Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 10-50
1.1. Наследственность и болезни 10-34
1.1.1. Классификация наследственных болезней 10-12
1.1.2. Краткий очерк организации иммунной системы 12-19
1.1.3. Наследственные дефекты В-клеточного иммунитета - иммуноглобулинопатии 19-25
1.1.4. Роль аллоантигенных маркеров иммуногене-тических систем в устойчивости к заболе-ваниям 25-34
1.2. Алеутская болезнь - основное инфекционное заболевание норок 34-44
1.2.1. Этиология заболевания 35-38
1.2.2. Патогенез 38-40
1.2.3. Иммунологические аспекты заболевания 41-42
1.2.4. Генетические аспекты алеутской болезни 42-44
1.3. Генетические системы аллотипов сывороточных
белков норки 44-50
1.3.1. Ьрт -система 45-46
1.3.2. Ld -система 46-47
1.3.3. Генетические маркеры иммуноглобулинов 47-50
ГЛАВА 2. Материал и методы 51-59
2.1. Материал 51-53
2.I.I. Экспериментальные животные и образцы сывороток крови 51-52
2.1.2. Аллоантисыворотки 52-53
2.1.3. Гетероантисыворотки 53-53 2.2.Методы 54-59
2.2.1. Иммунодиффузионные методы 54-56
2.2.2. Выделение IgG норки и получение препаратов его тяжелых и легких цепей 56-57
2.2.3. Электрофорез и иммуноэлектрофорез 57-57
2.2.4. Методы диагностики алеутской болезни 58-59
Собственные исследования
ГЛАВА 3. Сравнительная характеристика методов диагностики алеутской болезни 60-82
3.1. Краткие сведения о методах диагностики алеутской болезни 60-63
3.2. Результаты электрофоретического исследования сывороточных белков норок при алеутской болезни 63-70
3.3. Результаты сравнения диагностических тестов алеутской болезни 70-75
3.4. Обсуждение результатов 76-81
3.5. Заключение 81-82
ГЛАВА 4. Исследования иммуноглобулина класса g(igg) при алеутской болезни 83-113
4.1. Количественные исследования IgG у норок из популяций, представляющих собой очаги алеутской болезни 83-84
4.2. Сравнение антигенной структуры igG и его субъединиц у здоровых и больных алеутской болезнью норок 84-91
4.3. Исследования генетических маркеров IgG в благополучных и неблагополучных по алеутской болезни популяциях 91-99
4.4. Обсуждение результатов 99-110
4.5. Заключение II0-II2
ГЛАВА 5. Иммуноіжетические систеш сьшороточных белков норок при алеутской болезни
5.1. Исследования м-системы
5.1.1. Результаты
5.1.2. Обсуждение результатов
5.2. Исследования Lpm-системы
5.2.1. Результаты
5.2.2. Обсуждение результатов
5.3. Заключение
Выводы
Литература
- Классификация наследственных болезней
- Экспериментальные животные и образцы сывороток крови
- Краткие сведения о методах диагностики алеутской болезни
- Количественные исследования IgG у норок из популяций, представляющих собой очаги алеутской болезни
Введение к работе
Американская норка (Mustela vison ) - основной вид пушного животного, используемый в промышленном звероводстве. За рубежом шкурки норок составляют почти 100$ всей звероводческой продукции, в СССР - 85$ (Афанасьев, 1981).
Вирусный плазмодитоз, называемый чаще алеутской болезнью (АБ), представляет собой самую распространенную патологию норки. Принимая форму эпизоотии, АБ наносит большой экономический ущерб звероводству всех стран за счет высокой смертности норок, ухудшения качества пушнины, снижения плодовитости самок, повышенной стерильности самцов и падежа молодняка (Слу-гин, 1972, 1975; Porter, Cho, 1980; Lodmell, Portis, 1981).
Изучение АБ актуально, по крайней мере, по двум главным причинам. Во-первых, необходимо добиться ликвидации этой болезни. Во-вторых, она может служить прекрасной моделью для изучения аналогичных иммунопатологии человека, в частности системной эритематозной волчанки ( Trautwein, 1982). Обусловлено это тем, что в патогенезе АБ центральную роль играют специфические иммунологические реакции, в том числе аутоиммунные. Характерной чертой этих реакций является бурная пролиферация В-лимфоцитов и развитие, вследствии этого, гипериммуно-глобулинемии. Однако специфические механизмы иммунопатогенеза АБ до сих пор не ясны. Для их понимания и на основе этого успешной борьбы с АБ, необходимо детальное изучение особенностей системы иммунитета норок в норме и при воздействии вируса АБ.
С самого начала изучения АБ появились данные о том, что заражение ею и характер патологического процесса зависят от генотипа норок. Установлено влияние на степень выраженности и продолжительность течения болезни генов окраски шкурки, однако эти гены не создают абсолютной восприимчивости или невосприимчивости к АБ (Porter et al., 1973; Porter, Larsen,1974} Johnson et al., 1975; Lodmell, Portis, 1981). B.C. Слугин (1981) показал, что в стадах норок могут встречаться особи с повышенной резистентностью к АБ независимо от генов окраски шкурки. Другие генетические маркеры, другие гены в этом отношении не оценивались. В то же время естественно полагать, что гены, кодирующие различные варианты иммуноглобулинов и другие иммуногенетические маркеры могут быть каким-то образом связаны с АБ. Вопрос генетической основы дифференциальной устойчивости норок к АБ совершенно не изучен и требует специальных исследований с привлечением арсенала подходящих генных маркеров.
