Содержание к диссертации
стр.
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Сенсибилизирующее действие бактериальных токсинов и анатоксинов 10
Бактериальные аллергены, их приготовление и применение 21
Аллергодиагностика Щ vitro 41
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Описание и характеристика производственных штаммов 52
Выбор среды и типа возбудителя для получения микробной массы Cl.botulinum 52
Приготовление микробной массы Ol.botulinum. 53
Метод получения ботулинина 54
Изучение некоторых биохимических показателей ботулинина /..... 54
Контроль стерильности аллергена 55
Контроль безвредности ботулинина 55
Определение антигенных свойств ботулинина.. 56
Изучение специфичности ботулинического ал -лергена 57
Изучение типоспецифичности ботулинического аллергена 57
Изучение сенсибилизирующих свойств ботули -нического аллергена 57
Методы изучения сенсибилизирующего действия ботулинических антигенов 59
Характеристика антигенов,схемы сенсибили -зации, сроки наблюдения 61
Определение антитоксической активности про-тивоботулинической сыворотки 63
Метод статистической обработки результатов исследования 64
ГЛАВА Ш. ПРИГОТОВЛЕНИЕ АЛЛЕРГЕНА-БОТУЛИНИНА И ИЗУЧЕНИЕ
ЕГО СВОЙСТВ
Выбор типа возбудителя и среды для его выращивания при получении микробной массы Cl.botuiinum 69
Получение ботулинического аллергена 74
Изучение некоторых биохимических показателей ботулинина 79
Определение оптимальной дозы ботулинина в кожно-аллергической пробе и реакции повреждения нейтрофилов 80
Отработка схемы контроля аллергенных свойств ботулинина в кожно-аллергической пробе 83
Специфическая активность ботулинина в кожно-аллергической пробе 85
Реакция повреждения нейтрофилов с ботулинином у сенсибилизированных морских свинок и кроликов в динамике
Изучение специфичности ботулинина 89
Изучение типоспецифичности аллергена 90
Антигенные свойства .ботулинина 92
Изучение сенсибилизирующей активности ботули -нического аллергена.
ГЛАВА ІУ. СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ БОТУЛИНИЧЕСКИХ
АНТИГЕНОВ НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ 102
Сравнительное изучение иммуногенных и сенси -билизирующих свойств ботулинических анатоксинов 102
Сенсибилизирующее действие ботулинических анатоксинов различной степени очистки 105
Сенсибилизирующее действие ботулинических антигенов при различных способах введения 106
Изучение сенсибилизирующего действия ботули -нических антигенов на организм лошадей-продуцентов противоботулинической сыворотки в процессе эксплуатации . 114
ГЛАВА У. ВЫЯВЛЕНИЕ СЕНСИБИЖЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ
БОТУЛИНИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ НА ДОБРОВОЛЬЦАХ 129
I. Изучение уровня антител у привитых ботулиниче -
скими антигенами 131
2. Кожно-аллергические реакции с ботулинином у
лиц, привитых ботулиническими антигенами 133
3. Показатель повреждения нейтрофилов у много -
кратно привитых ботулиническими антигенами... 136
4. Использование ботулинина для постановки
кожно-аллергической пробы и ППН при оценке
иммунологического статуса у работающих в
сфере производства ботулинических антигенов
для решения вопроса об очередной ревакцинации. 137
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 144
ВЫВОДЫ 157
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 158
Введение к работе
Одной из важнейших задач советского здравоохранения является профилактика заболеваний, в частности, инфекционных. При этом большое значение приобретают вопросы, связанные с даль -нейшим совершенствованием специфической профилактики, преду -преждением побочных эффектов вакцинации, прежде всего аллергической природы. В настоящее время наблюдается тенденция к росту аллергических заболеваний. В среднем 10$ населения всего мира страдает от различных проявлений аллергии. Значительная роль в этом принадлежит сенсибилизирующему действию различных бактериальных и вирусных вакцин. Антигены, в том числе бакте -рийные токсины и анатоксины, обуславливая иммунологическую перестройку организма, одновременно вызывают и сенсибилизацию, в результате чего могут возникать различной интенсивности аллергические реакции (И.Н.Моргунов, 1959; А.Х.Канчурин, 1976; В.А. Евсеев, 1982; Н.Д.Беклемишев, 1983; G.Zaloga, B.Chernow, 1982; A.Heggie , 1983; G.Q?assi,G.Sacchi ,1983 и др.).
Велика роль специфической профилактики в защите персонала предприятий НИИ вакцин и сывороток, который согласно инст -рукций по технике безопасности периодически прививается против различных инфекций, в том числе и ботулизма. В связи с этим значительный практический интерес представляет выяснение вопроса о влиянии на организм прививаемых длительных систематических вакцинаций, создающих условия перегрузки организма различными антигенами, разработка соответствующих экспериментальных моде -лей, клинико-лабораторных тестов для оценки аллергизирующих свойств вакцин. Большое значение имеет усовершенствование схем и календаря прививок, направленное на снижение возможности ал -
- б -
лергизации организма прививаемых (В.В.Квирикадзе, 1976; С.Г. Дзагуров, 1976; А.Д.Адо, 1979; А.А.Воробьев с соавт., 1982 и
до).
