Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы 12
1.1 Агрегация эритроцитов 12
1.2 Адгезия лейкоцитов 19
1.3 Влияние катехоламинов на клеточное поведение 35
1.4 Взаимодействия между эритроцитами и лекоцитами 39
1.5 Роль воспаления и микрореологических нарушений при ревматических заболеваниях 43
ГЛАВА 2 Организация эксперемента, материалы и методы исследования 47
ГЛАВА 3 Результаты собственных исследований 58
3.1 Общий реологический профиль, агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов у лиц с повышенным артериальным давлением 58
3.2 Агрегация эритрцитов адгезия лейкоцитов у лиц с пониженным артериальным давлением 67
3.3 Общий реологический профиль, агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов у лиц с системной красной волчанкой (СКВ) 69
3.4 Анализ механизмов изменения микрореологических свойств эритрцитов и лейкоцитов 73
ГЛАВА 4 Обсуждение результатов 99
Выводы 114
Список литературы 115
- Агрегация эритроцитов
- Влияние катехоламинов на клеточное поведение
- Общий реологический профиль, агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов у лиц с повышенным артериальным давлением
- Агрегация эритрцитов адгезия лейкоцитов у лиц с пониженным артериальным давлением
Введение к работе
Актуальность проблемы
Механическое поведение клеток крови составляет предмет исследования микрореологии (L. Dintenfass, 1981). При этом анализу подвергаются агрегация и деформация эритроцитов, а также активация и адгезия лейкоцитов (В. А. Галенок и др., 1987; А. В. Муравьев, 1993; J. F. Stoltz et al., 1991; Т. W. Secomb, 1987; H. Lipowsky et al., 1999).
При анализе реологического поведения клеток крови рассматривают их микрореологические характеристики (L. Dintenfass, 1981; G. В. Nash et al., 1987; G. W. Schmid-Schonbein et al., 1999). Они включают анализ агрегации и деформации эритроцитов, локальлныи гематокрит и адгезию лейкоцитов (A.M. Чернух и др., 1975; В. А. Левтов и др., 1982; В. А. Галенок и.др., 1987; П. В. Михайлов, 2003; Хугаева В.К., Александров, 2003; Н. J. Meiselman, 1993; Н. Н. Lipowsky, 2002).
Наиболее существенным микрореологическим свойством эритроцитов, которое проявляется как в условиях естественного кровотока, так и при его моделировании in vitro, является обратимая агрегация (P. Gaehtgens, 1995; Р. Johnson, 1994).
П. Джонсон с соавт. (1994) определили вклад агрегации эритроцитов в венозное сопротивление и продемонстрировали обратное соотношение между венозным сопротивлением и скоростью кровотока; это соотношение отсутствовало как в неагрегирующей, так и в высокоагрегирующей суспензиях. Исходя из этого, было предположено, что существует некий оптимальный уровень агрегации эритроцитов для поддержания .сосудистого гомеостаза (Н. Meiselman, 2002).
Агрегация эритроцитов в нормальных физиологических условиях
является очень сложным и обратимым феноменом (В.А. Левтов и др., 1982; S. Chien, 1986; Н. Meiselman, 1993; R. S. Ajmani, 1997). Физико-химические процессы, лежащие в основе формирования "монетных" столбиков из
эритроцитов, многофакторные. К ним относятся: концентрация фибриногена, состояние липидного бислоя, поверхностный мембранный потенциал (С.А. Селезнев и др., 1975; В.А. Галенок и др., 1987; М. Rampling, 1993; W. Reinhart, 2002).
Многочисленные данные свидетельствуют о том, что агрегация эритроцитов проявляет разную степень интенсивности при разных состояниях организма, имея компенсаторное и адаптивное значение для системы кровообращения в целом. Следовательно, можно полагать, что агрегатообразование не является результатом только критического сближения соседних эритроцитов и формирования межклеточного макромолекулярного мостика, а регуляторный клеточный процесс.
