Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1
1.1
1.2
Глава 2
2.1
2.2 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.2.4
2.2.5
2.2.6
Глава 3
2.2.7 2.2.8
3.1
3.3.2
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Роль полиморфноядерных нейтрофилов в механизмах развития сосудистых осложнений при СД 2 типа
Биофлавоноиды как потенциальные фармакологические протекторы сосудистых осложнений при СД 2 типа МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Клиническая характеристика пациентов Методы исследования Выделение ПМН из периферической крови Агрегация ПМН
Метод определения МДА в ПМН Метод определения супероксидного анион-радикала (О2") в ПМН
Метод определения гипохлорной кислоты (НОСІ) в ПМН
Метод определения лейкотриена В4 (ЛТВд) и 5-й 15-гидроксиэйкозатетраеновых кислот (5-НЕТЕ и 15-НЕТЕ)
Метод определения выживаемости ПМН Статистическая обработка результатов РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Функциональное состояние и метаболизм ПМН больных сахарным диабетом 2 типа с разной степенью компенсации углеводного обмена Агрегация ПМН
Генерация супероксидного анион-радикала и образование гипохлорной кислоты ПМН Содержание липоксигеназных продуктов арахидоновой кислоты у больных СД 2 типа Влияние плазмы крови больных с декомпенсированной формой СД 2 типа на функциональное состояние и метаболизм ПМН Влияние ДКВ на функциональное состояние и метаболизм ПМН у больных СД 2 типа Сравнительное изучение влияния дигидрокверцетина (ДКВ) и кверцетина (KB) на функциональное состояние и метаболизм ПМН у больных СД 2 типа в условиях in vitro Изучение влияния дигидрокверцетина (ДКВ) на функциональное состояние и метаболизм ПМН у
Стр.
больных СД 2 типа в условиях in vivo
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 76
ВЫВОДЫ 84
Список литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Сахарный диабет (СД) одно из наиболее широко распространенных заболеваний в мире. По разным данным общее число больных всеми формами СД на Земле составляет от 70 до 120 миллионов, и эта цифра ежегодно увеличивается (23). По предварительным оценкам частота заболевания СД в следующем десятилетии возрастет с 6% до 10%, что является проблемой не только для развитых, но и для развивающихся стран (267-273). По данным эпидемиологического исследования, проведенного в Москве (14), фактическая частота СД 2 типа превышает зарегистрированную по обращаемости в 2- 4 раза. Более чем в 50% случаев СД 2 типа поздно диагностируется, что является причиной развития у больных тяжелых сосудистых осложнений, определяющих качество жизни и прогноз больного. К типичным сосудистым осложнениям СД 2 типа относятся диабетическая ретинопатия и нефропатия. Однако сосудистые осложнения при диабете также влияют на состояние сердца и участвуют в развитии диабетической невропатии путем снижения эндоневрального кровотока (1).
Последние годы характеризуются возрастающим интересом исследователей к окислительному стрессу, как одному из ключевых механизмов развития диабетических ангиопатий (252, 307, 311). Это не удивительно, поскольку образующиеся в результате самоокисления глюкозы высоко реактивные продукты окислительной деградации липидов и свободные радикалы кислорода оказывают повреждающее действие на эндотелий сосудов и участвуют в формировании инсулинорезистентности - основного патогенетического звена СД 2 типа (77, 92, 236, 271, 275).
В развитии окислительного стресса при СД 2 типа и патогенезе диабетических ангиопатий ведущую роль играют полиморфно-ядерные нейтрофилы (ПМН) благодаря их, способности образовывать супероксидные анионы и другие радикалы в системах NADPH-оксидазы и миелопероксидазы, в процессе окисления арахидоновой кислоты, а также наличию гидролаз и протеиназ, а именно эластазы и миелопероксидазы (216,233,281). Установлено, что эластаза нейтрофилов, концентрация которой при диабете существенно возрастает, подавляет активность
6 основных регуляторов систем свертывания крови, кининогенеза и комплемента -а 1-антитрипсина, антитромбина III и С1-ингибитора, что приводит к нарушению микроциркуляции и развитию внутрисосудистого свертывания крови (72, 184, 240, 254). В настоящее время получены многочисленные данные, свидетельствующие о нарушениях адгезивной способности, хемотаксиса, фагоцитоза, бактериоцидности и люминолзависимой хемилюминесценции ПМН у больных СД 2 типа (44, 72, 207, 280). Однако сведения о механизмах активации ПМН и их роли в развитии окислительного стресса у больных СД 2 типа в зависимости от показателей углеводного и липидного обмена противоречивы. В частности, на сегодняшний день отсутствуют данные о непосредственной активации ПМН и модуляции в них окислительных процессов высокими концентрациями глюкозы, а также возможность коррекции этих нарушений (243, 246, 247,249)
До настоящего времени нет эффективных методов профилактики поздних осложнений диабета, т.к. даже их раннее выявление и лечение пока не оказывают существенного влияния на течение и прогноз СД 2 типа (23, ПО). Установление ангиотропности липидных перекисей привело к использованию антиоксидантов в терапии больных СД. Биофлавоноиды (кверцетин и рутин), природные антиоксиданты растительного происхождения, не только «улавливают» свободные радикалы кислорода, но и благоприятно влияют на сосудистую стенку и систему гемостаза (26, 32, 33, 176, 187). Для лечения диабетической ретинопатии используется Танакан (экстракт Гинко билобы), который содержит кверцетин, однако его применение ограничивается высокой стоимостью. Дигидрокверцетин (диквертин) ДКВ - новый отечественный патентованный препарат, являющийся по химическому строению гидрированным по гетероциклическому фрагменту аналогом кверцетина, оказывает капилляропротекторное и антиоксидантное действие. Ранее в исследованиях А.А. Кубатиева и др.(Ю-ІЗ) было показано, что ДКВ улучшает функцию и метаболизм тромбоцитов у больных СД 2 типа, оказывая антиагрегационное действие и подавляя образование циклооксигеназных метаболитов арахидоновой кислоты.
