Введение к работе
Актуальность проблемы
Нарушения системы гемостаза характерны для многих заболеваний и патологических состояний (Козинец М.И., Макаров В.А., 1997). Для диагностики и правильной коррекции этих нарушений необходимы информативные и стандартизованные методы исследований, основанные на применении качественных диагностических реагентов (Бокарев И.НД995; Кондратьева Т.Б. и соавт.,1995; Becker D.et al.,1993; Bophy M. et al.,1993). Реагенты, применяемые в некоторых методах исследования гемостаза, получают из разного биологического сырья и по разным технологиям, что приводит к разночтению результатов (Зубаиров Д.М.,2000).
К наиболее распространенным тестам, составляющим основу современного исследования гемостаза, относятся методы определения протромбинового времени (ПВ) по Квику и активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ). Они отражают состояние внешнего и внутреннего механизмов образования протромбиназы. На этих методах основано определение активности отдельных прокоагулян-тов, а также с их помощью проводится контроль эффективности анти-коагулянтной терапии (Козлова Т.В., 2001). При их выполнении приме-няют фосфолипидные реагенты: полный тромбопластин - в тесте Квика и частичный — в АПТВ. Результаты, получаемые при использовании различных коммерческих диагностикумов, трудно сравнимы по причине их разной активности и чувствительности к снижению уровня факторов свертывания (Панченко Е.П., Добровольский А.Б., 1999; Берковский А.Л.,2000; Poller L.et al., 1998).
Помимо возросших потребностей контроля антикоагулянтной терапии важной является диагностика коагулопатий, в частности, гемофилии А и В, а также контроль терапии гемостатическими препаратами. При исследовании активности факторов VIII и IX предпочтение отдают одностадийным методам, основанным на тесте АПТВ (Качалова Н.Д. и соавт.,1999; Козлов А.А. и соавт., 2000). Кроме фосфолипидных реагентов и активаторов, тест-системы для определения факторов VIII и IX включают соответствующие субстраты, лишенные указанных прокоагу-лянтов и содержащие избыток других, а также контрольную плазму с
аттестованным значением исследуемого фактора, необходимую для построения калибровочных графиков (Тарасова Л.Н. и соавт., 1998; Barrowcliffe T.W.,1990). Из-за большого количества контрольных и субстратных плазм, производимых по разным технологиям, затруднительно сравнивать результаты исследований, полученные не только в различных лабораториях, но нередко - в разное время в одних и тех же (Тарасова Л.Н., Платонова Г.К., 1988; Левченко Л.Б. и соавт., 1989; Баркаган З.С.1991).
В клинико-диагностических лабораториях нашей страны в последние годы все более широкое применение находят автоматические коагулометры, требующие использования в тест-системах коммерческих лиофилизированных диагностикумов высокого качества, имеющих длительный срок годности. Однако, они могут оказывать влияние на показатели методов в зависимости от применяемых реагентов и приводить к разночтениям между результатами пробирочного и аппаратного воспроизведения (Барроуклифф Т.В.,1995; Бокарев И.Н., Козлова Т.В., 2000; D'Angelo A. et al, 1989; Taberner D.A. et al. 1990; Kitchen S.,1997).
Основным условием повышения точности и достоверности получаемых результатов является применение качественного оборудования и реагентов. Производство отечественных тест-систем, сопоставимых по качеству с зарубежными, пригодных для пробирочного и аппаратного выполнения методов, позволит ускорить решение проблемы стандартизации исследований коагуляционного гемостаза в нашей стране.
Цель исследования
Оценить соответствие реагентов, разработанных в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, современным требованиям качества при пробирочном и аппаратном исполнении методов исследования коагуляционного гемостаза.
Задачи исследования:
1. Оценить воспроизводимость и сопоставимость результатов методов определения протромбинового времени и АПТВ при использовании отечественных и импортных диагностических реагентов и наборов.
-
Изучить возможность использования полного тканевого и частичного тромбопластинов Кировского НИИ гематологии и переливания крови при проведении аппаратных исследований.
-
Изучить влияние различных активаторов, применяемых в методе АПТВ, на его результаты.
-
Оценить качество наборов для определения активности факторов VIII и IX, разработанных в Кировском НИИ гематологии и переливания крови.
-
Изучить возможность использования наборов для определения активности факторов VIII и IX при аппаратном исполнении методов.
Научная новизна
Проведена статистически обоснованная оценка качества результатов наиболее распространенных методов исследования коагуляционного гемостаза, выполненных с использованием реактивов и наборов, разработанных в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, а также зарубежных (производства фирмы "Organon Teknika", Нидерланды), в пробирочном и аппаратном исполнении. Доказано, что отечественные реактивы специфичны и чувствительны к измеряемым компонентам и обеспечивают хорошую воспроизводимость методов определения про-тромбинового времени, АПТВ, активности факторов VIII и IX, не уступающую таковой, получаемой при использовании аналогичных импортных реагентов.
При оценке различных активаторов для метода АПТВ выявлено, что реактивы, содержащие оксид кремния (каолины, кремнезем), не влияют на воспроизводимость метода и чувствительность к гепарину. Показано,что активность АПТВ-реагента зависит не только от частичного тромбопластина, используемого при выполнении метода, но также от концентрации и оптической плотности применяемого активатора.
Доказано, что диагностические реагенты и наборы, разработанные в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, пригодны для исследования коагуляционного гемостаза с применением фотооптических коагулометров.
Практическое значение работы
Проведенная оценка качества результатов ряда методов исследования коагуляционного гемостаза, выполняемых с использованием реактивов и наборов, разработанных в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, позволяет рекомендовать их в дальнейшем к более широкому внедрению в клинико-диагностическую практику, а та,кже к использованию данных реагентов и наборов в исследованиях, проводимых с помощью фотооптических коагулометров. Это будет способствовать стандартизации коагулологических исследований и улучшению качества обследования больных.
На защиту выносятся следующие положения:
-
Показатели качества диагностикумов для исследования коагуляционного гемостаза, разработанных в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, не уступают таковым зарубежных аналогов ("Organon Teknika", Нидерланды).
-
Реагенты и наборы, разработанные в Кировском НИИ гематологии и переливания крови, пригодны для определения протромбинового времени, АПТВ, активности факторов VIII и IX при использовании фотооптических коагулометров.
-
Активаторы на основе оксида кремния (каолины, кремнезем) не влияют на воспроизводимость показателей метода АПТВ и чувствительность к гепарину, но от их концентрации и оптической плотности зависит активность АПТВ-набора.
Апробация работы
Материалы работы были доложены на научно-практических конференциях "Национальные дни лабораторной медицины", (Москва, 2001), "Актуальные проблемы трансфузионной медицины" (Киров, 2000), "Современные проблемы гематологии и трансфузиологии" (Киров, 2002), а также итоговых научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови и Кировской Государственной Медицинской Академии (1999-2000 гг.).
По теме диссертации опубликовано 14 работ, из которых 8 - в центральной печати.
Объем и структура работы
Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, содержащего 161 источник, в том числе 70 иностранных. Диссертация изложена на 101 странице машинописного текста, иллюстрирована 7 рисунками и 16 таблицами.
