Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 17
1.1. Урогенитальный хламидиоз (УГХ) 17
1.2. Этиологическая роль уреанлазм в возникновении и развитии воспалительных процессов гениталий 31
1.3. Рецепторы врождённого иммунитета и их роль в инфекционной патологии 40
1.3.1.Строение TLR 47
1.3.3.Активация TLR 53
1.3.4. Молекулярные механизмы взаимодействия TLR с клетками макроорганизма 57
1.3.5.Роль TLR в патогенезе инфекционных заболеваний и
инициации местной антиинфекционной резистентности 63
1.4. Состояние местной антиинфекционной
резистентности урогепиталыюго тракта (УГТ) 69
Глава 2. Материалы и методы исследования 92
2.1. Клинико-лабораторная характеристика обследованных пациентов 92
2.2. Клинико-лабораторные методы исследования 96
Микроскопическое исследование мазков со слизистых УГТ 97
Микробиологические исследования 97
Молекулярпо-генетические методы исследования 100
ПЦР диагностика хламидийной инфекции 102
Цитологический метод (диагностика хламидиоза) 104
Серологический метод (диагностика хламидийной инфекции) 105
Культуральпый метод (диаі поетика хламидиоза) 105
Иммунологические методы исследования 105
Сттисгическая обработка полученных данных 106
Глава 3. Патогенетическая, диагностическая и прогностическая роль микробиоценозов урогенитального тракта при заболеваниях женщин 108
3.1. Микробиотон влагалища как объективный показатель реактивности организма при уреаплазмозе 108
3.2 Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями микробиоценоза УГТ при УГХ у женщин 123
3.31 Микробиотон влагалища и его патогенетическая роль при уреаплазмозе и хламидиозе 132
Глава 4. Роль врождённого иммунитета слизистых урогенитального тракта женщин в патогенезе хламидийной инфекции 141
Глава 5. Колонизационная резистентность слизистых цервикального канала как неотъемлемая составляющая местного иммунитета 149
5.1. Роль микроорганизмов в колонизационной резистетности 149
5.2. Роль цитокинов цервикального канала в колонизационной резистетности 152
5.3. Роль иммуноглобулинов цервикального канала в колонизационной резистетности 159
5.4. Установление взаимосвязи рецепторов врождённого иммунитета, цигокинов, иммуноглобулинов и микроорганизмов биотопа цервикального канала в колонизационной резистентности 162
Глава 6. Связь фенотипических свойств возбудителя с клиническими проявлениями при урогенитальном хламидиозе 168
Заключение 186
Выводы: 194
Практические рекомендации 196
Литература
- Молекулярные механизмы взаимодействия TLR с клетками макроорганизма
- Молекулярпо-генетические методы исследования
- Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями микробиоценоза УГТ при УГХ у женщин
- Роль иммуноглобулинов цервикального канала в колонизационной резистетности
Молекулярные механизмы взаимодействия TLR с клетками макроорганизма
Впервые комплексно оценена просветная и пристеночная микрофлора влагалища и показатели иммуноглобулинов секрета влагалища клинически здоровых женщин и пациенток с уреаплазменной микст-инфекцией. Выявлено резкое снижение колонизационной резистентности, характеризующееся появлением и/или значительным увеличением в просветной и пристеночной областях ассоциаций условно-патогенных факультативно (стрептококки, стафилококки, энтерококки, энтеробактерии, капдида)- и облигатио-анаэробных микрооганизмов (пептострептококки, пептококки, гарднереллы, бактероиды, фузобактерии) и изменением показателей иммуноглобулинов секрета влагалища у пациенток с уреаплазменной микст-инфекцией, по сравнению с клинически здоровыми.