Данные биомикроскопических методов исследования кровотока способствовали формированию точки зрения о том, что в кровеносных сосудах, особенно в его емкостном отделе, происходит обратимое образование эритроцитарных агрегатов (P. Johnson, 1994).
Реологическое поведение эритроцитов доминирует в
макроциркуляции, однако на уровне микрососудов на величину тканевой перфузии существенным образом может влиять повышенная адгезия активированных лейкоцитов (G. Nash et al., 2000).
Клетки крови этого типа адгезируются к сосудистому эндотелию и тем самым дополнительно могут образовывать «блоки» микроциркуляции (U. Bagg, P-I. Branemark, 1997; N. Т. Luu et al., 1998). Это особенно проявляется в условиях патологии, например, при воспалении, когда «жесткие» или адгезированные к сосудистому эндотелию лейкоциты создают довольно длительные остановки кровотока, ведущие к ишемии и ухудшению оксигенации тканей (G. В. Nash, С. Shearman, 1992; U. Bagg, P-I. Branemark, 1997).
Феномен адгезии лейкоцитов заключается в их контакте с эндотелиальными клетками сосудистой стенки (L. Grant, 1973; Т. J. Williams et al., 1984; М. P. Bevilacqa et al., 1987; K. Ley et al., 1991; G. E. Rainger et al.,
1997; S. Fukuda et al., 1998; G. Thurston et al., 2000; M. Yoshida, 2002). Имеются данные, свидетельствующие о том, что такие реологические параметры, как агрегация эритроцитов, влияют на адгезию лейкоцитов в сосудистом русле (P. Johnson et al., 1994). В свою очередь активированные лейкоциты стимулируют агрегацию эритроцитов (К. Baskurt, Н. Meiselman, 1997).
Цель исследования:
исследование патогенетических механизмов и сигнальных путей изменений агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов при нарушениях сосудистого тонуса и воспалении.
Задачи исследования:
1. Выявить основные патогенетические механизмы изменений
гемореологического профиля, оценить агрегацию эритроцитов и адгезию
лейкоцитов в условиях измененного сосудистого тонуса по типу
гипотонии и гипертонии.
Исследовать основные патогенетические механизмы изменений гемореологического профиля при воспалительных реакциях на примере воспаления при СКВ, а так же агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов при этом состоянии.
Изучить роль катехоламинов в патогенетических механизмах изменения агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.
Исследовать внутриклеточные сигнальные пути, опосредующие изменение агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.
Научная новизна
Впервые проведено исследование изменений адгезии лейкоцитов, агрегации эритроцитов в патофизиологических условиях: при
воспалительных процессах (на примере воспаления при системной красной волчанке) и изменениях сосудистого тонуса (при артериальной гипотонии и гипертонии). Впервые в комплексном исследовании было показано, что характерным для гемореологического профиля при нарушениях сосудистого тонуса и воспалении является выраженное увеличение вязкости крови при низких скоростях сдвига, коррелирующее с высокой агрегацией эритроцитов. Установлено, что при воспалении адгезия лейкоцитов и агрегация эритроцитов возрастают по сравнению с этими же показателями у здоровых лиц. Так же повышение агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов наблюдалось у лиц с нарушениями сосудистого тонуса, как по гипертоническому, так и по гипотоническому типам.
Установлено, что катехоламины (адреналин, норадреналин и др.) в избранных концентрациях (10"бМ) стимулируют агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов. Кроме того, было показано, что фенилэфрин в большей степени стимулировал адгезию лейкоцитов, а норадреналин агрегацию эритроцитов.
Впервые в комплексном исследовании показана роль Са2+ в изменениях адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов в патофизиологических условиях. Установлено, что блокирование кальциевых каналов верапамилом приводит к более заметному снижению адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов, чем связывание кальция в среде инкубации клеток при помощи ЭГТА. Показано, что увеличение входа в клетку Са" под действием ионофора А23187 вызывало выраженное повышение агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов.
