Влияние аллелей полиморфных генов системы HLA II класса, фолатного обмена, гемостаза и детоксикации на репродукцию человека [Электронный ресурс] Бескоровайная Татьяна Сергеевна

Содержание к диссертации

Введение

Глава I. Обзор литературы 8

Определение и классификация самопроизвольных выкидышей... 8

Этиология невынашивания беременности 9

Анатомические аномалии и эндокринные нарушения при патологии репродукции... 10

Цитогенетические факторы невынашивания беременности 11

Иммунологические факторы нарушения репродукции 12

Организация главного комплекса гистосовместимости человека 12

Иммунология и иммунопатология беременности 15

Генетические причины нарушения репродукции 20

Роль генов фолатного. Обмена в нарушении репродукции 20

Роль генов факторов свертываемости крови в нарушении репродукции 24

Роль генов системы детоксикации в нарушении репродукции 28

Лечение нарушений репродукции 32

Глава II. Материалы и методы 34

Материалы 34

Методы 34

Выделение геномной днк... 34

Метод полимеразной цепной реакции 35

Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (пдрф-анализ) 37

Электрофорез в пааг 38

Статистический анализ 38

Глава III. Результаты и обсуждение 41

Анализ совпадения аллелей hla ii класса в супружеских парах из групп с бесплодием, пнб и неудачной попыткой эко 41

Распределение частот аллелей, генотипов и гаплотипов hla ii класса в группе с пнб 46

Распределение частот аллелей, генотипов и гаплотипов hlaii класса в группе с неудачной попыткой эко 54

Полиморфизмы генов фолатного обмена в группе пнб 58

Полиморфизмы генов факторов свертываемости крови в группе пнб 67

Полиморфизмы генов детоксикации в группе пнб 69

Анализ «накопления» предрасполагающих аллелей

Полиморфных генов разных систем в группе с пнб 73

Выводы 79

Список литературы 80

• Определение и классификация самопроизвольных выкидышей...
• Цитогенетические факторы невынашивания беременности
• Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (пдрф-анализ)
• Анализ совпадения аллелей hla ii класса в супружеских парах из групп с бесплодием, пнб и неудачной попыткой эко

Введение к работе

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Данная работа посвящена изучению ассоциации аллелей полиморфных генов системы фолатного обмена, гемостаза и детоксикации, а таюке антигенов второго класса главного комплекса гистосовместимости с привычным невынашиванием беременности и другими формами репродуктивной патологии.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В последние годы репродуктивные проблемы супружеских пар становятся все более актуальными и требуют пристального внимания специалистов из различных областей медицины. Быстро развивающиеся технологии экстракорпорального оплодотворения помогают решать данную проблему, но некоторые генетические аспекты остаются за рамками внимания врачей, что иногда не позволяет достигать желаемого результата. Бесплодие - неспособность супружеской пары иметь детей, наблюдается в среднем у 15-20% супружеских пар [11]. Это гетерогенное состояние, причины которого очень разнообразны и могут быть связаны как с патологией в женской, так и в мужской половой системе. В ряде случаев бесплодие может быть обусловлено анатомическими аномалиями, гормональными нарушениями или другими хорошо диагностируемыми факторами. Также в его развитии могут быть задействованы генетические дефекты различных систем организма.

Выделяют различные формы бесплодия, одной из которых является привычное невынашивание беременности (ПНБ). ПНБ наблюдается у 1-2% женщин репродуктивного возраста, и, зачастую, при клиническом обследовании пациентки не удается выявить его причину [100]. В большом проценте случаев самопроизвольное прерывание беременности, особенно на ранних сроках, имеет повторяющийся характер, что позволяет предположить наличие генетических факторов, обуславливающих подобное состояние.