При хламидийной инфекции микроорганизмы, попадая на слизистые УГТ, взаимодействуют с рецепторами врождённого иммунитета и запускают воспалительную реакцию. Различные уровни активации рецепторов TLR-2 и TLR-4 зависят от качественного состава микробных сообществ, присутствующих на слизистой оболочке УГТ. Показатели уровней обсеменённости УПМ Цк, Ур и Вл прямо коррелировали с показателями уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4. Низкие уровни экспрессии генов TLR-4 при осложненном инфекционном процессе свидетельствуют о переключении TLR-4 типа иммунного ответа на TLR-2. Повышение экспрессии генов TLR-2 и TLR-4, как в Цк, так и в Ур, коррелирует с тяжестью клинических проявлений, зависящей как от хламидий, так и от ассоциатов (возбудителей ИППП и УПМ). Во Вл имеет место экспрессия генов TLR-2 и TLR-4 в ответ на УПМ, а в Цк и Ур - на УПМ и ИППП. Активация экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 происходит более выраженно в ответ на УПМ и менее выражено при контакте с нормофлорой.
Впервые установлена определяющая роль TLR-2 и TLR-4 слизистых нижних отделов урогенитального тракта в ответе макроорганизма на инфицирование хламидиями при урогенитальном хламидиозе. Естественная или приобретённая супрессия генов TLR-2 и TLR-4 обусловливает хроническое течение УГХ. При воспалении шейки матки/уретры более чем у половины женщин с хроническим рецедивирующим течением УГХ наблюдается снижение экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 (в полтора-два раза ниже значений у клинически здоровых пациентов), сопровождаемое уменьшением лейкоцитарной реакции. Как про-, так и антиапоптозная активности хламидии определяют характер развития инфекции: продуктивная инфекция либо персистенция.
Выявленные однотипные изменения показателей уровня экспрессии TLR-2 и TLR-4 в Цк и Ур пациенток с хронической формой хламидийной инфекции указывают на развитие "феномена рецепторной депрессии", сопровождающегося дисбалансом между развитием инфекционного процесса и воспалительной реакции. Уровни экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 служат критериями оценки выраженности хламидийной инфекции и наличия воспалительного процесса у больных, а при выздоровлении их снижение может свидетельствовать об эрадикации возбудителя. При острой хламидийной инфекции выявление низких уровней TLR-2 и TLR-4 указывает на возможность начала хронизации инфекционного процесса.
Впервые выявлена при УГХ в УГТ взаимосвязь рецепторов врождённого иммунитета TLR-2 и TLR-4 (контролируют запуск цитокинового каскада местной антиинфекционной резистентности, через который запускаются иммуноглобулиновое звено и воспалительная реакция) с микрофлорой биотопа (в том числе, с нормофлорой) определяет колонизационную резистентность слизистых и характеризует течение инфекционного процесса, выраженность клинических и лабораторных проявлений и исход заболевания (излеченріе, хронизация), а оценка их уровней носит диагностический и прогностический характер.
При хламидийной инфекции впервые выявлена зависимость выраженности патологического процесса и клинических проявлений от наличия и сочета 13 ния отдельных патогенетических факторов (плазмиды, функциональное состояние гена IncA, принадлежность штамма хламидий к конкретному генотипу, одновременное инфицирование штаммами хламидий с разными генотипами и возможность обменивания между ними генетической информацией с появлением другой разновидности хламидийного штамма).
Теоретическая значимость работы
Впервые показано, что взаимодействие микробиоценозов слизистых урогенитального тракта и макроорганизма носит динамический характер, обеспечивает жизненно необходимый оптимальный уровень реактивности макроорганизма. Тем самым, достоверно подтверждена роль микроорганизмов в обучении защитных систем макроорганизма в динамике онтогенеза. Формирование вторичного иммунодефицита является неотъемлемым патогенетическим фактором инфекционного процесса, обусловливающего, в конечном счёте, прогноз и исход заболевания.
Впервые выявлено, что взаимодействие микроорганизмов биотопов слизистых, а также возбудителей инфекционных заболеваний с рецепторами врождённого иммунитета является необходимым фактором запуска инфекционного процесса.
Впервые представлена колонизационная резистентность как неотъемлемая часть мукозального иммунитета.
