Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы : 12
1.1. Развитие гормонально-цитокинового дисбаланса при хронической почечной недостаточности 12
1.2. Влияние гемодиализа на цитокиновый профиль у больных ХПН 21
1.3 Функциональное состояние клеток крови при хронической почечной недостаточности 23
1.3.1. Состояние эритроцитов 23
1.3.2. Функциональное состояние лейкоцитов 25
1.3.3. Функциональное состояние тромбоцитов 27
1.4. Состояние системы комплемента у больных ХПН 29
1.5. Влияние диализа на функциональное состояние клеток крови 30
1.5.1. Влияние диализа на состояние эритроцитов 30
1.5.2. Влияние диализа на функциональную активность лейкоцитов 33
1.5.3. Влияние диализа на функциональную активность тромбоцитов 34
1.6. Состояние свободно-радикальных процессов у больных ХПН, находящихся на гемодиализе 36
1.6.1. Состояние нитроксидергических процессов у больных ХПН 37
1.7. Влияние гемодиализа на состояние свободно-радикальных процессов у больных терминальной ХПН 38
1.7.1. Состояние нитроксидергических процессов у больных на гемодиализе 41
1.8. Состояние системы комплемента у больных ХПН, находящихся на гемодиализе 42
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1. Характеристика клинической группы 44
2.2. Методы исследования 45
2.2.1. Гематологические методы 45
2.2.2. Биохимические методы 51
2.2.3. Хемилюминесцентные методы 51
2.2.4. Иммунологические методы 53
2.2.5. Статистические методы 54
Глава 3. Хроническая почечная недостаточность, гемодиализ и процессы свободно-радикального окисления в крови 55
Глава 4. Дисфункция клеток при хронической почечной недостаточности, влияние гемодиализа 75
Глава 5. Дезрегуляция клеток крови при хронической почечной недостаточности 100
Заключение из
Выводы 128
Список литературы 131
- Функциональное состояние лейкоцитов
- Влияние гемодиализа на состояние свободно-радикальных процессов у больных терминальной ХПН
- Гематологические методы
- Иммунологические методы
Введение к работе
На 1 млн. населения в развитых странах приходится 200-250 больных с хронической почечной недостаточностью (ХПН), из них 70 - 80 человек ежегодно умирают. Такие тяжелые поражения почек развиваются в трудоспособном возрасте у женщин до 40 лет, у мужчин после 40 лет (71). Патофизиологические проявления терминальной ХПН разнообразны, включают нарушения водно-электролитного, кислотно-основного, липидного, белкового, углеводного обменов, кроветворения, гемостаза, терморегуляции, гормональной регуляции, гемодинамики, развитие гипоксии, синдрома эндогенной интоксикации. В 100% случаев у больных терминальной ХПН развиваются анемия, гиперволемическая или ренинзависимая гипертония, сердечно-сосудистые нарушения, которые являются наиболее частой причиной смерти у больных ХПН (77), в 24-60% случаев развиваются инфекционные осложнения, что значительно ухудшает прогноз заболевания и реабилитацию больных. Основой инфекционных осложнений является вторичный иммунодефицит, прогрессирующий по мере ухудшения деятельности почек (9, 18,67,59).
Наиболее распространенное лечение данной категории больных -гемодиализ или перитонеальный диализ. Но диализная терапия имеет свои показания, противопоказания и осложнения. Указывается, что у больных получающих гемодиализную терапию ИБС развивается в 3-10 раз чаще, чем у больных ХПН без диализа; отмечается наличие аритмии, гипотонии или «синдиализной» гипертонии (2, 77). Для ХПН характерно развитие синдрома нарушенного равновесия (12), когда исчезает структурная и функциональная взаимосвязь между клетками крови и жидкой частью, усугубляемая гемодиализной терапий. Наличие синдрома эндогенной интоксикации обусловливает развитие клеточной дисфункции, в том числе и нарушение экспрессии регуляторных цитокинов. Кроме того, сама процедура гемодиализа может вызвать или усилить проявления клеточной дисфункции и дизрегуляции. Нарушение функции эндотелиоцитов, клеток крови и дизрегуляция может вносить определенный вклад в клинические проявления ХПН, в частности, развитие гипертонии и гипотонии, атеросклероза, ИБС, инфекционных осложнений, нарушение гемостаза, формирование анемии. Знание новых механизмов развития терминальной ХПН у пациентов, находящихся на гемодиализе, будет способствовать улучшению технологий лечения, сохранению и улучшению качества жизни больных. Все выше изложенное определяет актуальность и цель исследования.
