Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Биологическая активность селеноорганических соединений и ММ-волн КВЧ-диапазона 11
1.2. Современные представления о патогенезе заболеваний пародонта . 19
1.3. Биохимические исследования ротовой жидкости при диагностике физиологических и патологических состояний организма 27
Глава 2. Материалы и методы исследования 35
2.1. Объекты исследования 35
2.2. Биохимические методы исследования 35
2.3. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты 37
2.4. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот 38
2.5. Определения кинетических параметров лактатдегидрогеназы 39
2.6. Характеристика обследованных больных 43
2.7. Клинические и инструментальные методы исследования 44
2.8. Статистические методы 49
Глава 3. Результаты клинического обследовнаия и биохимические показатели ротовой жидкости больных пародонтитом 51
3.1. Состояние стоматологического статуса у пациентов с пародонтитом 51
3.2. Биохимические показатели ротовой жидкости у больных пародонтитом 52
Глава 4. Изучение активности ферментов и метаболитов ротовой жидкости у пациентов с интактным пародонтом и у больных пародонтитом различной степени тяжести в присутствии препарата ДАФС-25 56
4.1. Изменение активности ферментов ротовой жидкости у пациентов с интактным пародонтом в присутствии селеносодержащих препаратов 56
4.2. Результаты исследования ротовой жидкости у больных пародонтитом различной степени тяжести в присутствии ДМФА и ДАФС-25 59
4.3. Исследование концентрации малонового диальдегида и диеновых конъюгатов у больных пародонтитом с различной степенью тяжести 63
Глава 5. Изменение активности лактатдегидрогеназы ротовой жидкости в присутствии метаболитов и селеноорганического препарата (ДАФС-25) и при воздействии КВЧ-излучения 70
5.1. Изменение активности ферментов ротовой жидкости у пациентов с интактным пародонтом 70
5.2. Изменение активности фермента лактатдегидрогеназы в ротовой жидкости у больных пародонтитом (in vitro) 85
5.3. Определение активности лактатдегидрогеназы при облучении ротовой жидкости в КВЧ-диапазоне. 90
Заключение 92
Выводы 98
Практические рекомендации 99
Список литературы 100
- Современные представления о патогенезе заболеваний пародонта
- Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты
- Биохимические показатели ротовой жидкости у больных пародонтитом
- Результаты исследования ротовой жидкости у больных пародонтитом различной степени тяжести в присутствии ДМФА и ДАФС-25
Введение к работе
Актуальность проблемы. Распространенность воспалительных заболеваний пародонта среди взрослого и даже детского (уже с 12 лет) населения Российской Федерации остается довольно высокой, несмотря на большое количество проводимых научных исследований и предложенных методов лечения. Одним из ведущих факторов в этиологии и патогенезе заболеваний пародонта является микробная флора полости рта. Согласно современным представлениям, бактериальная агрессия, являясь одним из инициальных факторов в развитии заболеваний пародонта, вызывает различные формы поражения пародонтального комплекса в зависимости от характера и интенсивности спровоцированной ею ответной реакции организма. Полученные данные о роли анаэробной и смешанной бактериальной флоры в развитии заболеваний пародонта, позволили выделить группу так называемых пародонтопатогенных бактерий. Генетическая стратегия изменчивости микроорганизмов постоянно приводит к возникновению в микробных популяциях вариантов стойких к химиотерапевтическим препаратам, в том числе к антибиотикам.
Микроорганизмы поражают в первую очередь мембранный аппарат клеток слизистой оболоч1си полости рта. Необходимо отметить, что в условиях гипоксии и ацидоза резко усиливаются процессы перекисного окисления липидов мембран клеток слизистой оболочки, что, в свою очередь, будет приводить к накоплению в ротовой жидкости продуктов перекисного окисления липидов, которые будут понижать активность амилазы слюны. Поэтому поиск препаратов, обладающих антиоксидантным и мембранопротекторным действием является одним из актуальных вопросов клинической медицины и стоматологии.
Широкое применение в клинической практике излучений в КВЧ-диапазоне для улучшения реологии крови и увеличения проницаемости стенки сосудов для питательных веществ и кислорода (Шабогина А.А., 2006) предполагает более углубленное изучение воздействия подобных физических полей на ферменты и метаболиты биологических жидкостей, в том числе, и на ротовую жидкость у больных пародонтитом.
