Содержание к диссертации
Введение
Глава I. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ (обзор литературы) 8
1. Морфологические изменения в консервированной крови в процессе хранения 8
2. Биохимические изменения в консервированной крови 13
2.1. Изменения активности каталазы, пе-роксидазы, содержания глютатиона, натрия
и калия в консервированной крови 13
2»2. Гликолитические процессы в консервированной крови 19
2.3. Изменения осмотической резистентности эритроцитов и содержания свободного гемоглобина в плазме консервированной крови 22
2.4. Изменения уровня АТФ, 2-гЗ-ДФГ, кисло--родно-транспортной функции эритроцитов и кислотно-щелочного равновесия в консервированной крови 25
2.5. Влияние транспортировки на консервированную кровь 30
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 34
Глава III. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ 40
I. Изменения показателя гематокрита, среднего объема эритроцита, его диаметра, толщины, площади основания и количества сфероцитов 40
Глава ІV БИОХИМИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ 71
I Показатель каталазы, пероксидазная активность, содержание общего, восстановленного и окисленного глютатиона в крови 71
2. Изменения содержания сахара 94
3. Электролитный баланс плазмы крови 98
4. Изменения осмотической резистентности эритроцитов и содержания свободного гемоглобина в плазме крови 104
5. Изменения уровня АТФ и 2,3-ДФГ в консервированной крови 120
ВКЛЮЧЕНИЕ 134
ВЫВОДЫ 151
АЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ 153
- Морфологические изменения в консервированной крови в процессе хранения
- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Изменения показателя гематокрита, среднего объема эритроцита, его диаметра, толщины, площади основания и количества сфероцитов
- Показатель каталазы, пероксидазная активность, содержание общего, восстановленного и окисленного глютатиона в крови
Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время широкое приме-ение получила заготовка крови выездными бригадами, в связи чем возникли дополнительные факторы, влияющие на биологи-ескую полноценность консервированной крови. Многими иссле-;ователями изучалось изменение консервированной крови при е транспортировке, хранении в оптимальных условиях (+4? 6С ), комнатной (+15% +27С) и ниже 0 температурах, зучалось также влияние консервирующих и стабилизирующих ред. Однако влияние условий заготовки и хранения в жарком лимате (+30, +35С) южных районов страны на консервирован-:ую кровь определено недостаточно. В частности, почти не исследовалась биологическая полноценность эритроцитов такой :рови: ее кислородно-транспортная функция, структурная сох-іанность эритроцитов, нарзгшения электролитного состава плаз-ш консервированной крови и некоторые другие показатели.
Актуальность этой проблемы является несомненной, так :ак площадь, занимаемая районами с жарким климатом, состав-сяет многие тысячи квадратных километров.
В связи с этим возникла необходимость дополнительного [сследования консервированной крови в процессе ее заготовки і хранения.
Целью данной работы явилось изучение влияния на консер-шрованную донорскую кровь температуры и транспортировки, которые возникают при заготовке ее в выездных условиях тркого климата, выявление зависимости наступающих изменений )т состава консервирующего раствора.
Основные задачи исследования:
I. Изучение комплексного влияния высокой температуры >30C, +35C) и транспортировки в условиях жаркого климата іа свойства крови, консервированной на растворах ЦОЛИПК 76, \люгицир и ЦОЛИПК 12 (как широко применяемые в службе крови), 1,7% растворе лимоннокислого натрия (для приготовления све-іецитратной крови) и гепарине (для экстракорпорального кро-аообращения).
2. Изучение изменений эритроцитов консервированной кро- ш в процессе ее хранения, в зависимости от состава консер- шрующего раствора, условий заготовки и температуры хранения: >труктурной целостности и кислородно-транспортной функции [содержание аденозинтрифосфорной и 2,3- дифосфоглицериновой :ислот), осмотической резистентности, окислительно-восста-ювительных процессов (ферментативная активность пероксидазы, юказатели каталазы и глютатиона), потребление глюкозы, содержание свободного гемоглобина и электролитов в плазме.
3. Подготовить рекомендации по организации заготовки, [ранению и транспортировке крови в условиях жаркого климата.