Большое внимание в литературе уделяется изучению сенсибилизации при различных инфекционных заболеваниях. Мало изученным остается вопрос об аллергическом действии анатоксинов и других вакцинных препаратов при иммунизации, о взаимоотношении между аллергической перестройкой организма и наличием антитоксического и антиинфекционного иммунитета. Взаимосвязь между указанными показателями обнаружена в работах С.А.Шварца с соавт. (1974)при иммунизации столбнячным анатоксином, у привитых и переболевших сибирской язвой, чумой, туляремией (Т.А.Калитина, 1956; Е.И.Коробкова с соавт., 1961; Э.Н. Шляхов, 1970 и др.).
Следует отметить, что сенсибилизирующее действие ботулини-ческих антигенов изучено недостаточно. В этом плане мы можем привести лишь единичные исследования И.Н.Моргунова (1959), А.Т. Кравченко с соавт.(1968, 1971).
Поэтому актуальными являются исследования, направленные на изучение сенсибилизирующего действия ботулинических антигенов при иммунизации.
Цель работы. Целью исследований явилось изучение сенсиби -лизирующего действия ботулинических антигенов на модели мелких лабораторных животных, лошадях-продуцентах противоботулиничес -кой сыворотки и добровольцах, работающих в сфере производства ботулинических препаратов с помощью ботулинического аллергена.
Задачи исследования. I. Разработать и получить ботулинический аллерген -ботулинин, изучить его физико-химические свойства, специфическую активность в кожно-аллергической пробе и реакции повреждения нейтрофилов.
Изучить сенсибилизирующее действие ботулинических антигенов в эксперименте в зависимости от чистоты, иммуногенности, способа введения.
Определить с помощью кожно-аллергических проб с ботули -нином степень сенсибилизации лошадей-продуцентов противоботу -линической сыворотки в процессе эксплуатации и в зависимости от качества антигенов, используемых для иммунизации.
Оценить иммунологическую и аллергическую перестройку и проанализировать их соотношение у сотрудников производства ботулинических антигенов, которые согласно инструкций по технике безопасности периодически ревакцинируются.
Научная новизна, и практическая ценность.
Впервые изучено сенсибилизирующее действие ботулинических антигенов при однократной, многократной и гипериммунизациях.
Впервые разработан и получен аллерген ботулинин для оценки сенсибилизации человека и животных к ботулиническим анти -генам. Разработана инструкция по изготовлению и контроля ал -лергена ботулинического очищенного сухого, утвержденная Ученым Советом Томского НИИ вакцин и сывороток 23.03.1978 г.
Ботулинин используется в тесте ППН для обнаружения специфической сенсибилизации у привитых ботулиническими антигенами в Харьковском НИИ микробиологии вакцин и сывороток (Акт внед -рения от 3 декабря 1979 г.).
Показана эффективность кожно-аллергического теста с боту-линином для оценки аллергической и иммунологической перестройки лошадей-продуцентов гипериммунной сыворотки. Сделаны реко -мендации по возможности использования кожно-аллергического теста с ботулинином при оценке иммунологической реактивности лошадей в подготовительном цикле иммунизации. Кожно-аллергический
тест применяется в иммунотделе предприятия Томского НИИ вакцин и сывороток (Акт внедрения от II марта 1983 г.).
Обоснована возможность использования конского мяса, явля-
ы ющегося отходом свороточного производства, взамен говяжьего,
при изготовлении питательных сред, необходимых для получения ботулинических антигенов. Материалы исследования вошли в изменение № 103/4 к Регламенту производства на лечебно-профилактические и диагностические противоботулинические сыворотки от 29 марта 1966 г., утвержденному КВС МЗ СССР 17 ноября 1977 г., и использованы при разработке Регламента производства сыворо -ток противоботулинических типов А,В,С,Е, Р , очищенных, кон -центрированных жидких и сухих (полуфабрикат) № 229, утвержденного МЗ СССР в 1981 г.
Установлена коррелятивная взаимосвязь аллергической и иммунологической перестройки добровольцев, привитых ботулиничес-кими антигенами. Использование теста ППН рекомендовано для оценки иммунологического статуса лиц, работающих в системе производства ботулинических антигенов и многократно ревакцинируе -мых, при решении вопроса о целесообразности очередной ревакцинации. Тест ППН внедрен на предприятии Томского НИИ вакцин и сывороток (Акт внедрения от 21 апреля 1983 г.).
На защиту выносятся следующие основные положения:
Разработка и получение ботулинического аллергена. Характеристика его физико-химических, биологических свойств, специфической активности.
Изучение в эксперименте сенсибилизирующего действия ботулинических антигенов в зависимости от их иммуногенности, степени очистки и способа введения.
Оценка сенсибилизирующего действия ботулинических антигенов на организм лошадей-продуцентов противоботулинической сы -
воротки в процессе иммунизации. Рекомендация кожно-аллергичес-кого теста с ботулинином для оценки иммунологической реактив -ности лошадей в подготовительном периоде гипериммунизации.
Обоснование возможности использования конского мяса, являющегося отходом сывороточного производства, для изготовления питательных сред при получении ботулинических антигенов.
Влияние многократной вакцинации брюшнотифозной вакциной с секстаанатоксином на сенсибилизацию организма сотрудников производства ботулинических антигенов. Использование теста ГШН с ботулинином для оценки их аллергического и иммунологического состояния при решении вопроса об очередной ревакцинации.
