Введение к работе
Актуальность работы.
Важнейшим вопросом в проблеме трансплантации костного мозга является совершенствование методов длительного хранения миелоид-ной ткани при низких температурах. Криоконсервирование миелоид-ных клеток - необходимый этап трансплантации аутологичного костного мозга, которая находит широкое применение при лечении больных острыми и хроническими лейкозами (Абдулкадыров К.М. и соавт, 1994; Вегап М. et al., 1987), миеломной болезнью (Bjorkstrand В. et al., 1994), лимфомами (Афанасьев Б.В. и соавт., 1993) и другими неопластическими заболеваниями (Beatty P.G., 1993). Актуальность создания банков аутологичного костного мозга лиц, профессиональная деятельность которых связана с повышенным риском радиационных поражений, показала авария на Чернобыльской АЭС (Баранов А. Е. и соавт., 1989;Sale R.P. et al., 1989).
В Российской Федерации для клинического применения разрешено использование костного мозга, криоконсервированного под защитой глицерина. Существенным недостатком этого метода является необходимость предварительного удаления криопротектора из костномозговой взвеси перед ее инфузией, что приводит к потере значительного количества клеток в миелотрансплантате.
Широкое применение в качестве криопротектора для криокон-сервирования костного мозга в нашей стране и за рубежом нашел диметилсульфоксид ( Areman Е.М. et al.,1990; Areman Е.М.,1991). Однако, ДМСО оказывает выраженное токсическое влияние на миело-кариоциты трансплантата и организм реципиента (Davis J.M., 1990). Кроме того, в настоящее время в России ДМСО соответствующей степени очистки не производится. В связи с этим необходимы исследования по изысканию новых нетоксичных криозалщтных веществ
отечественного производства для криоконсервирования миелоидной ткани.
Среди разрешенных для клинического применения в России кри-опротекторов перспективным для криоконсервирования костного мозга является димешпацетамид (Холодный А. Я. и соавт., 1986). Его преимущества выявлены сравнительной оценкой криозалштных свойств ДМАЦ и ДМСО при замораживании гранулоцитов (Трошина В.М. и соавт., 1977). Имеющиеся в литературе единичные сообщения о крио-консервировании костного мозга с диметилацетамвдом свидетельствуют о том, что наиболее выраженной криофилактической способностью обладает 3% раствор ДМАЦ (Холодный А.Я и соавт.,1979). Для научного обоснования применения диметилацетамида в качестве криопротектора костного мозга необходимы углубленное исследование его криозадатной способности при замораживании миелокариоци-тов до - 19бС, экспериментальное исследование лечебной эффективности пересадки гемопоэтическои ткани, криоконсервированнои с ДМАЦ, и оценка влияния криопротектора на функциональное состояние костного мозга человека в процессе его длительного хранения.
В проблеме миелотрансплантации вопрос об источниках получения костного мозга занимает одно из ведущих мест. В настоящее время имеются убедительные данные о высокой функциональной активности трупного костного мозга (Обухов Д.А., 1992; Blazar B.R. et al., 1986). Важнейшим вопросом применения посмертного костного мозга является определение"целесообразных сроков его получения от трупов скоропостижно умерших людей и разработка эффективных методов криоконсервирования. Все это определяет актуальность настоящего исследования с научной и практической точек зрения.
Цель исследования.
Целью настоящей работы явилось исследование жизнеспособное-
ти костного мозга, замороженного до - 196" С под защитой '3Z раствора диметилацетамида. Задачи исследования.
-
Изучить функциональную полноценность костного мозга, криоконсервированного с 3Z раствором ДМАЦ, в эксперименте.
-
Оценить влияние ЗХ раствора ДМАЦ на морфофункциональную полноценность миелоидных клеток при 18 * 20 С.
-
Исследовать морфофункциональное состояние криоконсервированного под защитой 3% раствора ДМАЦ костного мозга гематологических Сольных и миелоидной ткани, взятой у трупов скоропостижно умерших людей.
