Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 10
1.1. Современное представление об HCV-инфекции: эпидемиологический и клинико-патогенетические аспекты формирования различных форм инфекционного процесса
1.2. Ко-инфекция HCV-HIV: иммунологические особенности взаимного влияния
Глава 2. Материал и методы исследования 29
2.1. Клинико-эпидемиологическая характеристика различных групп больных
2.2. Методы исследования 33
2.3 Статистическая обработка 36
Результаты собственных исследований и их обсуждение
Глава 3. Клинико-биохимическая и серологическая характеристика хронического вирусного гепатита С при HCV-моноинфекции
3.1. Клинико-биохимические особенности течения хронического вирусного гепатита С
3.2. Характеристика анти-HCV различной специфичности в сыворотке крови больных ХВГС методом ИФА
Глава 4. Особенности течения хронического вирусного гепатита С при HCV-HIV коинфицировании
4.1. Клинико-биохимические особенности течения хрониче- ского вирусного гепатита С при HCV-HIV-коинфекции в зависимо
сти от стадии ВИЧ-инфекции
4.2. Основные проявления хронического вирусного гепатита С 63 при HCV-HIV коинфекции в зависимости от давности инфицирования ВИЧ
4.3. Характеристика анти-HCV различной специфичности сы- 66 воротки крови больных хроническим вирусным гепатитом С при HCV-HIV-коинфекции методом ИФА
Глава 5 Выраженность гуморального иммунного ответа при HCV- 69 моно и HCV-HIV коинфекции
Обсуждение полученных результатов 81
Выводы 94
Практические рекомендации список основной использованной литературы
- Ко-инфекция HCV-HIV: иммунологические особенности взаимного влияния
- Статистическая обработка
- Характеристика анти-HCV различной специфичности в сыворотке крови больных ХВГС методом ИФА
- Основные проявления хронического вирусного гепатита С 63 при HCV-HIV коинфекции в зависимости от давности инфицирования ВИЧ
Ко-инфекция HCV-HIV: иммунологические особенности взаимного влияния
В последние 10 лет HCV-инфекция становится ведущей среди эпидемических вирусных гепатитов в виду повсеместной распространенности их, высокой частоты хронизации, возможных исходов в цирроз и гепатоцеллю-лярную карциному (Ивашкин В.Т., 1997; Сологуб Т.В., 1997; Соринсон С.Н., 1998; Рахманова А.Г., Неверов В.А., Кирпичникова Г.И. и др., 1999; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999; Подымова С.Д., Азов А.Г., 2001; Блохина Н.П., 2002; Онищенко Г.Г., 2002; Семененко Т.А., 2005; Daar E.S., Lynn К, Donfield S. et al.,2001;RuefC.,2005).
По данным многочисленных авторов частота инфицированности HCV-инфекции колеблется от 1% до 3% населения мира (Lavanchy D., Memahon В., 2000; Rondothoraval F., 2000). F. Rondothoraval (2000) указывает, что во Франции ежегодный прирост гепатита С составляет до 5-6 тысяч, это 0,8-1% на 10 тысяч населения. В Российской Федерации насчитывается более 2 млн. больных хроническим вирусным гепатитом С (Шахгильдян И.В., 2000). Это связано с тем, что почти 90% вновь выявленных случаев заражения составили потребители инъекционных наркотиков. Риск инфицирования вирусом гепатита С у потребителей наркотиков составляет от 60 до 90% против 5% в среде общей популяции (Онищенко Г.Г., 2002; Ивашкин В.Т., Буеверов А.О., 2002; Бакеев Д.В., 2003; Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003; Еналеева Д.Ш., Фазылов В.Х., Созинов А.С., 2003).
