Содержание к диссертации
Введение
1. Сведения литературы о патогенезе ,этиологии и фармакотерапии язвенной болезни желудка . 10
1.1. Современные сведения об этиологии и патогенезе язвенной болезни желудка 10
1.2. Принципы фармакотерапии язвенной болезни<желудка 19
1.3. Сведения литературы о софоре желтоватой 34
Глава 2. Материалы и методы исследования 39
Глава 3. Исследование специфической фармакологической активности сухого экстракта софоры желтоватой 46
3.1. Оценка острой токсичности сухого экстракта софоры желтоватой 46
3.2. Изучение противовоспалительной активности сухого экстракта софоры желтоватой 47
3.2.1. Антиэкссудативная активность при формалиновом отеке 47
3.2.2. Антиэкссудативная активность при декстрановом отеке 48
3.2.3. Антиэкссудативная активность при гистаминовом отеке 49
3.2.4. Влияние экстракта софоры на процессы альтерации и регенерации в очаге воспаления
3.2.5. Влияние экстракта софоры на пролиферативные процессы при воспалении 51
3.3. Изучение анальгезирующей активности экстракта софоры 52
3.4. Изучение антибактериальной активности экстракта софоры 53
3.5. Влияние экстракта софоры на секреторную активность желудка 68
3.6. Изучение иммуномодулирующей активности экстракта софоры 55
3.6.1. Влияние экстракта софоры на состояние клеточного звена иммунного ответа 55
3.6.2. Влияние экстракта софоры на состояние гуморального звена иммунного ответа 56
3.6.3. Влияние экстракта софоры на состояние макрофагального звена иммунного ответа 57
3.7. Изучение мембраностабилизирующей активности экстракта софоры 58
3.8. Влияние на дегрануляцию тканевых базофилов 61
3.9. Влияние экстракта софоры на интенсивность процессов свобод-норадикального окисления
3.9.1. Антирадикальная активность по отношению к супероксидным радикалам 62
3.9.2. Антирадикальная активность по отношению к NO радикалам 63
3.9.3. Влияние экстракта софоры на скорость накопления ТБК-активных продуктов 64
3.9.4. Влияние экстракта софоры на инактивацию Н2О2 65
3.9.5. Железосвязывающая активность экстракта софоры 66
Глава 4. Исследование фармакотерапевтическои эффективности экстракта софоры при экспериментальных повреждениях желудка 70
4.1. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при стресс-индуцированном повреждении желудка 68
4.2. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при повреждении желудка, индуцированного введением бутадиона 75
4.3. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при 84 «рефлюкс-гастрите»
Глава 5. Обсуждение результатов исследования 92"
Заключение 98"
Выводы і0ї
Список литературы
- Принципы фармакотерапии язвенной болезни<желудка
- Антиэкссудативная активность при формалиновом отеке
- Влияние экстракта софоры на состояние клеточного звена иммунного ответа
- Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при повреждении желудка, индуцированного введением бутадиона
Введение к работе
Актуальность темы. В общей структуре болезней одно из ведущих мест занимают заболевания желудочно-кишечного тракта и, в первую очередь, язвенная болезнь и гастриты. Несмотря на значительные успехи, достигнутые в лечении указанных заболеваний, в настоящее время наблюдается тенденция к росту заболеваемости среди населения в России и за рубежом (Бутов, 2007; Родина, Моисеева, 2011; Cavalcanti et al., 2006). Так, по данным статистических исследований в России в 2010 г. распространенность язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки составила 96 случаев на 1000 населения (Здоровье населения …, 2010), в высокоразвитых странах Европы и Америки число больных язвенной болезнью достигает 15% взрослого населения (Щербатых А.В. и соавт., 2005).
При этом, несмотря на использование высокоэффективных противоязвенных средств, развитие обострений и возникновение рецидивов наблюдается в 30-82 % случаев, осложненные формы язвенной болезни встречаются в 26-42 % случаев, а у 15-25 % больных существует проблема резистентности гастродуоденальных язв к фармакотерапевтическому воздействию (Щербатых и соавт., 2005; Куркин, 2006), почти у трети больных прием рекомендуемых препаратов сопровождается проявлением того или иного побочного действия (Емшанова и соавт., 2007). В этой связи актуальной проблемой остается разработка эффективных, не оказывающих побочного действия гастропротективных средств.