Впервые показано влияние фенотипических и генотипических свойств возбудителя на выраженность патогенетического процесса, клинических проявлений при хламидийной урогенитальной инфекции.
Практическая значимость работы
Получен патент РФ «Способ оценки микробиоценоза влагалища» № 2249821. Зарегистрирован 10.04.2005. Предложена новая медицинская технология «Оценка микробиоценоза влагалища при инфекционных и других заболеваниях женской половой сферы», утверждена Минздравсоцразвитием: Разреше 14 ниє на применение новой медицинской технологии. Серия АА. № 0001997. ФС № 2009/187 от 17.07.2009. Разработаны и предложены лабораторные критерии диагностики урогенитального хламидиоза с установлением острой и хронической рецидивирующей формы заболевания, защищенные Патентом РФ «Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза» №2327995. Зарегистрирован 27.06.2008 г. На разработаный способ мультиплексной ПЦР диагностики хламидийной инфекции обезьян, вызванной видом Chlamydophila pneumoniae и Chlamydia trachomatis, и способ мультиплексной ПЦР диагностики плазмидных и бесплазмидных штаммов вида Chlamydia trachomatis, получен Патент РФ «Способ диагностики хламидийной инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления» № 2385946, зарегистрирован 10.04.2010, (награждён Федеральной службой по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам Дипломом в номинации «100 лучших изобретений России») и Патент РФ «Способ прогнозирования манифестной или стертой формы хламидийной инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления» № 2385945, зарегистрирован 10.04.2010 (награждён Федеральной службой по интеллектуальной собственности, патентам и товарным знакам Дипломом в номинации «100 лучших изобретений Росси»).
Молекулярпо-генетические методы исследования
К настоящему времени известно, что TLR генетически обусловлены, поэюму в небольших количествах они присутствуют уже при рождении ребенка [136]. В первую очередь на тех клетках, которые отвечают за врожденный иммунитет: макрофагах, дендритных клетках, эозинофилах, тучных клетках, нормальных киллерах, Т- и В-лимфоцитах. Есть они и на клетках безмикробных животных, хотя и в минимальном количестве. Конституциональная экспрессия генов TLR свидетельствует о постоянной готовности врожденного иммунитета и других клеток макроорганизма к встрече и распознаванию патогенов при сохранении возможности усиления иммунного ответа. В целом уровень экспрессии TLR довольно низкий — от сотен до нескольких тысяч на клетку [287]. Например, на поверхности мембраны моноцита находится от одной сотни до двух тысяч молекул TLR (в среднем 1300 молекул), а молекул адгезии CD44 - 300000, CD14 - 115000 молекул. Характерной онтогенетической особенностью экспрессии TLR является постепенное увеличение плотности рецепторов на поверхности мембран клетки в течении интра- и постнатального развития индивидуума [ 144, 337]. Уменьшение уровня экспрессии TLR с возрастом объясняет сниженную иммунологическую реактивность у пожилых людей [229].
Таким образом, уровень экспрессии TLR зависит от природы клетки-носителя, стадии ее развития (дифференцировка, созревание), характеристики распознаваемых бактериальных лигандов и лишь после контакта с микрофлорой количество рецепторов увеличивается [136]. Клетки нашего организма в зависимости от количества проявляющихся па них TLR могут находиться в активном и неактивном состоянии. Для активации клеток, то есть для увеличения на них количества TLR, должно происходить постоянное их раздражение микробными продуктами. Однако нормофлора эту функцию выполнять не может, поскольку TLR к ней голерангны. Подавляющее большинство микрорганизмов нормофлоры не оказывают отрицательного влияния на макроорганизм, они устанавливают нейтральные (комменсальные) или симбионтные взаимоотношения с организмом хозяина [217]. И только УПМ могут поддерживагь клетки врожденного иммунитета в активном состоянии, в результате чего начинается транскрипция mRNA TLR с последующим синтезом белков. Клетка активируется — в ней происходит активный синтез разнообразных медиаторов воспаления. Данный факт объясняет особенность экспрессии индивидуальных TLR на различных типах клеток и их локализацию в клеточных компартментах [110].