В настоящее время, ситуация с наркоманией и HCV-инфекций продолжает ухудшаться, так как оба эпидемических процесса идут параллельно, в тесном взаимодействии. В целом по территории страны сложилась чрезвычайная по наркомании и HCV-инфекции эпидемическая ситуация, которая может дать тяжелую эпидемию, когда HCV-инфекция, как и ВИЧ-инфекция, из сообщества внутривенных наркоманов начнет выходить на широкие слои населения (Лопаткина Т.Н., 1997; Нестеров Н.Н., Пирумов П.А., Семиков В.А., Подколзин В.М., 2000; Кошкина Е.А., 2000; Старостина И.С., Богач В.В., Троценко О.Е. и др., 2000; Бондаренко А.Л., Барамзина СВ., Роянов В.В., Тиунова З.С., 2002; Еналеева Д.Ш., Фазылов В.Х., Созинов А.С, 2003).
HCV-инфекция носит госпитальный характер, имеет множество путей передачи, обуславливающих создание массового и скрытого источника инфекции, как носительство вирусов, что определяет прогрессивный рост хронических форм гепатитов этой этиологии (Журкин А.Т. и др., 2002 и др.). У 20% больных хроническим гепатитом С в течение 10 лет формируется цирроз печени (Блохина Н.П., 2003). В дальнейшем, среди HCV-инфицирован-ных пациентов с установленным циррозом печени вирусной этиологии через 3-5 лет в 3-4% случаев обнаруживается ГЦК (Nishiguchi S., Kuzoki Т., NakaaniS. etal., 1995).
Особенностью вируса гепатита С является чрезвычайно высокая гетерогенность. Наиболее вариабельным регионом вируса гепатита С является участок E2/NS1. Предполагают, что высокая генетическая варибельность его является результатом пресса иммунной системы хозяина (Лакина Е.И., Кущ А.А., 2002; Маммаев С.Н., Лукина Е.А., Шульпехова Ю.О. и др., 2002). Показано (Walker F.M., Dazza MX., Dange M.C. et al., 1998), что первая мутация происходит уже в момент острой фазы инфекции.
В инфицированном организме вирус присутствует в виде так называемых квазивидов, отличающихся друг от друга на 1-9% нуклеотидов (Bukh G., Miller R.H., Purcoll R.H., 1995; Bozdaeji A.M., Uzunalimoghi O., Asian N. et al.,
2000). Образование квазивидов имеет большой биологический смысл, поскольку таким образом вирус «ускользает» от иммунного ответа хозяина, что приводит к хронической персистенции вируса (Семененко Т.А., 2005 и др.). По данным X. Fan, Н. Solomon, J.F. Poulos и др. (1999) количество квазивидов вируса в печени больше, чем в сыворотке крови. Высокой гетерогенностью вируса объясняются трудности, возникшие при разработке эффективной вакцины против гепатита С, и ограниченный успех противовирусной терапии. В настоящее время выделяют 6 основных генотипов HCV. Преимущественное распространение в мире имеют 1, 2 и 3 генотип вируса. Установлена преимущественная частота встречаемости генотипа 1 в при посттранфу-зионном заражении. У наркоманов чаще регистрируется 2 и 3-й, в основном За.
Геном вируса гепатита С представлен однонитевой линейной молекулой РНК положительной полярности. В нем выделяют две зоны, кодирующие структурные и неструктурные белки. К структурным белкам относят белок нуклеокапсида-core и два белка оболочки вириона - envelop (El и Е2). Эти белки подвергаются процессингу с помощью сигнальной пептидазы эн-доплазматического ретикулума клетки хозяина. К неструктурным белкам относят 6 белков (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B), представляющих собой ферменты и регуляторные пептиды (Лакина Е.И., Кущ А.А., 2002; Круг-лов И.В., Знойко О.О., Огиенко О.Л. и др., 2002; Ильина Е.Н., Фомина Е.С., Артемов Е.К. и др., 2002; Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003).
Нуклеокапсидный белок core - один из наиболее иммуногенных структурных полипептидов вируса гепатита С. Этот белок используется для сборки вириона и обладает способностью связываться с вирусной РНК, выполняет регуляторную функцию, оказывая влияние на репликацию вируса. Помимо этого, core-белок может оказывать влияние на человеческие онкогены, задействованные в развитии гепатоклеточной карциномы у пациентов с хроническим гепатитом С (Школаева Л.И., 2003; Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003).
