Введение к работе
Актуальность исследования
Гипертензивные расстройства - одна из актуальных проблем в современном акушерстве, так как являются распространенной патологией при беременности и занимают ведущее место в структуре материнской и перинатальной заболеваемости и смертности [Чингаева Г.Н., 2013; Манухин И.Б., 2012; Макаров И.О. с соавт., 2011;Clivaz Mariotti L. et al., 2007]. В последнее время все большее количество исследований свидетельствует о роли иммунных нарушений в патогенезе гипертензивных расстройств во время беременности [Сотникова Н.Ю. с соавт., 2005; Посисеева Л. В. с соавт., 2008; Панова И.А., 2007; Laresgoiti-Servitje E. et al., 2010; Saito S. et al., 2007]. Большинство исследователей сходятся во мнении, что иммунная система женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности находится в активированном состоянии [Сотникова Н.Ю., 2005; Посисеева Л.В. с соавт., 2008; Панова И.А., 2007; Xia Y. et al., 2007; Laresgoiti-Servitje E. et al., 2010]. Так, при данной акушерской патологии усиливаются реакции адаптивного иммунитета с участием различных популяций ЦТЛ на системном и локальном уровне [Сотникова Н.Ю. с соавт., 2005; Посисеева Л. В. с соавт., 2008.; Paeschke S. et al., 2005; Darmochwal-Kolarz D. et al., 2007]. В последние годы было показано, что уровень функциональной активности цитотоксических Т-лимфоцитов определяется стадией их дифференцировки [Сотникова Н.Ю., 2010; van Leeuwen R. et al., 2006]. При этом различают 4 пула цитотоксических Т-лимфоцитов: наивные клетки, центральные, претерминально-дифференцированные и терминально-дифференцированные клетки памяти, характеризующихся различной экспрессией молекул CD45RA и CD62L [Tomiyama H. et al., 2002; Geginat G. et al., 2003; Sallusto F. et al., 2004]. Переход клеток на новую стадию дифференцировки определяет путь рециркуляции клеток через лимфоидную ткань, изменяет продукцию цитокинов и цитолитических молекул [Maldonado A., 2003; Blander J.M. et al., 2003; Beckhove P. et al., 2004; van Leeuwen R, 2006]. В литературе практически отсутствуют данные о характере дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов при гипертензивных расстройствах во время беременности. Известно, что на дифференцировку клеток памяти способны оказывать влияние IL-2, IL-7, IL-15, TNF и глюкокортикоиды [Талаев В.Ю. с соавт. 2005; Лядова И.В., 2008; Geginat J. et al., 2003]. Рядом авторов было показано, что при гестозе в периферической крови матери возрастает сывороточное содержание IL-2 [Dimitrakova E. et al., 2007; Brewster J.A. et al., 2008] и уровень ЦТЛ, экспрессирующих рецепторы к IL-2 [Панова И.А., 2006]. В литературе дискутируется вопрос о возможности изменения характера иммунного ответа при гестозе в результате стимуляции материнских лимфоцитов микрочастицами синцитиотрофобласта попавшими в кровоток матери [Germain S. et al., 2007]. Отмечалось стимулирующее влияние частиц синцитиотрофобласта на продукцию провоспалительных цитокинов периферическими лимфоцитами при преэклампсии [Germain S. et al., 2007]. Но данные об особенности влияния IL-2 и микрочастиц синцитиотрофобласта на дифференцировку цитотоксических Т-лимфоцитов при неосложненной и осложненной, гипертензивными расстройствами беременности отсутствуют.
Изучение процессов дифференцировки ЦТЛ с формированием различных пулов клеток памяти и их функциональной активности на системном и локальном уровнях, а также факторов, влияющих на данный процесс, позволяет уточнить механизмы, определяющие развитие гипертензивных расстройств во время беременности.
Цель исследования: установить особенности дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов и ее регуляции у женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности для уточнения иммунных механизмов развития гипертензивных расстройств во время беременности.
