Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 . Современные представления о патогенетических механизмах стресс-индуцированных патологических состояниях и средствах, повышающих неспецифическую резистентность организма 10
1.1. Современные представления об адаптации и механизмах ее формирования 10
1.2. Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью 20
1.3. Сведения о растениях, входящих в состав «Адаптона-6» 27
Глава 2. Материалы и методы исследования 40
Глава 3. Исследование спектра адаптогенной активности «Адаптона-6» 47
3.1. Влияние на общую физическую выносливость 48
3.2. Влияние на силовую выносливость 50
3.3. Влияние на устойчивость к гипоксии 51
3.3.1. Влияние на устойчивость к гипобарической гипоксии 52
3.3.2. Влияние на устойчивость к гемической гипоксии 53
3.3.3. Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии 54
3.3.4. Влияние на устойчивость к гистотоксической гипоксии 56
3.4. Влияние на устойчивость к иммобилизационному стрессу 57
Глава 4. Исследование психотропного действия «Адаптона-6» 59
4.1. Влияние «Адаптона-6» на поведенческую активность в тесте «открытое поле» 59
4.2. Влияние «Адаптона-6» на поведение животных в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» 61
4.3. Влияние «Адаптона-6» на выработку «условного рефлекса пассивного избегания» 62
4.4. Влияние «Адаптона-6» на ГАМК-ергическую систему 64
4.5. Влияние «Адаптона-6» на снотворное действие барбитуратов 65
Глава 5. Исследование фармакотерапевтическои эффективности «Адаптона-6» 67
5.1. Фармакотерапевтическая эффективность при интенсивных физических нагрузках 67
5.2. Фармакотерапевтическая эффективность при токсическом повреждении печени 70
5.3. Профилактическая эффективность при иммобилизационном стрессе 75
5.4.Фармакотерапевтическая эффективность при иммуносупрессивном состоянии 81
Глава 6. К механизмам защитного действия «Адаптона-6» 86
6.1. Влияние «Адаптона-6» на устойчивость тканей к действию флогогенных агентов 86
6.1.1. Влияние на процессы альтерации и регенерации 86
6.1.2. Влияние на фазу экссудации процесса воспаления 88
6.1.3. Противовоспалительная активность при остром перитоните 89
6.2. Изучение мембраностабилизирующей активности «Адаптона-6» 90
6.3. Изучение антирадикальной активности «Адаптона-6» 92
6.3.1. Антирадикальная активность по отношению к супероксидным анион-радикалам 92
6.3.2. Антирадикальная активность по отношению к N0 радикалам 93
6.3.3. Антирадикальная активность по отношению к радикалам ABTS«+ 94
6.4. Определение железосвязывающей активности «Адаптона-6» 95
6.5. Влияние на скорость накопления ТБК-активных продуктов 96
Глава 7. Обсуждение 97
Заключение 103
Выводы 105
Практические рекомендации 106
Список литературы 107
- Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью
- Фармакотерапевтическая эффективность при интенсивных физических нагрузках
- Профилактическая эффективность при иммобилизационном стрессе
- Изучение мембраностабилизирующей активности «Адаптона-6»
Введение к работе
Актуальность темы. Радикальные изменения социально-экономической обстановки современного техногенного общества способствовали возобновлению интереса ученых к исследованию механизмов адаптации индивида при психоэмоциональном стрессе. В рамках общебиологической теории Н. Selye психоэмоциональный стресс трактуют как генерализованную реакцию физиологического и эмоционального напряжения, возникающую в связи с действием факторов, требующих от организма человека мобилизации адаптивных возможностей со значительным превышением диапазона повседневных нагрузок (Крыжановский, 2006; Агаджанян, Баевский, 2006; Mastorakos et al, 2006; Мс Ewen, 2007).
В результате, подвергаясь разного рода антропогенным стрессорным воздействиям, современный человек зачастую не в состоянии справиться с перегрузками и адаптироваться к новым условиям существования, вследствие чего наблюдается повсеместное распространение «болезней цивилизации» (Разумов, 2004; Глазачев, 2006; Weisberg, 2009). Так, по данным статистики в России только 7-8% населения можно отнести к категории абсолютно здоровых (Григорьев, 2008). При этом заболеваемость и смертность в трудоспособном возрасте за последние 10 лет увеличились на 30% (Виленский, 2008).
