Содержание к диссертации
Стр.
В В Е Д Е Н И Е 7
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Получение и применение антилим-
фоцитарных сывороток 11
Доноры - продуценты АЛС 17
Методы оценки АЛС 20
Действие АЛС на кровь и кроветворные органы 21
Некоторые характерные особенности периферической крови морской
свинки 24
Краткие сведения об анти-В и анти~Т сыворотках к лимфоцитам морской свинки 26
Заключение по обзору литературы.. 28
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЕ 31
2.1. Получение разновидовых антилимфо-
цитарных сывороток 31
Антиген для иммунизации... 31
Схемы иммунизации.. 32
Выделение сыворотки, стабилизация, хранение 35
2.2. Оценка антилимфоцитарных сыворо
ток 35
Оценка АЛС в реакции лейко агглютинации (РЛА) 35
Оценка АЛС в лейкоцитоток-сичесном тесте 37
Определение титра гемаг-глютининов в разновидовнх
АЛС 37
Стр.
Оценка АЛС методом подавления антителообравования к эритроцитам барана у морской свинки 40
Испытание АЛС методом "цветной пробы" 41
Очистка АЛС от гемагглютининов методом сорбции на эритроциты морской свинки, фиксированные акролеином 4І
Метод получения анти-В и анти-Т сывороток к лимфоцитам морской свинки 41
Выявление антиглобулинов в сыворотках крови в реакции преципитации в агаре (РПА) 42
Обнарухение антиглобулинов к сывороточным белкам кролика по
РИГА 42
2.7. Обнарухение антиглобулинов к
сывороточным белкам ков по РИГА 45
2.8« Методы постановки экспериментов 47
2.9» Методы гистологических исследо
ваний . 48
2.10. Методы статистической обработ
ки результатов 50
ГЛАВА 3. НОВЫЕ ДАННЫЕ ОБ АНТИЛИМФОЦйТАРНЫХ
СЫВОРОТКАХ К ЛИМФОЦИТАМ МОРСКОЙ СВИН
КИ 51
3.1. Получение анти-В и анти-Т сыво
роток к лимфоцитам морской
свинки 51
3.1.1. Антиген для иммунизации,
схема иммунивации 51
Стр.
Выделение сыворотки, сорбци-онная очистка.. 52
Выявление в цитотоксическом тесте специфической активности анти-В и анти^-Т сывороток
к лимфоцитам морской свинки.. 53
3.1.4. Процентное соотношение Т- и
В-лимфоцитов в костном моеге,
тимусе, селезенке, лимфоузлах
и периферической крови мор
ской свинки 54
3.2. Новые методы оценки и сорбции АЛС к
лимфоцитам морской свинки 56
Испытание АЛС методом "цветной пробы" 56
Очистка АЛС от гемагглютининов методом сорбции на эритроциты морской свинки, фиксированные акролеином 58
3.3. Действие раэновидовых АЛС на организм
животного. 63
Действие раэновидовых АЛС на массу тела..... 64
Выявление раэновидовых АЛС на скорость оседания эритроцитов 65
Действие раэновидовых АЛС на температуру тела. -. 65
Действие раэновидовых АЛС на концентрацию эритроцитов крови 66
Действие раэновидовых АЛС на концентрацию лейкоцитов крови 66
Влияние раэновидовых АЛС на образование антител к гетерогенным эритроцитам 67
Содержание антиглобулинов к белкам антилимфоцитарных сывороток по РПА и РИГА 70
5.3.8. Действие разновидовых АЛС
на содержание комплемента
в крови морской свинки 77
3.3.9. Нейтрализация антилимфоци-
тарных сывороток различных
видов с помощью антиглобу
линов, выработанных в ответ
на введение АЛС. 79
3.3.10. О специфичности антиглобу
линов, вырабатываемых в от
вет на введение АЛС 80
ГЛАВА 4. ДЕЙСТВИЕ РАЗНОВИДОВЫХ АЛС НА КРОВЬ И
КРОВЕТВОРНЫЕ ОРГАНЫ... 90
Действие разновидовых АЛС на периферическую кровь 90
Действие разновидовых АЛС на лимфатический узел 102
Действие разновидовых АЛС на селе зенку 107
Действие разновидовых АЛС на тимус 113
Действие разновидовых АЛС на костный мозг 114
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 126
ВЫВОД Ы 134
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 137
- б -
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДИССЕРТАЦИИ
АЛС - антилимфоцитарная сыворотка
АЛГ - антилимфоцитарный глобулин
РЛА - реакция лейко агглютинации
РПА - реакция преципитации в агаре
РИГА - реакция непрямой гем агглютинации
РГА - реакция гем агглютинации
ЦТТ - цитотоксический тест
АТС - анти-Т сыворотка
ABC - анти-В сыворотка
АГС - сыворотка морской свинки, содержащая
антиглобулины к АЛС
Введение к работе
Актуальность. Антилимфоцитарная сыворотка - АЛС и анти лимфоцитарный глобулин - АЛГ прочно вошли в медицинскую практику как эффективные и направленно действующие иммуно-депрессанты (У.А.Арипов с соавт. (12), Сосіші (184),
Light ot. al. (238), Зі-riim et.al. (280). ДлИТЄЛЬНОСТЬ
их действия на организм как и у всех других сывороточных препаратов не является продолжительной. Мысль о возможности последовательного введения сывороточных препаратов, полученных на различных видах животных с целью продления терапевтического действия, высказывали ряд авторов. Среди них Г.Н. Крыжановский, Л.Н.Фонталии, Л.А.Певницкий (87), А.В.Пшенич-нов с соавторами (123, 124, 125, 126), А.В.Грембовская, Э.СГоровиц (41), У.А.Арипов с соавторами (15), К.М.Абдул-кадыров, В.Н.Шабалин (1), В.И.Говалло (36), А.К.Дрозд, Н.В. Медуницин (52), М.В.Биленко (24), Dormoirt, Sdroarzonberg (189) и др. Большинство из них решало вопрос о донорах иммунных сывороток методом проб и ошибок, склоняясь, однако, к мысли, что животные-продуценты должны быть отдаленными в генетическом отношении видами. Но какова должна быть степень этого удаления? Без принципиального решения этого вопроса невозможно научно обоснованное получение, а следовательно, и применение разновидовых АЛС Неизвестен механизм действия АЛС различных видов при последовательном введении в организм. До настоящего времени иммунологический статус такого важного лабораторного животного как морская свинка остается по существу неизученным. Особенно мало сведений, посвященных выяснению количественного содержания Т- и В-
лимфоцитов, их распределению в различных органах лимфоидной системы животного.
