Введение к работе
Актуальность работы. Электронная микроскопия широко приценяется в исследованиях структуры биологических макромолекул и их агрегатов. В последнее время разрешение этого метода улучшается за счет уменьшения, лоз облучения препарата в микроскопе. Поэтому изучение поведения обьекта в процессе его облучения электронами и зависимости получаемых изображений от методики препарирования чрезвычайно важно при электронно-микроскопических исследованиях. Уменьшение дозы облучения приводит к снижению контраста изображения и усложнений обработки полученных изображений. Большое число исследований оканчивается построением пространственной модели исследуемого объекта, что оказывает существенную помощь в понимании механизма его функционирования и инеет большое прикладное значение. Цель работы состоит в исследовании механизма негативного контрастирования биологических объектов, выяснении предельных возможностей этого метода по разрешению в- условиях малых доз облучения на принере структуры тонких кристаллов сериновой протеазы ( терми-тазы), а также в исследовании пространственной структуры кристаллических монослоев ( гидрогеназа из Tniocapsa roseopersicina) и трубчатых кристаллов (тирозин - фенол-лиаза из Citrobacter intei— midius) ферментов.
Научная новизна работы. Получены электронограммы высокого разрешения от мккрокрксталлов теркктазы. Обнаружена специфичность обычного негативного контрастирования, проявляющаяся при малых дозах облучения электронами. Показана возможность получения микро-кристаллов производных термитазы при смешанном контрастировании застворсм глюкозы с добавками солей тяжелых металлов. Исследована тространственная структура двух ферментов с использованием снимков : наклоном и изображений трубчатых кристаллов.
Практическая ценность роботы заключается в том, что было ис-:ледовано влияние облучения электронами на биологические объекты в шектронном микросьопе. По сериям снимков с наклоном препарата в гикроскопе определена симметрия кристаллических монослоев и иссле-ювана пространственная структура бактериальной гидрогеназы из hiocapsa roseopersicina. По изображениям трубчатых кристаллов актериальной тирозин - фенол-лиазы из Citrobacter intermidius осстановлена ее пространственная структура.
Апробация работы. Результаты работы докладывались на 10 Конг-ессе по электронной микроскопии (Гаага, 1982), на 5 конференции ирмы Филипс (Визеград, 1982), на 8-ой Европейской конференции по пектронной микроскопии (Будапешт, 1984), II Всесоюзном симпозиуме
по вычислительной томографии (Куйбышев, 1985), I Международной конференции по обработке изображений (Берлин, 1985), на конференция Скандинавских стран по электронной микроскопии (Упсала, 198Э), на Всесоюзных конференциях по электронной микроскопии (Сумы, 1982, Звенигород, 1986), на научных конкурсах ИК АН СССР.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 статей.
Объем работы. Диссертация состоит из введения, трех глав, включающих 15 разделов, и выводов. Ее объем 126 страниц, в которые входят 1 таблица, 30 рисунков х список литературы (191 наименование).