-
Оценить влияние 3% раствора ДМАЦ на функциональное состояние миелокариоцитов в сравнении с 10% раствором ДМСО.
-
Изучить возможность длительного хранения замороженной с ДМАЦ миелоидной ткани при - 196 С.
Научная новизна работы.
Выявлена высокая эффективность криоконсервирования костного мозга под защитой 3% раствора диметилацетамида. Впервые в эксперименте на смертельно облученных мышах установлена лечебная эффективность пересадки костного мозга, криоконсервированного с 3% раствором диметилацетамида. Выявлено, что при криоконсер-вировании костного мозга хладоограждающая способность 3% раствора ДМАЦ соответствует криофилактической активности 10% раствора ДМСО. Доказано, что посмертный костный мозг, криокон-сервированный под защитой 3% раствора ДМАЦ при - 196 С, сохраняет функциональную полноценность после 10 лет хранения (срок наблюдения). Установлена функциональная полноценность костного мозга, взятого у трупов внезапно скончавшихся людей в первые 8 часов с момента смерти.
- 4 -Практическая значимость работы и ее реализация.
Применение 3% раствора диметилацетамида в качестве криопро-тектора позволяет надежно сохранять функционально полноценные миелокариоциты костного мозга гематологических больных и посмертного костного мозга при замораживании в жидком азоте (- 19бС). При этом не требуется удаления криопротектора перед инфузией размороженной миеловзвеси реципиенту . Полученные данные о сохранности пролиферативной способности миелоидной ткани, взятой от трупов внезапно скончавшихся людей, подтверждают целесообразность резервирования посмертного костного мозга для клинического применения. Использование диметилацетамида - криопро-тектора отечественного производства позволяет создавать долгосрочные запасы ("банки") криоконсервированной миелоидной ткани в интересах экстремальной медицины.
Полученные в ходе исследования материалы использованы при подготовке отчета по теме НИР 100-95-пб "Обоснование системы долгосрочного хранения запасов гемотерапевтических средств, их транспортировки и применения в военное время"; применяются в практической деятельности НИЛ - Центра крови и тканей Воєнно -медицинской академии; используются при проведении лекций и практических занятий для слушателей академии. Материалы исследований по разработке метода криоконсервирования костного мозга с ДМАЦ направлены в Фармакологический комитет ШМП РФ для получения разрешения на клинические испытания.
Апробация работы.
Результаты научных исследований доложены на XX Ежегодном конгрессе ЕВМТ (Харрогейт,1994), XVIII симпозиуме Международной ассоциации исследования лейкемии и родственных заболеваний (Дублин, 1994), XXI Ежегодном конгрессе ЕВМТ,(Давос,1995), Российс-
- 5 -кой конференции "Актуальные вопросы службы крови и гематологии" (СПб.,1995), Конференции "Актуальные вопросы клиники диагностики и лечения" (СПб., 1995), Всеармейской научной конференции "Актуальные вопросы гематологии" (ВМедА.,1995), П-ой международной конференции "Новые информационные технологии в медицине и экологии" (Ялта - Гурзуф, 1996).
Основные материалы исследований опубликованы в 13 печатных работах. Оформлены 4 рационализаторских предложения (N 4824/5/94Г., 4825/5/94Г., 4826/5/94Г., 4828/5/94Г.).
Структура и обьем работы.
Диссертация изложена на 121 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Текст иллюстрирован 27 таблицами и 6 рисунками. Указатель литературы включает 154 источника, в том числе 73 отечественных и 81 иностранных работ.
Положения, выносимые на защиту:
-
Костный мозг мышей, криоконсервированный с 3% раствором ДМАЦ, сохраняет высокую биологическую полноценность.
-
Хладоограждащая способность 3 раствора ДМАД при крио-консервировании костного мозга гематологических больных и посмертного костного мозга, соответствует криофилактической способности 10% раствора ДМСО.
-
При хранении посмертного костного мозга, криоконсервиро-ванного с 3% раствором ДМАЦ, в жидком азоте (- 196 С) функциональная способность миелокариоцитов сохраняется в течении 10 лет (срок наблюдения).