Одним из рациональных подходов к решению этой проблемы является применение средств растительного происхождения, имеющих ряд преимуществ перед химиопрепаратами: поливалентность действия, низкая токсичность, отсутствие негативных побочных эффектов при длительном приеме (Крылов, 2005; 2006).
Софора желтоватая Sophora flavescens Soland. (сем. Fabaceae) является ценным лекарственным растением, широко используемым в народной и традиционной медицине стран Дальневосточного региона (Растительные ресурсы России, 2010). В тибетской медицине софора желтоватая известна под названием «слэ-трэс» и является одним из наиболее часто используемых видов сырьях в комплексных средствах (Базарон, Асеева, 1984). Спектр использования этого растения достаточно широк, в том числе его применяют для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (Сакаева и соавт., 2001; Kang et al., 2000; Ko et al., 2000).
В Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН разработан способ получения сухого экстракта из корневищ и корней софоры желтоватой, обладающего гастропротективной активностью. Заявка на предполагаемое изобретение за № 1020300902914 от 25.08.2011 направлена в Роспатент.
Целью настоящего исследования явилось определение фармакологических свойств и фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта Sophora flavenses при повреждениях желудка в эксперименте, а также выявление возможных механизмов его гастропротективного действия.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
- определить фармакологические свойства сухого экстракта софоры желтоватой;
- оценить его фармакотерапевтическую эффективность при экспериментальных повреждениях желудка ;
- определить особенности механизма гастропротективного действия сухого экстракта софоры желтоватой.
Научная новизна. Работа представляет собой исследование фармакологических свойств и гастропротективного действия сухого экстракта, полученного впервые из корневищ софоры желтоватой. Установлено, что сухой экстракт софоры в экспериментально-терапевтических дозах обладает противовоспалительным действием: уменьшает выраженность экссудации, ускоряет регенерацию, а также стимулирует секреторную активность слизистой оболочки желудка, оказывает анальгетическое, антибактериальное и иммуномодулирующее действие, обладает мембраностабилизирующей активностью. Установлена выраженная фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при экспериментальных повреждениях желудка: стресс-индуцированном и лекарственном ульцерогенезе, а также при «рефлюкс-гастрите». Показано, что курсовое введение экстракта софоры в экспериментально-терапевтических дозах препятствует развитию глубоких деструкций слизистой оболочки желудка, способствует сохранению его кислото - и ферментообразующих функций, ускоряет регенерацию тканей. Молекулярно-клеточным механизмом гастропротективного действия сухого экстракта софоры желтоватой является его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления, повышать потенциал эндогенной антиоксидантной системы организма и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток при повреждении желудка различной этиологии.
Практическое значение. Полученные данные о фармакологических свойствах и фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта софоры желтоватой при повреждениях слизистой оболочки желудка оформлены в виде заявки на предполагаемое изобретение «Способ получения сухого экстракта, обладающего гастропротективными свойствами». Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет».
Положения, выносимые на защиту:
1. сухой экстракт софоры желтоватой обладает противовоспалительным, иммуномодулирующим, анальгетическим, антибактериальным действием, стимулирует секреторную активность слизистой желудка, обладает мембраностабилизирующими свойствами;
2. испытуемое средство оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при экспериментальных повреждениях желудка, препятствуя развитию дистрофических и некротических изменений и способствуя функциональной состоятельности слизистой желудка;
3. механизмы антиульцерогенного действия экстракта софоры связаны с наличием базисной мембраностабилизирующей активности, обусловленной ингибированием процессов свободнорадикального окисления, а также его выраженными иммуномодулирующими свойствами.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.
Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: III международной научной конференции «Традиционная медицина: современное состояние и перспективы развития» (г. Улан-Удэ, 2008 г.); межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета БГУ (г. Улан-Удэ, 2009 г.); научно-практической конференции, посвященной 110-летию НУЗ ОКБ на ст. Улан-Удэ (г. Улан-Удэ, 2010 г.); 5 Международной конференции «Рresent situation and future development of Mongolian traditional medicine» (Ulaanbaatar, 2011).
Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 239 источников: 177 отечественных и 89 зарубежных авторов. Работа изложена на 117 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 27 таблицами.
Принципы фармакотерапии язвенной болезни<желудка
Вследствие полиэтиологичпости язвенной болезни фармакотерапия заболевания включает различные группы лекарственных средств, действие которых направлено на основные звенья патогенеза язвообразования. Современные терапевтические схемы включают антациды, блокаторы Н2-рецепторов и протонной помпы, антибиотики, антихеликобактерные средства и др. (Васильев, 2004, 2005, 2007). На сегодняшний день, очевидно, что хсликобактерная теория ульцерогенеза не решила в полной мере вопросы профилактического и противорецидивного лечения данного заболевания. Высокая частота рецидивов и осложнений при терапии язвенной болезни актуализирует необходимость создания препаратов, направленных на регенерацию язвенного дефекта, нормализующих секреторную и моторно-эвакуаторную функции желудочно-кишечного-тракта, повышающих защитные свойства слизи и, кроме того, не обладающих побочными эффектами, не вызывающих привыкания и экономически доступных для большинства пациентов.
Современная фармакотерапия язвенной болезни выделяет ряд основных звеньев патогенеза, на которые должны быть направлены соответствующие фармакологические средства. Такими звеньями являются следующие: нарушение гипоталамических взаимодействий и нервной трофики га-стродуоденальной зоны с преобладанием парасимпатической импульсации, дуоденогастральный рефлюкс, обратная диффузия ионов водорода, замедленное или ускоренное опорожнение желудка, повышение массы париетальных клеток и усиление функции гастриноцитов, увеличение активности агрессивных факторов в полости желудка,(кислотная продукция желудка, про-теолитическая активность желудочного сока), снижение продукции защитных факторов в желудке, белков слизи и факторов местного иммунитета, нарушение микроциркуляции в СОЖ, гипоксия гастродуоденальной зоны, снижение продукции гастроинтестинальных гормонов, обсемененость Helicobacter pylori. (Циммерман и соавт., 1998; Шептулин, 2000; Махакова и соавт., 2001; Гуменюк и соавт., 2001; Хомерики и соавт., 2001; Гриневич и соавт., 2002; Шептулин, 2004; Каратеев и соавт., 2005).
Вместе с этим, по признанию многих исследователей, традиционная фармакотерапия язвенной болезни, основанная на воздействии на основные патогенетические звенья заболевания, во многом остается несовершенной (Шептулин, 2004; Каратеев.и соавт., 2005; Крылова, 2006). Совершенствование лекарственной терапии язвенной болезни осуществляется за счет внедрения в терапию указанной патологии новых эффективных средств (Циммерман и соавт., 1998; Калинин и соавт., 2000; Лапина, 2002; Орзиев и соавт., 2003). В настоящее время для фармакотерапии язвенной болезни применяется более 500 лекарственных средств (Циммерман, 2000; Шептулин, 2004). Все лекарственные препараты можно разделить на нексколько групп: Н2 — блокаторы, ингибиторы протонной помпы; антихеликобактерная терапия; препараты местного защитного действия (цитопротекторы, репаран-ты);препараты, воздействующие на нейрогуморальную регуляцию (психотропные средства, регуляторы моторно-эвакуаторной функции - прокинети-ки, гастроинтестинальные гормоны).
Антацидные препараты были известны еще в глубокой древности. Эта группа лекарств, которые уменьшают кислотность желудочного содержимого за счет химического взаимодействия с НСІ в полости желудка. Антациды не относятся к истинно антисекреторным средствам, но благодаря выраженному влиянию на кислотнопептическую активность желудочного содержимого они не потеряли своего значения в терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта. Традиционно в этой группе принято выделять 2 основных вида: - всасывающиеся антациды (гидрокарбонат натрия, карбонат кальция, окись магния); - невсасывающиеся (гидроокись алюминия, фосфат алюминия, гидроокись магния, трисиликат магния).