Диквертин, обладая также выраженной антирадикальной активностью, по-видимому, может активно воздействовать на функцию и метаболизм ПМН больных СД 2 типа, что свидетельствует об актуальности настоящего исследования. Преимуществом диквертина перед другими препаратами биофлавоноидного ряда является его доступность, обусловленная большой и недорогой сырьевой базой, а также относительная простота технологии получения. Не вызывает сомнений, что изучение клинической эффективности применения биофлавоноидов в составе комплексного лечения больных СД 2 типа и влияния их на функцию и метаболизм ПМН имеет большой практический интерес для разработки стратегии оптимальной терапии этой группы больных.
Целью настоящей работы явилось изучение функциональной активности и метаболизма ПМН у больных СД 2 типа в зависимости от состояния липидно-углеводного обмена, а также исследование эффективности использования диквертина (ДКВ) в составе комплексной терапии больных СД 2 типа для коррекции выявленных нарушении.
Исходя из этой цели, были поставлены следующие основные задачи:
Изучить функциональную активность и метаболизм ПМН у больных СД 2 типа в зависимости от компенсации углеводного обмена.
Выявить наиболее информативные критерии нарушения функционального состояния и метаболизма ПМН у обследуемых больных.
Изучить влияние диабетической плазмы на функциональное состояние и метаболизм ПМН здоровых лиц.
Исследовать влияние ДКВ и кверцетина на функциональное состояние и метаболизм ПМН больных СД 2 типа в условиях in vitro.
Оценить клиническую эффективность использования ДКВ в составе комплексной терапии больных СД 2 типа и обосновать показания применения ДКВ для коррекции функциональной активности ПМН с целью профилактики сосудистых осложнений.
Научная новизна исследования.
Впервые проведено детальное исследование функциональной активности ПМН у больных СД в зависимости от компенсации показателей углеводного обмена. Установлено, что повышенная активность ПМН сохраняется у больных даже при компенсации углеводного обмена и обусловлена активацией агрегации, усиленной генерацией супероксидных радикалов и изменением метаболизма липоксигеназных продуктов арахидоновой кислоты. Выявлено, что нарушение функциональной активности ПМН при СД 2 типа происходит не только вследствие гипергликемии, но и независимо от нее в результате структурных изменений самой мембраны ПМН, что обуславливает дифференцированную реакцию клеток на воздействие разных агонистов: повышение агрегации ПМН в ответ на 12-о-тетрадеканоил-4-форболмиристат-13-ацетат (ФМА) и опсонизированный зимозан (03) и снижение ее в ответ на N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин.
Показано, что диабетическая плазма укорачивает выживаемость ПМН здоровых лиц. Токсическое влияние диабетической плазмы обусловлено не только повышенным содержанием глюкозы, но и воздействием фактора либо факторов, которые имеют белковую природу и инактивируются при нагревании плазмы. Выявлено нормализующее воздействие донорской плазмы на выживаемость ПМН больных.
Впервые изучено влияние ДКВ на функциональную активность и метаболизм ПМН больных в условиях in vitro и in vivo. Выявлено, что ДКВ подавляет как генерацию супероксидных радикалов и гипохлорной кислоты, так и образование малонового диальдегида в процессе окисления мембран ПМН в большей степени, чем наиболее широко изученый флавоноид - кверцетин. При этом более выраженный ингибирующий эффект флавоноидов (в меньших концентрациях) наблюдается при действии на ПМН больных, по сравнению с ПМН здоровых лиц. Теоретическая и практическая значимость исследования.
Обоснована целесообразность назначения ДКВ в комплексе со стандартной сахароснижающей терапией больным СД 2 типа для оптимизации лечения, восстановления функциональной активности ПМН и профилактики диабетических ангиопатий.
Продемонстрирована эффективность применения ДКВ при СД 2 типа в отношении показателей липидного и углеводного обменов, а именно уменьшения атерогенного потенциала крови и достижения низких значений гликемии на фоне прежних доз сахароснижающей терапии.
Установлено, что ДКВ улучшает функциональную активность и метаболизм ПМН, оказывая не только непосредственное воздействие на клетки, но и за счет влияния на плазменные факторы.
Обоснована целесообразность исследования функции ПМН при изучении новых препаратов биофлавоноидной природы. Положения, выносимые на защиту:
Компенсация углеводного обмена не приводит к нормализации функциональной активности и метаболизма ПМН у больных СД 2 типа.
ДКВ улучшает функциональную активность и метаболизм ПМН больных СД 2 типа, а также повышает их жизнеспособность.
Применение ДКВ в комплексной терапии больных СД 2 типа является целесообразным и способствует повышению эффективности лечения.
![Результаты коронарного стентирования у больных ишемической болезнью сердца в сочетании с сахарным диабетом 2 типа [Электронный ресурс]](/i/i/4499/176181.png "Результаты коронарного стентирования у больных ишемической болезнью сердца в сочетании с сахарным диабетом 2 типа [Электронный ресурс] Петрова Ксения Николаевна")