в последнее время интенсивно изучается роль селена в биохимических процессах, протекающих в живых организмах, поскольку он является необходимым ультрамикроэлементом, входящим в состав ряда ферментов (Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко А. и др., 2002).
Общеизвестна связь между селенистой недостаточностью и авитаминозом Е. В последние годы найдена взаимосвязь в организмах человека и животных между селеном и другими микроэлементами такими как: цинк, йод, медь и др..
Установлено, что селен влияет на эффективность действия не только витамина Е но и многих других: А , Вб, С и др. (Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко А. и др., 2002; Arbur J.R., 1994).
Наиболее значимая биологическая функция селена в организме человека, животных и птиц состоит в обеспечении эффективной работы защитной антиоксидантной системы организма. Он участвует в функционировании глутатионпероксидазы, разрушающей перекись водорода и липоперекиси и тем самым предохраняет клеточные мембраны от окислительной деструкции (Chu F.-F., Doroshow J.H., Esworthy R.S., 1993; Gamble S.C, Wiseman A., Goldfarb P.S., 1997; Колесниченко Л.С., Кулинский В.И., 1989).
Селен является необходимой составной частью ряда ферментов таких как: формиатдегидратаза, глицинредуктаза, глутатионпероксидаза. Известно, что селен участвует в формировании некоторых белков, в частности белка участвующего в переносе электрона между флавопротеидами и системой цитохромов (Chu F.-F., Doroshow J.H., Esworthy R.S., 1993; Sies H., 1993; Burk R.F., Hill K.E., 1993).
Несомненный интерес к селенорганическим соединениям обусловлен так же применением различных селенсодержащих препаратов в качестве пищевых добавок. Следует отметить, что большинство известных селеноорганических соединений токсичны. Неорганические соединения селена, как правило, еще более токсичны. Поэтому одним из направлений органического синтеза является поиск более активных и менее токсичных соединений, таких как соли селенопирилия, селеноксантилия, селенопираны и другие.
В то же время, остаются малоизученными биохимические механизмы действия селеноорганических препаратов на ферменты и метаболиты ротовой жидкости при патологии пародонта (пародонтит различной степени тяжести), что весьма актуально, так как может способствовать выбору наиболее оптимального соединения из ряда селеноорганических препаратов для лечения и профилактики воспалительных процессов в тканях пародонта.
Цель исследования Целью настоящей работы является выявление клинико-лабораторных критериев для оценки степени тяжести повреждения пародонта и влияние физикохимических факторов на ферменты и метаболиты ротовой жидкости больных парод онтитом.
Задачи исследования
1. Определить активность ферментов и концентрацию метаболитов в ротовой жидкости у пациентов с пародонтитом различной степени тяжести.
2. Изучить характер изменений в концентрации метаболитов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида и диеновых конъюгатов - в ротовой жидкости у пациентов с пародонтитом различной степени тяжести в присутствии селеноорганического препарата ДАФС-25.
3. Исследовать влияние селеноорганического препарата ДАФС-25 на активность лактатдегидрогеназы ротовой жидкости у лиц с интактным пародонтом и у лиц с пародонтитом различной степени тяжести in vitro.
4. Оценить изменение активности лактатдегидрогеназы при использовании селеноорганического препарата ДАФС-25 у больных пародонтитом in vitro в присутствии аминокислот аргинина и гистидина.
5. Определить активность фермента лактатдегидрогеназы при облучении ротовой жидкости у больных пародонтитом излзд1ением КВЧ-диапазона in vitro.
Научная новизна В результате проведенной работы установлено изменение активности ферментов и концентрации метаболитов, включая метаболиты перекисного окисления липидов, при различной степени повреждения пародонта.
Исследовано взаимодействие селеноорганического препарата ДАФС-25 с ферментами, содержащимися в ротовой жидкости у лиц с интактным пародонтом in vitro. Обнаружено изменение активности ферментов, принимающих участие в углеводном обмене. Изучена активность ферментов ротовой жидкости у больных с пародонтитом различной степени тяжести в присутствии препарата ДАФС-25.