Действие всасывающихся антацидов определяется химической реакцией нейтрализации HCI желудочного сока, что дает быстрый, но весьма кратковременный эффект. Образующаяся при нейтрализации углекислота вызывает отрыжку и вздутие живота (Начатой, 2000; Ивашкин и соавт., 2002; Ох-лобыстин, 2002; DeCross et al., 1994). Прием всасывающихся антацидов, прежде всего тех, в состав которых входят препараты кальция, может приводить к возникновению, так называемого, феномена «рикошета», когда после приема лекарства вторично повышается выработка HCI (Ивашкин и соавт., 2002). Использование антацидных препаратов, содержащих соединения натрия, вызывает задержку жидкости в организме. В результате у пожилых людей могут появляться отеки, повышаться артериальное давление (Лапина, 2002; Михайлов, 2002).
В настоящее время предпочтение отдается невсасывающимся антаци-дам, которые представляют собой относительно нерастворимые соли слабых оснований (Лапина и соавт., 2001; Охлобыстин, 2002). Эти препараты обладают не только выраженным кислотонейтрализугощим действием, но и цито-протективным, репаративным, обезболивающим и прокинетическим эффектами, имеют минимальные побочные проявления и не вызывают гиперсекреции после их отмены (Лапина Т.Л., 2002; Маев и соавт., 2003; Allescher et al., 2001; Rodriguez-Stanley et al., 1999). Основным компонентом невсасываю-щихся антацидов является гидроокись алюминия и магния.
Такие препараты, магния и/или алюминия трисиликат (Машковский, 2002), гидроокись алюминия (Ивашкин и соавт., 2002), реагирует с HCI с образованием соединений, вступающим в реакцию с секретом кишечника с образованием нерастворимых солей. Высвобождающийся хлор реабсорбирует-ся, но кислотно-основное равновесие не нарушается. Он обладает хорошими адсорбционными свойствами, тормозя эвакуацию пищи из желудка и его моторику, в результате чего появляется склонность к запорам. При комбиниро вании с препаратами магния этот эффект нивелируется. У препаратов алюминия особенно отчетливо выражено цитопротективное действие.
В последние годы в состав антацидных препаратов включают вещества, адсорбирующие газ в просвете желудочно-кишечного тракта - симетикон или диметикон (Маев, 2002; Машковский, 2002) Эффект невсасывающихся антацидов наступает не столь быстро, но оказывается гораздо более продолжительным. После приема невсасывающихся антоцидов не возникает сильной отрыжки и. вздутия живота. Эти препараты не приводят к возникновению алкалоза, не вызывают феномен «рикошета». В настоящее время, широко используется при язвенной болезни алюминиево-магниевые антациды I (фосфалюгель) и II (маалокс) поколений (Харченко, 1993; Дегтярева и соавт., 1995; Машковский, 2002). Наиболее эффективным препаратом, используемым при язвенной болезни, является алю-миниево-магниевый антацид с алгиновой кислотой. III поколения - таполкан (таппал). Помимо антацидного эффекта за счет алгиновой кислоты обеспечивается мощное антипептическое действие. Выраженное цитопротективное действие на слизистую желудка оказывает антацидный и антипептический препарат Де-нол — коллоидный субцитрат висмута (Исаков, 2003; Каратеев и соавт., 2005). Сложная органическая соль висмута не растворяется в пищеварительных соках и плотно обволакивает эрозивно-язвенную поверхность СОЖ, образуя защитные белково-висмутовые комплексы. Широко применяются в клинике алюминийсодержащие препараты, один из них сукральфат. Действующей основой препарата является алюминиевая соль сахарозогидро-генсульфата, которая, соединяясь с белком, образует слой, предохраняющий поверхность язвы от действия пепсина, HCL, желчи и других повреждающих факторов (Исаков, 2003; Шептулин,1997; Машковский, 2002). Важным преимуществом терапии антацидами по сравнению с антисекреторными средствами является возможность быстрой отмены препарата, не опасаясь развития «синдрома отмены» и рецидива ЯБЖ (Осадчук и соавт., 2000; Охлобыстин, 2002). Несмотря на эти обстоятельства, при лечении язвенной болезни анта циды обычно рекомендуют в качестве вспомогательных лекарственных средств в дополнение к другим антисекреторным препаратам, что связано, главным образом, с низкой эффективностью монотерапии, а значит, с необходимостью назначения больших доз и частого применения (Шептулин, 2004; Lanas et al., 1995).
