Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Бронхиальная астма (БА): общие представления 10
1.1.1. Клиническая характеристика 10
1.1.2. Морфологические изменения органов дыхания при Б А 11
1.1.3. Формы заболевания 11
1.1.4. История распространения заболевания и современная эпидемиология БА
1.2. Механизмы патогенеза БА 15
1.3. Генетические факторы, влияющие на патогенез БА
1.3.1. Хромосомные локусы, сцепленные сБА 23
1.3.2. Ген иммуноглобулинового рецептора FcsR 1 24
1.3.3. Гены цитокинов и их рецепторов 26
1.3.4. Ген р2- адренорецептора 32
1.3.5. «Второстепенные» геныиБА 34
1.4 Гены, контролирующие детоксикацию ксенобиотиков и их связь с БА 39
1.4.1. Гены, контролирующие Фазу I детоксикации ксенобиотиков 42
1.4.2. Гены, контролирующие Фазу II детоксикации ксенобиотиков 43
1.5. Резюме 52
ГЛАВА 2. Материал и методы
2.1. Характеристика обследованных больных бронхиальной
астмой 54
2.2 Реактивы, ферменты, оборудование 56
2.3. Методы исследования
2.3.1. Выделение ДНК 59
2.3.1.1 Выделение ДНК из пятен крови 60
2.3.2. Полимеразная цепная реакция (ГЩР) 61
2.3.3. Электрофорез в полиакриламидном геле 64
2.3.4. ПДРФ-анализ 68
2.4. Статистические методы обработки результатов 72
ГЛАВА 3. Результаты исследования
3.1. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GSTM1, GSTT1, GSTP1 у больных БА и в контрольной группе 73
3.2. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GSTM1, GSTT1,GSTP1 у больных БА 3.2.1. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST у больных разного пола 84
3.2.2. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST у больных Б А разного возраста 84
3.2.3. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST у больных, различающихся по возрасту, при котором начинается заболевание 88
3.2.4. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST у больных с разной тяжестью течения БА. 94
3.2.5. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST в группах больных, принимавших разную терапию 103
3.2.6. Ассоциация генотипов GST с эффективностью лечения БА 105
3.2.7. Проверка соответствия распределения полиморфных
аллелей генов GSTM1, GSTT1, GSTP1 закону Харди Вайнберга 116
3.3. Частота встречаемости полиморфных аллелей гена Р4501А1
(CYP1A1) у больных БА и в контрольной группе... 116
3.4. Частота встречаемости полиморфных аллелей гена N ацетилтрансферазы 2 (NAT2) у больных БА и в контрольной
группе 118
3.5. Частота встречаемости полиморфных аллелей гена ангиотензин-конвертирующего фермента (АСЕ) у больных БА и в контрольной группе 136
3.6. Сочетания генотипов шести исследованных генов у больных БА и контроле 145
3.7. Проверка соответствия распределения полиморфных аллелей генов CYP1А1, NAT2, АСЕ закону Харди-Вайнберга 162
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 166
Заключение 184
Выводы 186
Благодарности 187
Список литературы
- Клиническая характеристика
- Методы исследования
- Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GSTM1, GSTT1,GSTP1 у больных БА
- Проверка соответствия распределения полиморфных аллелей генов CYP1А1, NAT2, АСЕ закону Харди-Вайнберга
Клиническая характеристика
Наиболее распространенной формой астмы является аллергическая астма, также известная как атоническая астма. Термин "атопия" был впервые введен Кока и Куком в 1923 году для обозначения семейного заболевания, проявляющегося у больных в форме астмы, сезонных ринитов и диатеза у детей (цит. по Cookson, 1994). 95% детей, страдающих бронхиальной астмой, имеют аллергическую форму этого заболевания. Атоническая астма клинически диагностируется легче, чем другие формы астмы и имеет наиболее выраженное семейное наследование (Cookson, 1994).