Задачи исследования:
1. Выявить особенности дифференцировки клеток памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов периферической крови и децидуальной оболочки плаценты при гипертензивных расстройствах во время беременности.
2. Оценить внутриклеточную продукцию эффекторных молекул GranzymeB, Perforin, IFN и TNF CD45RA+ и CD45RA- клетками в популяции цитототоксических Т-лимфоцитов при гипертензивных расстройствах во время беременности.
3. Выявить в эксперименте in vitro влияние IL-2 и микрочастиц ворсин аутологичного хориона на дифференцировку клеток памяти и параметры их апоптоза в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов при неосложненной и осложненной гипертензивными расстройствами беременности.
4. Выявить в эксперименте in vitro влияние IL-2 и микрочастиц ворсин аутологичного хориона на внутриклеточную продукцию эффекторных молекул GranzymeB, Perforin, IFN и TNF цитототоксическими Т-лимфоцитами при неосложненной и осложненной гипертензивными расстройствами беременности.
Научная новизна исследования
Впервые установлено, что развитие гипертензивных расстройств во время беременности сочетается с изменением характера дифференцировки клеток памяти в популяции цитотоксических Т-лимфоцитов, заключающимся в накоплении в периферической крови терминально-дифференцированных клеток памяти, в децидуальной оболочке - претерминально-дифференцированных клеток памяти.
Впервые выявлено, что при гестационных гипертензивных расстройствах в популяции CD8+ лимфоцитов повышается содержание клеток, продуцирующих провоспалительные цитокины и цитолитические молекулы, в периферической крови в пуле CD45RA+ лимфоцитов, в децидуальной оболочке плаценты - в пуле CD45RA- лимфоцитов.
В эксперименте in vitro впервые показано, что независимо от наличия гипертензивных расстройств у беременных IL-2 стимулирует рост уровня наивных клеток и снижение количества терминально-дифференцированных клеток памяти, и только при неосложненной беременности IL-2 повышает уровень центральных и снижает содержание претерминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов.
Впервые установлено, что стимуляция микрочастицами ворсин хориона периферических CD8+ лимфоцитов женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности индуцирует повышение пула наивных клеток и снижение содержания терминально-дифференцированных клеток памяти, при неосложненной беременности к снижению уровня наивных, центральных, претерминально-дифференцированных и повышению пула терминально-дифференцированных клеток памяти.
Впервые выявлено, что под влиянием IL-2 при беременности независимо от наличия гипертензивных расстройств, стимулируется ранний апоптоз периферических цитотоксических Т-лимфоцитов, только при гипертензивных расстройствах подавляются конечные этапы апоптоза.
Показано, что стимуляция микрочастицами ворсин хориона плаценты лимфоцитов при гипертензивных расстройствах во время беременности подавляет переход клеток на конечные этапы апоптоза, при неосложненной беременности – ранние этапы апоптоза в популяции периферических CD8+ лимфоцитов.
Впервые определено, что стимуляция IL-2 периферических CD8+ лимфоцитов при неосложненной беременности индуцирует повышение количества CD45RA+IFN+ клеток и снижение CD45RA+Perf+, CD45RA+GrB+ и CD45RA-GrB+ клеток.
В эксперименте in vitro показано, что под влиянием микрочастиц ворсин хориона аутологичной плаценты в группе женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности происходит усиление внутриклеточной продукции TNF в популяции периферических CD45RA-CD8+ лимфоцитов, при неосложненной беременности – подавление внутриклеточной продукции Perforin периферическими CD8+CD45RA+ лимфоцитами.
Практическая значимость работы
Впервые установлены нормативные показатели содержания наивных, центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции CD8+ лимфоцитов в периферической крови и в лейкоцитарном инфильтрате децидуальной оболочке зрелой плаценты.