Причины первичного бесплодия, то есть отсутствия беременности у женщины, и ПНБ могут быть схожими (хромосомные аномалии у эмбриона, дефект имплантации эмбриона), но действовать в более ранний период и поэтому фенотипически проявляться лишь увеличением периода между менструациями. Бесплодные супружеские пары зачастую прибегают к искусственным методам оплодотворения, однако только около 70% клинически подтвержденных беременностей после ЭКО заканчивается живорождением, причем, несмотря на поддерживающую гормональную терапию, 75% беременностей

протекает с угрозой прерывания, а частота спонтанных абортов в сроки до 20 недель беременности достигает 18.0-44.4% [2, 9, 10, 13, 35]. Это также позволяет предположить действие различных иных неблагоприятных факторов, в том числе генетических и иммунологических, на развитие беременности у таких пациенток.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

В связи с вышеизложенным, целью работы явилась оценка вклада некоторых генетических факторов в патогенез различных форм репродуктивной патологии, характеризующихся неспособностью к зачатию или вынашиванию плода.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Определить долю супружеских пар, имеющих одинаковые аллели в одном, 2 или 3 локусах HLA II класса (DRB1, DQA1, DQB1) в группе с нарушением репродуктивной функции и в контрольной выборке. Определить частоту аллелей, генотипов и гаплотипов HLA II класса в группах с различными формами репродуктивной патологии.

2. Определить частоту аллелей полиморфных генов MTHFR, MTR и MTRR в супружеских парах с ПЫБ и в контрольной группе.

3. Определить частоту мутаций в генах факторов свертываемости крови F2, F5 и PAI-1 у женщин с ПНБ и в контрольной группе.

4. Определить частоту аллелей генов «детоксикации» CYP1A1, GSTM1, GSTT1, GSTP1 в выборке супружеских пар с ПНБ и в контроле.

5. Оценить частоту низкофункциональных аллелей разных генов в совокупности и их возможное влияние на нарушение репродукции.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые при исследовании выборки супружеских пар с нарушением репродуктивной функции было изучено влияние маркеров предрасположенности к мультифакториальной патологии в генах системы HLA II класса, фолатного цикла, гемостаза, детоксикации, как по отдельности, так и в их совокупности.

Показано, что совпадение супругов по аллелям в трех локусах HLA II класса повышает вероятность невынашивания беременности более чем в 2 раза, а также может влиять на отсутствие положительных результатов при ЭКО. Наличие в генотипе мужчины аллеля DQB1 0302 в 6 раз увеличивает вероятность ПНБ в паре и увеличивает риск неудачи при ЭКО. Наиболее неблагоприятными и предрасполагающими к ПНБ у женщин

определены такие генотипы, как DQA1 0101/0501 (р=0.015, OR-5.4 С1-95%: 1.6-18.4) и DQB1 0201/0602 (р=0.023, OR=7.4 CI-95%: 1.5-36.4). Наличие генотипа DRB1 06/15 как у мужчин, так и у женщин увеличивает риск патологии более чем в 12 раз.

' Установлено, что сочетание у женщины двух и более низкофункциональных аллелей в нескольких генах фолатного обмена в 3 раза повышает риск ПНБ, тогда как наличие только одного предрасполагающего аллеля не оказывает существенного влияния на развитие патологии. При наличии в паре низкофункциональных аллелей во всех четырех изученных полиморфизмах генов фолатного обмена риск ПНБ значительно возрастает, превышая популяционный в 15 раз.

Впервые показано, что предрасполагающие аллели генов разных систем «накапливаются» при заболевании, оказывая сочетанное воздействие на патологический процесс.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Полученные данные дают возможность оценить вклад аллелей некоторых генетических маркеров различных систем в нарушение репродукции у человека, что позволяет рекомендовать использование комплексного подхода для обследования супружеских пар с различными формами бесплодия. Результаты работы могут быть применены в дальнейших исследованиях при различных формах нарушения репродукции у человека, а также для создания алгоритма расчета риска патологии в конкретной супружеской паре и использования метода при обследовании в центрах по лечению бесплодия.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1.