Среди пациентов с бронхиальной астмой в 1927 году Ракеманном (цит. по Gleich, Kita, 1997), была выделена группа больных, у которых не удалось выявить экзогенных аллергенов, вызывающих астматическую реакцию. В противоположность атопической БА, эта форма астмы была названа эндогенной (intrinsic), которая, как правило, развивается во7 зрелом возрасте (около 40 лет) и не всегда передается по наследству. Эндогенная астма не связана с уровнем IgE, имеет ярче выраженную эозинофилию. Если при атопической Б А ТН2-лимфоциты выделяют преимущественно цитокин IL4 и в меньшем количестве IL5, то при эндогенной форме повышен уровень цитокинов IL5 и IL2 (Gleich, Kita, 1997). Пациенты с эндогенной формой астмы часто негативно реагируют на лекарства, особенно на аспирин, и на некоторые пищевые агенты. Больные эндогенной Б А имеют повышенную чувствительность к инфекционным заболеваниям, и зачастую эта форма астмы развивается после вирусной инфекции (Чучалин, 1985).
Типичные синдромы удушья, в настоящее время известные как бронхиальная астма, были впервые описаны Гиппократом, однако на протяжении длительного времени астма оставалась крайне редким заболеванием. По данным ВОЗ (Всемирной Организации Здравоохранения) от 1978 года, бронхиальной астмой страдали люди, составляющие только 1% населения Европы. Через 20 лет, в 1998 году заболеваемость БА составила 8-10% для взрослых и 10-15% для детей (Марр et al., 1999). Последние несколько лет заболеваемость бронхиальной астмой приняла характер эпидемии, и наблюдается тенденция к более тяжелому протеканию БА. В конце XX века впервые предложен термин «потенциально смертельная астма» (Matsui, Boba, 1990). Особенно высока доля заболевших БА среди детей, живущих в бедных семьях на окраинах промышленных мегаполисов. Существует мнение о том, что заболеваемость бронхиальной астмой напрямую связана с ухудшением экологической обстановки в промышленно развитых странах, так называемой «вестернизацией жизни» (Bleecker et al., 1997, Марр etal., 1999).
Как и во всем мире, в России проявляются тенденции к росту заболевания БА. Эпидемиологические исследования последних лет показали, что около 5 % взрослого населения России страдает бронхиальной астмой. В детской популяции этот показатель достигает 10 % (Леонтьев, Хохлова, 2000). При этом часто тяжесть течения заболевания находится в обратной зависимости от возраста больного, при котором был поставлен диагноз (Украинцева, 1998). Риск возникновения БА в детском, взрослом или пожилом возрасте связан с целым рядом факторов, такими как генетическая предрасположеннрсть, загрязнение окружающей среды, климат, качество жизни пациента, профессиональная вредность, курение и пр
Бронхиальная астма относится к хроническим воспалительным заболеваниям дыхательных путей. Взаимодействие тканей бронхов с медиаторами воспаления приводит к острой бронхоконстрикции, отеку бронхиальной стенки, перестройке бронхиального дерева (Lewis, 1998).
Длительное время существовало мнение, что приступы удушья, характерные для астмы, являются результатом нарушений в гладких мышцах бронхов. Только за последние 25 лет было доказано, что симптомы бронхиальной астмы связаны с процессом воспаления в дыхательных путях. Воспаление происходит при участии различных типов клеток, в особенности тучных клеток, эозинофилов и Т-лимфоцитов, а такие признаки, как гиперреактивность и обструкция бронхов являются следствием воспаления (Demoly et al., 1997).
Патогенетическую основу атопической бронхиальной астмы составляют IgE-опосредованные реакции, которые вызывают аллергическое воспаление дыхательных путей и гиперреактивность бронхов (Рис. 1.2) (Lewis, 1998).