В связи с этим, повышение резистентности организма к действию стрессор-ных факторов является актуальной задачей современной медицинской науки. В решении указанной проблемы большое значение принадлежит разработке и внедрению в клиническую практику новых эффективных адаптогенных средств, преимущественно, природного происхождения (Яременко, 2008). В этом плане особый интерес представляет тибетская традиционная медицина, располагающая большим количеством тонизирующих средств, называемых «жудлэны», рецептурные прописи которых приведены в ее первоисточниках «Чжуд-ши: Канон тибетской медицины» (2001), «Кунпан-дудзи: Большой рецептурный справочник Агинского дацана» (2008). Характерными особенностями тибетских препаратов является многокомпонентность, обеспечивающая одновременное корригирующее влияние на заинтересованные органы и системы организма; безвредность при длительном применении; содержание комплекса биологически активных веществ, близких по своей природе эндогенным физиологическим соединениям; многоуровневое регулирующее влияние на системы организма, благодаря чему они оказывают не только терапевтическое влияние на патологический процесс, но и обеспечивают повышение неспецифической резистентности организма.
В связи с вышеизложенным, в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН на основе тибетской рецептурной прописи «Жудлэн -15» разработано новое многокомпонентное растительное средство, в состав которого входит сырье следующих видов растений: шиповника коричного (Roza cinnamomea
L.), боярышника кроваво-красного {Crataegus sanguinea Pall.), облепихи круши-новидной {Hippophae rhamnoides L.), астрагала перепончатого {Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge), левзей сафлоровидной {Rhaponticum carthamoides Willd.), ревеня тангутского {Rheum tanguticum Maxim.), условно названное «Адаптон-б».
Целью настоящего исследования явилось определение спектра адаптоген-ной активности «Адаптона-6» и фармакотерапевтической эффективности при экспериментальных стресс-индуцированных повреждениях, а также оценка механизмов адаптогенного действия.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
-изучить влияние «Адаптона-6» на устойчивость организма животных к действию экстремальных факторов различной природы;
оценить влияние испытуемого средства на физическую выносливость организма животных;
определить лечебно-профилактическую эффективность «Адаптона-6» при состояниях, приводящих к дезадаптации;
определить влияние фитосредства на функциональное состояние ЦНС;
определить особенности механизма адаптогенного действия «Адаптона-6».
Научная новизна. Работа представляет собой исследование адаптогенного действия нового средства растительного происхождения. Установлено, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтических дозах (50 - 150 мг/кг) повышает неспецифическую сопротивляемость организма к экстремальным воздействиям различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипо-барической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, иммобилиза-ционному стрессу. Показано, что «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательскую активность животных, оказывает анксиолитическое и ноо-тропное действие. Психотропные эффекты фитоэкстракта обусловлены активацией ГАМК-ергической системы.
Профилактическое курсовое введение «Адаптона-6» на фоне иммобилиза-ционного стресса уменьшает выраженность всего комплекса вегетативных проявлений стресс-реакции, что связано с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма под его влиянием. Установлено, что испытуемое средство оказывает фармакотерапевтическое влияние при интоксикации белых крыс тетрахлорметаном, обеспечивая нормализацию морфофункционального состояния печени животных на более ранних сроках патологического процесса. Выявлено также, что «Адаптон-6» обладает существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гумо-
рального и клеточного звеньев иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях.
Широкий спектр адаптогенной активности испытуемого средства связан с формированием под его влиянием состояния неспецифически повышенной резистентности, обусловленного стабилизацией мембранных структур клеток. Молекулярно-клеточный механизм мембраностабилизирующего действия «Адаптона-6» связан с ограничением окислительного стресса, обусловленного как ингибированием процессов перекисного окисления липидов, так и повышением мощности системы эндогенной антиокислительной защиты организма при экстремальных воздействиях.