2.

3.

Наличие одинаковых аллелей у супругов в двух и более локусах системы HLA II класса является неблагоприятным фактором, увеличивающим риск невынашивания беременности в 2 и более раз.

Аллель DQB1 0302, генотипы DRB1 06/15, DQA1 0101/0501 и DQB1 0201/0602 являются предрасполагающими к привычному невынашиванию беременности.

Низкофункциональные полиморфные варианты генов MTHFR, MTRR, MTR, CYP1A1, GSTM1, GSTT1, GSTP1, PAI-I, а также мутантные аллели в генах F2 и F5 факторов свертываемости крови, не оказывают значительного влияния на развитие привычного невынашивания беременности при рассмотрении их по отдельности. Сочетание предрасполагающих аллелей увеличивает вероятность невынашивания беременности.

4. Разработана компьютерная программа для анализа влияния сочетания

низкофункциональных аллелей в разных системах генов предрасположенности. «Накопление» 10 и более неблагоприятных аллелей в паре увеличивает риск развития патологии в 5 и более раз.

Определение и классификация самопроизвольных выкидышей...

Под невынашиванием беременности понимают ее самопроизвольное прерывание в различные сроки от зачатия до 37 нед. Общепринятой классификации данной патологии до сих пор не существует. По данным ряда авторов, 50 -75% всех зигот погибает в период от оплодотворения до рождения [81, 104]. Приблизительно 1/5 часть (то есть около 20%) всех клинически распознаваемых беременностей прерывается спонтанно в период до 20 недель [71, 126]. Невынашивание беременности до 28 недель относят к самопроизвольным выкидышам (абортам). Их подразделяют на ранние (до 16 нед.) и поздние (свыше 16 нед.) в связи с различным клиническим течением. Прерывание беременности в сроки свыше 28 недель - к преждевременным родам (недонашивание беременности). Под привычным невынашиванием беременности (ПНБ) подразумевают самопроизвольное прерывание беременности два и более раз подряд [96, 113]. ПНБ наблюдается у 1-2% женщин репродуктивного возраста, и, зачастую, при клиническом обследовании пациентки не удается выявить его причину [100].

Некоторые авторы считают важным определять, произошло ли прерывание беременности до или после появления сердечной активности у плода. Так, Bricker L. и Farquharson R.G. выделяют эмбриональную гибель, если прерывание беременности произошло на этапе до появления сердечной активности и плодную гибель, если у плода уже определялось сердцебиение [32]. Другие же авторы предлагают выделять такие типы, как доклиническое прерывание беременности на сроках до 6 недель, прерывание в эмбриональный период (от 6 до 10 недель гестации) и в плодный период (от 10 до 20 недель гестации) [112]. Поэтому при сравнении результатов различных исследований необходимо учитывать возможность существования различий критериев включения при формировании авторами изучаемых групп.

Причины возникновения и механизмы НБ чрезвычайно разнообразны и пока недостаточно изучены, многое еще остается загадкой для современных исследователей. К НБ могут приводить анатомические аномалии, гормональные нарушения, генетические/хромосомные дефекты, патология системы гемостаза и иммунной системы, инфекции и др. (рис. 1). [39, 78, 106, 128]. Кроме того, на развитие беременности важное влияние оказывает воздействие различных неблагоприятных факторов окружающей среды, например таких, как тяжелые металлы (ртуть, свинец), органические соединения, ионизирующее излучение, стрессовые факторы [93, 115]. Точная распространенность перечисленных нарушений до конца не ясна. В современной литературе указывается, что причины данной патологии выявляются только в 50% случаев [39, 62, 92, 121]. По результатам эпидемиологических исследований риск прерывания беременности составляет 24% после двух случаев неудачно завершившихся предыдущих беременностей, после трех последовательных прерываний риск возрастает до 30%, а после 4-х - до 40%. Это позволяет предположить наличие влияния как различных генетических факторов, так и факторов внешней среды. Таким образам, НБ можно рассматривать как мультифакториальную патологию. Развитие современных методов исследования позволило существенно расширить представление о наследственном генезе самопроизвольного прерывания беременности.