Впервые проведен анализ изменений адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов при ингибировании активности фосфодиэстераз (ФДЭ) папаверином, дротаверином в патофизиологических условиях. Установлено, что снижение активности ФДЭ сопровождается уменьшением адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов. На сигнальную роль цАМФ, при
изменениях агрегации и адгезии клеток крови, указывало их выраженное снижение при действии проникающего аналога цАМФ (дБ-цАМФ). Теоретическая и практическая значимость исследования
В исследовании показаны характерные нарушения гемореологического профиля, которые можно рассматривать как элементы патогенеза развития гипертонии и специфического воспаления. Характерным изменением гемореологической картины в этих патологических условиях был высокий уровень агрегации эритроцитов и адгезии лейкоцитов. Это определяет и направление коррекционных мероприятий - поиск и применение препаратов, снижающих эти микрореологические эффекты. Результаты исследований дополняют знания о механизмах межклеточных взаимодействий, влиянии сигнальных молекул на процессы адгезии лейкоцитов и агрегации эритроцитов. Исследованы новые, плиотропные свойства таких лекарственных препаратов, как верапамил, дротаверин, папаверин, установлены их выраженные антиагрегационные и антиадгезивные эффекты, особенно в условиях патологии. Выявленные изменения в суспензионной стабильности крови (выраженное снижение агрегации) при действии ингибиторов фосфодиэстераз и антагониста кальция в патофизиологических условиях могут быть уточнены при назначении этих препаратов в клинической работе.
Материалы диссертации могут быть использованы для преподавания физиологии и патофизиологии, при написании обзоров, монографий и учебных пособий, а так же служить основой для дальнейшей научно-исследовательской работы.
Положения, выносимые на защиту:
1. Агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов повышены у лиц с
нарушениями сосудистого тонуса по типу артериальной гипотонии и гипертонии.
В условиях воспаления агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов более выражены, чем у здоровых лиц.
Катехоламины и их синтетические аналоги, действующие как агонисты альфа-рецепторов, повышают агрегацию эритроцитов и адгезию лейкоцитов и наибольший эффект достигается при действии альфа-2-агониста - клонидина.
Ингибирование активности фосфодиэстераз и увеличение концентрации ц-АМФ в эритроцитах и лейкоцитах выражено снижают их агрегацию и
адгезию. Сходный эффект наблюдается при ограничении входа Са в
клетки. Напротив, стимулирование поступления Са в эритроциты или лейкоциты сопровождается повышением их клеточной активности.
Апробация работы
По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 2 в центральной печати, в журналах, рекомедованных ВАК РФ.
Материалы диссертации доложены на международной конференции по микроциркуляции и гемореологии (Ярославль, 2003); на международной
конференции по гемостазиологии и гемореологии в сосудистой хирургии (Москва, 2005); доложены на международной конференции по гемореологии в макро - и микроциркуляции (Ярославль, 2005); доложены на международной конференции «Микроциркуляция в клинической практике» (Москва, 2006); на конференции «Чтения Ушинского» факультета физической культуры ЯГПУ (Ярославль, 2003, 2006).
Агрегация эритроцитов
Адгезия лейкоцитов - способность клеток связываться с соседними клетками или различными субстратами биологического или не биологического происхождения, зависит от состояния наружной поверхности плазматической мембраны и состава внеклеточной среды. (Н. Г. Харланова, 1993).