Практическая значимость. Установленные адаптогенные свойства нового средства природного происхождения аргументируют целесообразность его применения в качестве средства, повышающего неспецифическую сопротивляемость организма. Полученные экспериментальные данные явились основой для производства и применения нового адаптогенного средства в клинической практике в качестве биологически активной добавки к пище «Арура-тан №8». Кроме того, материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 14 октября 2011г.).
Основные положения, выносимые на защиту:
растительное средство «Адаптон-6» в экспериментально-терапевтических дозах оказывает выраженное адаптогенное действие, повышая неспецифическую резистентность организма к действию стрессорных факторов различной природы;
испытуемое средство обладает профилактической и фармакотерапевтиче-ской эффективностью при интенсивных физических нагрузках, экспериментальном токсическом повреждении печени, иммобилизационном стрессе и им-мунодефицитном состоянии;
«Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательские реакции, проявляет анксиолитические и ноотропные свойства;
базисным молекулярно-клеточным механизмом адаптогенного действия испытуемого средства является его способность ингибировать процессы свободно-радикального окисления и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток, а также повышать энергетический потенциал организма при экстремальных воздействиях различной природы.
Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факуль-
тета Бурятского государственного университета (Улан-Уда, 2009); научно-практической конференции, посвященной 110-летию НУЗ ОКБ на станции Улан-Удэ ОАО «РЖД» (Улан-Удэ, 2010); научно-практической врачебной конференции «Артериальная гипертензия: этиология, клиника, лечение» в НУЗ ОКБ на станции Улан-Удэ ОАО «РЖД» (Улан-Удэ, 2010); 5 International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011); научно-практической конференции, посвященной 50-летию нейрохирургического отделения РКБ им. Н.А. Семашко (Улан-Удэ, 2011).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.
Работа выполнена в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 7 глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 244 источника: 180 отечественных и 64 зарубежных авторов. Работа изложена на 132 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 32 таблицами и 3 рисунками.
Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью
В последние десятилетия большую актуальность приобрели исследования, направленные на изыскание фармакологических средств повышения работоспособности человека в неблагоприятных эколого профессиональных условиях. Анализ обширной литературы по фармакологической поддержке работоспособности в экстремальных условиях (Виноградов, Бобков, 1986; Смирнов и соавт., 1993; Шустов и соавт., 1994; Войтенко, 2002; Стратиенко, 2003; Шабанов, 2003; Шанин, Шанин, 2003; Зарубина, Шабанов, 2004; Шастун, 2005; Родичкин, Шабанов, 2007; и др.) позволяет заключить, что применение фармакологических средств осуществляется по следующим основным направлениям: регулирование психоэмоциональной сферы, защита от психологического стресса, устранение астеноневротической или астенодепрессивной симптоматики; экстренное повышение физической работоспособности; защита операторской работоспособности, особенно в условиях монотонии или интенсивных информационно-семантических нагрузок, лишения сна, выраженного нервно-эмоционального напряжения; повышение переносимости неблагоприятных физических, в том числе климато-географических факторов - высоких или низких температур, измененного газового состава вдыхаемого воздуха, шума, вибрации и др.; профилактика симптомов переутомления в процессе длительной и напряженной профессиональной деятельности; ускорение процессов адаптации к новым условиям труда, связанным с возрастанием интенсивности нагрузок; профилактика и коррекция неблагоприятных симптомов, опосредованно затрудняющих профессиональную деятельность; применение специальных фармакологических средств защиты (антидоты, радиопротекторы и др.); ускорение процессов реабилитации после воздействия астенизирующих и экстремальных факторов. Поиск фармакологических средств коррекции экстремальных состояний принципиально может идти по следующим направлениям (Фисенко, 2000): разработка фармакологических средств защиты от действия конкретного экстремального фактора (антиоксиданты, антигипоксанты, термопротекторы и др.); поиск фармакологических средств неспецифического повышения резистентности (витамины, стероидные и нестероидные анаболики, глюкокортикоиды, стресспротекторы и др.); изыскание препаратов, обеспечивающих экстренное формирование завершенной, долговременной адаптации (адаптогены, нейропептиды).
Для коррекции функционального состояния организма необходимо формирование достаточно сложных фармакологических рецептур, включающих те или иные группы лекарственных средств, в зависимости от конкретной ситуации и исходного состояния организма человека (Новиков и соавт., 2001).