Выявлены биохимические критерии для селеноорганического препарата ДАФС-25, при которых данный препарат может увеличить ферментативную активность ДДГ. Показано, что при действии излучения в КВЧ-диапазоне происходит увеличение активности фермента ДДГ ротовой жидкости при интактном пародонте и при пародонтитах различной степени тяжести.
Практическая ценность В результате проведенных исследований выявлены специфические особенности в изменении активности ферментов ротовой полости при наличии воспалительного процесса в пародонте. Можно предположить, что изученные биохимические механизмы действия ДАФС-25 могут служить в дальнейшем критерием выбора наиболее оптимального селеноорганического препарата, обладающего выраженными антиоксидантными мембранопротекторными свойствами, что позволит существенно улучшить результаты лечения данной категории больных. Использование аминокислот (в случае проведенных исследований - аргинина и гистидина) в виде биологически активных добавок, особенно в сочетании с препаратами, содержащими селен, должно оцениваться с позиции возможной активации лактатдегидрогеназы в ротовой жидкости, что имеет важное значение в лечении больных с пародонтитом.
Внедрение результатов исследования Результаты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс на кафедре биохимии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава» и МУЗ «Стоматологическая поликлиника № 6» г. Саратова.
Апробация работы Основные положения диссертации рассмотрены и обсуждены на IX международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2008); VII Межвузовской конференции с международным участием «Обмен веществ при адаптации и повреждении» (Ростов-на-Дону, 2008); на межрегиональной научнопрактической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы» (Саратов, 2008); на 69-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Росздрава» «Молодые ученые - здравоохранению региона» (Саратов, 2008).
Материалы диссертации обсуждены и одобрены на заседании кафедры биохимии и кафедры общей, биоорганической и фармацевтической химии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава».
По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 2 в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ. Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 113 страницах машинописного текста, включает 1 таблицу и иллюстрирована 36 рисунками. Библиография включает 147 источников, в том числе 79 отечественных и 68 зарубежных авторов.
Основные положения, выносимые на защиту
1. При пародонтитах происходит изменение активности ферментов и концентрации метаболитов в ротовой жидкости. Селеноорганический препарат ДАФС-25 взаимодействует с ферментами ротовой жидкости, ДАФС-25 уменьшает концентрацию малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в ротовой жидкости.
2. Препарат ДАФС-25 может в присутствии аминокислот аргинина и гистидина увеличивать ферментативную активность ЛДГ.
3. Активность фермента ЛДГ возрастает при облучении ротовой жидкости действием ЬСВЧ-диапазона на частоте 65 ГГц.
Современные представления о патогенезе заболеваний пародонта
Несмотря на многочисленные экспериментальные исследования и использование профилактических гигиенических мероприятий, частота воспалительных заболеваний пародонта не уменьшается, а по некоторым данным даже увеличивается. В связи с этим большое внимание уделяют изучению биохимических и патохимических изменений в пародонте [Лукиных Л.М., 2001; Максимовский Ю.М., Митрохин А.В., 2004; Лебедев К.А. и др., 2006; Gjermo Р., 1998; Guggenheim В. et al., 2001].
Актуальность проблемы обусловлена тем, что воспалительные заболевания пародонта, наряду с кариесом, являются главной причиной потери зубов [Боровский Е.В. и др., 1988; Данилевский Н.Ф. и др., 1993].
Бактериальная флора рассматривается как первичный фактор, вызывающий заболевания пародонта.
В настоящее время, к пародонтопатогенным микроорганизмам (до 10 типов), комбинации которых оказывают выраженное повреждающее действие на околозубные ткани, относятся следующие: Actinobacillus actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum, Eikenella corrodens [Улитовский СБ. и др., 1999, 2000; Грохольский А.П. и др., 2000; Дунязина Т.М. и др., 2001; Сивовол СИ., 2001; Asikainen S. et al., 1996; Armitage G.C., 1999; Socransky S.S. et al., 2003].
По результатам исследований оказалось, что одни и те же виды бактерий в различных географических регионах проявляют различную патогенность [GjermoP., 1998].