В настоящее время известно много анатомических вариантов врожденных пороков развития мюллеровых протоков. Частота анатомических дефектов матки по разным оценкам варьирует от 1.8% до 37.6% [18]. Наиболее распространенными врожденными аномалиями матки, которые могут приводить к НБ, являются перегородка тела и шейки матки, двурогая, однорогая матка и гипоплазия матки. Еще одной распространенной патологией является истмико-цервикальная недостаточность, которая приводит к раскрытию шейки матки во втором триместре, сопровождаемому пролабированием (выпячиванием) плодного пузыря или разрывом плодных оболочек и преждевременным прерыванием беременности.

К патологиям, нарушающим анатомическую целостность полости матки, можно отнести и синдром Ашермана. Это приобретенное состояние в результате посттравматического рубцевания и зарастания полости матки фиброзной тканью. При этом происходит снижение чувствительности к стероидным гормонам в местах, лишенных эндометрия, что значительно ухудшает процесс имплантации плодного яйца. Также прерывание беременности на ранних сроках могут вызывать интрамуральные миоматозные узлы больших размеров, приводящие к сужению полости матки и тем самым нарушающие кровообращение в месте имплантации плодного яйца. Все перечисленные состояния требуют хирургического вмешательства для лечения данной патологии.

Гормональные нарушения в организме женщины также оказывают немаловажное влияние не развитие беременности, особенно в 1-ом триместре беременности. Эндокринологическими нарушениями, ассоциированными с НБ, являются синдром поликистоза яичников (СПКЯ), дефект лютеиновой фазы менструального цикла, дисфункция щитовидной железы и сахарный диабет [98]. СПКЯ является существенным осложнением гиперандрогении. Частота встречаемости СПКЯ у женщин с НБ составляет 44%-82% [120]. При СПКЯ наблюдается гиперсекреция лютеинизирующего гормона (ЛГ), что неблагоприятно сказывается на созревающем ооците и эндометрии и приводит к повышению риска самопроизвольного выкидыша на 25-40% [24].

Преимущественное влияние прогестерона в лютеиновую фазу цикла способствует секреторной трансформации эндометрия и открытием «окна для имплантации» -непродолжительного (3-4 сут.) периода в середине лютеиновой фазы. Недостаточность желтого тела характеризуется снижением уровня синтезируемого прогестерона, задержкой или нарушением секреторного развития эндометрия и «окна для имплантации», что может проявляться в виде аборта раннего срока беременности.

Заболевания щитовидной железы (гипо- и гиперфункция) и поражения инсулярного аппарата поджелудочной железы (сахарный диабет) тоже нарушают процесс развития беременности. Механизмами прерывания беременности при этих гормональных расстройствах являются недостаточная подготовка эндометрия к беременности, неполноценная имплантация плодного яйца, повышенная возбудимость миометрия, первичная плацентарная недостаточность во 2 триместре и нарушения развития плода в результате эмбриотоксического действия гипергликемии.

Цитогенетические факторы невынашивания беременности

Организация главного комплекса гистосовместимости человека Система генов главного комплекса гистосовместимости человека (Major Histocompatibility Complex - МНС, у человека это лейкоцитарные антигены - Human Leukocyte Antygens - HLA) является одной из наиболее полиморфных генетических систем, выполняющей в организме человека ряд функций. Важнейшими из них являются генетический контроль иммунного ответа и поддержание иммунного гомеостаза, нарушение которых лежит в основе таких патологических процессов, как аутоиммунные заболевания и развитие опухолей [1]. Обеспечивая регуляцию иммунного ответа, система HLA осуществляет генетический контроль взаимодействия всех иммунокомпетентных клеток организма, распознавание своих и чужеродных (в том числе измененных собственных) клеток, запуск и реализацию иммунного ответа и, в целом, обеспечивает выживание человека как вида в условиях экзогенной и эндогенной агрессии [16]. Многообразие указанных функций обеспечивается особенностями строения главного комплекса гистосовместимости. Одна из этих особенностей - полигенность - наличие нескольких неаллельных генов, белковые продукты которых сходны в структурном отношении и выполняют идентичные функции, а также - экстремальный аллельный полиморфизм комплекса генов HLA (таб. 1). Полигенность и полиморфизм определяют антигенную индивидуальность особей данного вида.