Вопрос о пусковых механизмах, которые приводят к началу усиления экспрессии адгезинов на различных клетках, остаётся дискуссионным. Ряд авторов указывают на то, что ключевую роль в запуске и поддержании свойственных некоторым заболеваниям патологических проявлений играет повышенный уровень глюкозы крови. Неферментативное гликозилирование белков и других содержащих аминогруппы соединений, аутоокисление глюкозы, приводящее к повышению уровня крайне реакционноспособных свободных радикалов, прямая глюкозотоксичность осуществляют запуск каскада реакций со стороны иммунной, свёртывающей, фибринолитической и других систем. Усиление экспрессии адгезивных молекул лейкоцитами, тромбоцитами, эндотелиальными клетками также может быть обусловлено воздействием глюкозы. Продукты неферментативного гликозилирования, связываясь с рецепторами (RAGE), обнаруживаемыми на лейкоцитах, эндотелиальных, мезангиальных клетках, стимулируют продукцию фактора некроза опухолей - а и интерлейкина-1 (F.W. Luscinskas et al., 1991; S. Fukuda et al., 1998). Цитокины вызывают усиление экспрессии адгезивных молекул на этих клетках. Подобные реакции внутри сосудов мелкого и крупного калибра в условиях метаболических, гемодинамических и реологических сдвигов приводят к тому, что адгезивные молекулы, экспрессируемые одними клетками, связываются со своими контррецепторами, находящимися на других клетках, что вызывает их присоединение друг к другу. Это способствует локальному накоплению клеток, развитию стаза и тромбоза в сосудах, которые в зависимости от своего калибра приводят к полиорганным нарушениям. Однако не все учёные разделяют точку зрения о пусковой и поддерживающей роли гипергликемии в этом процессе. Имеются данные о том, что на адгезию лейкоцитов значительное влияние оказывают другие клетки крови: увеличение содержания тромбоцитов повышает степень адгезии белых клеток крови, а эритроциты угнетают адгезию (В. А. Калион, Ю.И Шмаков, 2000).
Известно также, что для осуществления адгезии необходимо присутствие ионов кальция и магния. Кальций необходим для многих физиологических процессов в организме человека. Ионы кальция, в частности, играют важную роль в передаче внутриклеточных сигналов, различных реакциях ферментов, коагуляции крови (А.Д. Адо, 2001). Каналы, по которым движутся ионы, могут открываться или закрываться в зависимости от разности потенциалов на мембране, а также в ответ на присоединение гормонов и медиаторов к мембранным рецепторам, регулируя, таким образом, поток ионов. Са"+ поступает в клетку из внеклеточного пространства или освобождается внутри клетки из мест і 1-І связывания кальция на сарколемме путем Na - Са" обмена (А.Д. Адо, 2001).
Нейтрофилы способны самым существенным образом влиять на характер микрогемоциркуляции. В микроциркуляторном русле, особенно в его венозном отделе, нейтрофилы преимущественно занимают краевое положение (В.В.Куприянов, и др., 1975; H.N. Mayrovitz, 1992). Подобное положение создает оптимальные условия для их адгезии к стенке сосуда, в результате чего адгезировавшие нейтрофилы, обладающие значительными размерами, способны существенно уменьшить просвет капилляра, нарушая тем самым его перфузию (С.С. Хармоненко, А.А. Ракитянская, 1974).
Адгезия лейкоцитов имеет определенное отношение к гемостазу. Лейкоциты являются важным и необходимым физиологическим компонентом первичного (клеточного) гемостаза: наряду с кровяными пластинками они принимают активное участие в реакциях клеточной агрегации и входят в состав первичной гемостатической пробки.
Интенсивность смешанно-клеточной (лейкоцитарно-тромбоцитарной) агрегации зависит от количества участвующих в ней лейкоцитов и от их функциональной активности. (Б.Ф. Архипов и др., 1987) У здоровых людей гемостатический процесс является нормальной реакцией организма, возникающей обычно в ответ на механическое повреждение сосудов и направленное на остановку локального кровотечения. Однако, очень многие патологоанатомические состояния, как приобретенного, так и наследственного характера, могут сопровождаться спонтанным образованием тромбов, что способно послужить причиной тяжелых нарушений функций и систем организма и даже привести к внезапной смерти.