Штамм A. actinomycetemcomitans, выделенный у пациентов с пародонтитом африканского происхождения, продуцирует в больших количествах лейкотоксин и, соответственно, высоко патогенен. У пациентов на европейском континенте с пародонтитом обычно высевается другой серотип A. Actinomycetemcomitans, и он не обнаруживается у пациентов из Кореи и Японии [Sanz М. et al., 2004]. По мнению ряда авторов, микроорганизмы обладают различными биологическими характеристиками, различной степенью патогенности и их строение генетически детерминировано [Craig R.G. et al., 2001; Kingman A., Albadar J.M., 2002; Haffajee A.D. etal.,2004].
Заболевания пародонта развиваются при сочетании действия местных причин и эндогенных факторов на фоне изменения реактивности организма [Кирсанов А.И., Горбачева И.А., 1999; Цепов Л.М. и др., 2005; Gillum R.F., 1994; Castellote J. et al., 2003; Slots J., 2004].
К местным патогенетическим факторам можно отнести следующие: нарушение биомеханики зубочелюстной системы, связанные с анатомическими отклонениями, отсутствием адекватной нагрузки на пародонт, наличием окклюзионной травмы [Логинова Н.К., Воложин А.И., 1995; Григорьян А.С и др., 2004].
По данным зарубежных авторов среди общесоматических факторов риска развития пародонтита выделяют стрессовые воздействия, эстрогенную недостаточность, физиологические гормональные перестройки в организме [Aimano J., Aimano А., 1996; Beck J.D., Slade G.D., 1996; Kinane D.F., Hodge PJ., 2001; Needleman H.L., 2001]. Развитие воспалительного поражения пародонта происходит при нарушении неироэндокриннои регуляции и психосоматических взаимоотношении [Цепов Л.М., Лобзенев С.Н., 1998; Giannopoulou C.et al., 2003].
Дисбаланс макро и микроэлементов, изменение активности ферментных систем в биологических жидкостях также способствует повышению восприимчивости тканей пародонта к инфекции. Т. Kuraner и соавт. в 1991 г. установили недостаточное содержание Са, Mg и Zn в слюне при воспалительных заболеваниях пародонта. Ряд авторов обнаружили повышенное содержание железа в слюне и в зубном налете при воспалении в тканях пародонта, что сопровождается быстрым ростом микрофлоры [Прохорова О.В., Кучумова У.Д., 1999].
Пусковым механизмом, инициирующим воспаление в пародонте с поражением гистогематического барьера, является нарушение лейкоцитарно-тромбоцитарно-эндотелиального баланса [Канканян А.П., Леонтьев В.К., 1998; Безрукова А.П., 1999]. Особая роль в инициировании процесса первичного повреждения в тканях пародонта принадлежит эндотоксинам и ферментам, выделяемым патогенными бактериями [Bergstrom J., 2004; Lee J.Y. et al., 2006].
В результате действия бактериальной гиалуронидазы происходит деполимеризация межклеточного вещества эпителия и соединительной ткани, вакуолизация фибробластов, резкое расширение микрососудов и лейкоцитарная инфильтрация. Патогенетическое действие гиалуронидазы усиливает действие коллагеназы, нейраминидазы, эластазы, что приводит к развитию деструктивных процессов в тканях пародонта [Socransky S.S. et al., 1998].
Пародонтопатогенные виды микроорганизмов, обладая антигенными свойствами, оказывают сенсибилизирующее действие на ткани пародонта, активизируют кинины и систему комплемента, что вызывает ответные иммунные реакции клеточного и гуморального типов [Орехова Л.Ю., 1998; Nishihara Т. et al., 2004].
Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты
Принцип метода: при 100С в кислой среде малоновый диальдегид реагирует с 2-тиобарбитуровой кислотой, образуя окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при 532 нм. Молярный коэффициент экстинкции этого комплекса - є = 1,56x105 см М"1. Реактивы: 0,025 М трис-HCl буфер (рН = 7,4),содержащий 0,175 М хлорида калия; 17% раствор трихлоруксусной кислоты; 0,8% раствор 2-тиобарбитуровой кислоты. Ход определения: Подготовленный биологический материал в буферном растворе по 2,0 мл помещают в центрифужные пробирки, осаждают белок добавлением 1 мл 17% раствор трихлоруксусной кислоты. Образующийся осадок отделяют центрифугированием в течение 10 минут при 400g (центрифуга ЦУМ-1). Надосадочную жидкость по 2 мл переносят в пробирки, добавляют по 1 мл 0,8% раствора тиобарбитуровой кислоты и помещают пробы на 10 минут в кипящую водяную баню. В качестве контроля используют пробы, содержащие вместо надосадочной жидкости буферный раствор. После развития розовой окраски пробы охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность при 532 нм. Принцип метода: В ходе перекисного окисления на стадии образования свободных радикалов в молекулах полиненасыщенных высших жирных кислот возникает система сопряженных двойных связей, что сопровождается появлением нового максимума в спектре поглощения - А, = 233 нм, є = 2,2х10"5 М хсм"1. Реактивы: гептан-изопропаноловая смесь (1:1); раствор НС1 (рН = 2,5); гептан; 0,025 М трис-HCl буфер (рН = 7,4), содержащий 0,175 М хлорид калия. Ход определения: Подготовленный биологический материал в буферном растворе по 2,0 мл помещают в центрифужные пробирки, добавляют 4 мл гептан-изопропаноловой смеси и встряхивают 10 минут. Затем в пробу добавляют 1 мл раствора HCl и 2,0 мл гептана, интенсивно встряхивают. После центрифугирования в течение 10 минут при 400g (центрифуга ЦУМ-1), отбирают гептановый слой, измеряют оптическую плотность при 233 нм в кварцевых кюветах против контрольной пробы. В качестве контроля используют пробы, содержащие вместо биологического материала буферный раствор. 1. Необходимое оборудование: спектрофотометр "Specord UV VIS М-40" (Германия). 2. Необходимые реактивы: Реактив А. 1/15 М фосфатный буфер: 1) Na2HP04: 937,2 мг + 100 мл Н20 бидистиллят. 2) NaH2P04: 792 мг + 100 мл Н20 бидистиллят. Рабочий раствор: мл раствора NaH2P04 + 80 мл раствора Na2HP04 (довести рН реактива А до рН =7,4). Реактив Б. Пируват натрия: 4 мг (СзНзС а) + 1 мл фосфатного буфера. Реактив В. НАДН+ НҐ: 4 мг НАДН + Н+ +1,5 мл фосфатного буфера. Реактив Г. Лактатдегидрогеназа: 2 мкл ЛДГ + 0,2 мл фосфатного буфера. В работе использовали препараты фирмы "Merck" (Германия). Реактив Д. Раствор соединения I: 2 мг соединения 1+100 мкл бидистиллят. Реактив Е. Раствор соединения II: 13,6 мг соединения II + 100 мкл ДМФА. Реактив Д готовили при нагревании до 70о С. Реактив Ж. ДМФА. 2.4. Ход определения. Для определения активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) регистрировали спектры поглощения характерные для перехода: В работе использовали две кюветы: кювету определения и кювету сравнения. В кювету определения последовательно вносили 3000 мкл реактива А, 2 мкл реактива Д-Е, 150 мкл реактива Б-В, 3 мкл реактива Г. В кювету сравнения 3000 мкл реактива А, 2 мкл реактива Д-Е. Таким образом, происходило уравнивание реакционной смеси по соединениям I-II, благодаря чему прослеживали ход ферментативной реакции по изменению спектров НАДН + ВҐ. Спектры регистрировались после добавления фосфатного буфера и НАДН + Н4" в кювету на спектрофотометре «Specord UV VIS» в диапазоне волн от 220 до 400 нм. Для определения интенсивности ЛДГ и прослеживания кинетики данного процесса в кювету определения добавляли последовательно соединение I-II (раствор в кювете сравнения уравнивали добавлением в кювету сравнения соединения I-II) и НАДН + ЕҐ далее самописец спектрофотометра устанавливали на отметку 29,5, что соответствовало длине волны 340 нм. Затем в кювету определения добавляли пируват натрия (не поглощает при А,=340 нм) и ЛДГ. Сразу после добавления ЛДГ, засекли время с помощью секундомера, каждые 10 секунд в течение минуты, затем каждую минуту до полного затухания реакции опускали самописец на бумагу, отмечая точки, тем самым, прослеживали ход реакции (рис. 3). 220 340 Рис. 3. Спектры поглощения НАД4" и НАДН+ЕҐ" Действие соединений I и II на активность ЛДГ определяли по уменьшению скорости реакции и изменению константы Михаэлиса (Кт). Для определения Кт вычисляли скорость реакции при различных концентрациях субстрата-пирувата натрия. Для этого готовили разведение пирувата натрия в концентрациях от 3,64х10-2 до 2,84 1 (Г4 М/л, для выбора рабочей концентрации. Затем строили график зависимости скорости ферментативной реакции (V, М/лхс) от концентрации субстрата (С, М/л пирувата натрия). Кт численно равна концентрации пирувата натрия, при которой скорость ферментативной реакции равна половине от максимальной (рис. 4).