Большинство TLR располагаются на поверхности клеюк, реже — в цитоплазме, в области аппарата Гольджи. На мембране клеток обычно находятся те TLR, которые связываются с микроорганизмами, развивающимися вне клеток (бактериями, простейшими, грибами). На вирусы и другие внутриклеточные микробы нацелены TLR, сидящие на внутренних структурах клеток [350]. Так, функционально активные TLR-1, TLR-2, TLR-4, TLR-5 и TLR-6, распознающие РАМР бактерий и другие клеточные патогены, экспрессированы на поверхности клеюк, а после фагоцитоза патогена некоторые из них продолжают экспрессироваться на мембранах эндосом, где получают дополнительную возможность взаимодействовать с РАМР после разрушения патогена. Напротив, TLR-7, TLR-8 и TLR-9, распознающие различные варианты нуклеиновых кислот, слабо экспрессируются на внешней мембране клеток, а появляются в эндосомах, тогда как для TLR-3 возможны оба варианта экспрессии. TLR-9 конституционально экспрессируется на эндоплазматическом ретикулуме и появляется в эндосомах после активации клеток CpG-DNA [ПО].
Существует предположение, что TLR (по крайней мере, одна субпопуляция) присутствуют на мембранах любых клеток человеческого организма [302]. Так, TLR-1 экспрессирован практически на всех типах лейкоцитов, TLR-3, связывающий вирусную двуспиральную RNA, — в основном на нормальных клетках киллерах (NK-клетках), участвующих в противовирусном ответе, и на DC. TLR-2 и TLR-4 обнаружены на моноцитах/макрофагах, нейтрофильных гранулоцитах и DC, а также на эндотелии, гепатоцитах и эпителиальных клетках кишечника, респираторного и урогенитального трактов [ПО]. Нейтрофилы, моноциты/макрофаги экспрессируют все TLR, кроме TLR-3 [194]. Эозинофилы в основном экспрессируют mRNA TLR-1, -2, -4, -6, -7, -9 и -10 [269]. Базофилы экспрессируют TLR-2 и TLR-4 [299]. Тучные клетки экспрессируют mRNA для TLR-1, -2, -6, но не TLR-4. TLR-9 был обнаружен на поверхности антиген несущих клеток и идентифицирован на цитоплазматических фолликулах. Моноциты/макрофаги экспрессируют mRNA для всех TLR, кроме TLR-3 [220, 267].
TLR неодинаково представлены в разных субпопуляциях DC. На клеточной мембране миелоидных DC экспрессируются все TLR (TLR-1,-2,-4,-5,-6), кроме 7 и 9; в эндоплазме - LR-3 и TLR-8. В цитоплазме плазмацитоидных DC экспрессируются почти исключительно TLR-7 и TLR-9 [225, 230]. Процесс созревания материнских DC определяет экспрессию TLR. Так, экспрессия TLR-1, -2, -4, -5 снижается по мере созревания DC, в то время как TLR-3 экспрессируется только в созревших DC. В-клетки экспрессируют высокий уровень TLR-1, -6, -9, -10 и низкий уровень TLR-2, -4, -7 [220]. NK способны экспрессировать TLR-3, TLR-2, TRL-5 и TLR-9, активируются напрямую или непосредственно в ответ на полиинозиновую-полицидиновую кислоту (poly 1:С), вирусными компонентами (CpG-DNA). NK-клетки при стимуляции TLR2 и TRL5 лигандами индуцируют продукцию интерферона-а (IFNa) и повышенную секрецию защитных факторов [165, 308, 313].
Связь уровней экспрессии генов TLR-2 и TLR-4 с изменениями микробиоценоза УГТ при УГХ у женщин
Проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 50 женщин в возрасте 18-36 лет, с установленной уреаплазменной моно- и микст-инфекцией. U. urealiticum выявлвлась у всех больных в диагностическом титре более чем 104 КОЕ/мл. Контрольная группа (группа сравнения) включала 40 клинически здоровых женщин.
