс. Все эти показатели были одинаковыми в каждой группе (таблица 15).
Ход операции. Крысу фиксировали на спине. Наркоз: калипсол внут-рибрюшинно в дозе 150 мг/кг веса тела. Разрезом в паховой области выделяли бедренную артерию и бедренную вену и брали их на дистальную и проксимальную лигатуры. Проксимальной лигатурой сосуд перевязывали и натягивали с помощью зажима. Свободным узлом дистальной лигатуры также с помощью зажима временно прекращали доступ крови в выделенный участок сосуда. Между лигатурами делался разрез сосудистой стенки, в который вставлялся кончик полиэтиленового катетера (РЕ-10), длиной 5 см (артериальный) и 2 см (венозный). При ослабленной дистальной лигатуре катетер проводили в аорту или в полую вену и подвязывался к сосуду лигатурами. Катетер предварительно был заполнен физиологическим раствором и до эксперимента герметично закрыт. Периферические концы катетеров проводили под кожей в межлопаточную область, где фиксировали.
Исследование выполняли через 24 часа после вживления катетеров. Регистрировали гемодинамические параметры в исходном состоянии в течение 5 мин., затем вводили исследуемые растворы в объеме 10% от объема циркулирующей крови (ОЦК), не прекращая регистрации параметров на протяжении 60 мин. Эксперименты выполняли не сразу на всех животных, а по 4 в день, по одному животному из каждой группы.
Использовался перфторан производства ОАО НПО «Перфторан», проксанол и солевой раствор ( Пущино), дата выпуска 25.10.04 г. ВФС 42-2576 Проксанол разводился солевым раствором до концентрации 2,9%о (1 часть 20% проксанола и 6 частей солевого раствора). При таком разведении концентрация проксанола в растворе равна, концентрации свободного проксанола (не участвующего в образовании адсорбционного слоя частиц эмульсии) в перфторане. Разведенный препарат разливался по пробиркам и хранился при температуре -20 С. Растворы вводились без предварительного забора крови в дозе 10% ОЦК Объемы введения растворов тестируемого и контрольных препаратов рассчитывали для каждого животного в соответствии с его весом тела и вводили внутривенно через катетер в течение 3 минут.
Артериальное давление (АД) измеряли электроманометром (регистрирующим 16 точек в секунду). Аналоговые сигналы оцифровывались с частотой 512 Гц с помощью 16-битового аналого-цифрового преобразователя. Обработку кривой АД проводили с помощью оригинальной программы, рассчитывая среднее АД и частоту сердечных сокращений. Результаты и обсуждение Результаты динамической регистрации АД и ЧСС у животных разных групп приведены в таблице 16 и на рис. 28,29
Как следует из представленных в таблице данных, после введения проксанола и перфторана у животных отмечена тенденция к повышению АД через 60 минут. В то же время ЧСС имела разнонаправленную динамику: в 3 группе животных на фоне введения проксанола отмечена тенденция к увеличению ЧСС по сравнению с группой интактных животных - 108,3% (р 0,05), а в 4 группе на фоне введения перфторана к урежению - 96,8%о (р 0,05).