Методы исследования
Постановку полимеразной цепной реакции (ПНР) осуществляли по стандартной методике (Sambrook et al., 1989), с модификациями, принятыми в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им. Д.О. Отта. 1. В пробирке эппендорф объемом 1,5 мл смешивали: 16,6мМ сульфата аммония; 67мМ трис НС1, рН 8,8; 6,7мМ MgCl2; ЮмМ 2-меркаптоэтанола; 6,7мкМ ЭДТА; 0,17мг/мл бычьего сывороточного альбумина; 1мМ смеси четырех дезоксинуклеотидтрифосфатов; 1 ед. активности ДНК-полимеразы Thermus thermophilis и по 30 пМ каждого олигопраймера. 2. В полученную смесь для ПЦР добавляли 1 мкг исследуемого образца геномной ДНК или фильтр, пропитанный кровью, размером 1x1 мм. 3. ПЦР проводили при следующих условиях: после денатурации (94С, 7 мин) устанавливали 32 цикла амплификации в режиме 94 С-1 мин (денатурация); 53С-1 мин (отжиг праймеров); 72 С-1 мин 20 сек (синтез). Последний синтез (при 72 С) длился 10 мин. Таблица 2.1 Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для проведения ПЦР Название гена(белковый продукт) Название мутации Размерамплифицированного фрагмента Структура праймеров Литературный источник CYP1A1(цитохром Р4501А1) lie/Val 4889, экзон 7 192 н.п. 1А1S F - GAA CTG CCA СТТCAGCTGTCT1А1 AHincII R - GAA AGAССТ ССС AGC GGT СА Oyamaetal., 1995 GSTM1(глутатион-S-трансфераза Ml) делеция 271 н.п. F - GAACTC ССТ GAA AAGCTAAAGCR- GTTGGGCTCAAATATACGGTGG Chen et al., 1996 GSTTl(глутатион-S-трансфераза ТІ) делеция 315 н.п. F - ТТС СТТ ACT GGT ССТ САС АТС ТСR - ТСА CCG GAT CAT GGC CAG СА Chen et al., 1996 GSTP1(глутатион-S-транеферазаРІ) lie 105 Val экзон 5Ala 114 Val экзон 6 192 н.п. 146 н.п. F - СТС TAT GGG AAG GACCAG CAG GAGR - CCT TAC ССС TCA GGTGGC TTGF - GTT GTG GGG AGC AAGCAGAGGR - GAG GCC GGC AAG GATGAC TAT GTG AAG GC Таблица 2.1 (продолжение) Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для проведения ПЦР. CFTR(трансмембранныйрегуляторный белокмуковисцидоза) del F 508 экзон 10 94 н.п. CF1 F - GTT ТТС CTG GATTAT GCC TGCF2 R - GTT GGC ATG СТТTGATGACG Kerem et al., 1989 АСЕ(ангиотензин-конвертирующийфермент) Инсерция -делеция Aluповтора винтроне 16. Инсерция -477 н.п.Делеция -190н.п. F - CTG GAG АСС ACT ССС АТС СТТ ТСТR - GAT GTG GCC АТС АСА ТТС GTC AGA Т Holla etal., 1999 NAT 2 (ариламин-N-ацетилтрансфераза 2) С481Т G590A G857A 547 н.п. F - GCT GGG ТСТ GGA AGCтестеR - TTG GGT GAT АСА ТАС ACAAGGG Brockmoller et al., 1996 Для проведения полимеразной цепной реакции использованы программируемые термоциклеры "Perkin-Elmer Cetus» (США) и «Мультициклер» (г. Москва).
Последовательности олигонуклеотидных праймеров для всех изученных генов представлены в таблице 2.1. 2.3.3 Электрофорез в полиакриламидном геле Продукты амплификации разделяли в 7,5% неденатурирующем полиакриламидном геле (ПААГ) по стандартной методике (Sambrook et al., 1989), с модификациями, принятыми в лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им. Д.О. Отта. 1. Для приготовления 20 мл 7,5% геля смешивали: 1) 5 мл 30% раствора полиакриламида (состав раствора: 29 г акриламида, 1г К,№метилен-бис-акриламида на 100 мл дистиллированной воды) 2) 2 мл 10х трис-боратного буфера (ТВЕ) (состав буфера: 54 г Tris, 27,5 г борной кислоты, 20 мл 0,5М ЭДТА рН 8,0 на 1л дистиллированной воды). 3) 13 мл дистиллированной воды 4) 200 мкл 10% водного раствора персульфата аммония 5) 25 мкл тетраметилэтилендиамина 2. Раствор тщательно перемешивали и заливали между стекол длиной 20-40 см, расположенных горизонтально на специальном столике, избегая при этом образования пузырьков воздуха. Для формирования лунок вставляли гребенку. 3. Через 20-25 мин, после полимеризации геля, вынимали гребенку и устанавливали стекла в аппарат для вертикального электрофореза. 4. На каждую дорожку наносили 10 мкл амплифицированной ДНК, смешанной непосредственно перед нанесением с 1 мкл окрашенного буфера (состав буфера для нанесения проб: 0,25% бромфенола; 0,25% ксиленцианола; 15% фиколла). 5. Электрофорез проводили в 1х буфере ТВЕ при напряжении электрического поля 80 V до тех пор, пока образец входил в гель и удалялся на 1 см от дна лунок. В дальнейшем напряжение увеличивали до 250 V. 6. После окончания электрофореза гель аккуратно отделяли от стекол и помещали в водный раствор бромистого этидия (0,5 мкг/мл). 7. После окрашивания гель промывали в дистиллированной воде и фотографировали в проходящем ультрафиолетовом свете на транс-иллюминаторе «Macrovue" (фирма «Pharmacia LKB») на фотопленку «Микрат-300».
