Введение к работе
Актуальность исследования. Проблема туберкулеза с каждым годом привлекает все большее внимание. Это связано с ростом заболеваемости, появлением тяжелых форм заболевания со смертельным исходом в странах Западной Европы, США и России, тогда как еще недавно туберкулез рассматривали как исчезающую болезнь (Хоменко А.Г., 2005; Перельман М.М., 2007). В мире ежегодно заболевают туберкулезом более 8 млн. человек; 85% из них - жители развивающихся стран; 3 млн. человек ежегодно умирают от туберкулеза (World Health Organization, 2000; WHO, Centersfor Disease Control, 2005).
Треть населения планеты сегодня инфицирована микобактериями туберкулеза, которые уносят больше жизней, чем любая другая инфекция: из всех смертей, которых можно было бы избежать, 25 % приходится на туберкулез. Сложившаяся ситуация охарактеризована ВОЗ как кризис глобальной политики в области туберкулеза (World Health Report, 2000).
В связи с этим точная и быстрая лабораторная диагностика инфекции стала особенно востребованной и актуальной (Карпищенко А.И., 2001; Попов С.А., Сабгайда Т.П., Пузанов В.А., 2007). Эффективность лабораторной диагностики туберкулезной инфекции обеспечивается тщательным, продуманным проведением всех этапов диагностического процесса - преаналитиче- ским, аналитическим, постаналитическим.
Исключительно велика значимость преаналитического этапа. Даже незначительные ошибки на этом этапе исследований неизбежно приводят к искажению окончательных результатов, не позволяя получить достоверные данные.
По сведениям, приводимым многими авторами, на преаналитический этап приходится от 57 до 68% всех диагностических ошибок, которые ведут к потере времени и средств на проведение повторных исследований, но, что еще более серьезно, - неправильной постановке диагноза (Карпищенко А.И., 2001; Попов С.А., 2007). Таким образом, чтобы повысить качество лабораторных исследований, в первую очередь необходимо повысить качество сбора проб биологического материала.
Самый эффективный путь предотвращения ошибок преаналитического этапа - это разработка стандартов для каждой его процедуры. Опыт наиболее развитых стран Европы и США, где приняты такие стандарты, показывает, что при этом качество лабораторных исследований значительно повышается (Федорин И.М. с соавт., 2005; Дробниевский Ф., Балабанова Я.М., 2011).
Настоящее исследование выполнено в рамках Федеральной программы научно-исследовательских работ: «Новые возможности индивидуализации донозологической диагностики и оптимизации лечебных мероприятий с учетом молекулярно-генетических особенностей организма и алиментарных факторов» (номер гос. регистрации 0120.0809697).
Цель исследования: повышение эффективности лабораторной диагностики туберкулезной инфекции.
Задачи:
-
Оценить влияние условий хранения и способов обработки мокроты на витальные свойства микобактерий.
-
В условиях in vitro изучить влияние физических и химических факторов жизнеспособность микобактерий туберкулеза. Исследовать жизнеспособность возбудителей туберкулеза на каждом из этапов окрашивания мазка.
-
Определить диагностическую ценность сред Левенштейна-Йенсена, Финн-II и жидких питательных сред BBL MGIT 7 mL Mycobacteria Growth Indicator Tube для культурального исследования микобактерий туберкулеза. Оценить влияние железа на интенсивность роста микобактерий туберкулеза на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена.
-
Оценить клеточный состав крови и особенности метаболизма у больных туберкулезом 0(I) - AB(IV) групп крови.
-
Оценить диагностическую значимость ПЦР и ИФА - исследований для диагностики туберкулезной инфекции.
Научная новизна. Получен блок новых данных, обеспечивающих повышение эффективности лабораторной диагностики туберкулеза. Результативность бактериологических методов исследования непосредственно зависит от условий хранения и обработки мокроты. Обоснован оптимальный режим преаналитического этапа исследований, обеспечивающий максимальную сохранность и жизнеспособность возбудителя туберкулеза и минимальную контаминацию посторонней микрофлорой при замораживании биоматериала, использование для консервации трехзамещенного фосфата натрия. Получены новые данные, обоснованно позволяющие осуществлять выбор способа хранения и обработки мокроты. Установлено, что из бактерицидных средств, достигающих эффективного подавления роста микрофлоры, преимуществами обладает NALC-NaOH. Получены данные, позволяющие улучшить преаналитический этап исследований. По данным микробиологических исследований, установлено, что культуральная диагностика туберкулеза при посеве на среду Финн-II повышается на 36-59% по сравнению с использованием среды Левенштейна-Йенсена.
Получены новые данные, характеризующие витальные свойства мико- бактерий туберкулеза при обработке биоматериала, высушивании мазка, облучении его ультрафиолетом, фиксировании открытым пламенем, пятнадцатиминутной экспозиции в 70-ном этаноле.