Научная новизна. Впервые изучено комплексное влияние транспортировки и температурного фактора, имеющих место при іаготовке крови в условиях жаркого климата, на морфологи-іеские изменения эритроцитов, кислородно-транспортную фун-щию их, показатель каталазы, ферментативную актишость перок-шдазн, на окислительно-восстановительные процессы, концен-грацию сахара, минимальную осмотическую резистентность эритроцитов, на электролитный баланс и увеличение концентрации івободного гемоглобина в плазме крови.
Выбран более целесообразный консервирующий раствор для заготовки донорской крови в выездных условиях жаркого климата.
Разработаны дополнения к практическим рекомендациям по аготовке консервированной крови на выезде в условиях жар-ого климата.
Практическая ценность проведенного исследования. Дока-анная в ходе исследования связь между биологической пол-оценностью консервированной крови, условиями заготовки и ранения позволит выбирать более рациональный способ кон-ерзирования крови, обеспечивающий лучшую сохранность ее. слученные результаты исследования структурной целостности ритроцитов и нарушение их кислородно-транспортной функции огут служить критерием оценки биологической полноценности онсервированной крови. Внедрение в практику работы разра-отанных рекомендаций по организации заготовки крови в ус-овиях жаркого климата повысит возможности службы крови по аготовке доброкачественной и биологически полноценной тран-фузионной среды.
Положения, выносимые на защиту:
В консервированной крови, заготовленной на выезде в словиях жаркого климата,подвергавшейся комплексному воздей-твию высокой температуры (+30, +35С) и транспортировки, нижена ее биологическая полноценность. Степень выраженноети зменений зависит от состава консервирующего раствора, вре-:ени воздействия высокой температуры и срока хранения.
Изменения минимальной осмотической резистентности эритроцитов, увеличение количества сфероцитов и содержания свободного гемоглобина, снижение показателя структурной целостно ти (АТФ) и уровня кислородно-транспортной функции эритроцитов (2,3-ДФГ) происходят менее интенсивно в крови на гемо-:онсерванте ЦОЛИПК 12,
3. Хранение крови при температуре +30, +35С и ее тран- портировка (до 200 км), в первые 5 часов после консервации, е оказывают существенного влияния на окислительно-восстано-ительные, гликолитические процессы, а также на электролит-ый баланс плазмы крови. Изменения этих показателей зависят т состава консервирующего раствора и срока последующего ранения крови.
4. В условиях жаркого климата для сохранения биологичес-ой полноценности донорской крови необходимо строго соблю-ать систему организационных мероприятий, направленных на беспечение температурного режима хранения крови.
Морфологические изменения в консервированной крови в процессе хранения
После победы Великой Октябрьской социалистам ской рево-:юции, наряду с решением важных политических, экономических : военных задач, партия приступила к строительству новой системы народного здравоохранения, в том числе и службы крови. ; 1926 году в Москве организуется Государственный институт :ереливания крови. С этого периода развернулась широкая на--чная разработка теоретических и практических проблем по кон-ервированиго и переливанию крови советскими исследователями.
В отличие от способа Раус и Тернера, при котором перели-алась только глобулярная масса, Д.Н. Беленький (1930) пред-:ожил брать меньшее количество цитрата и использовать для [ереливания всю кровь.
В 1931 году Л.Р. Перельман показал, что благоприятными гсловиями хранения крови являются температура от +4 до +6С. :.Д. Балаховский и Ф.Г. Гинзбург (1934) работают над созда-[ием новых консервирующих растворов.
Считается доказанным, что в консервированной крови в процессе хранения происходят постепенные морфологические изме-гения эритроцитов. Степень этих изменений позволяет судить ) структурной целостности и функциональной полноценности эри-?роцитов (40,71,72,92,94,108,166,176,190,205,234,255,304).
Доказано, что эритроциты консервированной крови проходят ри фазы морфологических изменений. Они наступают в разные роки и зависят от состава консервирующего раствора и температуры хранения крови (13,36,73,74,75,81,99,100,173,181,198, 99,201,206,233).
Материалы и методы исследования
Для решения поставленных задач исследовалась донорская :ровь, заготовленная в стационарных и выездных условиях жар-;ого климата ( летом при температуре от +30 до +35С).