Неструктурные белки (NS3, NS4, NSs) являются ферментами HCV, необходимыми для полноценной репликации вируса (Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003). Максимальной иммуногенностью среди них обладает NS3 (молекулярная масса 70 кДа). Неструктурный белок NS3 содержит два функциональных домена: протеазный и геликазный. Он осуществляет протеолиз неструктурных белков вируса, катализирует «кэпиро-вание» вирусной РНК (Ющук Н.Д., О.Л. Огиенко, И.В. Круглов и др., 2002).
В регионе NS4 выделяют две зоны - NS4 А и NS4 В (молекулярной массой 8 и 26 кДа). Считают, что белок, кодированный зоной NS4 А служит кофактором протеинкиназной функции NS3 (Михайлов М.И., 2001; Малышев B.C., Карпов В.В., Ведяков А.Г. и др., 2001 и др.)
Статистическая обработка
Диагностика ВИЧ-инфекции у всех обследованных устанавливался после скринингового, референтного и экспертного исследований на наличие специфических антител к ВИЧ в ИФА и иммуноблоте.
Для исследования иммунного статуса больных осуществляли забор венозной крови из локтевой вены натощак в утренние часы. В работе использовалась гепаринизированная кровь (12-15 ЕД гепарина на 1 мл крови) и цельная венозная кровь. Забор крови проводили в пробирки «Vacutainer» («BD»).
Сывороточные иммуноглобулины А, М, G определяли методом турби-диметрии на биохимическом анализаторе ФП-901М по методике Т.И. Луки-чевой и др. (1991), Н.М. Кудряшовой и др. (1993).
Исследование спектра анти-HCV в сыворотках крови проводили методом ИФА на тест-системах «РекомбиБест анти-ВГС» ЗАО «Вектор-Бест» с последующим определением спектра антител к структурным и неструктурным белкам HCV в иммуноблоте «INNO-LIA HCV Ab III update» фирмы «INNO GENETICS» (Бельгия). Денситометрию стрипов иммуноблота проводили в отраженном свете на сканере SHARP JX-330 «Pharmacia Biotech» (Швеция).
При оптимизации метода получения ЦИК из сывороток крови использовали следующие концентрации полиэтиленгликоля с молекулярным весом 6000 (ПЭГ-6000): 7%, 14% и 21%, которые служили для определения содержания ЦИК различной молекулярной массы по оптической плотности [Герасимов И.Г., Зоркова Е.В, 2001].Сыворотки крови смешивали в соотношении 1:1с разными концентрациями ПЭГ. Далее смесь инкубировали при +6+2С в течение 18 и 72 часов. Преципитат осаждали центрифугированием при 5000g в течение 20 минут и четырежды промывали десятикратным объемом ПЭГ в концентрациях: 3,5%, 7% и 10,5% в 0,05М боратном буфере, рН 8,8. Учитывая то, что действие ПЭГ на белковые растворы сходно с действием органических растворителей, которые могут вызвать осаждение наряду с иммунными комплексами и свободных иммуноглобулинов, мы провели исследование по определению титра анти-ВИЧ антител в сыворотках крови до и после обработки различными концентрациями ПЭГ-6000. Методом ИФА установлено, что только после осаждения ЦИК из сывороток крови 7%-ным раствором полиэтиленгликоля титры анти-ВИЧ антител в ИФА не изменялись и были равны титрам антител в исходных пробах, в отличие от ПЭГ в концентрациях 14% и 21%.