Молекулы антигенов HLA обеспечивают презентацию иммунодоминантных пептидов, против которых будет развиваться иммунный ответ. Однако физиологическая функция аллелей и кодируемых ими HLA-антигенов, относящихся к различным классам HLA, в значительной степени различается. Наиболее удаленные от центромеры гены кодируют молекулы I класса HLA -В, -С, и -А. Антигены HLA класса I экспрессируются практически во всех клетках организма и осуществляют взаимодействие с Т-эффектором киллером при помощи корецептора CD8. В результате этого взаимодействия происходит индукция Т-киллера против иммунодоминантного пептида, экспонированного на поверхности клеток-мишеней. Для всех вышеуказанных локусов HLA класса I установлен выраженный аллельный полиморфизм. В последние годы в пределах I класса системы HLA открыты новые (неклассические) локусы - Е, F, G, Н, J, для большинства из которых пока не выявлено наличие аллелыюго полиморфизма и не определены биологические функции.

Между генами HLA I и II классов расположены гены, кодирующие молекулы III класса. Среди них выделяют суперсемейства С (факторы комплемента, которые вовлечены в процессы элиминации чужеродных антигенов) и G (функции окончательно не выяснены, но предполагается, что продукты экспрессии отдельных генов данного семейства участвуют в процессе созревания лейкоцитов) [102].

Молекулы II класса кодируют ближайшие к центромере гены локуса HLA -DP, -DQ и -DR. Антигены HLA класса II (альфа-бета гетеродимеры) обеспечивают взаимодействие антиген-презентирующей клетки с Т-хелпером при помощи корецептора CD4, что ведет к формированию популяции Thj- и ТЬг-клеток, одни из которых индуцируют развитие гуморального иммунного ответа, а другие являются необходимым компонентом в индукции Т-киллеров [16]. Гены, кодирующие различные полипептидные цепи молекул II класса, имеют сходную экзон-интронную организацию. Первый экзон кодирует 5 -нетранслируемую и лидерную последовательности. Второй и третий экзоны - первые (а-1 или (3-І) и вторые (а-2 или (3-2) внешние домены соответственно [5]. Четвертый экзон кодирует трансмембранную часть, пятый - цитоплазматический "хвост".

Молекулы HLA II класса - это мембранные гликопротеины, состоящие из двух нековалентно связанных цепей (а и Р), каждая из которых содержит по два домена (рис. 3). Цепи молекул II класса очень сходны между собой [17]. N-концевые домены (а-1 и р-1) в значительной степени полиморфны, они образуют пептид-связывающую бороздку и отвечают за презентацию антигенов. Вторые домены (а-2 и р-2) более консервативны и структурно гомологичны константным участкам иммуноглобулинов. Размер доменов около 90 остатков. В доменах Р-1, а-2 и р-2 имеются дисульфидные связи. Каждая из цепей молекул II класса имеет трансмембранный участок длиной около 25 гидрофобных аминокислотных остатков и короткую С-концевую цитоплазматическую область длиной примерно в 10-20 аминокислотных остатков. Строение молекул HLA класса I принципиально сходно с таковым молекул II класса, несмотря на различие в составе образующих их субъединиц.

Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (пдрф-анализ)

В последнее время все больше работ посвящается изучению вклада иммунного фактора в нарушение репродукции у человека и в частности, совпадению супругов по аллелям HLA II класса [22, 41, 118]. Некоторые исследователи в группах с репродуктивными патологиями отмечают увеличение количества пар, в которых партнеры имеют одинаковые аллели в локусах HLA II класса, другие ученые данные изменения в своих исследованиях не подтверждают [26]. В лабораторию ДНК-диагностики врачами направляются пары с различными формами нарушения репродуктивной функции для исследования локусов HLA II класса у супругов. В данной работе мы решили выяснить, в каких случаях наиболее целесообразно назначать этот вид исследования. Для этого нами был проведен анализ количества совпадений аллелей в супружеских парах по локусам DRBl, DQAl, DQB1 в группе пациентов с различными формами нарушения репродукции. Результаты представлены в таблице 6. Совпадением считалось, если оба супруга имели хотя бы один одинаковый аллель в локусе.

Статистически значимых отличий в этой гетерогенной группе от контрольной выборки не выявлено. Далее, для того чтобы оценить вклад иммунной компоненты в развитие определенной формы репродуктивной патологии по результатам анкетирования нами были сформированы три группы с более четкой клинической характеристикой: бесплодие неясного генеза, группа супружеских пар с неудачной попыткой ЭКО и пары с ПНБ на ранних сроках. При анкетировании оценивались следующие клинические данные: 1. Первичное/вторичное бесплодие 2. Наличие близкородственного брака 3. Наличие беременностей и количество самопроизвольных абортов в анамнезе 4. Срок, на котором прервана беременность 5. Результаты обследования супругов на кариотип 6. Пристрастие супругов к курению, алкоголю, употреблению кофе 7. Группа крови, резус-фактор супругов

В случае первичного бесплодия в браке дополнительно учитывалось наличие у супругов патологии в мужской репродуктивной системе (изменения в спермограмме, физиологические особенности, гормональный статус) и в женской репродуктивной системе (изменения менструального цикла, физиологические особенности, гормональный статус), наличие аутоиммунных антител.

По результатам анкетирования из анализа нами были исключены пары, в которых у женщины было НБ поздних сроков, однократный спонтанный аборт, либо, в которых был выявлен один или более следующих отягощающих факторов: у женщины - изменения гормонального статуса (ановуляция, СПКЯ), трубно-перитонеальный фактор бесплодия; у мужчины - изменения в спермограмме; в паре - резус-конфликт и аномалии кариотипа у одного из партнеров.

В трех отобранных группах также была оценена доля супружеских пар, в которых супруги имели как минимум один одинаковый аллель в 1, 2 или 3 локусах HLA II класса (таб.7).

В супружеских парах из группы бесплодия неясного генеза наблюдалось схожее с контрольной выборкой распределение совпадений по аллелям локусов HLA II класса. Однако, в группе с ПНБ было выявлено статистически значимое увеличение числа пар, в которых супруги имели одинаковые аллели в трех локусах HLA II класса по сравнению с контрольной группой (р=0.044, OR=2.6 CI-95%: 1.0-6.6). В парах с неудачной попыткой ЭКО прослеживалась схожая тенденция (р=0.082). В статье, опубликованной в 2003 году, на меньшей выборке больных мы также наблюдали увеличение количества пар с ПНБ, в которых супруги имеют «общие» аллели в двух или трех локусам HLA, однако, из-за недостаточного размера изучаемых групп, достоверных различий не было получено [8]. Отсутствие отличий группы бесплодия неясного генеза от контрольной, вероятно, связано с гетерогенностью выборки и говорит о том, что вклад иммунного фактора в развития патологии в данной выборке не столь значителен, а бесплодие в данных супружеских парах может быть следствием других нарушений.