Биохимические показатели ротовой жидкости у больных пародонтитом
Целью настоящего раздела работы является установление характера изменений клинико-биохимических показателей ротовой жидкости при пародонтите различных степеней тяжести. Исследования проведены в ММУ стоматологическая поликлиника № 6. Обследовано 60 человека, которые были распределены в четыре группы: 1 - пациенты с пародонтитом I степени (15 человек), 2 - пациенты с пародонтитом II степени (15 человек), 3 - пациенты с пародонтитом III степени (15 человек), 4 - пациенты с интактным пародонтом (15 человек) - группа сравнения. В результате изучения ротовой жидкости лиц с интактным пародонтом и пациентов с пародонтитом различной степени тяжести установлено, что при поражении пародонта отмечается увеличение активности лактатдегидрогеназы и щелочной фосфатазы на фоне резкого снижения активности сс-амилазы, что отражено в таблице 1. Вероятно, это происходит, с одной стороны, в результате активизации пародонтопатогенной бактериальной микрофлоры, содержащей большое количество ЛДГ и ЩФ. С другой стороны, увеличение активности ЛДГ и ЩФ может быть обусловлено разрушением тканей пародонта и выходом в ротовую жидкость данных ферментов из клеток соединительной ткани и клеток, участвующих в поддержании структуры зуба, - остеокластов и остеобластов. Необходимо отметить, что достоверное увеличение активности ЩФ при сопоставлении с группой сравнения наблюдается у пациентов с пародонтитом II и III степени. При пародонтите II степени тяжести активность ЩФ при сопоставлении с группой сравнения (16,50±0,44 ед/л) повышается в среднем до 25,00±1,24 ед/л, при развитии тяжелой формы пародонтита - до 36,43±2,38 ед/л. Напротив активность ЛДГ нарастает с момента инфицирования пародонта, высокая активность которой отмечается в слюне больных пародонтитом, начиная с I степени.
Существенных различий в увеличении активности ЛДГ при пародонтите I и II степени не выявлено: активность фермента (при сопоставлении с группой Р - достоверность различий при сравнении пародонтита различных степеней тяжести с группой сравнения. Р! - достоверность различий при сравнении пародонтита средней степени с пародонтитом легкой степени. Р2 - достоверность различий при сравнении пародонтита тяжелой степени с пародонтитом средней степени. Снижение активности амилазы обусловлено, по всей видимости, поражением секреторных клеток слюнных желез продуктами жизнедеятельности микроорганизмов. Анаэробные процессы, инициируемые бактериальными клетками, приводят к увеличению концентрации молочной кислоты в ротовой жидкости. В свою очередь, лактат является слабой кислотой и, следовательно, поставляет в раствор ионы водорода, которые закисляют ротовую жидкость, сдвигают рН в кислую сторону, что в свою очередь, приводит к снижению активности амилазы, поскольку известно, что активность амилазы проявляется при нейтральных и слабощелочных значениях рН (рН=6,8-7,2). Гипоферментемия амилазы наблюдается параллельно с возрастанием концентрации лактата в слюне при пародонтите II и III степеней. Активность амилазы при средней форме пародонтита (II степень) составляет 33,00±2,21 ед/л относительно группы сравнения (57,75±3,64 ед/л), при тяжелом пародонтите - только 21,29±1,71 ед/л. При этом концентрация лактата при сопоставлении с группой сравнения (0,31±0,08 ммоль/л) нарастает от 1,00±0,24 ммоль/л до 3,50±0,63 ммоль/л при пародонтите II и III степеней соответственно. В процессе эксперимента было оценено содержание глюкозы в слюне. Достоверное отклонение при сопоставлении с группой сравнения выявлено только в случае тяжелой бактериальной инфекции ротовой полости (III степень пародонтита) - концентрация глюкозы составила 8,82±0,33 ммоль/л. При тяжелой форме пародонтита отмечено высокое содержание в слюне кальция - 2,93±0,41 