Однако, формирование подобных рецептур для широких слоев населения достаточно проблематично, кроме того, многие лекарственные синтетические средства при длительном применении могут вызывать негативные побочные эффекты. В этом аспекте перспективным направлением является использование средств природного происхождения, преимуществом которых является широкий спектр биологически активных веществ; наличие нескольких видов фармакологической активности; плавное нарастание фармакологического эффекта; низкая токсичность и отсутствие неблагоприятных побочных реакций при их длительном приеме (Яременко, 2008). Такие композиции лекарственных препаратов включают, как правило, в качестве базисного средства адаптогены, а также витамины, аминокислоты, продукты пчеловодства, моря и другие природные вещества.
Термин «адаптогены» в научный оборот впервые был введен Н.В.Лазаревым (1959, 1962), сформулировавшим концепцию о состоянии неспецифически повышенной сопротивляемости организма (СНПС), а лекарственные средства, вызывающие это состояние, были названы им «адаптогенами». Требования к адаптогенам в уточненном виде следующие:
1) адаптоген должен быть совершенно безвредным для организма, обладать большой широтой терапевтического действия, вызывать минимальные сдвиги в нормальных функциях организма или вовсе их не вызывать и проявлять свое адаптогенное действие только на соответствующем фоне;
2) действие адаптогена должно быть неспецифично в том смысле, что должна повышаться сопротивляемость к вредному влиянию весьма широкого набора факторов физической, химической и биологической природы;
3) действие адаптогена должно быть тем более выражено, чем более глубоки неблагоприятные сдвиги в организме;
4) адаптоген должен обладать нормализующим действием независимо от направленности предшествующих сдвигов.
В определенном смысле концепция адаптогенов предшествовала появлению современных представлений о ноотропах, психоэнергизаторах и актопротекторах, теоретическое развитие которых шло в сторону конкретизации отдельных положений концепции адаптогенов (Шабанов, 2002; Скоромец, 2007; Perez-Pinzon, 2004). Механизм действия разных адаптогенов может быть различным, однако конечным результатом является оптимизация энергетического обмена и синтеза белков, особенно выраженная в клетках защитных систем организма (нейроэндокринной, иммунной).
В наибольшей мере этим требованиям отвечают адаптогены растительного происхождения. В настоящее время в России в качестве адаптогенных средств разрешены к применению препараты женьшеня настоящего, элеутерококка колючего, родиолы розовой, лимонника китайского, левзей сафлоровидной, аралии маньчжурской, заманихи высокой (Машковский, 2010). Они оказывают мягкое тонизирующее действие, которое проявляется в ослаблении симптомов общей астенизации, повышении физической и умственной работоспособности, уменьшении признаков утомления, повышении общей сопротивляемости организма к широкому спектру экстремальных воздействий (Брехман, 1968, 1980; Wagner et al., 1994). Экспериментально установлено, что введение растительных адаптогенов лабораторным животным сопровождается повышением физической и умственной выносливости, являющимся интегральным показателем благополучия организма (Дардымов, 1976; Барабой, 1997; Нимаева, 2003; Раднаева, 2009).
В отличие от стимуляторов ЦНС эффекты растительных адаптогенов реализуются вследствие активации адаптивного синтеза РНК и белков, в результате чего возрастает активность ферментов энергетического и пластического обмена, интенсифицируются репаративные и восстановительные процессы. Известно, что для адаптогенов растительного происхождения характерна выраженная антиоксидантная активность, наличие которой во многом обусловливает неспецифичность действия указанных лекарственных средств, поскольку большинство патологических состояний изначально сопровождается индукцией СРО в организме (Коган и соавт., 1992; Зенков и соавт., 2001), интенсивность которых определяется соотношением систем, активирующих СРО, и систем, осуществляющих антирадикальную защиту. Индукция процессов СРО характеризуется повреждением мембранных структур с нарушением морфо-функционального состояния клеток и тканей организма.