Клинико-анамнестические и лабораторные данные 228 больных с УГХ позволили отобрать 100 пациенток и 32 клинически здоровых женщин, которые были разбиты на 4 группы. Группу I составила 41 пациентка. Положительные результаты прямой иммунофлуоресценция (ПИФ), ПЦР и культурального посева подтверждали наличие Ch. trachomatis в УГТ. В сыворотке крови данных больных иммуноферменгным анализом (ИФА) определялись антитела (Ат) иммуноглобулина (Ig)- IgG-Ат в титре 1:50-100. Повторный лабораторный анализ на наличие антител (через 2-3 недели) показал появление IgM-Ат (в титре 1:50 и выше), что свидетельствовало о первичном инфицировании больных и острой стадии инфекционного заболевания. Пациентки отрицали наличие ранее перенесенного хламидиоза. Группу II составляли 29 пациенток. В сыворотке крови определялись стойкие титры IgA-Ат (1:100-1:200) и IgG-Ar (1:100-1:200), концентрация которых не изменялась на протяжении длительного периода. Длительность заболевания составляла от 3 до 5 лет. Положительные результаты ПИФ, культурального посева и ПЦР свидетельствовали о лабораторно подтверждённом рецидиве УГХ. Схожесть клинических проявлений и наличие двух эпизодов обострения заболевания в течение предшествующих 12 месяцев свидетельствовали о хроническом течении хламидийной инфекции. Рецидивы отмечались с частотой 1 раз в полгода. Все больные неоднократно получали антибактериальную терапию, однако не наблюдалось стойкого клинического и бактериологического положительного эффекта. В группу III (группа сравнения) вошли 30 пациенток, в анамнезе которых ранее диагностировался УГХ. Отсутствие lgA-Ат и низкие, не меняющиеся во времени титры IgG-Ar (1:50) свидетельствовали о давно перенесённой хламидийной инфекции. Об этом свидетельствовали и IgG-Ат в титрах 1:100-200, уровни которых снижались в течение 12 месяцев. Маркёры хламидий в УГТ не выявлялись ни одним из использованных методов диагностики в течение одного года. В группу IV (контрольная, группа сравнения) включили 32 клинически здоровые женщины. Клинико-лабораторное обследование подтвердило отсутствие признаков хламидийной инфекций и ИШТП, а также наличия гинекологической патологии. Возраст обследованных пациенток варьировал от 20 до 39 лет.
Дополнительно проведено клинико-лабораторное обследование 99 пациентов с подозрением на хламидиоз и 39 клинически здоровых пациентов.
По возрасіу, общему соматическому статусу, репродуктивному состоянию, выраженности клинических проявлений, социальному положению и уровню образования пациентки всех групп были сопоставимы.
Клинико-лабораторная характеристика клинически здоровых женщин контрольной группы (111 пациенток). Гинекологический анамнез обследованных контрольной группы показал, что беременность регистрировалась в 26,6% случаев, роды — в 20,0% случаев, а аборты - в 6,6% случаев. У 30,3% женщин выявлялись в анамнезе воспалительные заболевания половых путей: кольпит — у 23,5%, цистит — у 13,0%), эрозия шейки матки - у 6,0%. Из перенесенных инфекций половых путей выявлены: бактериальный вагинит - 10%), кандидоз - 17,5%. На момент обследования у 20,9%) женщин контрольной группы были жалобы на выделения из половых путей. У 8,1% диагностирован кольпит, у 6,2% - цистит, у 6,0% — эрозия шейки матки. У 24,4% женщин выявлены условно-патогенные микроорганизмы (пептострептококки, стафилококки, этерококки, кишечная палочка, грибы рода Candida) при отсутствии возбудителей ИГШП.