ммоль/л по отношению к группе сравнения (1,87±0,16 ммоль/л). Увеличение концентрации глюкозы и кальция при развитии тяжелой формы пародонтита, вероятно, объясняется цитолизом клеток соединительной ткани, а также разрушением остеокластов и остеобластов вследствие остеорезорбирующей агрессии патогенной микрофлоры. В процессе работы было обнаружено изменение содержания общего белка во всех группах с инфицированным пародонтом. Концентрация общего белка возрастала пропорционально тяжести пародонтита, и, вероятно, объясняется тем, что прирост общего белка имеет бактериальное и клеточное происхождение. Таким образом, биохимическое исследование ротовой жидкости у больных пародонтитом позволило установить, что наиболее выраженный характер изменений биохимических показателей наблюдается при пародонтитах II и III степеней. Активность пародонтопатогенных бактерий приводит к увеличению активности ЛДГ и ЩФ в 2,2 раза; подавляет активность амилазы в 1,7-2,7 раз, способствует увеличению концентрации лактата и общего белка. Ранняя диагностика заболеваний пародонта с помощью биохимических критериев слюны представляет определенные трудности, поскольку при наличии парод онтита I степени исследуемые показатели, за исключением ЛДГ и общего белка, находятся в пределах нормы.
Результаты исследования ротовой жидкости у больных пародонтитом различной степени тяжести в присутствии ДМФА и ДАФС-25
Определение малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в ротовой жидкости являются дополнительными критериями, отражающими процессы перекисного окисления липидов в организме. Процессы ПОЛ сдерживаются антиоксидантными системами, включая и фермент каталазу. Однако лечебные мероприятия, направленные на укрепление клеточных мембран, выступают на первый план наряду со специфическими лечебными приемами, которые применяются при лечении ПРД.
Поэтому наряду со специфическими маркерами: иммунологическими, серологическими, микробиологическими, биогенными аминами, следует обратиться к менее специфическим, но не менее значимым биохимическим маркерам. К таким, на наш взгляд, можно отнести уровень малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в ротовой жидкости.
Малоновый диальдегид отражает процессы перекисного окисления липидов, следовательно, является маркером на процессы распада клеточных биомембран. Поэтому общее нарастание или уменьшение концентрации этого метаболита в ротовой жидкости будет служить достаточно надежным критерием прогноза и течения заболевания, а также оценки эффективности проводимого лечения.
При исследовании концентрации малонового диальдегида у больных ПРД с различной степенью тяжести обнаружено изменение этого показателя в ротовой жидкости (рис. 14). При этом наибольшая концентрация МДА обнаруживается у больных с тяжелой степенью тяжести ПРД.
ДК также увеличиваются в плазме крови у больных ПРД с различной степенью тяжести (рис. 15).
При исследовании содержания малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в ротовой жидкости больных ПРД обращает на себя внимание тенденция увеличения концентрации МДА и ДК в ротовой жидкости при нарастании патологического процесса мягких тканей у больных ПРД. Можно утверждать, что концентрация МДА и ДК являются общими неспецифическими показателями, которые отражают выраженность патологического процесса. Действительно, при ПРД III степени тяжести обнаруживаются 12,3±0,4 мкМ/л малонового диальдегида и 2,4±0,11 мкМ/л диеновых конъюгатов, в то время как без осложнений эти показатели ниже: 7,15±0,23 мкМ/л для МДА и 1,83±0,13 мкМ/л для диеновых конъюгатов. В то же время, и МДА и ДК при всех видах ПРД были значительно выше при сопоставлении группой сравнения: 6,21±0,15 мкМ/л для МДА и 1,72±0,12 для ДК. При лечении обнаруживается снижение МДА и ДК в ротовой жидкости (рис. 15-20).