Положения, выносимые на защиту
Гипертензивные расстройства во время беременности сочетаются с изменением дифференцировки цитотоксических Т-лимфоцитов: на уровне периферической крови отмечается увеличение пула терминально-дифференцированных клеток памяти, на уровне децидуальной оболочке плаценты - накопление центральных и претерминально-дифференцированных лифоцитов при уменьшении количества терминально-дифференцированных клеток памяти. При этом происходит накопление в периферической крови CD45RA позитивных CD8+ лимфоцитов, продуцирующих GranzymeB, Perforin и TNF, и снижение количества CD45RA- цитотоксических Т-лимфоцитов, продуцирующих Perforin и IFN; в децидуальной оболочке плаценты – угнетение уровня CD45RA+ цитотоксических Т-лимфоцитов, синтезирующих GranzymeB, IFN и TNF, на фоне увеличения пула CD45RA- цитотоксических Т-лимфоцитов, продуцирующих GranzymeB, IFN и TNF.
IL-2 стимулирует рост уровня наивных лимфоцитов и уменьшает количество терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических цитотоксических Т-лимфоцитов женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности, а также стимулирует вступление периферических ЦТЛ в ранние этапы апоптоза.
Микрочастицы ворсин хориона индуцируют повышение пула наивных клеток и снижение содержания терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции периферических CD8+ лимфоцитов у женщин с гипертензивными расстройствами во время беременности, подавляют переход CD8+ лимфоцитов на конечные этапы апоптоза и усиливают продукцию TNF периферическими CD45RA-CD8+ лимфоцитами.
Внедрение результатов в практику
Нормативные показатели содержания наивных, центральных, претерминально-дифференцированных и терминально-дифференцированных клеток памяти в популяции CD8+лимфоцитов в периферической крови и в лейкоцитарном инфильтрате децидуальной оболочке зрелой плаценты используются в работе врачей аллергологов-иммунологов КДП ФГБУ «Ив НИИ М и Д им. В.Н.Городкова» Минздрава России и в учебном процессе на кафедре патофизиологии, клинической патофизиологии и иммунологии ГБОУ ВПО «ИвГМА» Минздрава России.
Апробация работы: Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых ФГБУ “Ив НИИ М и Д им. В.Н. Городкова” Минздрава России, Иваново 2009г., 2010г., 2011г.; VIII конференции иммунологов Урала, Сыктывкар 2010г.; IV Всероссийской конференции «Иммунология репродукции», Пермь 2011г.; конференции «Клиническая иммунология и иммуногенетика – междисциплинарные проблемы», Ташкент 2010г.; IX Российской конференции иммунологов Урала, посвященной 90летию Л.Я. Эберта, Челябинск 2011г.; XIV Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Санкт-Петербург 2011г.; VIII Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, V Съезде иммунологов России, Москва 2011г.; Объединенном иммунологическом форуме, VI Съезде иммунологов России, VI конференции по иммунологии репродукции, Нижний Новгород 2013г.
Публикации: по теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 10 в рецензируемых журналах, включенных в перечень журналов, рекомендованных ВАК РФ.
Личное участие автора: Диссертационная работа представляет собой самостоятельный труд автора. Автором самостоятельно выполнялись иммунологические исследования. Была проведена систематизация полученных результатов, их статистическая обработка, описание полученных результатов.
Структура и объем диссертации:
Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, содержит введение, обзор литературы, 2 главы собственных исследований, обсуждение результатов, заключение, выводы и практические рекомендации, список литературы, включающий 211 источников. Работа иллюстрирована 24 таблицами.
![Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов](/i/i/4503/301534.png "Изучение влияния [Г]-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима) на дифференцировку и функциональную активность лимфоцитов Петров Александр Владимирович")
![Профилактика растяжек во время беременности и послеродового периода [Электронный ресурс]](/i/i/4253/194387.png "Профилактика растяжек во время беременности и послеродового периода [Электронный ресурс] Шаталова Светлана Тимофеевна")