Гомозигот и гетерозигот по нормальной аллели ("+") генов GSTM1 и GSTT1 определяли на электрофореграммах наличием бэнда размером 271 н.п. для GSTM1 и фрагмента 315 н.п. для GSTT1. Отсутствие соответствующих фрагментов указывало на гомозиготность индивидуума по делеции одного из генов. В качестве внутреннего контроля использовали амплификацию фрагмента гена CYP1A1 - 192 н.п. (Рис. 2.4).
Для гена АСЕ определяли гомозигот и гетерозигот по инсерционно-делеционному полиморфизму интрона 16 по наличию продукта амплификации длиной 477 н.п. (аллель I) или фрагмента длиной 190 н.п. (аллель D). Аллель I содержит Alu повтор длиной 287 н.п., аллель D - не имеет Alu -повтора (Рис. 2.5).
Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GSTM1, GSTT1,GSTP1 у больных БА
Генотип GSTTl 0/0, GSTPl А/С у больных БА встречается с частотой 13,8% против 2,2% в контрольной группе (t=3,17, р=0.0014).
Генотип GSTT1 0/0, GSTP1 В/В, составивший 5,5% у больных БА, не встречался в контрольной группе (t=2,52 , р=0.012).
Для генотипа GSTT1+, GSTP1 А/С характерна обратная зависимость между частотой встречаемости этого генотипа у больных БА и контроле. В группе здоровых доля генотипа составила 13,3%, в то время как у больных БА почти в 3 раза меньше (4,6%) (t=2.13, р=0.04).
Различия по частоте встречаемости у больных БА и контроле в группах с другими сочетаниями генотипов GSTTl, GSTP1 не были выявлены.
Сочетания генов GSTMl, GSTTl, GSTP1. Из 24 возможных вариантов сочетаний трех генов GST в группе больных бронхиальной астмой имеет место 14 вариантов сочетания генотипов, в контроле - 17 вариантов (Рис. 3.4).
Среди больных БА часто встречаются 3 варианта сочетания генотипов: (1) GSTM1 0/0, GSTT1 0/0, GSTP1 А/А у больных БА -19,3% в контроле - 4,4% (х =9,86; t=3,4, р=0.0007; RR: 5,13 95% CI 1,849-14,239); (2) GSTM1 0/0, GSTT1 0/0, GSTP1 А/В - 16,5% у больных БА против 3,3% в контрольной группе (% =9,07; t=3,27, р=0.001; RR: 5,74 95% CI 1,841-17,876); (3) GSTM1 0/0, GSTT1 0/0, GSTP1 А/С - 12,3% у больных БА против 2,2% в контрольной группе (х2=7,52; t=2,99, р=0.003; RR: 6,48 95% CI 1,704-22,662) (Рис. 3.4).
В контрольной группе почти четверть субъектов (24,4%) имели генотип GSTMl +, GSTTl +, GSTP1 А/А, а среди пациентов с БА такое же сочетание генов было зарегистрировано только у 7 из 1
Генотипы GSTM1 0/0, GSTT1 +, GSTP1 А/А и GSTM1 0/0, GSTT1 +, GSTP1 А/В со сходной частотой встречались у больных БА и в контроле. Частота встречаемости генотипа GSTM1 0/0, GSTT1 +, GSTP1 А/А у больных БА составила 11.0% (в контроле -15,6%) (х2=0.897; t=0.94, р 0.05), генотипа GSTM1 0/0, GSTT1 +, GSTP1 А/В у больных БА - 8,3%, в контроле - 11.1% (%2=0,47; t=0,67, р 0.05).