Антиэкссудативная активность при формалиновом отеке
Опыты проведены на крысах-самцах линии Wistar массой 160-170 г. В качестве флогогенного агента использовали водный 6 % раствор декстрана, вводимый в объеме 0,1 мл субплантарно (Лещинский, 1976). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили экстракт софоры в дозе 50 мг/кг за 30 минут и через 1 час после инъекции декстрана. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Оценку антиэкссудативной активности осуществляли через 3 часа после инъекции декстрана методом онкометрии по разности между объемами здоровой и отечной лапкой. Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 160-180 г. Острое асептическое воспаление воспроизводили по методу Александрова (1986) путем однократного субплантарного введения 0,1 мл 0,5 % раствора гистамина гидрохлорида. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили экстракт софоры в дозе 50 мг/кг за 30 минут и через 1 час после инъекции гистамина гидрохлорида. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Оценку антиэкссудативной активности осуществляли через 3 часа после инъекции декстрана методом онкометрии по разности между объемами здоровой и отечной лапкой. Полученные данные представлены в таблице 3.2.3.1.
Как следует из приведенной таблицы, введение экстракта софоры в дозе 50 мг/кг на фоне гистаминового отека способствовало выраженному угнетению экссудации на 27,8 % по сравнению с данными в контрольной группе.
Опыты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель асептического воспаления воспроизводили по методу Менкина (Ойвин, Шетель, 1961) путем подкожного введения 0,5 мл 9 % раствора уксусной кислоты в область спины животного с предварительно выстриженной шерстью. Одновременно с этим, внутрибрюшинно вводили раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. Животным опытной группы внутрижелу-дочно вводили сухой экстракт софоры желтоватой в дозе 50 мг/кг. Первое введение осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 25 дней. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в дозе 100 мг/кг, который вводили по аналогичной схеме. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. На 2, 9 и 25 сутки эксперимента оценивали площадь нек-ротизированной ткани планиметрическим методом. Полученные данные представлены в таблице 3.2.4.1.
Как следует из приведенной таблицы, введение сухого экстракта софоры в дозе 50 мг/кг на фоне повреждения тканей уксусной кислотой оказывает противовоспалительное действие, уменьшая степень альтерации тканей и ускоряя их регенерацию. При этом противовоспалительный эффект испытуемого средства, как и препарата сравнения, проявляется на ранних сроках эксперимента: на 7 сутки площадь альтерации у крыс опытных групп была в среднем на 20% меньше, чем в контроле. Кроме этого, было выявлено наличие антиальтеративной активности, на что указывает тот факт, что у 3-х крыс из 8-ми, получавших экстракт софоры желтоватой, на 2 сутки эксперимента не отмечалось развития кожно-мышечного дефекта. На 14 сутки эксперимента площадь повреждения у крыс опытных групп, была на 25% меньше по сравнению с показателями у животных контрольной группы. На 21 сутки у 5-ти крыс, получавших экстракт софоры желтоватой, отмечалось полное закрытие кожно-мышечного дефекта, а у оставшихся - ее площадь была в 4 раза меньше, чем у животных контрольной группы. При этом выраженность регенерации у крыс, получавших испытуемый фитоэкстракт, превосходила таковую у животных, получавших препарат сравнения.