В настоящее время многочисленными исследованиями доказано наличие у растительных адаптогенов выраженного прямого и непрямого антиоксидантного действия. Наличие у адаптогенов способности снижать интенсивность процессов СРО и повышать мощность эндогенной антиокислительной системы (Барабой и соавт., 1992, 1997; Kim et al., 1992), обусловливает повышение устойчивости биологических мембран к широкому кругу повреждающих воздействий и тем самым - повышение неспецифической резистентности организма.
Курсовой прием адаптогенов ведет к перестройке обмена веществ, под их влиянием наблюдается ослабление негативных биохимических и функциональных нарушений углеводного, белкового и липидного обмена; повышается утилизация глюкозы клетками, мобилизация липидных депо и усиление использования липидов в качестве субстратов окисления (Давыдов, 1996); предупреждается истощение гипофиз-адреналовой системы при экстремальных воздействиях. При этом, повышение устойчивости организма к стрессу не связано с психоседативным действием, которое не отмечается при приеме этих средств.
Фармакотерапевтическая эффективность при интенсивных физических нагрузках
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180 - 200 г. Общую физическую выносливость определяли общепринятым методом по длительности плавания животных в бассейне с грузом, составляющим 7% от массы тела. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили раствор испытуемого средства в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней (1 раз в сутки за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Через 7 суток от начала введения средства определяли общую физическую выносливость путем плавания животных до утомления, критерием которого служило первое погружение животного под воду (Методические рекомендации..., 1999), после чего под легким эфирным наркозом крыс декапитировали и определяли: в гомогенатах скелетной и сердечной мышц - содержание АТФ (Алейникова, Рубцова, 1988), величину глюкозы, общего белка, триацтлглицеридов (ТГ) в сыворотке крови. Исследование проведено на анализаторе «SAPPHIRE 400» (Япония). Содержание гликогена в печени определяли по методу S. Seifter (1950). Также оценивали интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Королюк и соавт., 1988). Полученные данные представлены в таблицах 5.1.1. и 5.1.2.
Как следует из данных, приведенных в таблице 5.1.1. интенсивная физическая нагрузка сопровождается снижением концентрации АТФ в скелетной и сердечной мышцах. Кроме того, на фоне интенсивной физической нагрузки наблюдалось истощение углеводных запасов, на что указывает снижение концентрации гликогена в печени. Превентивное многократное введение «Адаптона-6» оказывало выраженное актопротекторное действие, о чем свидетельствует повышение общей физической работоспособности животных опытной группы: продолжительность плавания увеличилась на 58% по сравнению с данными животных контрольной группы. Анализ показателей энергетического обмена свидетельствует, что повышение физической выносливости животных под влиянием препарата обусловлено активацией ресинтеза АТФ: содержание ее в скелетной мышце было на 73% и в сердечной мышце на 33% выше по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. Кроме того, введение «Адаптона-6» сопровождалось увеличением углеводных запасов в печени: концентрация гликогена в печени животных опытной группы была на 34% выше и, соответственно, повышением концентрации глюкозы в сыворотке крови на 40% по сравнению с данными контрольной группы, а также увеличением общего белка на 6%, ТГ на 60% по сравнению с контролем.
Как видно из данных, приведенных в таблице 5.1.2. у животных на фоне максимальной физической нагрузки отмечается существенное повышение уровня МДА в крови, а также снижение активности катал азы и СОД сыворотки крови, что свидетельствует об индукции перекисного окисления липидов и угнетении активности эндогенной антиокислительной системы организма в результате плавания до полного утомления. На фоне превентивного введения препарата в указанной дозе отмечаются менее выраженные изменения в показателях свободнорадикального окисления и параметров антиокислительной системы. Так, концентрация МДА в сыворотке крови животных опытной группы была на 25% меньше по сравнению с аналогичными показателями крыс контрольной группы. Наряду с этим, на фоне введения испытуемого средства в сыворотке крови животных опытной группы отмечалось повышение активности СОД в 2,5 раза и каталазы на 30% по сравнению с контролем, что свидетельствует об активации антиокислительной системы.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что в основе актопротекторной активности «Адаптона-6» лежит ряд функциональных и метаболических изменений на различных уровнях биологической организации. В частности, установлено, что под влиянием указанного средства повышается содержание макроэргических соединений в сердечной и скелетной мышцах. Активация синтеза макроэргических соединений сочетается с отчетливым повышением содержания гликогена в печени, что свидетельствует о повышении углеводных запасов, являющихся, как известно, основным субстратом окисления при выполнении интенсивных физических нагрузок. Установлено также, что под влиянием испытуемого средства снижается интенсивность процессов СРО и повышается активность эндогенной антиокислительной системы.