Влияние катехоламинов на клеточное поведение
Адаптация организма к постоянно изменяющимся условиям внешней среды, формирование его стрессорной реакции, патогенез наиболее распространенных заболеваний (сердечно-сосудистые, психические и др.) в значительной степени обеспечивается изменением функционального состояния симпатоадреналовой системы. Поэтому оценка физиологического состояния различных звеньев этой системы представляет значительный интерес, как для теоретических, так и для практических исследований. В действии симпатоадреналовой системы можно выделить два основных этапа: пресинаптический и постсинаптический. Пресинаптический этап - это синтез, накопление и выделение катехоламинов адренергическими нейронами и хромаффинными клетками. Постсинаптический - восприятие адренергического воздействия и его трансформация в количественно и качественно адекватную реакцию эффекторной клетки (В.Н. Соминский и др., 1989; R. Scalia, Т. Murohara, 1997).
В организме человека функционирует более трех десятков биологически активных веществ (гормоны, простагландины, цитокинины и др.), действие которых опосредуется путем повышения концентрации Са"+ в цитоплазме клеток крови и сосудов (П.В. Авдонин и др., 1978; Е.Б. Негреску и др., 1989; В.А. Ткачук, 1998; G. Caimi et al., 1998; Т. Osanai, N. Fujita, 2000). Некоторые гормоны сами по себе не вызывают увеличения Са , но обладают способностью потенцировать кальциевый ответ клеток. Например адреналин, связываясь с а2-адренергическими рецепторами, увеличивает чувствительность тромбоцитов к индукторам агрегации, повышающим Са"+. В кардиомиоцитах этот же гормон потенцирует вход Са через потенциал управляемые кальциевые каналы, взаимодействуя с р-адренергическими рецепторами (Н. Reuter, 1987).
В 1930-х г. эффекты адреналина описывались то, как стимулирующие, то, как ингибиторные. Проанализировав на разных тканях действие шести различных, но структурно очень близких катехоламинов, Ahlquist (1948) сделал вывод о существовании двух типов рецепторов (а и Р), реагирующих на один гормон. Постепенно стали складываться представления о механизмах реализации биохимических эффектов. Выяснилось, что катехоламиновые рецепторы разных подтипов (аі, ( Pi, Рг) опосредуют каскад внутриклеточных биохимических реакций. Реализация гормонального действия в клетке-мишени осуществляется путем активации нескольких внутриклеточных мессенджерных систем: (аденилатциклаза -цАМФ, полифосфоинозитиды, ионы Са2+ и другие),которые через фосфорилирование изменяют активность ферментативного аппарата клетки. Множественность пострецепторных путей действия гормонального агента, по-видимому, лежит в основе полифункциональности их эффектов, и обеспечивает интеграцию клеточного ответа. Наиболее изученными в настоящее время системами трансмембранной рецептор сопряженной передачи гормонального сигнала является цАМФ - аденилатциклазный и полифосфоинозидный пути. Первый из них включает в себя активацию аденилатциклазы, накопление цАМФ и стимуляцию цАМФ зависимой протеинкиназы А, полифосфоинозитивный путь сигнализации включает рецепторзависимый гидролизфосфатидилинозитол-1,4,5-трифосфата (ИФз) и диацилглицерина-. ИФз обеспечивает мобилизацию внутриклеточного Са"+, а диацилглицерин активирует, фосфолипид зависимую протеинкиназу С (В.А. Ткачук, 1998; G. Caimietal., 1998).
С помощью этих систем относительно небольшое число молекул гормона, связываясь с рецепторами, вызывает продукцию гораздо большего числа молекул второго посредника, а последние в свою очередь влияют (положительно или отрицательно) на активность еще большего числа белковых молекул. Таким образом, происходит прогрессивная амплификация сигнала, исходно возникающего при связывании гормона с рецептором.
На тромбоцитах расположены в основном аг- и pV субтипы адренорецепторов. Возбуждение а2- адренорецепторов вызывает усиление агрегации тромбоцитов под действием АДФ, тромбина, фактора активации тромбоцитов, тогда как торможение этой реакции опосредуется через 32-адренорецепторы. Преобладание осг- адренорецепторов на тромбоцитах говорит об их роли в регуляции агрегации тромбоцитов (Е.Б. Негреску и др., 1989; В.А. Ткачук, 1998).