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wlstar обоего пола массой 180-200 г. Воспалительную реакцию вызывали по методу Ф. Тринус и соавт. (1975). Стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали под кожу крыс в области спины в асептических условиях. Экстракт софоры вводили внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество воды очищенной по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в дозе 100 мг/кг. Через 17 суток извлекали гранулемы и проводили взвешивание на аналитических весах после высушивания при температуре 70 С в течение 24 часов (до постоянной массы). Полученные данные (табл.3.2.5.1.) свидетельствуют, что исследуемый фитоэкстракт в дозе 50 мг/кг не оказывает существенного влияния на процесс развития гранулемы, при этом обнаруживается тенденция к стимуляции образования грануляционно-фиброзной ткани. Так, масса сухой гранулемы у крыс, получавших экстракт софоры, была на 11 % больше, чем в контроле (различия недостоверны). Препарат сравнения оказывает аналогичное действие.
Для изучения влияния сухого экстракта софоры желтоватой на болевую чувствительность использовали метод «горячей пластины» (G. Woolf, A.D. Mac Donald, 1944). Исследования проведены на 20 белых крысах линии Вис-тар с исходной массой 180-200г, которых помещали на пластину ультратермостата с температурой 60С. Опытной группе крыс водный раствор экстракта софоры желтоватой вводили в дозе 50 мг/кг внутрижелудочно однократно в объеме 1 мл/100 г. Животные контрольной группы получали дистиллированную воду в аналогичном объеме. Учет болевой реакции на температурный раздражитель в виде облизывания задних лапок и прыжков у подопытных животных проводили через 1 час после введения испытуемого фитосредства.
Влияние экстракта софоры на состояние клеточного звена иммунного ответа
Опыты проведены на мышах-самцах линий СВА и Fi (СВАхС57В1/6) массой 18-20 г. Контролем служили группы мышей с иммунодефицитом, вызванным цитостатиком азатиоприном, который вводили перорально в дозе 50 мг/кг, 1 раз в сутки в течение 5 дней. Исследуемые средства вводили опытной группе животных на фоне введения азатиоприна перорально в виде водного раствора в следующих дозах: экстракт софоры желтоватой - 50 мг/кг; отвар софоры желтоватой - 10 мл/кг. Указанные средства вводили 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная группа животных получала дистиллированную воду по аналогичной схеме. Влияние испытуемых средств на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали по реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Р.В. Петров и соавт., 1987). Полученные данные приведены в таблице 3.6.1.1.
При исследовании влияния лекарственных средств на клеточноопосре-дованную реакцию ГЗТ установлено, что испытуемые средства восстанавливают индекс реакции ГЗТ (ИР ГЗТ) в условиях азатиоприновой иммуносу-прессии. Введение азатиоприна в указанной дозе приводило к снижению ИР ГЗТ на 57% по сравнению с тем же показателем в интактной группе. При введении экстракта софоры и отвара софоры на фоне иммунодепрессии наблюдали увеличение ИР ГЗТ в 2,11; 1,72; раза соответственно по сравнению с контролем. Как следует из полученных данных наиболее выраженное действие оказывает экстракт софоры желтоватой.
Влияние испытуемых средств на состояние гуморального звена иммунного ответа оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A J.Cunningham (1965).
Как следует из приведенной таблицы, введение азатиоприна в указанной дозе приводило к снижению как абсолютного числа АОК, так и количества АОК на 106 спленоцитов на 45% и 30%соответственно по сравнению с теми же показателями в интактной группе. На фоне введения исследуемых фитос-редств: экстракта и отвара софоры желтоватой на фоне азатиоприновои им-муносупрессии, наблюдали достоверное увеличение количества АОК как в абсолютных значениях , так и при расчете на 106 спленоцитов :при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновои супрессии в2,2 раза ,а второй - в Зраза соответственно по сравнению с контролем.