Анализ данных по заболеваемости туберкулезом среди носителей 0(I) - AB(IV) групп крови показал, что большей предрасположенностью обладают пациенты с A(II) группой крови, у которых предиктивным фактором развития туберкулезной инфекции являются достоверно более высокие уровни сывороточного железа; лица с O(I) группой крови являются более резистентными к данной инфекции.
Сопоставление данных результатов ПЦР, ИФА и бактериоскопическо- го исследования мокроты показало, что исследование методом ПЦР необходимо для пациентов с впервые выявленным туберкулезом для уточнения принадлежности МБТ к микобактериальному комплексу. Полученные результаты ПЦР и ИФА - исследований у пациентов с диагнозом «туберкулез» включены в план лекций для специалистов «клиническая лабораторная диагностика» на курсах повышения квалификации кафедры «фундаментальная и клиническая биохимия с лабораторной диагностикой» ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России.
Научно-практическая значимость. Результаты исследований, проведенных в условиях in vitro, позволили регламентировать оптимальный режим хранения и консервации мокроты в зависимости от реальных условий работы, возможностей транспортировки, быстроты доставки биоматериала для лабораторного исследования. Предлагаемые способы позволяют выбрать оптимальное бактерицидное средство. Обоснованы преимущества выбора для культуральной диагностики среды Финн-II и жидкой питательной среды Middlbrook по сравнению со средой Левенштейна-Йенсена, что оптимизирует аналитический этап исследований и повышает качество диагностики туберкулезной инфекции. Показана аналитическая и экономическая целесообразность использования жидких питательных сред при впервые выявленных случаях инфицирования микобактериями туберкулеза. В случае хронического течения заболевания, когда интервал до начала лечения имеет более гибкие границы, применение плотных питательных сред адекватно и аналитически надежно. Регламентирован новый режим приготовления мазков мокроты, предполагающий комплексную обработку биоматериала ультрафиолетовыми лучами и фиксацию открытым пламенем, что определяет эпидемиологическую безопасность работы в лаборатории при осуществлении диагностического процесса. Результаты молекулярно-генетического исследования позволили оптимизировать алгоритм обследования пациентов с впервые выявленным диагнозом «туберкулез». Получены новые данные, характеризующие ассоциированность туберкулезной инфекции с групповой принадлежностью крови. Установлены доминирование А(П) группы крови по частоте развития туберкулезной инфекции; минимальная частота встречаемости туберкулеза - у лиц с 0(I) группой крови. Установлены новые сведения, отражающие генетически детерминированные особенности патохимических метаболических изменений у лиц с туберкулезной инфекцией с определенной групповой принадлежностью.
Основные положения, выносимые на защиту: 1. Оптимизация преаналитического этапа исследований с учетом выбора способа консервации мокроты, обеспечивающего сохранение витальных свойств возбудителя туберкулеза и максимального освобождения от конта- минантов, регламентирование условий хранения мокроты.
-
-
Преимущества среды Финн-II относительно среды Левенштейна- Йенсена по частоте положительных результатов и количеству контаминации; Корреляция результатов посевов, бактериоскопии, ПЦР и ИФА.
-
Неспецифические клинико-лабораторные показатели у больных туберкулезом: снижение содержания эритроцитов, гемоглобина; лейкоцитоз; лим- фоцитопения; моноцитоз; ускорение СОЭ; тенденция к эозинофилии.
Апробация работы. Результаты исследований были представлены на научно-практической конференции, посвященной 25-летию института последипломного образования СамГМУ (Самара, 2007); на Национальных днях лабораторной медицины России - 2009 (Москва, 2009); Материалах Российской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Омск, 2009); научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 2009); конференциях «Аспирантские чтения» (Самара 2010 и 2011); Всероссийской конференции «Совершенствование оказания медицинской помощи больным туберкулезом» (Санкт-Петербург, 2011); на совместном заседании кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой и кафедры общей, бионеорганической и биоорганической химии Самарского государственного медицинского университета; Самарского регионального отделения Всероссийского общества молекулярных биологов и биохимиков; Ассоциации специалистов по клинико- лабораторной диагностике Самарской области (Самара, 2012).
Внедрение результатов в практику. Результаты данных исследований внедрены в практику работы бактериологической лаборатории ГБУЗ «Самарский областной противотуберкулезный диспансер»; ЦРБ Красноярского района; в лекционный материал на постдипломном уровне обучения для клинических ординаторов кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразви- тия России.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 6 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Ми- нобрнауки РФ; получено свидетельство о государственной регистрации программы для ЭВМ №2099613356 от 26.06.2009г. Издано учебно-методическое пособие «Лабораторные методы диагностики туберкулезной инфекции», утвержденное центральным координационно-методическим советом ГОУ ВПО «СамГМУ» Росздрава от 03.10.2007 г.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию объектов и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Диссертация изложена на 150 страницах, иллюстрирована 28 рисунками, содержит 25 таблиц. В работе использованы 220 литературных источников, из них 148 отечественных и 72 зарубежных.
Похожие диссертации на Совершенствование преаналитического этапа лабораторной диагностики туберкулезной инфекции
-