Клинико-лабораторная характеристика женщин с диагностированной уреаплазменной инфекцией урогенитального тракта (50 пациенток). Из анализа анамнеза выявлен высокий процент абортов, так из 58 беременностей только 16 завершились родами, у 4 больных отмечены самопроизвольные выкидыши. Наиболее высокий процент абортов выявлен в группе от 36 до 40 лет: из 18 беременностей- 2 родов, 15 абортов, 1 самопроизвольный выкидыш. Анализ репродуктивной функции обследованных установил наличие вторичного бесплодия у 24% пациенток при наличии различных патологических отклонений. Из перенесенных инфекций половых путей наиболее часто в анамнезе встречались уреаплазмоз - у 30%, бактериальный вагинит - у 18% и хламидиоз - у 14% обследованных; трихомониаз и вирус папилломы человека (ВПЧ) определялись ранее у 4% больных, цитомегаловирус (ЦМВ), вирус простого герпеса (ВПГ) и кандидоз - у 2% больных. У 58% встречались в анамнезе и были подтверждены при обследовании хронические воспалительные заболевания. Преобладали эрозия шейки матки - 24% и хронический сальпингоофорит - 20%. Кольпит, хронический цистит и эндометрит выявлялись в 2%, 4% и 6% случаев, соответственно. Оценка симптоматики заболеваний показала, что часто встречаемыми жалобами у больных являлись выделения из половых путей различной интенсивности, жжение и зуд в области влагалища и вульвы, боли внизу живота (тазовые боли). При исследовании в зеркалах у подавляющего большинства больных определялась гиперемия и отечность слизистой шейки матки, эктопия и контактная кровоточивость шейки матки. Основными клиническими проявлениями были цистит в 4,0% случаев, уретрит — в 12,0% случаев, цервицит - в 44,8% случаев, кольпит — в 2,0% случаев, эрозия шейки матки - в 32,0% случаев, сальпингоофорит — в 20,0% случаев.
Клинико-лабораторная характеристика женщин с диагностированной хламндийной инфекцией урогенитального тракта (100 пациенток). Из анализа анамнеза выявлен высокий процент абортов. В группе больных с острым хламидиозом из 26 беременностей только 15 завершились родами (х"=5,755, р 0,05), у 4 больных отмечены самопроизвольные выкидыши; у больных с обострением хронической хламидийной инфекции из 14 беременностей только 8 завершились родами, при этом у 6 человек в анмнезе был аборт или самопроизвольный выкидыш. Из перенесенных инфекций половых путей наиболее часто в анамнезе встречались уреаплазмоз — у 30%, бактериальный вагинит - у 18% обследованных; трихомониаз и ВПЧ определялись ранее у 4% больных, ЦМВ, ВГТГ и кандидоз - у 2% больных. В анамнезе выявлены воспалительные заболевания половых путей: кольпит — у 87,8% больных I группы, у 27,6% больных II группы, у 13,3% больных III группы; сальпингоофорит - у 12,2% больных I группы, у 24,1% больных II группы, у 20,0% больных III группы; цистит - у 53,7% пациентов I группы, у 13,8%о пациентов II группы и у 6,7% пациентов III; эрозия шейки матки - у 17,1%) обследованных I группы, у 34,5% обследованных II группы и у 10%) обследованных III группы. Оценка симптоматики заболевания показала, что часто встречаемыми жалобами у больных являлись выделения из половых путей различной интенсивности, жжение и зуд в области влагалища и вульвы, боли внизу живота (тазовые боли). У большей части больных выделения из влагалища были обильными, различными по цвету (белыми, желтыми или творожистыми, слизисто-гнойными) и характеру (жидкими или густыми) и большинства пациентов сопровождались зудом или дизурическими явлениями (хотелось чаще в туалет, боль при мочеиспускании или наблюдались стреляющие боли в мочевой пузырь или нижнюю часть живота, ощущение тяжести в низу живота, жжения или зуда во влагалище). При исследовании в зеркалах у подавляющего большинства больных определялась гиперемия и отечность слизистой шейки матки, эктопия и контактная кровоточивость шейки матки.