Цели и эадачи исследования.
Получение сходных по эффекту и направленности действия АЛС от животных ив различных отрядов класса млекопитающих.
Разработка дополнительных методов оценки и очистки АЛС
Получение анти-В и анти-Т кроличьих сывороток к лимфоцитам морской свинки и определение процентного содержания Т- и В-лимфоцитов в органах лимфоидной системы животного.
Оценка in vivo биологического действия разнови-довых АЛС при последовательном введении по некоторым тестам на иммунную систему морской свинки.
Изучение клеточного состава иммунокомпетентных органов морской свинки после действия разновидовых, одновидо-вых АЛС и сывороток интактного животного.
Новизна и практическая значимость. Обоснована целесообразность последовательных введений АЛС различных видов для создания длительной иммунодепрессии и показано преимущество этого способа по сравнению с применением АЛС одного вида.
Исследованы механизмы иммунодепрессии при последовательном введении разновидовых АЛС.
Получены сыворотки к Т- и В-лимфоцитам морской свинки. Данные о таких препаратах до сих пор практически отсутствовали. С помощью таких препаратов автором впервые изучена численность субпопуляций Т- и В-лимфоцитов в лимфоузлах, селезенке, тимусе, костном иозге и периферической крови морских свинок.
Разработан метод изготовления и применения эритроцитов, фиксированных акролеином, для сорбции гемагглютининов. Способ позволяет эффективно очищать АЛС, процесс изготовления сорбента прост.
Применен модифицированный метод титрования сывороток на наличие антиглобулинов к гетерогенным сывороточным белкам в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА), где реагент приготовлен методом иммуносорбции белков на эритроциты, фиксированные акролеином. РИГА выгодно отличается быстротой выполнения, реагент стабилен, на его основе можно приготовить стандартный сухой диагностикум.
Разработан и применен новый способ титрования АЛС, названный "цветной пробой".
Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 1) заседании Пермского отделения ВНО микробиологов, эпидемиологов и инфекционистов им. И.И.Мечникова, Пермь, сентябрь, 1971; 2) заседании Пермского отделения ВНО анатомов, гистологов, эмбриологов, Пермь, ноябрь, 1971; 3) республиканском совещании по иммунодепрессии и аллотрансплантации, Ташкент, октябрь, 1971; 4) межвузовской научной конференции "Реактивность и пластичность эпителия и соединительной ткани в нормальных экспериментальных и патологических условиях", Тюмень, ноябрь, 1974; 5) итоговой научной конференции профессорско-преподавательского состава ПГМИ, отделение ВНО микробиологов, эпидемиологов и инфекционистов им. И.И.Мечникова, Пермь, январь, 1975; б) итоговой научной конференции профессорско-преподавательского состава ПГМИ, отделение ВНО анатомов, гистологов, эмбриологов, Пермь, март, 1977; 7) заседании Пермского отделения ВНО анатомов, гистологов, эмбриологов, Пермь, март, 1980; 8) заседании проблемной комиссии по об-
щим вакономернос тям морфогенеза в норме, патологии и индивидуальном развитии, Пермь, январь, 1983.
По материалам диссертации опубликовано 9 статей, получено два удостоверения на рационализаторские предложения.
Структура диссертации. Диссертация изложена на 170 страницах (собственно текста - 136 страниц машинописи) и состоит из оглавления, введения и 4 глав, в которых излагаются основные положения работы, заключения, выводов, списка литературы, включающего 287 источников, из них 164 отечественных и 123 иностранных. Работа иллюстрирована 25 таблицами и 44 рисунками.
Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и подвергнут анализу лично автором.
На защиту выносится: обоснование принципа последовательного введения разновидовых АЛС, полученных от животных из различных отрядов класса млекопитающих. Доказательство возможности использования данных сывороток для создания более длительного иммунодепрессивного эффекта, чем при действии АЛС одного вида.
.- 11 -
