Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Широкая распространенность аллергических заболеваний обуславливает акгуалыюстьизучения механизмов регуляции биосинтеза иммуноглобулина Е (IgE) - ключевого компонента реакций гнперчувствителыюстн немедленного типа. Одной из молекул, влияющих на уровень биосинтеза IgE является низкоаффинный рецептор Fc-фрагмента IgE человека (FcERII) (Delespesse G., et al., 1992). Некоторые моноклональиые антитела к FcERII способны супрессировать продукцию IgE (Bonnefoy J, —Y., et al., 1990). Такой же активностью обладает и один из фрагментов этого рецептора (Sarfati М., et al., 1992). Кроме того, сообщалось о способность фрагментов FcERII вызывать и усиливать рост важнейших субпопуляций клеток крови и их предшественников (Delespesse G., et al., 1992). Механизмы, лежащие в основе описанных феноменов, остаются неясными, что обуславливает необходимость дальнейшего изучения структуры и функций этого рецептора.
Клонирование генов, кодирующих функционально важные молекулы иммунной системы, является важнейшим методом изучения их строения и, кроме того, дает возможность получить рекомбннантные препараты н уникальные по чувствительности ДНК-гибрндизационные зонды для использования в дальнейших исследованиях и для разработки новых методов диагностики н лечения. Целью дайной работы было структурно-функциональное изучение низкоаффнппого рецептора IgE человека.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. 1. Клонирование кДНК, кодирующей низкоаффшшый рецептор IgE человека. 2. Изучение экспрессии FcERII в различных клеточных линиях. 3. Изучение роли IL-4 в регуляции экспрессии FcERII в В-лимфоцитах периферической крови.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. В данной работе описано клонирование кДНК низкоаффинного рецептора IgE
-4-человека из независимо полученной в нашей лаборатории В-лимфобластоид-ной клеточной линии. Первичная структура клонированной кДНК идентична опубликованной ранее из другой клеточной линии, что подтверждает ряд предположений о структуре этого рецептора. Клонированная кДНК была использована для получения высокоспецифичного зонда, с помощью которого изучена структура геномного гена в ряде клеточных линий и регуляция экспрессии FcERII в очищенных В-лимфоцитах периферической крови здоровых доноров. Впервые показано, что отсутствие поверхностной экспрессии FcERII в одной из исследованных клеточных ліпшії связано с делецией геномных последовательностей, кодирующих рецептор. Показано, что влияние IL-4 на экспрессию FcERII не зависит от присутствия в культуре Т-клеток и моноцитов. Полученные результаты свидетельствуют, что клонированная кДНК может быть использована для разработки новых методов диагностики и изучения аллергических болезней. Кроме того, клонирование кДНК FcERII позволило приступить к работе по получению рекомбинантных препаратов - фрагментов рецептора. Имеющиеся данные ( зидетельствуют, что такие препараты могут найти практическое применение в аллергологии и гематологии.
1. Методы клонирования кДНК FcERII, структура клонированных фрагментов и их соответствие гену FcERII. 2. Строение гена FcERII в геноме различных клеточных линий и его влияние на поверхностную экспрессию рецептора. 3. Усиление экспрессии FcERII в В-лимфоцитах периферической крови здоровых доноров под действием интерлейкина 4 не требует присутствия в культуре Т-клеток II моноцитов.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ: Результаты работы доложены на Международном симпозиуме по Аллергологии и Клинической иммунологии "IgE:
регуляцня синтеза и клиническая значимость" (Москва, 1990), на ежегодных собраниях Европескои академии аллергологии и клинической иммунологии (Цюрих, 1991, Роттердам, 1993), на XIV международном конгрессе но Аллергологии и Клинической иммунологии (Киото, 1991), на ежегодном научном собрании Биохимического общества Республики Корея (Лпсан, 1991), на Международном конгрессе по созданию новых лекарств (Сеул, 1991), на XV конгрессе Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (Париж, 1992), на 8-ом международном конгрессе по Иммунологии (Будапешт, 1992).
ПУБЛИКАЦИИ: По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ: Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 131 работу. Диссертация изложена на 107 страницах, содержит 10 рисунков и 6 таблиц.
Похожие диссертации на Клонирование кДНК и изучение экспрессии низкоаффинного Fc рецептора иммуноглобулина Е человека