Таким образом, в группе больных бронхиальной астмой преобладающим оказался генотип, состоящий из двух функционально неактивных генов GST (GSTM1, GSTT1) и одного функционально полноценного гена GSTP1. В контрольной группе, преобладает генотип, где все три гена глутатион-8-трансфераз являются функциональными (Сиделева и др., 2001а).
GST у больных разного пола. Различий по частоте встречаемости нормальных и мутантных аллелей генов GSTM1, GSTT1, GSTP1 и шести вариантов генотипов GSTP1 у пациентов разного пола не обнаружено (Табл. 3.4,3.5).
Также не выявлено достоверных различий в распределении сочетаний генотипов GSTM1, GSTT1 среди мужчин и женщин, больных БА (Табл.3.6). Относительный риск при генотипе GSTM1 0\0, GSTT1 0\0 составляет 8,7 (CI: 3,66-20,63) для женщин и 7,9 (CI: 3,46-18,04) для мужчин (Сиделева и др., 2002). 3.2.2. Частота встречаемости полиморфных аллелей генов GST у больных БА разного возраста.
Распределение нормальных и мутантных аллелей генов GSTM1 и GSTT1 у мужчин и женщин, больных бронхиальной астмой. Пол GSTM1+ GSTMIOXO GSTT1+ GSTT10X0 Женскийп=43 12 (27,9%) 31 (72,1%) 13 (30,2%) 30 (69,8%) Мужскойп=63 13 (37,5%) 50 (62,5%) 22 (34,4%) 41 (65,6%) х2 0,75 р 0.05 0,25 р 0.05 т 0,85 р 0.05 0,51 р 0.05 Таблица 3.5. Распределение нормальных и мутантных аллелей гена GSTP1 у мужчин и женщин, больных бронхиальной астмой. Пол Генотипы GSTP1 Частоты аллелей гена GSTP1 А/А А/В А/С В/В В/С С/С А В С Женскийп=43 17 (39,5%) 13 (30,2%) 9 (20,9%) 4 (9,3%) 0 0 0,651 0,244 0,104 Мужскойп=63 28 (44,4%) 21 (33,3%) 11 (17,5%) 2 (3,2%) 1(1,6%) 0 0,698 0,206 0,095 0,25 р 0.05 р 0.05 0,20 р 0.05 1,80 р 0.05 0,68 р 0.05 - 0.52 р 0.05 0.42 р 0.05 0.05 р 0.05 т 0,50 р 0.05 0,34 р 0.05 0,44 р 0.05 1,24 р 0.05 1,01 р 0.05 - 0.72 р 0.05 0.65 р 0.05 0.23 р 0.05 Таблица 3.6. Распределение различных генотипов GSTM1, GSTT1 у мужчин и женщин, больных бронхиальной астмой. Пол GSTM1+; GSTT1+ GSTM10\0; GSTT1+ GSTM1+; GSTT10\0 GSTM10\0; GSTT10V0 RR(95% CI) Женскийп=43 6 (14,0%) 7 (16,3%) 6 (14,0%) 24 (55,8%) 9,07 (3,66-20,63) Мужскойп=63 5 (7,9%) 17 (27,0%) 8 (12,7%) 33 (52,4%) 7,9 (3,46-18,04) х2 0,99 р 0.05 1,67 р 0.05 0,04 р 0.05 0,12 р 0.05 t 0,96 р 0.05 1,35 р 0.05 0,19 р 0.05 0,35 р 0.05 Для того, чтобы проанализировать возможную ассоциацию аллельных вариантов генов GST с разным возрастом больных БА, все обследованные больные БА были разделены на 5 возрастных групп с возрастным интервалом в10 лет.