Цель исследования
Установить наличие, проявления и некоторые механизмы дисфункции и дисрегуляции клеток крови у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
Задачи исследования
1. Исследовать интенсивность свободно-радикальных процессов в жидкой части и клетках крови у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
2. Исследовать образование метаболитов оксида азота у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
3. Исследовать агрегацию тромбоцитов, деформабильность и агрегацию эритроцитов, электрический заряд и электрофоретическую подвижность клеток крови, межклеточные взаимодействия у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
4. Исследовать содержание железа, насыщение трансферрина, содержание ферритина у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
5. Исследовать содержание эритропоэтина, интерлейкинов-ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4 у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
6. Исследовать активность системы комплемента у больных терминальной хронической почечной недостаточностью до и после процедуры гемодиализа.
Научная новизна исследования
Впервые показано, что у больных терминальной хронической почечной недостаточностью, на фоне окислительного напряжения, в организме гемодиализ еще более увеличивает активность этого процесса. После гемодиализа возрастает спонтанная хемилюминесценция крови, количество конечных продуктов ПОЛ, концентрация нитритов и нитратов. Выраженность процессов СРО связана со сроком ХПН и количеством гемодиализов. Характерно усиление свободно-радикальных процессов в додиализный период в эритроцитах и тромбоцитах. Гемодиализ активирует СРО в тромбоцитах, но снижает в эритроцитах. Для больных с ХПН характерна дисфункция клеток крови: нарушение деформабильности и агрегации эритроцитов, агрегации тромбоцитов, заряда и электрофоретической подвижности всех клеток крови, межклеточных контактов. Гемодиализ способствует возрастанию дисфункции тромбоцитов, восстановлению функции эритроцитов. У обследованной категории больных не отмечено нарушений в обмене железа, но диализ способствует снижению ферритина и у 40% его концентрация в пределах 18-32 мкг/л. Впервые установлено, что у больных ХПН содержание ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-3, ИЛ-4 отлично от их количественного представительства в норме. Гемодиализ приводит к снижению уровня ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-4, не изменяет содержание ИЛ-2; активирует сниженную до диализа активность комплемента. Теоретическая и практическая значимость исследования
Выявление новых частных и общих проявлений, механизмов дисфункции и дисрегуляции клеток крови при терминальной ХПН имеет большое значение для развития патофизиологии почек. Патофизиологические и клинические проявления у больных ХПН, находящихся на гемодиализе в определенной мере обусловлены самой процедурой гемодиализа. Гемодиализная процедура, с одной стороны, способствует удалению уремических токсинов из организма, с другой — неоднозначно влияет на функциональное состояние клеток, цитокиновый профиль, содержание ферритина, активность комплемента, усиливает свободно-радикальное окисление в крови. Изменение цитокинового профиля до и после гемодиализа может быть одной из причин развития анемии, вторичного иммунодефицита у данной категории больных. Полученные результаты важны для развития медицины, патофизиологии, нефрологии и могут быть использованы в преподавании соответствующих разделов на теоретических и клинических кафедрах медицинских ВУЗов. Практическое значение работы состоит в том, что дано патогенетическое обоснование необходимости внедрения новых медицинских технологий с целью коррекции свободно-радикального окисления, клеточной дисфункции и дисрегуляции у больных хронической почечной недостаточностью, находящихся на гемодиализе. Методы исследования хемилюминесценции плазмы и клеток крови позволяют объективно оценивать интенсивность окислительного напряжения у больных хронической почечной недостаточностью и эффективность процедуры гемодиализа.
Основные положения, выносимые на защиту
1. У больных в додиализный период активированы процессы свободно-радикального окисления. Процедура гемодиализа способствует еще большей активации этого процесса. У больных терминальной хронической почечной недостаточностью установлена дисфункция клеток крови, проявляющаяся активацией СРО в тромбоцитах и эритроцитах, нарушением агрегации тромбоцитов; снижением деформабильности эритроцитов; снижением электрофоретической подвижности клеток крови. Гемодиализ приводит к еще большему нарушению функции тромбоцитов, способствует восстановлению функции эритроцитов и заряда клеток крови. Дисрегуляция у больных терминальной хронической почечной недостаточностью подтверждается изменением представительства ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-2; отсутствием повышения эритропоэтина при наличии выраженной анемии. Гемодиализ проводит к снижению ИЛ-1, ИЛ-3 и ИЛ-4, ферритина и активации комплемента.