Профилактическая эффективность при иммобилизационном стрессе
Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Иммобилизационный стресс воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 24 ч. Крысам опытной группы внутрижелудочно вводили «Адаптон-6» в дозе 100 мг/кг профилактически в течение 7 дней до стрессорного воздействия (1 раз в день за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. На 7 сутки эксперимента животных контрольной и опытных групп подвергали иммобилизационному стрессу, после чего животных декапитировали под легким эфирным наркозом и определяли выраженность триады Селье: гипертрофию надпочечников, состояние иммунокомпетентных органов и появление деструктивных повреждений в слизистой оболочке желудка с подсчетом «язвенного индекса Паулса». Интенсивность процессов свободнорадикального окисления оценивали по накоплению малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1987). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Королюк и соавт., 1988). Также определяли влияние иммобилизационного стресса на биохимические показатели сыворотки крови: концентрацию общего белка, билирубина, глюкозы, триацилглицеридов, аспартаттрансферазы (АсТ), аланинтрансферазы (АлТ). Исследование проведено на автоматическом биохимическом анализаторе «Sapphire 400» (Япония). Полученные данные приведены в таблицах 5.З.1.-5.3.5.
Как следует из данных, приведенных в таблице 5.3.1. у животных опытной группы наблюдается уменьшение массы надпочечников на 22% по сравнению с данными у крыс контрольной группы, а также курсовое введение «Адаптона-6 » в дозе 100 мг/кг на фоне стресса способствует увеличению массы иммунокомпетентных органов: тимуса на 22%, а селезенки на 34%.
Наряду со снижением массы иммунных органов, под влиянием стресса у крыс контрольной группы наблюдалось существенное уменьшение числа ядросодержащих клеток (ЯСК) тимуса и селезенки (табл. 5.3.2.). Установлено, что введение «Адаптона-6 » на фоне иммунодепрессии, вызванной стрессом, способствует увеличению клеточности тимуса и селезенки соответственно на 21 и 50% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.
Как следует из данных, приведенных в таблицах 5.3.1. - 5.3.3., в результате 24-часового иммобилизационного стресса у животных развивается комплекс дистрофических изменений внутренних органов, характерных для стрессорной реакции: инволюция лимфоидных органов, гипертрофия надпочечников, появление деструктивных поражений слизистой оболочки желудка. Наряду с этим, превентивное введение испытуемого средства оказывало выраженное гастропротективное действие, задерживая развитие глубоких деструкции слизистой оболочки желудка белых крыс (табл. 5.3.3.).
Так, у опытных животных число мелкоточечных кровоизлияний и эрозий встречалось в 75 % случаев при 100 % поражении в контроле. Соответственно, индекс Паулса для эрозий у животных, принимавших испытуемое средство, был меньше, чем таковой у крыс контрольной группы и составил 0,75 против 1,25, а для точечных кровоизлияний 1,4 против 3,25 в контроле. При этом, у крыс, получавших «Адаптон-6», не наблюдалось образования полосовидных язв, тогда как у животных контрольной группы в 100 % случаев отмечалось появление такого глубокого поражения слизистой оболочки как полосовидные язвы, причем у одной крысы в контроле наблюдалась перфорация стенки желудка. На слизистой оболочке желудка крыс, входящих в контрольную группу наблюдался резко выраженный отек и гиперемия, тогда как у крыс, получавших испытуемое средство отек и сглаженность рельефа слизистой оболочки желудка была умеренной.