Роль иммуноглобулинов цервикального канала в колонизационной резистетности
При уреаплазмозе интенсивность колонизации пристеночной зоны влагалища лактобациллами достигала 4,2±0,5 lg КОЕ/г. Определялись у 100% больных и по частоте встречаемости они достоверно не отличались по сравнению с клинически здоровыми пациентами, по сравнению с пациентами при остром хламидиозе (выявлялись у 56,1% пациентов, б,5±1,0 lg КОЕ/г; Х =24,667, р 0,001) и при обострении хронического хламидиоза (%"= 12,466, р 0,001) различия достоверны, а также с переболевшими хламидиозом (х2=4,491, р 0,05). Бифидобактерии не определялись. При хламидиозе обнаружено достоверное снижение частоты выявления {% =\6,353, р 0,001) лактобацилл у больных осгрым хламидиозом (выявлялись у 56,1% пациентов, 6,5±1,0 lg КОЕ/г) по сравнению с клинически здоровыми пациентами, также достоверно различие по сравнению с пациентами при обострении хронического хламидиоза (выявлялись у 72,41%, 6,2±1,0 lg КОЕ/г; %2=4,272, р о,05) и переболевшими (выявлялись у 87,00%, 7,2±0,6 lg КОЕ/г; х2==6,200, р 0,05). Бифидобакгерии не выявлялись. У обследованных с обострением хронического хламидиоза частота выявления лактобацилл (72,41%), 6,2±1,0 lg КОЕ/г) достоверно (% -7,880, р 0,01) отличалась от гаковой у клинически здоровых пациентов. Различия с переболевшими не достоверны. Бифидобактерии выявлялись у двух пациентов. У переболевших и клинически здоровых пациентов- у 87,00% (7,2±0,6 lg КОЕ/г) и 100% пациентов (7,5±1,5 lg КОЕ/г), соответственно, выявлены лактобациллы; различия между группами пациентов не достоверны. У 26,6% переболевших и у 50% клинически здоровых пациентов бифидобактерии выделялись в количестве 5,2±0,7 lg КОЕ/г и 6,1+0,9 lg КОЕ/г, соответственно; различия между группами не достоверны. Следовательно, хламидийная инфекция в сопоставлении с уреаплазменной инфекцией сопровождается наиболее выраженными нарушениями (уменьшении) в содержании лактобацилл на слизистых гениталий женщин.
УПМ при остром уреаплазмозе регистрировались в количестве 6,2±1,2 lg КОЕ/мл, при остром хламидиозе - 8,1±0,4 lg КОЕ/мл, при обострении хронического хламидиоза - 4,6±1,0 lg КОЕ/мл, у переболевших - 2,5±1,2 lg КОЕ/мл, у клинически здоровых пациентов - 2,74±0,94 lg КОЕ/мл. Уровни вывления УПМ не различались при остром уреаплазмозе и остром хламидиозе, но они достоверно (при р 0,05) отличались от таковых других сравниваемых групп пацинтов. При уреаплазмозе и хламидиозе дисбиотические нарушения во влагалище сопровождались повышением частоты встречаемости семи условно-патогенных микроорганизмов с наиболее частой высеваемостыо при остром уреаплазмозе (табл. 10). Причём при уреаплазмозе высевались достоверно чаще Staphylococcus spp. по сравнению с острым хламидиозом (% =8,436, р 0,01), обострением хронического хламидиоза (х"=4,997, р 0,05), переболевшими пациентами (х =8,837, р 0,01) и клинически здоровыми пациентами (х"—14,370, р 0,001); Streptococcus spp. по сравнению с острым хламидиозом (Х =17,365, р 0,001), обострением хронического хламидиоза (х — 7,456, р 0,05), переболевшими пациентами (%"= 14,044, р 0,001) и клинически здоровыми пациентами (х =20,562, р 0,001); были не достоверны Таблица 10. Встречаемость условно-патогенных микроорганимов при уреаплазмозе и хламидиозе