Кровь стабилизировали раствором ЦОЛЙПК 76, глюгицир и [ОЛИПК 12 - как гемоконсервантами, получившими массовое при-[енение в службе крови, 3,7$ лимоннокислым натрием - для Приготовления цитратной крови и гепарином - применяемым при ікстракорпоральном кровообращении в кардиохирургии.
Исходные пробы брали из донорской крови, заготовленной j стационарных условиях; исследовали их в течение часа посіє взятия. Остальные пробы помещали в холодильник и хранили [ри температуре от +4 до +6С. Последующие исследования [роводили через каждые 5 дней на протяжении 30 суток хранения.
При заготовке донорской крови на выезде в условиях жар-:ого климата она подвергается комплексному влиянию высокой температуры (от +30 до 35С) и транспортировки, что особен-ю может быть при отсутствии табельных термоконтейнеров и е$рижераторов
С целью изучения влияния выездных условий жаркого клима-са на биологическую полноценность эритроцитов консервирован-юй крови, нами проведено экспериментальное исследование, соторое заключалось в следующем: в выездных условиях бригада заготавливала кровь в помещениях, временно приспособлен-шх под операционные, при температуре +30, 35С. Через 5 іасов хранения крови при температуре +30С и после ее тран - 35 портировки на базовую часть станции(до 200 км), проводили соледование проб крови, Остальные пробы помещали в холодиль-ик и хранили при температуре от +4С до +6С. Последующие ооледования крови проводили на 3,5,10,15,20,25 и 30-е сутки.
Было проведено экспериментальное исследование донорской рови, заготовленной в климатической камере при температуре 30С. Изучение ее проводили сразу после заготовки и через часов хранения при температуре +30С в камере. Затем про-ы помещали в холодильник и хранили при температуре от +4С о +6С. Последующие исследования крови проводили на 5,10, 5 и 20-е сутки хранения.
Изменения показателя гематокрита, среднего объема эритроцита, его диаметра, толщины, площади основания и количества сфероцитов
Как известно по морфологическим изменениям эритроцитов удят о биологической полноценности консервированной крови 20,38,40,71,72,92,94,108,166,176,190,205,234,255,304). Потому представлял интерес изучить эти показатели в крови, за-отовленной в условиях жаркого климата и консервированной а различных растворах.
Изучено 8 340 проб крови. Удалось установить (табл.3), то в крови, консервированной на гемоконсерванте Ц0ЛИІЇК 76, люгицир и заготовленной в стационарных условиях, с 1-го по -8 день хранения показатель гематокрита не изменялся. Пос-е 5-го дня хранения крови отмечалось его увеличение и к 15-0-м суткам он достигал 107 (р 0,001) от исходного уров-я, а к 30-м - 112 ( р 0,001).
В пробах крови, заготовленной на выезде (хранившейся 5 асов при температуре +30С и транспортированной на базовую асть станции переливания крови), показатель гематокрита с -го по 5-й день оставался без изменения.
Показатель каталазы, пероксидазная активность, содержание общего, восстановленного и окисленного глютатиона в крови
Изучение окислительно-восстановительных процессов, изме-эния содержания сахара, калия и натрия, осмотической резис-знтности эритроцитов, свободного гемоглобина, АТФ и 2,3-ДФГ крови, консервированной на гемоконсерванте ЦОЛИДК 76, глю-ицир, ЦОЖЖ 12 и стабилизированной 3,7$ раствором лимонно-ислого натрия, гепарином и заготовленной в различных усло-иях жаркого климата, позволяет судить о сохранении жизнеспо-обности и о кислородно-транспортной функции эритроцитов. С той целью нами изучено 8660 проб консервированной крови и роведено 25660 исследований (табл.1).
Показатель каталазы в крови, консервированной на раство-е ЦОЖПК 76 и глюгицир, заготовленной в стационарных усло-иях жаркого климата, изменялся фазно (табл.15). Так, с 1-го о 5-й день хранезия он снизился на 11$ от исходного уровня р 0,01). На 10-й день отмечено небольшое его увеличение р 0,05), а в последующем, начиная с 11-го по 20 й день -ыраженное снижение (до 18$ исходного уровня, р 0,001). осле 20-го дня хранения показатель каталазы в крови изменял-я незначительно