Влияние сухого экстракта софоры желтоватой на состояние гуморального звена иммуннога ответа более выражено, чем при введении отвара указанного растительного сырья . Влияние экстракта и отвара софоры желтоватой на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей в отношении Staphylococcus aureus исследовали in vitro по методике И.С. Фрейдлин (1976). При этом оценивали следующие показатели фагоцитоза: активность (процент фагоцитирующих клеток из общего числа подсчитанных клеток) и интенсивность (среднее количество St. aureus, поглощенных одной клеткой). Внесение в культуральную среду перитонеальных макрофагов экстракта и отвара софоры в концентрациях, эквивалентных экспериментально-терапевтическим дозам, на фоне введения азатиоприна сопровождалось повышением функциональной активности перитонеальных макрофагов. При этом активность фагоцитоза при внесении экстракта и отвара софоры была в среднем одинаковой: увеличивалась в 2,02 и 1,81 раза соответственно, а интенсивность — в 1,69 и 1,59 раза соответственно по сравнению с контролем.
Таким образом, как экстракт, так и отвар софоры желтоватой способны ослаблять супрессивное действие азатиоприна на показатели клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа, что выражается в восстановлении индекса реакции ГЗТ, количества АОК, активности и интенсивности макрофагов. Следует отметить, что наиболее выраженное иммуно-модулирующее влияние оказывал экстракт растения.
Эксперименты проведены с использованием 1 % суспензи донорских эритроцитов. Оценку мембраностабилизирующей активности фитосредства осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, который вызывали реактивом Фентона, фотоактивированным аминазином (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемлиз) (Ковалев и соавт., 1986). Компоненты, входящие в состав реактива Фентона, были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих полный лизис 1% суспензии эритрцитов: FeS04 х 7 НгО - 0,01 мг/мл; Н2О2 — 0,2 мг/мл (в пересчете на 100% раствора перекиси). Для активации свободнорадикальных процессов в аминазине, его выдерживали в течение 12 часов на солнечном свету. Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. Изучение мембраностабилизирующего действия сухого экстракта софоры желтоватой проводили в концентрациях 0,002 г/л; 0,004 г/л; 0,02 г/л. Степень гемолиза измеряли через 24 часа по поглощению при 420 нм. Действие фитосредства на степень гемолиза эритроцитов оценивали в процентах по отношению к поглощению в контроле (без добавления экстракта в инкубационную среду). Результаты проведенных исследований представлены в таблице 3.7.1-3.7.3.
Фармакотерапевтическая эффективность экстракта софоры при повреждении желудка, индуцированного введением бутадиона
Эксперименты проведены на крысах линии Вистар обоего пола массой 170-180 г. Модель острой язвы воспроизводили путем внутримышечного однократного введения бутадиона в дозе 300 мг/кг в виде 15% взвеси на ацетоне. Крысам опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта софоры в дозе 50 мг/кг в объеме 10 мл/кг профилактически в течение 5 дней (1 раз в сутки) до введения ульцерогенного агента, последнее введение осуществляли через 3 часа после его применения. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. Через 24 часа после введения бутадиона крыс забивали под легким эфирным наркозом и проводили оценку гастропротективного действия испытуемого средства. Для этого желудок разрезали по большой кривизне и подсчитывали количество деструкции, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений подсчитывали «индекс Паулса» (ИП) (Амосова и соавт., 1998). Кроме того, рассчитывали среднее количество каждого вида деструкции на 1 животное в группе и определяли их размеры. Для» оценки антиоксидантной активности экстракта софоры определяли концентрацию малонового диальде-гида в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1987), а также оценивали состояние системы антиоксидантной защиты организма. Для этого в крови определяли активность супероксиддисмутазы (Чевари и соавт., 1985), катала-зы (Королюк и соавт., 1988), а также концентрацию восстановленного глута-тиона (Anderson, 1989). Полученные данные приведены в таблицах 4.2.1. -4.2.3 и рисунках 4.2.1.