Условно-патогенные микроорганизмы Острый уреаплазмоз 50 пациентов, % Острый хламидиоз. 41 пациент, % Обострение хроническогохламидиоза 29 пациентов,% Пациенты, перенёсшие, хламидиоз 30 человек, % Клинически здоровые пациенты,32 человека,% Staphylococcusspp. 46,0 17,5 20,1 12,5 6.0 Streptococcus spp. 56.0 17,5 22,9 13.5 6,0 Enterococcus spp. 42,0 51,2 26,9 3,3 3.0 Candida spp. 48,0 29,3 31,0 6,7 4,0 Esherichia coli spp. 10,0 6,0 7,4 0 0 различия показателей высеваемости стрептококков и стафилококков между острым хламидиозом и обострением хронического хламидиоза, а также между указанными группами больных но сравнению с переболевшими и клинически здоровыми пациентами. Пациенты с острым уреаплазмозом, острым хламидиозом и обострением хронического хламидиоза по выссваемости Enterococcus spp. и Candida spp. не различались; частота высеваемости Enterococcus spp. и Candida spp. у пациентов с уреаплазмозом была достоверно выше по сравнению с переболевшими пациентами (х —12,188 при р 0,001 и Х -12,779 при р 0,001, соответственно) и клинически здоровыми (х -14,838 при р 0,001 и % —16,484 при р 0,001, соответственно); высеваемость Enterococcus spp. у больных острым хламидиозом достоверно выше чем при обострении хронического хламидиоза (х"=3,854, р 0,05), у переболевших (Х = 16,405, р 0,001) и клинически здоровых (% = 17,527, р 0,001), а при обострении хронического хламидиоза достоверно выше по сравнению с переболевшими (х"—4,964, р 0,05) и клинически здоровыми пациентами (Х"-5,423, р 0,05); уровни показателей высеваемости Candida spp. у больных острым хламидиозом и обострением хронического хламидиоза достоверно не разлчались, однако они достоверно выше чем у переболевших хламидиозом (Х =4,254 при р 0,05 и х =4,278 при р 0,05, соответственно) и у клинически здоровых пациентов (х "—6,701 при р 0,01 и х б.,730 при р 0,01, соответственно). Частота высеваемости Gardnerella vaginalis достоверно выше при уреаплазмозе по сравнению с хламидиозом (х =4,086, р 0,05). При уреаплазмозе и при хламидийной инфекции с одинаковой частотой высевались энтерококки и грибы рода Кандида, которые обусловливают внутрибольничную инфекцию на фоне снижения иммунологической реактивности и колонизационной резистентности слизистых макроорганизма. Следовательно, наблюдается относительно сниженная реакция на условно-патогенную микрофлору.
По сравнению с уреаплазмозом при хламидийной инфекции регистрируется развитие более выраженного длительного вторичного иммунодефицита. При этом на местном уровне отмечаются относительно слабо выраженная воспалительная реакция при остром и обострении хронического хламидиоза, угнетение нормофлоры (лактобациллы и бифидобактерии), сниженная реакция на условно-патогенную микрофлору, что в сочетании способствует нарушению колонизационной резистентности слизистых как основного компонента мукозального иммунитета, а на организменном уровне-развитие у переболевших кольпита, эрозии шейки матки, сальпингоофорита и возможная малигнизация тканей.
Суммируя результаты проведённого анализа полученных данных можно заключить, что взаимодействие микробиоценозов слизистых урогенитального тракта женщин и макроорганизма носит динамический характер, обеспечивает жизненно необходимый оптимальный уровень реактивности макроорганизма. В ряде случаев, биологические особенности возбудителя инфекционного заболевания и условно-патогенной микрофлоры слизистых наряду с выраженными клиническими проявлениями способствую формированию стойкого вторичного иммунодефицита, обусловливающего, в конечном счёте, прогноз и исход заболевания.