В случае пар из группы ЭКО беременность у женщин по ряду причин (трубно-перитонеальный фактор, олиго- или азооспермия у супруга и др.) естественным путем не наступает. Методы ЭКО позволяют преодолеть некоторые факторы бесплодия в паре. Однако, зачастую, после переноса эмбриона в полость матки, несмотря на медикаментозную гормональную поддержку и коррекцию других нарушений у женщины, имплантации эмбриона не наступает, или беременность прерывается на ранних сроках. В случае ПНБ беременность наступает естественным путем, однако тоже прерывается на ранних сроках. Поэтому, так как в группе с неудачной попыткой ЭКО и с ПНБ прослеживается одинаковая тенденция, то это наводит на мысль о схожести механизмов развития данных форм репродуктивной патологии, и далее мы рассматривали только две указанные группы. В тоже время в парах с неудачной попыткой ЭКО могли действовать и другие факторы, кроме иммунных, что выражается в более низком значении уровня статистической значимости (р), так как многие из этих пар провели только одну попытку, которая по данным ряда исследований заканчивается беременностью не более чем в 30-50% случаев [11].

Анализ совпадения аллелей hla ii класса в супружеских парах из групп с бесплодием, пнб и неудачной попыткой эко

Фолатный цикл является сложным каскадным процессом, в котором задействовано большое количество ферментов. Для полиморфных вариантов в генах MTHFR, MTRR и MTR рядом авторов было показано наличие ассоциации с определенными формами репродуктивной патологии, и в частности с ПНБ [67, 75, 83, 111, 130]. Роль других генов фолатного обмена в развитии нарушений репродукции еще мало изучена. В данном исследовании у мужчин и у женщин из группы с ПНБ и контрольной выборки были определены частоты аллелей в трех генах фолатного обмена {рис. 18). Результаты представлены в таблице 14.

Статистически значимого увеличения частоты ни одного низкофункционального аллеля не выявлено, хотя в группе ПНБ и у мужчин и у женщин отмечено некоторое увеличение частоты аллеля 677Т в гене MTHFR, причем у женщин разница в частотах по сравнению с контрольной группой более выражена. Отсутствие достоверного уровня значимости может быть обусловлено размерами выборки. Аллель 1298С гена MTHFR наоборот оказался более редким у женщин из пар с репродуктивной патологией (р=0.039). Для гена MTR значительных различий в частотах аллелей 2756А и 2756G в исследуемых группах не выявлено. Полиморфизмы генов MTHFR С677Т и MTRR A66G являются наиболее изученными, определению их распространенности в группах с ПНБ, у матерей, имеющих детей с синдромом Дауна и со spina bifida посвящено большое количество работ и для них показана наиболее выраженная ассоциация со всеми этими формами патологии [38, 86, 129]. Роль двух других полиморфизмов (MTHFR А1298С, MTR A2756G) пока изучается и их причастность к репродуктивным нарушениям еще до конца не ясна. Таблица Нами было также оценено распределение генотипов по изучаемым полиморфизмам у мужчин и у женщин из выборки с ПНБ и в контрольной группе. Статистически значимых отклонений частот генотипов в изучаемых группах от соотношения Харди-Вайнберга не выявлено. У женщин из отягощенной группы отмечено увеличение частоты генотипа 66G/G в гене MTRR, а также генотипов, содержащих аллель 677Т в гетеро- и, особенно, в гомозиготном состоянии в гене MTHFR (С/Т+Т/Т) (таб.15). Генотипы, содержащие полиморфный аллель С в 1298 позиции гена MTHFR (А/С+С/С) в группе ПНБ наоборот были значительно более редкими по сравнению с контролем (р=0.036), а генотип MTR 2756 G/G у женщин с ПНБ вообще не встретился, тогда как в контрольной группе его частота составила 8.9%.