Общий реологический профиль, агрегация эритроцитов и адгезия лейкоцитов у лиц с повышенным артериальным давлением
Анализ гемореологического профиля у лиц с артериальной гипертензией показал, что негативные сдвиги имели место, как в макро - так и в микрореологической частях профиля. Так вязкость цельной крови оказалась на 26% (при высоких скоростях сдвига) и на 44% (при низких скоростях сдвига) выше, чем в группе контроля (табл. №2). Основной причиной снижения текучести цельной крови явилась высокая вязкость плазмы, величина которой на 17% (р 0,01) была больше, чем в контроле (рис.4).
Достоверная разница в 14% (р 0,05) между показателем концентрации эритроцитов у больных с гипертонической болезнью и у лиц с нормальным АД тоже указывает на вторую причину выраженного прироста вязкости крови у лиц с повышенным артериальным давлением. Расчет коэффициента ; 58 I корреляции, который был равен 0,780 и определение на его основе коэффициента детерминации показало, что примерно на 61% текучесть крови и ее изменение у лиц с высоким АД связана с динамикой гематокрита.
Кровоток в микроциркуляторном русле существенным образом зависит от потоковой деформации клеток крови, и в первую очередь, эритроцитов. Анализ группы характеристик показал, что деформируемость эритроцитов у лиц данной группы была снижена, по сравнению с данными здоровых лиц (табл.3.). Так вязкость суспензии эритроцитов в буфере была на 25% выше, чем у лиц с нормальными величинами АД. Другой показатель деформируемости, отражающий вклад вязкости внутреннего содержимого клетки - средняя концентрация гемоглобина в эритроците, был тоже достоверно увеличенным на 6% (р 0,05). Индекс ригидности эритроцитов составил 0,946 ±0,006 отн. ед., что на 17% выше, чем в группе контроля (Табл. 3).
В результате проведенного исследования было установлено, что показатель агрегации эритроцитов в группе лиц с гипертензией был на 89% (р 0,01) больше, чем в контроле (Табл.3., Рис.5.). Однонаправлено изменялись и другие характеристики агрегации эритроцитов. В том числе и размер агрегатов. Так количество эритроцитов, приходящихся на один агрегат достигало в среднем 7,79±0,24, что на 53% (р 0,05) больше, чем в контроле (табл. 3).
У лиц с повышенным артериальным давлением заметная разница в величине среднего давления с этим показателем у здоровых лиц, разница составила около 20% и была статистически достоверной (р 0,05). Следовательно, относительно высокая агрегация могла сказаться на величине артериального давления, поскольку она является причиной изменения вязкости цельной крови при низких величинах напряжения сдвига. На это указывало однонаправленное изменение показателя агрегации эритроцитов и величины среднего АД (рис. 6).
На состоянии микроциркуляции сказывается не только реологическое поведение самой большой популяции клеток крови эритроцитов, но и изменение свойств лейкоцитов и в том числе их степени адгезии. При анализе проб крови, взятой у лиц с повышенным и нормальным АД было выявлено, что число лейкоцитов в среднем составляло 6,60 х 10"6, в первой группе, тогда как в контроле эта величина было на 18% меньше (5,42±0,27 х 10 6). Разница в концентрации лейкоцитов сочеталась также и с различием в степени их адгезии. Было найдено, что у лиц с артериальной гипертензией величина адгезии лейкоцитов к нейлоновым волокнам составила 0,624 ±0,024 отн. ед. (от 0,45 до 0,80), тогда как в контроле эта величина не превышала 0,850±0,001 отн. ед. Следовательно, если у здоровых лиц только 15% лейкоцитов задерживались фильтром из нейлоновых волокон, то в патологических условиях эта величина достигала уже 37%. Различия между двумя группами были достоверными (р 0,01; рис. 7).