Апробация работы
Основные положения диссертации представлены на VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2006); межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные проблемы внутренних болезней: традиционные и психосоматические подходы» (Челябинск, 2007); V итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (Челябинск, 2007); международной конференции «Гемореология и микроциркуляция» (Ярославль, 2007); научно-практической конференции, посвященной 69-летию Челябинской областной клинической больницы «Актуальные проблемы практической медицины: материалы (Челябинск, 2007).
Внедрение результатов исследования
Результаты исследования внедрены в преподавание патофизиологии, биохимии в разделах «Патофизиология почек», «Патофизиология системы крови», «Биохимия крови», «Биохимия мочи», «Регуляция водно-солевого обмена», в ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава», ГОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия Росздрава». Методы исследования эритроцитов внедрены в научную работу кафедры патофизиологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава» и в практику отделения диализа ГМЛПУЗ «Челябинская областная клиническая больница».
Функциональное состояние лейкоцитов
Оксидативный стресс и воспаление являются неотъемлемым компонентом хронической почечной недостаточности, при этом восприимчивость больных к инфекции повышается. Ключевую роль в противоинфекционной защите организма играет система полиморфноядерных нейтрофилов (122). Поэтому изучение их состояния представляет существенный интерес. Имеются достаточные свидетельства изменения спектра адгезивных молекул нейтрофилов. Так, Yoon et al. показали, что при терминальной ХПН гранулоциты экспрессируют достоверно большее количество интегринов CDllb и CD18 и содержат при этом меньшее количество гранул, чем в контрольной группе, что указывает на их спонтанную активацию (305). Сходные результаты были получены также Caimi et al. По их данным, покоящиеся гранулоциты экспрессируют повышенное количество интегринов CDllb, CDllc и CD18. Активация их с помощью форбол-миристил-ацетата приводит к дальнейшему росту экспрессии CDllb, CDllc, CD18, а экспрессия CD Па не изменяется. Таким образом, спектр адгезивных молекул отличается от нормального (111).
При изучении степени примирования гранулоцитов больных ХПН было обнаружено, что выброс перекиси водорода в ответ на стимуляцию достоверно повышен, причем степень усиления коррелирует с тяжестью недостаточности. Одновременно повышались содержание внутриклеточной МПО и активность апоптоза (265). Активность фагоцитоза и базальная продукция Н2Ог не изменяются, а стимулированная секреция супероксидного радикала также повышена (296). Как возможный механизм усиления продукции свободных радикалов нейтрофилами рассматривается накопление в плазме метилглиоксаля, который способен вызывать дегрануляцию in vitro (298). С другой стороны, при ХПН страдает локомоторная функция нейтрофилов: плазма больных ХПН угнетает миграцию нейтрофилов, вызванную формил-метионил-лейцил-фенилаланином. Степень выраженности этого феномена прямо зависит от содержания в плазме лептина (231). В качестве еще одного возможного эндогенного ингибитора миграции нейтрофилов рассматривают пара-крезол, однако его действие опосредовано через блокаду секреции фракталкина и адгезивной молекулы JAM-A эндотелиальными клетками, что впоследствии снижает способность гранулоцитов мигрировать через сосудистую стенку (140). Необходимо отметить также повышенную апоптическую активность нейтрофилов, определяемую по экстернализации фосфатидилсерина, причем данный факт отмечается только при терминальной ХПН и исчезает с началом диализа (257). Аналогично изменяется ригидность нейтрофилов: повышаясь при терминальной ХПН, она возвращается к норме у диализных больных (269). Интегральный показатель функции нейтрофилов - хемилюминесценция цельной крови - повышена в 5 раз по показателям светосуммы и вспышки (253).
Свойства же прочих клеток крови у больных с уремией практически не изучены. Интерес представляют факт обнаружения у мононуклеарных клеток больных ХПН способности угнетать продукцию эритропоэтина in vitro (112), а также способность уремической плазмы стимулировать апоптоз моноцитов (126).