Данные, приведенные в таблице 5.3.4. свидетельствуют, что иммобилизация продолжительностью 24 часа сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления, на что указывает повышение концентрации МДА, значительное снижение активности ферментов антиоксидантной защиты. Профилактическое введение испытуемого средства оказывало выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение концентрации МДА на 40% по сравнению с контролем, а также повышение активности каталазы - на 32% и СОД - в 2,5 раза по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение «Адаптона-6» в дозе 100 мг/кг на фоне 24-часового иммобилизационного стресса оказывает выраженное антистрессорное действие, уменьшая выраженность дегенеративных катаболических изменений во внутренних органах белых крыс. Кроме того, испытуемое средство уменьшает интенсивность процессов перекисного окисления липидов и предупреждает истощение эндогенных антиоксидантных систем организма. Исходя из этого, можно предположить, что протекторное действие испытуемого комплексного растительного средства связано с наличием в его составе биологически активных веществ фенольной природы (дубильных веществ, флавоноидов и др.), обладающих, как известно, выраженной антиокислительной и мембраностабилизирующей активностью (Барабой, 1997).
Таким образом, как видно из данных, приведенных в таблице 5.3.5., можно заключить, что иммобилизационный стресс оказывает повреждающее воздействие на функциональное состояние внутренних органов, а также вызывает существенные нарушения обменных процессов. На фоне профилактического введения испытуемого средства отмечается повышение углеводного и белкового обменов, о чем свидетельствует повышение уровня глюкозы и общего белка крови в среднем на 25 и 23% по сравнению с контрольной группой, а также снижение повреждающего воздействия стресса на функциональное состояние печени: активность трансаминаз (АсТ и АлТ) и концентрация прямого билирубина снижались соответственно на 53, 36 и 20% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение «Адаптона-6» в дозе 100 мг/кг на фоне 24-часового иммобилизационного стресса оказывает стресспротективное и иммуномодулирующее действие, уменьшая выраженность катаболических изменений во внутренних органах белых крыс. Показано, что реализация стресспротективного действия испытуемого средства связана с его ингибирующим влиянием на процессы свободнорадикального окисления и активацией системы антиоксидантной защиты организма.
Изучение мембраностабилизирующей активности «Адаптона-6»
Эксперименты проведены с использованием 1 % суспензии отмытых эритроцитов донорской крови. Гемолиз эритроцитов вызывали реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) (Ковалев и соавт., 1986). Для воспроизведения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды.
In vitro на моделях перекисного и осмотического гемолиза изучали мембраностабилизирующую активность сухого экстракта «Адаптон-6» в широком диапазоне концентраций. Исследования проводили в трехкратной повторности. Действие сухого экстракта на гемолиз оценивали по сравнению с контролем (без добавления исследуемого фитосредства в инкубационную среду). Эксперименты проведены с использованием 1% суспензии отмытых эритроцитов донорской крови.
В результате исследований установлено, что сухой экстракт «Адаптон-6» оказывает выраженное дозозависимое тормозящее влияние на гемолиз эритроцитов, вызванный реактивом Фентона. Полученные данные свидетельствуют, что наиболее выраженное мембраностабилизирующее действие исследуемое фитосредство оказывает в концентрации 0.1 мкг/мл, при которой происходит уменьшение степени гемолиза на 64% по сравнению с контролем. В концентрации 1,0; 0,1 и 0,01 мг/мл степень гемолиза снижается на 42; 52 и 60 % соответственно. 1С5о для перекисного гемолиза составляет 0.492 мг/мл (492 мкг/мл).
Данные, полученные при исследовании действия сухого экстракта «Адаптона-6» в условиях осмотического гемолиза, свидетельствуют о значительном - на 52% уменьшении осмотического гемолиза в пробах, содержащих данное средство в концентрации 0,1 мкг/мл (рис.6.2.1.); в концентрациях 1,0; 0,1; 0,01 мг/мл процент гемолиза уменьшается на 32, 49 и 51 % соответственно. ІСзо для осмотического гемолиза составляет 0,06 мг/мл (60 мкг/мл).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «Адаптон-6» оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, существенно уменьшая степень перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов и дегрануляции тучных клеток. Учитывая, что свободные радикалы, образующиеся в реакции Фентона, индуцируют перекисное окисление липидов клеточных мембран и как следствие этого приводят к гемолизу эритроцитов, можно полагать, что в основе механизма мембраностабилизирующего действия «Адаптона-6» лежит ингибирование процессов СРО биологических мембран.
