Введение к работе
Актуальность темы.
В настоящее время в экспериментальной и клинической иммунологии ' все большую значимость приобретают исследования, направленные на поиск средств и способов избирательного воздействия на отдельные этапы развития иммунного ответа, а также на отдельные субпопуляции клеток иммунной системы. Наиболее перспективный подход к репюнию данной проблемы - создание лекарственных препаратов на основе эндогенных биологически активных верств.
В середине 70-х годов в коллективе иммунологов, руководимом академиком Р. В. Петровым, были обнаружены костномозговые медиаторы -миелопептиды (МП), обладающие иммуностимулирующими (Petrov R. V. et al,1975, Михайлова А. А. 1981), дифференцировочными (Стрелков Л.А. и др. , 1987, 1989) и опиатоподобными свойствами (Петров P. R и др. , 1982, Захарова А А., Летров Р. & , 1991). На основе смеси МП был создан иммужжорригирующий лекарственный препарат Миелопид, не имеющий аналогов за рубежом (Михайлова А. А. , 1988). Миелопид внедрен в клиническую и ветеринарную практику, он применяется для профилактики и коррекции иммунологических нарушений, связанных со стрессом, инфекционными и вирусными заболеваниями, эффективен при некоторых формах лейкозов. Клиническое использование Миелопида, а также многочисленные экспериментальные исследования,- проведенные со смесью неидентифицированных МП, выявили разнообразные иммунорегудяторные эффекты костномозговых медиаторов. Однако, до настоящего времени остается неясным вопрос о химической структуре действующих в Миело-пиде веществ и о механизмах их иммунотропных эффектов. Решение данного вопроса чрезвычайно актуально, поскольку оно позволит установить неизвестные ранее молекулярные механизмы регуляторной функции костного мозга в иммунном ответе, а также дает основу для разработки новых, структурно охарактеризованных иммуномодуляторов эндогенной природы, конкурентно способных на международном фармакологическом рынке.
В последние годы из сулернатанта культуры клеток костного мозга свиньи были выделены и синтезированы два МП следующей структуры.: Phe-Leu-Gly-Phe-Pro-Thr (МП1) и Leu-Val-Val-Tyr-Pro-Trp (МШ) (Фо
кина Л. А. и др., 1993). Наличие структурно охарактеризованных МП открывает возможность проводить всестороннее изучение их биологических свойств на различных экспериментальных моделях, изучать механизмы их действия на клеточном и молекулярной уровнях. Такие исследования необходимы для аффективного отбора веществ, перспективних для разработки на их основе иммуноыодуляторов нового поколения. Цадь и задачи исследования.
Целью настоящая работы явилось всестороннее изучение имыуноре-гуляторных свойств синтетических аналогов пептидов костношагового происхождения иШ и ЖЕ и выяснение механизмов их иммунотропной активности. В процессе проведения работы решались следующие задачи: 1. Определение стимулирующего действия Ш на антнтелообразоваииэ
in vitro при первичном и вторичном иммунном ответе.
Z. Изучение влияния Ш на функциональную активность различных
популяций иммунокоыпетентных клеток (ИКК): Т-, В-клеток а
макрофагов. -
3. Исследование иымунакорр'нгируюшего действия Ш в эксперимен-
тальной модели иммунодефицита ыыдш, вызванного ионизирующей радиацией, и разработка оптимальных схем введения Ш.
-
Изучение корригирующего аффекта Ш на показатели иммунитета мышей, обработанных циклофосфаиидоы (ЦФ).
-
Исследование и..імунорегуляторноа активвости Ш у мышей NZB с врожденным иммунодефицитом.
-
Выявление специфических участко» связывания гексапевтвдов с поверхностью клеток-мишеней.
Научная новизна.
В результате проведенной работы получены экспериментальные данные, демонстрирующие иммунорегуляторные свойства двух новых гекса-пептидов эндогенной'природы, Шй И ЫП2.
Впервые показано, что Шй и ЫГЕ в системе in vitro повышают
антителопродукцию на пике иммунного ответа, усиливают пролиферацию
селезеночных клеток, стимулированных Кон А, и увеличивают фагоци
тарную активность макрофагов при иммунодефицитах. Установлен дозо-
аааисимый характер ишунорегуляторяого влияния ЫШ и ШЕ на иммуно
логические реакции, выявлены различия в характере
иммунорегуляторного действия Ш1 и ШЕ.
Впервые выявлен иммунокорригирущий аффект МЛІ и ЫП2 на экспе риментальных мышиных моделях иммунодефицигов, индуцированных иони вируюпзей радиацией или ЦФ.
Установлено, что иммунорегуляторное влияние НП1 осяцэствляется черев популяцию т-клеток.
Впервые показано регуляторное влияние МП на функциональную активность различных популяций иммунокомлетентных клеток мышей NZB со спонтанно развивающимся аутоиммунным процессом. Установлено, что Ш1 и ШЕ на фоке повышенного ответа на тимусзависимые антигены увеличивают антителообрааование на пике иммунного ответа на ЭЕ, усиливают сниженный пролиферативньй ответ селезеночных клеток на Кон А, отменят ингибируший эффект митогена лаконоса (МЛ) на повы-пенную спонтанную секрецию IgG в культуре селезеночных клеток и увеличивает фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов.
Практическая зиачндос-гь.
Научная-практическая значимость полученных данных заключается в выявлении неизвестных ранее иммунорегуляторных пептидов .эндогенной природы и расшифровке некоторых сторон механизма их иммунотропного действия. Эти данные вносят вклад в понимание роли веществ костномозгового происхождения (МП) в регуляции иммунного ответа и создают предпосылки для разработки на основе индивидуальных МП препаратов с направленным корригирующим эффектом. Индивидуальные, структурно охарактеризованные биологически активные молекулы эндогенной природы являются перспективной основой для создания эффективных иммуно-модуляторов, действующих физиологично и не вызывающих вредных последствий.
Основные шлояения, выносимые на заджгу:
-
МП1 и ШЕ оказывают антителе стимулирующий эффект на пике иммунного ответа в культуре мышиных селезеночных клеток, усиливают пролиферацию селезеночных клеток в ответ на Кон А и не влияют на ЛПСЬиндуцированную пролиферацию селезеночных клеток in vitro.
-
ЫШ повышает уровень продукции IgG селезеночными клетками мыши, стимулированными МЛ.
-
Иммунорегуляторные эффектк Шй имеют дозозависимый характер.
4. МШ и МП2 не влияют на фагоцитарную активность мышиных перито-нальных макрофагов в норме и усиливают ее при нарушениях иммунитета.
б. ШП оказывает вырахешюе иммулюкорригир.ую«ее действие m vivo на антителообразование у животных, обдучешых гамма-лучами шш обработанных ЦФ, и на Кон А-индуцироваваую. пролиферацию селезеночных клеток, подавленную ЦФ.
-
ЫШ. и МІЕ влияют на иммунные реакции у кшей NZB.
-
Иммунорегуляторное действие Шй осуществляется через поиулацию Т-лимфоцитов.
Апробация работы.
Основные положения работы доложены на 1 съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); 8 Международной ишуаологическом когресее (Будапешт, Венгрия, 1992); 12 Европейской иммунологической коферев-ции (Барселона, Испания, 1994); конференции отдела иммунологии Института Сиоорганическоя химии PAR
Публикации.
По теме диссертации имеется 7 печатных работ, 1 патентна» ааавг ка в США и 1 патентная заявка в России.
Объем и структура диссертации.