Результаты диск-электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) показали, что 7%-ный раствор ПЭГ обеспечивал выделение двух фракций: «быстро» (18 часов) - и «медленно» (72 часа) - препипитирующих ЦИК, которые были представлены на электрофореграммах иммуноглобулиновой зоной и не содержали примесей белков плазмы. При использовании ПЭГ в концентрациях 14% и 21% выделялась только одна фракция ЦИК. Таким образом, за основу получения ЦИК из сывороток крови был взят метод преципитации 7%-ным раствором полиэтиленгликоля в ОДМ боратном буфере с рН 8,8 (Меньшиков В.В., Делекторский Л.Н., Золотницкий Р.П., 1987). Далее препараты ЦИК диссоциировали температурным воздействием при +60С в течение 3-х часов, предварительно поместив их в отрицательные по ВИЧ, HbsAg и гепатиту С сыворотки крови фирмы «Bio Rad» (США).
Антитела к вирусу гепатита С определяли с использованием иммуноб-лот тест-системы 3-го поколения INNO-LIA HCV Ab III update фирмы 1п-nogenetics (Бельгия) на стрипах с линейно нанесенными на нейлоновую мембрану серологически информативных синтетическими конформационных аналогов эпитопов вируса. Исследуемые образцы разводили 1 к 10 в буфере для разведения образцов и инкубировали в течение 16±2 часов при комнатной температуре (15-30С) на шейкере Wemixx (Denley Instruments Ltd, Великобритания). По окончании инкубации стрипы промывали 3 раза фосфатно-солевым буфером, содержащим детергент твин 20, вносили анти-челове 36 ческий Ig(H+L цепи), меченный щелочной фосфатазой и инкубировали на шейкере в течение 30 минут при комнатной температуре. Далее стрипы промывали 2 раза фосфатно-солевым раствором с твином 20 и 1 раз субстратным буфером. Далее стрипы помещали в раствор, содержащий бромхлориндо-лилфосфат и нитросиний тетразоль в диметилформамиде на 30 минут при комнатной температуре при постоянном встряхивании. По окончании инкубации субстратную смесь аспирировали и добавляли стоп-реагент 0,1 М раствор серной кислоты на 10-20 минут, стрипы высушивали. Результаты реакции оценивали визуально и инструментально в отраженном свете на сканере Sharp Jx-330 с использованием программы Image Master 10 Prime, версия 3,00 (Pharmacia Biotech). Интенсивность окрашенных полос (количественный анализ сканированных фракций) выражалась в оптических единицах плотности (Pixel). Полученные результаты обрабатывали с использованием программы Microsoft Excel и представляли в виде табличных данных и линейных графических изображений.
Циркулирующие иммунные комплексы исследовали методом преципитации полиэтиленгликолем - 6000 по М. Dygeon и др. (1977).
Статистическая обработка данных
Статистическая обработка данных производилась на персональном компьютере IBM НС «Pentium», с использованием программ «MS Excel-97» и программы «Статис-Мед». При этом использовались параметрические методы оценки результатов - вычисление средней арифметической (М), сред-неквадратического отклонения, средней ошибки средней арифметической (т). Оценка различий между сопоставляемым группами по избранным критериям осуществлялась по критерию Стьюдента. Достоверность изменений признавалась при вероятности ошибки р меньше или равно 0,05.
Характеристика анти-HCV различной специфичности в сыворотке крови больных ХВГС методом ИФА
Жалобы больных при первичном обследовании носили неспецифический (внепеченочный) характер. Наиболее частой жалобой у наблюдаемых больных на момент обследования была слабость, повышенная утомляемость, снижение трудоспособности - у 38 (82,6%) больных. В большинстве случаев жалоба на слабость выявлялась только при целенаправленном опросе. 15,2% больных жаловались на головную боль и головокружение, на нарушение сна - 26,1%, боли в суставах отмечались у 8,7% больных. Характерными были жалобы на ухудшение аппетита и снижение массы тела (30,4% и 10,8%).
В отличии от внепеченочных, печеночные клинические признаки болезни у больных HCV-инфекцией не носили выраженный характер.
Большинство из наблюдаемых больных обычно жаловались на тяжесть (65,2%) и боли в правом подреберье как в покое, так при физической и алиментарной нагрузке.