Ген GSTM1. Наибольшее число гомозигот (85,4%) по нулевым аллелям гена GSTM1 выявлено в возрастной группе пациентов от 11 до 20 лет, а наименьшее (50%) - в возрастной группе 31-40 лет. Тем не менее, отличия по частоте встречаемости GSTM10/0 между этими группами пациентов статистически недостоверны (t=l,68, р 0.05) (Табл. 3.7) (Sideleva et al., 2001с; Сиделева и др., 2002).
Ген GSTT1. Самые низкие значения частоты встречаемости индивидуумов с генотипом GSTT1 0/0 (50%) обнаружены у больных БА в возрастной группе 31-40 лет Отличия в частоте встречаемости генотипа GSTT1 0/0 между другими возрастными группами пациентов также недостоверны (t=l,38, t=l,35, р 0.1) (Sideleva et al, 2001c; Сиделева и др., 2002).
Ген GSTP1. Результаты встречаемости нормальных и мутантных аллелей гена GSTP1 представлены в таблице 3.8. Между группами пациентов разного возраста статистически достоверных отличий не выявлено.
Гены GSTM1, GSTT1. Сравнение распределения нормальных и мутантных генотипов GSTM1, GSTT1 в различных возрастных группах больных не выявило зависимости между частотой встречаемости функционально неполноценных аллелей и возрастом пациентов (Табл. 3.9) (Сиделева и др., 2002).
Проверка соответствия распределения полиморфных аллелей генов CYP1А1, NAT2, АСЕ закону Харди-Вайнберга
Сочетания генотипов GSTM1, GSTP1. Встречаемость различных генотипов GSTM1, GSTP1 показана на рисунке 3.7. В группе пациентов с эффективным лечением обнаружена самая высокая частота встречаемости нормального генотипа (GSTM1+, GSTP1 А/А) - 20%. В группе с неэффективным лечением встречаемость этого генотипа была почти в 5 раз меньше и составила всего 4.5%. Выявленные различия статистически достоверны (t=2,08, р=0.04). Различия в частоте встречаемости генотипов GSTM1 0/0, GSTP1 А/А среди больных БА с различной реакцией на лечение (45,5% и 22,2%) недостоверны (t=l,89, р 0,05) (Рис. 3.7).
Сочетания генотипов GSTT1, GSTP1. Встречаемость генотипов GSTT1, GSTP1 в группах пациентов с разной реакцией на лечение Б А представлена на рисунке 3.8. Нами изучено семь возможных вариантов генотипов. Обнаружено, что сочетание генотипов GSTT1 0/0, GSTP1 А/С встречается наиболее часто (24.4%) у пациентов, положительно воспринимающих лекарства. У пациентов с неэффективной терапией БА это сочетание генотипов зарегистрировано значительно реже и составляет всего 4,5% (t=2,55, р=0.009). Связи между другими генотипами и эффективностью лечения не установлены (Рис. 3.8).
Нами также исследована зависимость эффективности лечения БА (стероидными или нестероидными препаратами) от частоты встречаемости генотипов GSTM1 0/0 и GSTT1 0/0. (Табл. 3.23).
Ген GSTM1. Группа пациентов с неэффективным лечением гормональными препаратами, на 93.3% была представлена больными Б А с генотипом GSTM1 0/0. Этот же генотип сравнительно часто (71.4%) встречается у больных, для которых лечение нестероидными препаратами не дает ожидаемого эффекта (Сиделева и др., 20016).
Частоты встречаемости нулевых аллелей генов GSTM1 и GSTT1 в группах больных, применяющих разные лекарства, с разной эффективностью лечения БА. Варианты лечения БА GSTM1+ GSTM10\0 GSTT1+ GSTT10\0 І.Без применения кортикостероидов, эффективное лечение п=21 9 (42,9%) 12(57,1%) 4 (19,0%) 17(81,0%) 2.Без применения кортикостероидов, неэффективное лечение п=7 2 (28,6%) 5 (71,4%) 2 (28,6%) 5 (71,4%) х2 0,45 р 0.05 1,08 р 0.05 t 0,71 р 0.05 0,50 р 0.05 3 Кортикостероиды, эффективное лечениеп=21 5 (23,8%) 16 (76,2%) 5 (23,8%) 16 (76,2%) 4.Кортикостероиды, неэффективное лечение п=15 1 (6,7%) 14 (93,3%) 6 (40,0%) 9 (60%) х2 1,85 р 0.05 1,08 р 0.05 t 1,52 р 0.05 1,03 р 0.05 Ген GSTT1. Больные с генотипом GSTT1 0/0 наиболее часто в встречались среди пациентов с эффективным лечением: глюкокортикостероидами - 72.2%, нестероидными препаратами -81.0% (Табл. 3.23).
