Содержание к диссертации
Список используемых сокращенийГлава!. ОБЗОР ЛИГГЕРАТУРЫ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материал исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Протокол приготовления цитоцентрифугатов периферической крови и костного мозга
2.2.2. Лабораторные методы исследования периферической крови и костного мозга
2.2.3. Система анализа клеточного изображения
2.2.4. Статистическая обработка
Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Разработка протокола пробоподготовки периферической крови практически здоровых людей и больных анемиями
3.2. Разработка протокола пробоподготовки костного мозга практически здоровых людей и больных острыми лейкозами
3.3. Оценка особенностей расположения клеток в цитоцентрифугатах и воспроизводимость результатов, полученных на приборе «АСПЕК»
3.4. Сравнение гемограмм, подсчитанных в обьганых мазках и цитоцентрифугатах периферической крови с нормальными и с отличными от нормы гематологическими показателями
3.5. Сравнительный анализ обьганых мазков и цитоцентрифугатов костного мозга
3.6. Морфометрические особенности бластных клеток в стандартных цитоцентрифугатах костного мозга больных различными вариантами острых миелоидных лейкозов
3.6.1. Контрольная морфометрия эритроцитов в стандартных цитоцентрифугатах крови практически здорового человека
3.6.2. Сравнение морфометрических характеристик бластных клеток костного мозга в обычных мазках и цитоцентрифугатах больного острым лейкозом
3.6.3. Морфометрические параметры бластных клеток в стандартных цитоцентрифугатах проб костного мозга практически здоровых людей (контрольная группа из доноров костного мозга)
3.6.4. Морфометрические параметры бластных клеток в стандартных цитоцентрифугатах костного мозга больных острыми миелоидными лейкозами
3.6.4.1. Острые миелобластные лейкозы
3.6.4.2. Острый миеломонобластный лейкоз
3.6.4.3. Острый монобластный лейкоз
3.6.4.4. Острый эритромиелоз и острый мегакариобластный лейкоз
Введение к работе
Актуальность темы исследования.
Гетерогенность популяции нормальных кроветворных предшественников по фенотипическим признакам и уровням дифференцировки, а также возможность опухолевой трансформации на любой стадии их развития отражается в значительном разнообразии лейкозных клонов. Выявление этой гетерогенности в первую очередь базируются на морфо—цитохимических особенностях лейкозных клеток [50].
Анализ морфо-цитохимических признаков позволил выделить и охарактеризовать типы бластных клеток и разработать классификации острых лейкозов [59, 74]. Применение их в практической гематологии привело к достижению существенных успехов в области диагностики и лечения больных. Использование современных лечебных программ у больных острыми миелоидными лейкозами (ОМЛ) позволяет получить 62 —
85% полных ремиссий с 5-летней безрецидивной выживаемостью, достигающей 29 - 46% [58]. Однако, у части больных развиваются фатальные рецидивы заболевания, а эскалация доз цитостатиков не всегда оказывает терапевтический эффект.
Под воздействием естественной и «искусственной» (цитостатическая
терапия) селекции в лейкозной популяции появляются новые варианты клеток. Давно отмечено, что с введением новых комплексов цитостатических средств, с появлением длительных ремиссий, сменяемых рецидивами, рефрактерными к ранее эффективным цитостатическим препаратам, в первую очередь проявляется изменчивость формы и величины ядер и цитоплазмы лейкозных клеток, причем изменения ядра морфологически более выражены [59, 69].
В настоящее время оценка морфологических и цитохимических признаков бластных клеток при острых лейкозах, которые отражают степень их созревания и дифференцировки и лежат в основе современных классификаций (ФАБ-классификация, 1991; ВОЗ классификация, 2008), носит субъективный характер. Это подчеркивает необходимость перехода с обычного визуального анализа микроскопических изображений к применению методов количественной цитологии, позволяющих выявить и сравнить индивидуальную и внутригрупповую вариабельность цитологических признаков лейкозных клеток.
