Содержание к диссертации
ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
ГЛАВА 1 РОЛЬ ЦИТОКИНОВ В РАЗВИТИИ ИММУННОГО ОТВЕТА В НОРМЕ
И ПРИ ПАТОЛОГИИ 11
ГЛАВА 2 РЕГУЛЯЦИЯ НЕЙРО-ЭНДОКРИННЫХ ПРОЦЕССОВ
МЕДИАТОРАМИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ 17
ГЛАВА 3 НЕЙРО-ЭНДОКРИННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА 20 ГЛАВА 4 ГЛИПРОЛИНЫ НОВЫЙ КЛАСС РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ 25
ЧАСТЬ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 28
ГЛАВА 1 ОБЪЕКТ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 28
ГЛАВА 2 ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОРЕГУЛИРУЮЩИХ СВОЙСТВ
ГЛИПРОЛИНОВ В НОРМЕ 45
2 1 Влияние глипролинов на продукцию цитокинов линиями нервных и
иммунокомпетентных клеток 45
2 2 Интерферон-индуцирующие свойства глипролинов в системе in vitro 48
2 3 Влияние Селанка на цитокинстимулирующие и интерферон-индуцирующие
функции иммунной системы мышей 49
ГЛАВА 3 ПРОТИВОВИРУСНЫЕ СВОЙСТВА СЕЛАНКА 52
3 1 Противовирусная активность препарата Селанк in vitro при
экспериментальной гриппозной инфекции 52
3 2 Противовирусная активность препарата Селанк in vivo при
экспериментальной гриппозной инфекции 53
3 3 Противовирусная активность препарата Селанк in vitro при
экспериментальной герпетической инфекции 58
3 4 Противовирусная активность препарата Селанк in vivo при
экспериментальной герпетической инфекции 59
ГЛАВА 4 ОЦЕНКА ЦИТОКИНОВОГО СТАТУСА У ЛЮДЕЙ, СТРАДАЮЩИХ
ХРОНИЧЕСКИМИ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ 65
4 1 Продукция цитокинов и состояния противовирусного иммунитета у
неврологических больных 65
4 2 Динамика изменений в продукции цитокинов у неврологических больных
на фоне симптоматического лечения 67
4 2 1 Экспрессия генов цитокинов у больных БП и ГЛД 67
4 2 2 Уровень содержания цитокинов в сыворотке крови больных БП и ГЛД 70
4 2 3 Оценка противовирусных гуморальных факторов крови больных БП и
ГЛД 71
ГЛАВА 5 ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ГЛИПРОЛИНОВ ПРИ
ПСИХОНЕВРОЛОГИЧЕСКИХ РАССТРОЙСТВАХ У ЛЮДЕЙ 72
5 1 Влияние глипролинов на продукцию цитокинов и индукцию ИФН in vitro
клетками периферической крови больных, страдающих депрессивными
расстройствами 72
5 2 Влияние препарата Селанк на уровень содержания цитокинов и Тип-1/Тип-
2 цитокиновый баланс в периферической крови больных, страдающих
тревожными расстройствами и неврастенией 74
ГЛАВА 6 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 79
ВЫВОДЫ 93
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 95
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:
1. АКТГ - адренокортикотропный гормон
2 БП - болезнь Паркинсона
3. ВПГ - вирус простого герпеса
4 ВЭМК - вирус энцефаломиокардита мышей
ГК - глюкокортикоиды
ГГАС - гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система
ГЛД - гепатолентикулярная дегенерация
ГТР - генерализованное тревожное расстройство
ДГЭА - дигидроэпиандростерон
ЕК - клетка естественный киллер
ИЛ - интерлейкин 12. ИФН - интерферон
ИФА - иммуноферментный анализ
Л ПС - липополисахарид
МПК - мононуклеары периферической крови
НГУК - невринома Гассерова узла крысы
ОТ - обратная транскрипция
ПрК - протеинкиназа
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РП - регуляторные пептиды
Тк - киллерная субпопуляция Т-клеток
Тс - супрессорная субпопуляция Т-клеток
Тх - хелперная субпопуляция Т-клеток
ТФР-р - трансформирующий фактор роста Р
ФГА - фитогемагглютинин
ФЛЭЧ - фибробласты легкого эмбриона человека
ФИО - фактор некроза опухоли
ФРН - фактор роста нейронов
29. ЦНС - центральная нервная система
30 ЦПД - цитопатогенное действие
31 ЧЛИ - человеческий лейкоцитарный интерферон
32. CD - кластер дифференцировки лимфоцитов
Ig - иммуноглобулин
J-96 - клеточная линия моноцитарной лейкемии человека
Jaks - янус-киназа
MDCK - культура клеток фибробластов почки собаки 37. NDV - вирус болезни Ньюкастла
38 PGP - пролил-глицил-пролин
STAT - сигнальный белок трансдукции и активации транскрипции
VERO - культура клеток почки африканской зеленой мартышки
Введение к работе
В патогенезе большинства инфекционных и неинфекционных заболеваний часто наблюдается дисбаланс в продукции и рецепции нейропептидов, гормонов и цитокинов [23]. Данный факт напрямую указывает на тесное взаимодействие нервной, эндокринной и иммунной систем в регуляции го-меостатических реакций, что обуславливает актуальность исследования взаимосвязей этих регуляторных и эффекторных медиаторов для разработки объективных методов коррекции их дисбаланса
Нарушение нейроэндокринной регуляции функций иммунной системы служит патогенетическим звеном многих заболеваний Обнаружено, что различные медиаторы нейроэндокринной системы могут селективно модулировать иммунную систему, влияя на пролиферацию иммунокомпетентных клеток и продукцию ими цитокинов [84]. В то же время, выявлены и механизмы обратной связи иммунной и нейроэндокринной систем, реализуемые посредством растворимых медиаторов иммунной системы, в первую очередь - цитокинов [35, 61] Многочисленные исследования показали, что регуляторные пептиды продуцируются клетками иммунной системы в концентрациях, достаточных для нейроэндокринной регуляции и способных оказывать влияние на психическое состояние человека [21]. С другой стороны, нарушения в функционировании нейро-эндокринной системы являются факторами предрасположенности к развитию вторичных иммунодефицитов, приводящих к опасности развития аутоиммунных, онкологических заболеваний, к утяжелению протекания инфекционных заболеваний, и тд [80] Больные, страдающие различными психоневрологическими расстройствами, подвержены частым инфекционным заболеваниям, которые протекают, как правило, в более тяжелой форме