Агрегация эритрцитов адгезия лейкоцитов у лиц с пониженным артериальным давлением
В качестве величины для сравнения использовали адгезию лейкоцитов, при инкубации клеток с фосфатным буферным раствором. Было найдена, что здесь она составила 0,77 отн. ед. Таким образом, процент клеток, задержанных, нейлоновыми нитями фильтра составил 23,0 (табл.8).
Анализ адгезии лейкоцитов в условиях действия адреналина (10"6М) показал, что она была более выраженной, чем в контроле (инкубация с одним буфером) и составила 37%. Разница была статистически достоверной (р 0,05; Табл.8). Активация белых клеток крови норадреналином привела к умеренному увеличению адгезии. Ее прирост составил 11% (р 0,01) по сравнению контрольными пробами (табл. 8). Адреналин и норадреналин являются природными катехоламинами, которые действуют на альфа и бета адренорецепторы клеточных мембран. При этом адреналин активирует оба типа рецепторов, тогда как норадреналин преимущественно действует на альфа - адренорецепторы. Для оценки роли отдельных подтипов адренорецепторов стимулировали альфа 1-рецепторы их агонистом фенипэфршом (10"бМ), который заметно стимулировал адгезию лейкоцитов. По сравнению с контролем (инкубация клеток с фосфатным буфером) фенилэфрин повышал адгезию на 18% (р 0,01; табл.9).
Близким по величине стимулирующим адгезию эффектом обладал альфа2-агонист клонидин. В концентрации 10"6М он повысил адгезию к нейлоновым волокнам на 15% (р 0,05; табл.9). Таким образом, все четыре катехоламина: адреналин, норадреналин, фенилэфрин и клонидин стимулировали адгезию лейкоцитов на сходную величину (от 14 до 18%; рис.17). Сравнение между показателем адгезии в контрольном растворе и препаратом катехоламина (в абсолютных единицах), не выявило разницы между действием отдельных агонистов адренорецепторов между собой. Следовательно, можно полагать, что влияние катехоламинов и их синтетических аналогов (в эквимолярных концентрациях 10" М), на адгезию лейкоцитов, было сопоставимо в данных условиях опытов (рис.17).
Рис. 17. Изменение адгезивности лейкоцитов после инкубации с катехоламинами, стимулирующими в основном альфа - адренергические рецепторы (за исключением адреналина) по сравнению с данными, полученными при инкубации клеток только в одном буферном растворе такого же состава (нулевой уровень на рисунке).
Метапротеренол (10" М) агонист бета - адренорецепторов не вызывал однонаправленных и достоверных изменений адгезии лейкоцитов. В ряде случаев отмечено небольшое увеличение адгезии, в среднем на 3-5%, тогда как остальная часть популяции лейкоцитов проявляла снижение адгезии на 9%. При исходно относительно высокой степени адгезии метапротеренол снижал адгезию лейкоцитов. На это указывало уменьшение числа адгезированных клеток к нейлоновым нитям с 20,0% (0,80±0,04 отн. ед.) до 10,0% (0,90±0,03 отн. ед.).
С другой стороны, при менее выраженной исходной адгезии этот бета-агонист несколько стимулировал адгезивный процесс захвата клеток нейлоновыми нитями фильтра. Ответ клеток с разной исходной адгезией иллюстрирует рис. 18.
Анализ изменений адгезии лейкоцитов под влиянием катехоламинов проводили параллельно с исследованием характера изменения агрегации эритроцитов при действии препаратов данной группы. Полученные данные свидетельствовали о стимулирующем агрегацию эффекте катехоламинов.
Инкубация эритроцитов в среде, содержащей 10 бМ адреналина гидрохлорида, приводила к выраженному приросту агрегации клеток (табл. 10). На это указывало увеличение показателя агрегации на 62%. Если в контрольных пробах (при инкубации с буферным раствором) агрегировало около 32% клеточной популяции, то после инкубации в течение 15 минут с адреналином уже 60%) клеток объединялись в агрегаты (рис. 19).