Оценка современного состояния и внедрения технических достижений в медицинскую практи1су показывает, что анализаторы изображений клеток охватывают большую область применений, однако используются в основном, в отличие от проточных цитометров, при выполнении научноисследовательских работ: метод предъявляет повышенные требования к приготовлению исследуемого материала и требует стандартизации этого процесса.
Стандартизация приготовления препаратов периферической крови осуществляется либо с помощью различных автоматических/механичесьсих устройств, либо с применением специальных цитоцентрифзгг [23. 41, 50, 103, 109]. Однако, нам не встретились опубликованные данные о возможности использования таких устройств для стандартизации пробоподготовки костного мозга с последующим компьютерным морфометрическим анализом его клеточного состава.
Все вышеизложенное определяет актуальность проблемы и позволяет обозначить цель и задачи настоящего исследования.
Цель работы: определить морфометрические параметры бластных клеток в стандартных цитоцентрифугатах костного мозга больных острыми миелоидными лейкозами.
Задачи исследования:
1. Разработать протокол полз^ения стандартных цитоцентрифугатов на предметных стеклах из проб периферической крови и костного мозга.
2. Выявить особенности расположения клеток в цитоцентрифугатах периферической крови и костного мозга в норме и при острых лейкозах.
3. Определить пригодность стандартных цитоцентрифугатов периферической крови и костного мозга для компьютерного анализа изображения клеток.
4. Исследовать возможности компьютерной морфометрии для оценки морфологической гетерогенности бластных клеток при различных вариантах острых миелоидных лейкозов.
Научная новизна.
В работе впервые показано, что морфометрия изображений бластных клеток, отобранных из стандартных цитоцентрифугатов костного мозга больных различными вариантами острого миелоидного лейкоза, может быть положена в основу количественной оценки гетерогенности морфологических особенностей клеточных популяций разного уровня созревания и формирования базы знаний.
Полученными в диссертации достоверными результатами обосновано наз^ное положение о том, что количественная цитология - средство выделения и объективного описания модальных устойчивых классов бластных клеток, характериззоощих варианты острых миелоидньгх лейкозов.
Практическая значимость работы.
Разработанная в ходе настоящего исследования стандартная пробоподготовка периферической крови и костного мозга обеспечивает пригодность препаратов исследуемого материала для объективной оценки с использованием компьютеризированных систем анализа клеточного изображения в научно-исследовательских работах и в практике клиниколабораторного обследования гематологических больных.
Апробация работы:
1. Разработанная методика используется в лаборатории гемоцитологии учреждения Российской академии медицинский наук Гематологический научный центр РАМН для проведения клинико-лабораторных и научных исследований.
2. Материалы диссертации опубликованы в 16 печатных работах, докладывались на научных и научно-практических конференциях.
3. Полученные в процессе работы аппаратно-программные средства используются при обучении аспирантов и научных сотрудников методам автоматизированного исследования бластных клеток в лаборатории гемоцитологии Гематологического научного центра РАМН.
4. Разработанную установку для автоматизированного компьютерного морфометрического анализа бластных клеток и комплекс методов, полученных в ходе проведения данной работы можно рассматривать как научно-методическую базу для проведения подобного рода исследований.
Положения, выносимые на защиту:
1. Стандартная пробоподготовка периферической крови и костного мозга обеспечивает пригодность цитологических препаратов для объективного анализа.
2. Компьютерная морфометрия бластных клеток, отобранных из стандартных цитоцентрифугатов костного мозга больных различными вариантами острого миелоидного лейкоза, может быть положена в основу количественной оценки гетерогенности морфологических особенностей клеточных популяций разного уровня созреваш1Я и формирования базы знаний.
Апробация диссертации.
Основные положения диссертации доложены на Российской научнопрактической конференции «Технологии и инновации в лабораторной медицине» (Москва, 2009).
Струютра и объем диссертации.
Диссертационная работа изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов и библиографического указателя, включающего 145 работ, из них 71 работа отечественных авторов.
Диссертация иллюстрирована 25 рисунками, содержит 21 таблицу.