Заболевания вирусной этиологии, гакие как грипп и герпес, являются наиболее широко распространенными и плохо контролируемыми инфекциями Несмотря на многочисленные исследования, направленные на поиск и разработку новых противовирусных и иммуномодулирующих препаратов, эта проблема на сегодняшний день не потеряла своей актуальности В связи с этим, представляется важным детальное изучение продукции цитокинов, играющих ведущую роль в развитии противовирусных и противораковых иммунных реакций у больных с нейродегенеративными заболеваниями для оценки нового подхода иммунокоррекции с использованием нейротропных препаратов, идентичных или близких по природе к эндогенным пептидам
В данной работе, был использован новый подход для коррекции имму-нодефицитных состояний у психоневрологических больных Исследовались иммунотропные свойства новой группы отечественных нейротропных препаратов пептидной природы - глипролинов (Семакс, Селанк, PGP), синтезированных в Институте Молекулярной генетики РАН. Глипролияы включают ряд простейших пролинсодержащих ди- и трипептидов и входят в состав олигопептидов, которые легли в основу таких лекарственных препаратов, как Семакс и Селанк Семакс - синтетический аналог фрагмента адренокортико-тропного гормона (АКТГ4 ю), полностью лишенный гормональной активности Являясь регулятором функций центральной нервной системы (ЦНС), Семакс в очень низких дозах (3-30 мкг/кг) обладает выраженным ноотроп-ным эффектом и в настоящее время широко используется в неврологической клинике [8,13] Молекула Селанка может быть рассмотрена как содержащая фрагмент 289-292 иммуноглобулинов (Ig) класса G Ранее проведенные исследования и результаты клинических испытаний подтвердили наличие психотропной активности Селанка, проявляющейся в виде сочетания анксиоли-тического и стимулирующего действия [12, 14] PGP - трипептид, стабилизирующий молекулы Семакса и Селанка, находится на стадии предклиниче-
ских испытаний в качестве противоязвенного препарата Уникальность свойств этой группы препаратов заключается в их психо-, нейро- и иммуно-тропной активности. Характерными чертами этих пептидов являются высокая эффективность в малых дозах, быстрота наступления эффектов при отсутствии негативных последствий [4, 26]
Целью наших исследований являлось выявление изменений в цито-киновом профиле при экспериментальных вирусных инфекциях (грипп и инфекция, вызванная вирусом простого герпеса (ВПГИ) и ряда психоневрологических патологий, а также обоснование возможности и тактики иммунокоррекции этих нарушений нейротропными препаратами из семейства глипролинов
Для реализации указанной цели решались следующие задачи:
Изучить иммуномодулирующие и интерферон-индуцирующие свойства глипролинов в системах in vitro и in VIVO.
Изучить противовирусную активность глипролинов в отношении вируса гриппа и ВПГИ в системах in vitro и in vivo.
Изучить цитокиновый Тип-1/Тип-2 баланс у людей с психоневрологическими заболеваниями (болезнь Паркинсона (БП), гепато-лентикулярная дегенерация (ГЛД), неврастения, генерализированное тревожное расстройство (ГТР))
Провести корреляцию экспериментальных лабораторных данных с результатами, полученными при клиническом испытании Селанка
Оценить возможность использования глипролинов в качестве иммуно-модуляторов и индукторов интерферона для профилактики и иммунокоррекции вторичных иммунодеффицитов.
В работе использован широкий спектр культуральных, вирусологических, иммунологических и молекулярно-биологических методов, в том числе им-муно-ферментный анализ (ИФА) и метод полуколичественной полимеразнои цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР)
Новизна исследования:
1 Впервые была проведена комплексная оценка изменений в экспрессии генов и секреции цитокинов в клеточных культурах и в системе in VIVO под воздействием иммуно- и нейротропных препаратов;
2. Впервые выявлено наличие иммуномодулирующих свойств у новых нейротропных препаратов пептидного происхождения, влияющих на продукцию интерферона (ИФН) и других цитокинов
Впервые показан противовирусный эффект глипролинов на моделях экспериментальных вирусных инфекций (грипп, ВШИ)
Впервые проведен корреляционный анализ психоневрологического состояния и секреции цитокинов у больных с различными нейро- и психопатологическими нарушениями (БП, ГЛД, неврастения, ГТР)
Практическая ценность:
В работе показаны иммунорегуляторные свойства трех новых отечественных глипролинов: Селанка, Семакса, и PGP. Обнаружены выраженные противовирусные свойства Селанка в отношении вируса гриппа А и вируса простого герпеса I и 2 типов Результаты исследований продемонстрировали возможность и целесообразность использования глипролинов для предупреждения и лечения вирусных заболеваний у людей с психоневрологическими нарушениями Обнаруженные иммуномодуляторные свойства этих пептидов, позволяют классифицировать их в качестве адаптогенов и рекомендо-
вать их клиницистам для применения у лиц старшего возраста и людей, подверженных воздействию стресс-индуцирующих факторов окружающей среды
ЧАСТЫ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