Проверка соответствия распределения полиморфных аллелей генов GSTP1, GSTM1, GSTT1 закону Харди-Вайнберга. Распределение частот генотипов GSTP1 у жителей Северо-Запада России не показало статистически достоверного отклонения от равновесия Харди-Вайнберга. В контрольной группе P-value составляет 0,2092+0,061, а у больных бронхиальной астмой Р=0,0907-0,077. При сравнении этих групп между собой по спектру аллелей методом Фишера обнаружено, что между больными БА и контролем достоверные отличия отсутствуют (х2=7,9, Р=0,0942). В связи с тем, для генов GSTM1 и GSTT1 различимы только два фенотипа: "0/0" и "+", для проверки равновесия популяции необходимы дополнительные исследования, позволяющие точно идентифицировать гетерозиготных носителей. 3.3. Частота встречаемости полиморфных аллелей гена цитохрома Р-4501А1 (CYP1A1) у больных БА и в контрольной группе.
Нами был изучен наиболее распространенный в разных этнических группах полиморфизм гена CYP1A1 - мутация в экзоне 7 - A4889G, или полиморфизм Ile/Val. Результаты встречаемости нормальных и мутантных аллелей гена CYP1A1 в контрольной группе Северо-Западного региона России и у больных бронхиальной астмой представлены в таблице 3.24.
В контрольной группе и среди больных БА преобладающим оказался нормальный генотип IleMle, который составил в каждой группе 90,1% и 95,4% соответственно. Гетерозигота IleWal
Распределение нормальных и мутантных аллелей гена CYP1A1 в контроле и в группе больных бронхиальной астмой. Генотипы Частота встречаемости ПеДОе Бе/Val Val/Val аллели Не аллели Val Больные БА(п=109) 104 (95,4%) 5 (4,6%) 0 0,977 0,023 Контрольная группа(п = 90) 82 (90,1%) 9 (10,9%) 0 0,950 0,050 х2 2,51 р 0.05 2,09 р 0.05 t 1,43 р 0.05 1,45 р 0.05 RR 0,44 0,925-0,207 0,45 0,927-0,217 встречались в контрольной группе с частотой 10,9% против 4,6% у больных бронхиальной астмой (х2=2,14, р 0.01; t=1.43, р 0.05). Гомозиготы ValWal нами не были обнаружены ни в контрольной группе, ни среди пациентов с бронхиальной астмой.
Таким образом, мутантная аллель Val в контрольной группе жителей Северо-Запада России встречается с частотой 0.050, в группе больных БА - 0.023, эти различия статистически недостоверны. Тем не менее, следует отметить общую тенденцию к уменьшению частоты встречаемости мутантной аллели Val в группе больных бронхиальной астмой в сравнении с контролем (Sideleva et al., 2001b; Ivaschenko et al., 2002).
Изучена частота встречаемости аллелей F, SI, S2 и S3 гена NAT2 у больных БА и здоровых жителей Северо-Запада России. В качестве контрольной группы были использованы наши данные, полученные для 28 человек, а также неопубликованные материалы о генотипе 43 здоровых доноров, любезно предоставленные Т.Э.Иващенко.
Результаты анализа частоты встречаемости аллелей гена NAT2 представлены в таблице 3.26, из которой следует что у больных бронхиальной астмой частота встречаемости нормальных и мутантных аллелей гена NAT2 достоверно не отличаеются от таковой в контрольной группе.
![Влияние аллелей полиморфных генов системы HLA II класса, фолатного обмена, гемостаза и детоксикации на репродукцию человека [Электронный ресурс]](/i/i/4357/184412.png "Влияние аллелей полиморфных генов системы HLA II класса, фолатного обмена, гемостаза и детоксикации на репродукцию человека [Электронный ресурс] Бескоровайная Татьяна Сергеевна")