Выявленные тенденции свидетельствуют в пользу влияния полиморфизмов MTHFR С677Т и MTRR A66G на развитие ПНБ, что описано во многих работах других авторов [67, 75, 83, 111, 130]. Другие два полиморфизма, вероятно, сами не оказывают какого-либо значимого влияния на развитие патологии, хотя их сочетание с другими низкофункциональными аллелями генов фолатного обмена может иметь клинические проявления. Примечательно, что в изучаемых группах в гене MTHFR ни у одного человека нами не было обнаружено одновременно двух полиморфных вариантов на одной хромосоме, что говорит о том, что две эти замены С677Т и А1298С произошли независимо друг от друга на разных хромосомах. Возможно также, что индивидуумы, несущие замены в обеих позициях на одной хромосоме, не жизнеспособны. Такие аномальные генотипы наблюдал Isolato et al. в своей работе на абортивном плодном материале [59].

Изучаемые ферменты задействованы в одном каскаде, и поэтому высоко вероятно наличие межгенных взаимодействий. Рядом исследователей было отмечено значительное увеличение риска развития форм патологии, связанных с повышенным уровнем гомоцистеина в крови в случае наличия низкофункциональных аллелей в нескольких генах фолатного цикла по сравнению с наличием такого аллеля только в одном гене [29, 58]. Для проверки этого предположения мужчины и женщины из изучаемых групп были нами проанализированы на наличие сочетания у них предрасполагающих аллелей в гомо-или гетерозиготном состоянии в разных генах. У женщин из группы ПНБ по сравнению с женщинами из контрольной группы достоверно чаще встретилось сочетание двух низкофункциональных аллелей 677Т и 2756G в генах MTHFR и MTR (34.5% и 13.6% соответственно, р=0.035, OR=3.2 CI-95%: 1.1-9."4), а также более частым оказалось сочетание аллелей 66G и 677Т в генах MTRR и MTHFR и трех аллелей 66G, 677Т и 2756G (р=0.101) (рис.19). Однако комбинация аллелей 2756G и 1298С в генах MTHFR и MTR, соответственно, оказалась более частой у женщин из контроля, что скорее указывает на незначительность негативного влияния только этих аллелей и их сочетания на работу фолатного цикла.

Сочетание аллеля 66G гена MTRR в гомозиготном состоянии с носительством низкофункционального аллеля 677Т в гене MTHFR также несколько чаще встретилось у женщин с ПНБ (генотипы 677C/T+66G/G и 677T/T+66G/G в генах MTHFR+MTRR встретились у 24.1% женщин с ПНБ и у 10.5% женщин из контроля, р=0.096).

Похожие диссертации на Влияние аллелей полиморфных генов системы HLA II класса, фолатного обмена, гемостаза и детоксикации на репродукцию человека [Электронный ресурс]

Влияние аллелей гена small bristles (sbr) на репродуктивные функции самок и морфогенез у Drosophila melanogaster Голубкова Елена Валерьевна

Влияние вакционного и "дикого" штаммов вируса кори на репаративную активность клеток человека Антоненко С.В.

Полиморфные аллели генов, ассоциированные с патогенезом атопической формы бронхиальной астмы у жителей Северо-Запада РоссииСиделева Ольга Геннадьевна

Распределение аллелей гена GPIIIa среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердцаКасапова Евгения Николаевна

Индукция эпигенетической гетерогенности в популяции клеток , содержащих искусственные циклические системы геновСтупак Евгения Эдуардовна

Полиморфизм генов системы детоксикации и НLA II класса супружеской пары на этапах экстракорпорального оплодотворенияЛипин, Михаил Александрович

Роль генов систем протеолиза и медиаторов воспаления в формировании предрасположенности к хроническим заболеваниям органов дыханияЦелоусова, Ольга Сергеевна

Эволюция генов иммунной системыТаранин Александр Владимирович

Изучение связи генов дофаминергической системы с особенностями психологических и психопатологических признаков человека [Электронный ресурс]Гриценко Инга Карловна

Анализ ассоциаций генов нейромедиаторных систем с агрессивным поведением человека Гайсина Дарья Александровна