Нарушение процессов взаимодействия «тромбоцит-тромбоцит» и «тромбоцит-эндотелий» рассматривают как основную причину кровоточивости у больных с уремией (247, 202). Страдают все компоненты гемостатической функции тромбоцитов: активация, адгезия, секреция, агрегация (179), хотя, по мнению некоторых авторов, и в настоящее время характер нарушения функции тромбоцитов требует уточнения (105). До настоящего момента общепризнанным остается концепция о том, что нарушения функции тромбоцитов являются следствием их контакта с «уремическими токсинами» (95). Основными лабораторными проявлениями дисфункции тромбоцитов являются нарушение АДФ-индуцированной агрегации и ретенции тромбоцитов при их нормальном количестве, а также замедление процесса дезагрегации (139).
Влияние гемодиализа на состояние свободно-радикальных процессов у больных терминальной ХПН
Взаимодействие гранулоцитов периферической крови с мембраной диализатора является основным источником свободных радикалов в процессе диализа. В свою очередь, свободно-радикальной атаке подвергаются мембраны эритроцитов, которые изменяют свою резистентность, а также эндотелиоциты (229).
Литературные данные относительно базального состояния свободно-радикальных процессов весьма противоречивы. Так, Ward и McLeish считают, что активация свободно-радикальных процессов присутствует как у больных с ХПН, так и на диализе и связана только с наличием уремии, а факт проведения диализа не оказывает особого влияния (297). В связи с этим представляют особый интерес данные о влиянии первой процедуры диализа на состояние СРО. До диализа обнаруживался повышенные уровень МДА и активность СОД (оба - в эритроцитах) и сниженный уровень GSH. После диализа уровень МДА стал еще выше, а СОД и GSH снизились. Таким образом, авторы делают вывод, что диализ лишь усиливает оксидативный стресс, присутствующий при уремии (123).
Taylor et al. считают, что базисный уровень МДА у диализных больных также повышен по сравнению со здоровым контролем и указывают, что активность СОД эритроцитов ниже нормальной (281). Loughrey et al. произвели сравнение уровня МДА между больными терминальной ХПН и диализными больными и обнаружили достоверное его повышение в последней группе. Таким образом, диализ усиливает оксидативный стресс, вызванный уремией (203). Уровень МДА плазмы и эритроцитов после диализа изменяются разнонаправленно. Так, Hirayama et al. приводят данные о том, что ТБК-позитивные продукты плазмы после диализа снижаются до уровня здоровых людей, тогда как до диализа они достоверно повышены. Maher et al. указывают, что диализ вообще не влияет на уровень МДА плазмы вне зависимости от типа используемой мембраны (207). Вместе с тем, диализ не снижает уровень гидроперекисей плазмы, который стабильно выше контроля (164) или даже повышает его выше исходного уровня (135). Таким образом, в целом диализные больные находятся в состоянии оксидативного стресса, который не корригируется процедурой и связан в значительной мере не только с активацией продукции радикалов, но и со снижением активности антиоксидантной системы (220).
Весьма сложно дать однозначную оценку состоянию АОС вследствие большого числа ее компонентов. По данным Toborek et al., у больных снижена общая антиоксидантная активность плазмы, при этом активность СОД повышена, а каталазы - нормальна. После диализа лишь снижалась активность СОД (283). Jackson et al. приводят прямо противоположные данные: они указывают, что до диализа общая АОА повышена за счет накопления урата, и соответственно его удаление при диализе приводит к достовеному падению общей АОА. Также диализ снижает уровень аскорбата и токоферола (173). По данным Dakshinamurty et al., уровень токоферола, напротив, достоверно повышается (128).
Наиболее изученной у диализных больных представляется система глютатиона. Фоновый уровень GSH плазмы достоверно снижен и не изменяется или достоверно снижается после диализа. Так как активность глютатион-синтетазы не отличалась от контроля, падение уровня глютатиона предположительно связано с блокадой гамма-глутамил-цистеин-синтетазы -ключевого фермента синтеза глютатиона. Уровень глютатион-редуктазы достоверно выше, а глютатион-пероксидазы — ниже контроля. После диализа активность этих ферментов приближается к норме (79, 259). Таким образом, система глютатиона мало страдает у диализных больных, что согласуется с данными о ее состоянии в эритроцитах. Klemm et al. изучали ее методом ЭПР и обнаружили, что системы глютатиона и гексозомонофосфатного шунта функционируют нормально, однако при их блокаде элиминация свободных радикалов резко замедляется в сравнении с нормой. Следовательно, в эритроцитах больных нарушены другие антиоксидантные системы (183). Имеются сведения о том, что процедура диализа не влияет на уровень церулоплазмина (219).