Желтушность слизистых оболочек отмечалась лишь у трети больных (23,9%)). Она была умеренной, характеризовалась субиктеричностью и/или слабой иктеричностью склер. Колебания уровня общего билирубина сыворотки крови были от 1,5 до 3-х кратного превышения верхней границы нормы. Клинических симптомов холестаза у обследованных нами больных не отмечалось. Лишь у 3 больных в анамнезе отмечено эпизодическое потемнение мочи, появление гипо- или ахоличного стула.
Изменения со стороны кожных покровов, в основном, характеризовались появлением сосудистых «звездочек», точечных геморрагии и капилля-ритом в зоне кожи верхнего плечевого пояса. Наиболее частым проявлением болезни было увеличение печени. Гепатомегалия была выявлена у 87% больных, что обычно совпадало с изменениями показателей печеночных проб.
Всем наблюдаемым больным было проведено ультразвуковое исследование органов гепатобилиарной системы и селезенки. Увеличение размеров печени отмечалось у 100% больных, хотя в основном это было умеренное увеличение. Повышение эхогенности паренхимы печени было констатировано в 73,4% случаев. У всех обследованных больных определялись изменения со стороны желчного пузыря и желчевыводящих путей, перипортальные уплотнения, у 50% больных - явления гепатоза.
29 (63%)) больным была проведена биопсия печени. У всех ПЦР-РНК-HCV был положительным. При гистологическом исследовании пунктата выявлены следующие изменения: - признаки фиброзирования отсутствовали у 31,03% больных; - слабовыраженный фиброз был выявлен у 68,9%; - признаков выраженного фиброза не было выявлено ни у одного больного. Индекс гистологической активности по Knodell более 9 баллов зарегистрирован у 15 (51,7%) больных, перипортальные и мостовидные некрозы составили 3,9±1,45 баллов, воспаление - 3,45+0,75 баллов, внутридольковые дегенерации и некрозы - 2,2+0,81 баллов.
На основании комплексной клинико-лабораторной, инструментальной, морфологической оценки (биоптата печени) у 45,6% больных (21 человек) установлен хронический вирусный гепатит С малой активности, у 32,6% (15 человек) - умеренной и у 21,8%) (10 человек) - выраженной активности.
Увеличение селезенки было отмечено лишь у 3-х (6,5% ) больных. Клинических признаков указывающих на выраженную печеночно-клеточную недостаточность не было.
Анализируя основные жалобы больных хроническим вирусным гепатитом С было установлено, что частота их возрастает с давностью инфицирования (таблица 3.5; рис. 3.1). Следует отметить, что такие симптомы как кожные высыпания, эпизоды диареи, снижение массы тела, артралгии отмечали больные с давностью инфицирования более 3-х лет. Жалобы на слабость, повышенную утомляемость, тяжесть и/или боли в правом подреберье предъявляли все 100%) больных с давностью инфицирования 3 года и более.
Клинико-биохимическая характеристика крови больных ХВГС. Данные биохимического исследования крови больных хроническим вирусным гепатитом С в период обострения характеризовались высокими уровнями активности ферментов АлАТ и ГГТП (таблица 3.6). Изменения показателей активности АлАТ колебались от 93 до 214 МЕ/л. У 15,2% пациентов (7 человек) были зарегистрированы нормальные значения АлАТ. К моменту клинической ремиссии содержание АлАТ снижалось, однако нормаль 42 уровня не достигало. Обращало на себя внимание, как правило, слабое повышение активности АлАТ и АсАТ: в пределах 3-х норм - у 18 (39,1%), от 3 до 5 норм - у 12 (26,08%), выше 5 норм - у 8 (19,6%) больных. до 1 года 1-3 года 3-5 лет более 5 лет слабость тяжесть в правом подреберье р снижение аппетита снижение массы тела Рис. 3.1. Частота жалоб в зависимости от срока инфицирования HCV (в %). Анализ мембранного фермента - гаммаглютамилтранспептидазы (ГГТП) показал, что уровень его зависит от периода болезни. Так, при обострении болезни уровень ГГТП превысил норму у 22 (47,8%) больных и составил 44,9+15,0 МЕ/л. Наиболее часто имело место 1,5-2-х кратное превышение нормального уровня. В периоде ремиссии происходила нормализация этого показателя. Уровень щелочной фосфатазы не имел значительных колебаний. Превышение его наблюдалось лишь у 12 пациентов, и не более чем в 1,5-2 нормы, и зависело от стадии печеночного процесса.