-4.2.4. Установлено, что через 24 часа после инъекции бутадиона в группе контрольных животных погибло 5 крыс из 15, т.о. процент гибели составил 33,3 %. При макроскопическом осмотре слизистой оболочки желудка обращает на себя внимание развившаяся у всех крыс контрольной группы выраженная гиперемия («алый желудок») с локализацией, преимущественно, в фундальном отделе желудка, а также наличие разного рода деструкции (табл. 4.2.1). Так, точечные кровоизлияния определялись практически у всех животных этой группы (100 %). Эрозии встречались у 60 % крыс контрольной группы, в некоторых случаях они носили сливной характер; количество полосовидных язв колебалось от 2 до 15. Значительным было также количество язв, которые были выявлены у 8 из 10 крыс. Установлено, что превен тивное курсовое введение калефлона в дозе 100 мг/кг оказывало достаточно выраженное гастропротективное и неспецифическое защитное действие. Так, в опытной группе животных процент гибели составил 10%, (погибла 1 крыса из 10-ти), а из оставшихся 9 животных у 2-х отмечена нормальная без гиперемии слизистая желудка. Точечные кровоизлияния имели место у 80 % животных, среднее их число было почти в два раза меньше, чем в контроле; индекс Паулса был в 9 раз меньше, чем в контроле. Эрозии выявлены в 2-х случаях из 9 (22,2 % случаев), индекс Паулса для этого вида деструкции был 54 раза меньше аналогичного показателя у крыс контрольной группы. Полосо-видные язвы у крыс опытной группы были выявлены у 3-х из 9 животных (33,3 % поражаемости), индекс Паулса для полосовидных язв у крыс этой группы был в 17 раз меньше, чем в.контроле.
Как следует из данных, приведенных в таблице 4.2.2., введение токсической дозы бутадиона сопровождается индукцией процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) со снижением мощности системы антиоксидантной защиты организма. Установлено, что курсовое профилактическое введение экстракта софоры на фоне бутадионового повреждения желудка оказыва ет выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует уменьшение концентрации МДА в сыворотке крови крыс опытной группы в среднем на 36 % , повышение активности СОД и каталазы крови соответственно более чем в 2 и 1,5 раза по сравнению с аналогичными показателями крыс контрольной группы. Наряду с этим, на фоне введения испытуемого средства у крыс опытной группы отмечалось повышение концентрации восстановленного глутатиона на 37 % по сравнению с контролем.
Опыты проведены на крысах линии Вистар обоего пола массой 180-200 г. Экспериментальный «рефлюкс-гастрит» вызывали внутрижелудочным 28-дневным введением медицинской желчи в объеме 10 мл/кг (Аруин и соавт., 1976). Крысам, опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта софоры в дозе 50 мг/кг спустя 6 часов после введения желчи 1 раз в сутки на протяжении всего-эксперимента. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по - аналогичной-схеме. Исследование морфофункционального состояния желудка производили на 28 сутки эксперимента: под барбамиловым наркозом (60 мг/кг внутри-брюшинно) производили наложение лигатуры на привратник, через 8 часов после этого крыс декапитировали под легким эфирным наркозом и собирали желудочный сок. С учетом массы животного определяли темп желудочной секреции. В желудочном соке определяли кислотность по Михаэлису (Меньшиков и соавт., 1987), содержание пепсина - методом В.Н.Туголукова (1965), концентрацию кислых мукополисахаридов — по реакции связывания с альциановым синим (Piper, 1974). Интенсивность процессов ПОЛ оценивали по концентрации МДА в гомогенате периульцерозных зон желудка (Стальная, Гаришвили, 1977). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985) и каталазы крови (Королюк и соавт., 1988). Проводили также макро- и микроскопиче 77 ское исследование слизистой желудка. В слизистой желудка определяли характер и количество деструкции с подсчетом индекса Паулса вышеописанным методом.
Для патоморфологических исследований стенку желудка фиксировали в 10 % нейтральном формалине. Гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по ван Гизону; для гистохимических исследований свежезамороженные срезы стенки желудка окрашивали ШИК-реакцией по Мак Манусу-Хочкиссу, толуидиновым синим (Волкова, 1982 Микроскопическая..., 1996). Полученные данные приведены в таблицах 4.3.1.-4.3.3. и рисунках 4.3.1.-4.3.4.