Гематологические методы
Обследовано 80 больных с терминальной почечной недостаточностью в возрасте от 23 лет до 61 года (средний возраст 45,72±2,06 лет). Из них 41 женщина и 39 мужчин. Основными причинами ХПН явились хронический пиелонефрит (35%), хронический гломерулонефрит (40%), артериальная гипертензия (8%), поликистоз почек (7%), амилоидоз почек (7%), сахарный диабет (3%). Стаж заболевания составил от 1 до 14 лет (в среднем 4,44±0,55 лет).
Все больные 2 раза в неделю получали гемодиализную терапию в отделении диализа ГМЛПУЗ «Челябинская областная клиническая больница». Гемодиализ осуществлялся на аппаратах «искусственная почка» 4008S/BIBAG фирмы «Fresenius» в течение 5 часов. Диализаторы полисульфоновые фирмы «Fresenius» F7HPS (площадь мембраны 1,6 м ; коэффициент ультрафильтрации 16 Hd/час, клиренс: мочевина 188 мл/мин, креатинин 175 мл/мин, витамин Bi2 102 мл/мин, фосфаты 155 мл/мин) или F8HPS (площадь мембраны 1,8 м ; коэффициент ультрафильтрации 18 Hd/час; клиренс: мочевина 190 мл/мин, креатинин 177 мл/мин, витамин В\2 106 мл/мин, фосфаты 159 мл/мин). Объемная скорость кровотока - 300 мл/мин - 350 мл/мин. Количество диализов у обследуемых — от 162 до 1360 (в среднем 438±52). Величина диализной дозы Kt/V составила от 0,89 мл/мин до 2,06 мл/мин (в среднем 1,42±0,08 мл/мин).
Кровь для исследований брали из артериального колена артерио-венозной фистулы до и после сеанса гемодиализа. Мочу у пациентов собирали непосредственно до и сразу после гемодиализа. Группой контроля служили 75 практически здоровых людей - кадровых доноров областной станции переливания крови. Кровь стабилизировали 3,8% (масса/объем) раствором цитрата натрия или гепарином (50 ЕД/мл) в соотношении 5:1 или 9:1 в зависимости от дальнейших методов исследования. Центрифугированием при 150 g и 1200 g получали соответственно обогащенную (ОТП) и бедную тромбоцитами плазму (БТП). Из цельной крови получали плазму, сыворотку, эритроциты, лейкоциты.
Количество эритроцитов, лейкоцитов в периферической крови определяли общепринятым меланжерным способом (63).
Агрегационную способность тромбоцитов определяли турбиди-метрическим методом Борна в модификации Люсова В.А. и др. (34, 103). Концентрация тромбоцитов в среде агрегации составила 300»109/л. В качестве индуктора применяли раствор АДФ 6,4« 10"6 М. На агрегатограммах регистрировали максимальную амплитуду (МА, %), время агрегации (ВА, мин), скорость агрегации (СА, %/мин) и аналогичные показатели 1-й (Аь Вь Сі) и 2-й (Аг, Вг, Сг) волн агрегатограммы. За 100 % принимали плотность БТП.
Эритроцитарно-тромбоцитарные взаимодействия исследовали в суспензии эритроцитов и тромбоцитов с концентрацией 300 10 /л и 10#1010/л соответственно. Клетки смешивали в ячейке иммунологического планшета и инкубировали при 37С 30 минут. Затем подсчитывали количество эритроцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (ЭТК) в камере Горяева. ЭТК дифференцировали на малые (1-3 эритроцита и 1-3 тромбоцита) и большие (больше 3 эритроцитов и/или тромбоцитов).
О величине поверхностного заряда эритроцитов судили на основании показателей агрегации эритроцитов, индуцированной альциановым голубым по (34, 156). Концентрация эритроцитов в среде агрегации составила 10»1010/л. При анализе агрегатограмм за 100 % принимали значение оптической плотности фосфатно-солевого раствора.