Основные проявления хронического вирусного гепатита С 63 при HCV-HIV коинфекции в зависимости от давности инфицирования ВИЧ
В настоящее время самым доступным и эффективным способом выявления HCV-инфекции является иммуноферментный анализ на антитела к HCV (анти-HCV). Во всем мире, в том числе и в России, применяются диагностические системы 3-го поколения. Иммуноферментные тест-системы включают синтетические полипептиды иммуногенных фрагментов белков core, NS3, NS4, NS5 (Афанасьев А.Ю., Зубов СВ., Жданов Ю.Е., Кривопусто-ва А.В., 1995; Афанасьев А.Ю., Пименов В.К., Зубов СВ. и др., 1997; Михайлов М.И., 2001; Ющук Н.Д., Огиенко О.Л., Круглов И.В. и др., 2002).
Нуклеокапсидный белок core - один из наиболее иммуногенных структурных полипептидов вируса гепатита С. Этот белок используется для сборки вириона и обладает способностью связываться с вирусной РНК; выполняет регуляторную функцию, оказывая влияние на репликацию вируса (Шах-гильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003; Николаева Л.И., Арча-ков А.И., Блохина Р.П. и др., 2003).
Неструктурные белки (NS3, NS4, NS5) являются ферментами HCV, необходимыми для полноценной репликации вируса (Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003; Ястребов О.Н., 2003 и др.). Максимальной иммуногенностью среди них обладает NS3 (молекулярная масса 70 кДа). Неструктурный белок NS3 содержит два функциональных домена: протеаз-ный и геликазный. Он осуществляет протеолиз неструктурных белков вируса, катализирует «кэпирование» вирусной РНК (Николаева Л.И., 2003).
Считают, что NS4 белок служит ко-фактором протеинкиназной функции NS3 (Николаева Л.И., 2003). NS5 регион участвует в начальных стадиях противовирусного действия интерферона (Михайлов М.И., 2001; Шахгиль-дян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г., 2003).
Антитела к неструктурным белкам вируса гепатита С, выполняющие различные ферментативные функции и не входящие в состав вириона, появляются только при деструкции инфицированных вирусом клеток. Поэтому антитела против неструктурных белков могут использоваться в качестве маркеров репликации вируса и разрушения клеток. Установлено также, что при благоприятном исходе острого вирусного гепатита С уровень aHTH-NS3 и aHTH-NS5 заметно снижается (Бузина А.Б., Корочкина О.В., Михайлова Е.А., 2003; Beld М., Penning М., van Putten М. et al., 1999).
Установлено, что тесты ИФА на анти-HCV допускают наличие ложно-положительных и неопределенных (сомнительных) результатов (Богач В.В., Троценко О.Е., Давидович М.А., 2003; Baretto A.M., Sabino Е.С., Takei К. et al., 2000). Доля ложнопозитивных результатов при выявлении анти-HCV с помощью различных диагностических тест-систем может составлять 10-20% (Schroter М., Feuctit Н.Н., Schafer P. et al., 1999; Hernander-Agnado I., Bolumar F., Moreno R. et al., 1998). S. Georg, D. Klinzman, W.N. Schmidt и др. (2000) продемонстрировали, что у 8,4% больных с ВИЧ-инфекцией регистрируются ложнонегативные результаты выявления анти-HCV. Поэтому в качестве подтверждающего теста на анти-HCV используют тесты иммуноблота с раздельной сорбцией антигенов на нитроцеллюлозном носителе, отличающиеся более высокой специфичностью и возможностью анализа спектра антител к HCV (Zignego A.L., De Carli М., Monti М. et al., 1995; Малышев B.C., Карпов B.B., Ведяков Ф.Г. и др., 2001; Николаева Л.И., Арчаков А.И., Блохина Р.П. и др., 2003).