Деформабильность эритроцитов исследовали на эктацитометре. За его основу была взят оптико-механический блок, предложенный Bessis М. (92). В основе блока имеются два соосных диска из оргстекла (рис. 1).
Иммунологические методы
Обследовано 80 больных с терминальной почечной недостаточностью в возрасте от 23 лет до 61 года (средний возраст 45,72±2,06 лет). Из них 41 женщина и 39 мужчин. Основными причинами ХПН явились хронический пиелонефрит (35%), хронический гломерулонефрит (40%), артериальная гипертензия (8%), поликистоз почек (7%), амилоидоз почек (7%), сахарный диабет (3%). Стаж заболевания составил от 1 до 14 лет (в среднем 4,44±0,55 лет).
Все больные 2 раза в неделю получали гемодиализную терапию в отделении диализа ГМЛПУЗ «Челябинская областная клиническая больница». Гемодиализ осуществлялся на аппаратах «искусственная почка» 4008S/BIBAG фирмы «Fresenius» в течение 5 часов. Диализаторы полисульфоновые фирмы «Fresenius» F7HPS (площадь мембраны 1,6 м ; коэффициент ультрафильтрации 16 Hd/час, клиренс: мочевина 188 мл/мин, креатинин 175 мл/мин, витамин Bi2 102 мл/мин, фосфаты 155 мл/мин) или F8HPS (площадь мембраны 1,8 м ; коэффициент ультрафильтрации 18 Hd/час; клиренс: мочевина 190 мл/мин, креатинин 177 мл/мин, витамин В\2 106 мл/мин, фосфаты 159 мл/мин). Объемная скорость кровотока - 300 мл/мин - 350 мл/мин. Количество диализов у обследуемых — от 162 до 1360 (в среднем 438±52). Величина диализной дозы Kt/V составила от 0,89 мл/мин до 2,06 мл/мин (в среднем 1,42±0,08 мл/мин).
Кровь для исследований брали из артериального колена артерио-венозной фистулы до и после сеанса гемодиализа. Мочу у пациентов собирали непосредственно до и сразу после гемодиализа. Группой контроля служили 75 практически здоровых людей - кадровых доноров областной станции переливания крови. Кровь стабилизировали 3,8% (масса/объем) раствором цитрата натрия или гепарином (50 ЕД/мл) в соотношении 5:1 или 9:1 в зависимости от дальнейших методов исследования. Центрифугированием при 150 g и 1200 g получали соответственно обогащенную (ОТП) и бедную тромбоцитами плазму (БТП). Из цельной крови получали плазму, сыворотку, эритроциты, лейкоциты.
Количество эритроцитов, лейкоцитов в периферической крови определяли общепринятым меланжерным способом (63).
Агрегационную способность тромбоцитов определяли турбиди-метрическим методом Борна в модификации Люсова В.А. и др. (34, 103). Концентрация тромбоцитов в среде агрегации составила 300»109/л. В качестве индуктора применяли раствор АДФ 6,4« 10"6 М. На агрегатограммах регистрировали максимальную амплитуду (МА, %), время агрегации (ВА, мин), скорость агрегации (СА, %/мин) и аналогичные показатели 1-й (Аь Вь Сі) и 2-й (Аг, Вг, Сг) волн агрегатограммы. За 100 % принимали плотность БТП.
Эритроцитарно-тромбоцитарные взаимодействия исследовали в суспензии эритроцитов и тромбоцитов с концентрацией 300 10 /л и 10#1010/л соответственно. Клетки смешивали в ячейке иммунологического планшета и инкубировали при 37С 30 минут. Затем подсчитывали количество эритроцитарно-тромбоцитарных коагрегатов (ЭТК) в камере Горяева. ЭТК дифференцировали на малые (1-3 эритроцита и 1-3 тромбоцита) и большие (больше 3 эритроцитов и/или тромбоцитов).
О величине поверхностного заряда эритроцитов судили на основании показателей агрегации эритроцитов, индуцированной альциановым голубым по (34, 156). Концентрация эритроцитов в среде агрегации составила 10»1010/л. При анализе агрегатограмм за 100 % принимали значение оптической плотности фосфатно-солевого раствора.
Деформабильность эритроцитов исследовали на эктацитометре. За его основу была взят оптико-механический блок, предложенный Bessis М. (92). В основе блока имеются два соосных диска из оргстекла (рис. 1).