Хроническая персистенция вируса гепатита С приводит к интенсивному синтезу антител, направленных к антигенам HCV, а также к поверхностным структурам лимфоцитов, образованию иммунных комплексов. Образование иммунных комплексов следует рассматривать как физиологическую реакцию организма, которая может становиться патологической в тех случаях, когда фагоцитоз - основной механизм элиминации ЦИК - оказывается недостаточным, а их длительное персистирование может отягощать течение болезни и способствовать возникновению обострений (Жданов В.М., Ананьев В.А., Стаханова В.М., 1986; Жданов К.В., Лобзин Ю.В., Гусев Д.А., Чир-ский B.C., 2003; Яхонтова О.И., Дуданова О.П., 1992).
Иммунные комплексы несомненно играют определенную роль в патологии печени, особенно при затяжном и хроническом течении болезни. Их отложения наблюдаются при иммуногистологических обследованиях в цитоплазме и плазменных мембранах гепатоцитов, а также в ядрах. Предполагается, что антитела проникают в клетку в следствие токсического повреждения наружных мембран гепатоцитов. Иммунные комплексы, определяемые в ядрах гепатоцитов, почти всегда содержат сердцевинный антиген; их находки в срезах из биопсийного материала рассматриваются как указание на неблагоприятное течение и исход болезни (Гебеш В.В., Митченко И.Ю., Дегтя-ренко О.М. и др., 1990).
Внепеченочные осложнения при гепатите в большинстве случаев оказываются патогенетически связанными с формированием иммунных комплексов. К числу таких осложнений относят васкулиты, гломерулонефриты, узелковые полиартриты, вторичные смешанные криоглобулинемии и др. (Кокорева Л.Н., Змызгова А.В., Волчкова Е.В., 1996; Игнатова Т.М., 2002).
Качественный и количественный состав ЦИК во многом определяют характер и исход иммунологического разрешения HCV-инфекции. Достоверность выявления вирус-специфических антител может быть существенно повышена только при их параллельном выявлении в свободном и связанном виде в ЦИК. Это связано с тем, что не в 100% случаев свободные и связанные в ЦИК анти-HCV регистрируются параллельно. Анти-HCV IgG, циркулирующие в свободном и связанном виде в ЦИК крови больных ХВГС при HCV-моно- и HCV-HIV-коинфекции методом иммунного блотинга
Соотношение основных иммунологических факторов (репликация вируса, антителообразование, показатели клеточного и гуморального иммунитета) определяют сроки появления печеночных и внепеченочных проявлений, связанных как с прямым действием HCV, так и его структурных и неструктурных белков. Качественный и количественный состав спектра антител класса IgG к белкам вируса гепатита С во многом определяют характер и исход иммунологического разрешения HCV-инфекции (Marion Peters, 1998; Donald В. Smith, Peter Simmond, 1998). А достоверность выявления вирусспе-цифических структур может быть существенно повышена только при их параллельном выявлении в свободном и связанном виде в ЦИК (Рязанова Г.А., Коксин В.П., Мустафин И.Г. и др., 2002).
Целью настоящей работы явилась оценка диагностической значимости количественного определения анти-HCV IgG, циркулирующих в свободном и связанном виде в ЦИК крови больных ХВГС при HCV-моно- и HCV+HIV коинфекции методом иммунного блотинга.
Результаты анализа на наличие серологических маркеров вируса гепатита С у больных моно- и коинфекцией показали, что частота выявления анти-HCV IgG в сыворотке крови методом иммунного блотинга у наблюдаемых больных была достоверно выше, чем частота обнаружения анти-HCV методом ИФА (р 0,001), носила стабильный характер и не зависела от активности патологического процесса в печени.