В лаборатории эволюционной генетики животных Института цитологии и генетики СО АН СССР открыты и разносторонне изучены иммуногенетические системы, объединяющие самые мощные и разнообразные аллоантигены (аллотипы) сыворотки крови. Это Lpm -система липопротеина очень высокой плотности, представляющая собой мультигенное семейство; Ld -система липопротеина низкой плотности и генные комплексы, кодирующие аллотипы тяжелых и легких цепей igG - иммуноглобулина класса G (Беляев и др., 1974, 1984а,б; Фомичева и др., 1977; Баранов, 1981; Баранов и др., 1984а,б; Baranov, Savina, 1981).
Учитывая иммунологический и предполагаемый генетический характер АБ, иммуногенетическое исследование норок при этой болезни с использованием аллоантигенных маркеров перечисленных
выше иммуногенетических систем весьма актуально. Настоящее исследование является первой иммуногенетической работой по АБ норок. Оно направлено на получение совокупности иммуногенетических характеристик норок и их популяций при АБ. Особенность данной работы - популяционно-генетический подход к проблеме АБ. Были поставлены для решения следующие основные задачи:
Комплексное сравнительное исследование IgG, включающее в себя: а) тестирование общей видоспецифической антигенной структуры молекул IgG и его субъединиц - тяжелых и легких це-цей у здоровых и больных АБ норок с целью установления качественных и количественных особенностей этого класса иммуноглобулинов при АБ; б) исследование генетических антигенных маркеров (аллотипов) IgG в благополучных и неблагополучных по АБ популяциях норок.
Сравнительный анализ групп здоровых и больных норок,
а также благополучных и неблагополучных в отношении АБ норочьих популяций по аллотипам иммуногенетических систем м и Lpm.
Исследование сывороток крови норок с целью выявления особенностей их электрофоретических картин при АБ и получения электрофоретических характеристик типа (моно-, олиго-, или поли-) клональной пролиферации В-лимфоцитов при этом заболевании.
Вспомогательная задача, которая хронологически решена первой, - сравнение пяти методов диагностики АБ (оценка пата-логоанатомической картины, йодный тест, электрофорез сывороток крови в геле агарозы, специфическая реакция встречного имму-ноэлектроосмофореза, определение количества IgG ). При этом имелось в виду, прежде всего, обеспечить на основе показателей совокупности методов надежную диагностику АБ у норок, исполь-
зованных для иммуногенетического анализа.
На защиту выносятся следующие основные положения: а) Установлено, что в очагах АБ разные методы диагностики этой болезни дают высоко совпадающие результаты - 77-99$. Различия между ними незначительны,, что подтверждает низкое значение корреляционного отношения і)2 = 0,08. Это позволило нам надежно диагностировать по АБ норок, б) Обнаружена прямопропорциональная зависимость между абсолютной концентрацией сывороточного IgG и степенью развития паталогоанатомических изменений у пораженных АБ норок, в) Выявлены, преимущественно выраженные в сыворотках крови норок с АБ, изменения в картинах иммунопреципитации тяжелых и легких цепей igG. Установлена статистически достоверная связь аллотипа тяжелых цепей НЗ с АБ. г) Установлено, что в стационарных очагах АБ резко усиливается отбор гомозигот по субвитальному гену Ld2. д) Выявлены достоверные различия генотипичес-кой структуры bpm-сие темы между благополучной и неблагополучными по АБ популяциями. В последних впервые обнаружены норки с ранее неизвестными, по-видимому, рекомбинантными bpm-фенотипами.
Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю О.К.Баранову, а также сотрудникам группы иммуногенетики лаборатории эволюционной генетики Фомичевой И.И., Савиной М.А., Ермолаеву В.И. и, особенно, Таранину А.В. за большую помощь в работе. Приношу свою признательность также Волковой О.Ю., Белоусову Е.С., Мечетиной Л.В., Филиппову В.В., Кутявиной Т.В. за моральную поддержку и помощь в работе.
Данная работа выполнена в лаборатории эволюционной генетики животных Института цитологии и генетики СО АН СССР. Автор очень признательна ее заведующему, академику Д.К.Беляеву, который является инициатором проведения исследований по иммуногене-тике АБ.
Классификация наследственных болезней
Возникновение и развитие болезней определяется взаимодействием двух основных факторов: наследственности и среды (Дави-денкова и др., 1968; Бочков, 1978; Бердышев, Криворучко, 1979; Визнер, Виллер, 1979). К факторам внешней среды относятся инфекционные, травматические, термические, пищевые, радиационные и др. Факторы внутренней среды - это в конечном счете результат взаимодействия гено- и паратипических факторов. С генетической точки зрения все болезни в зависимости от относительной значимости наследственных и средовых факторов можно подразделить на четыре группы:
I. Первая группа - это наследственные болезни, этиологическим фактором которых является мутация. К заболеваниям этой группы относятся все хромосомные и генные наследственные болезни с полным проявлением. Такие болезни являются, как правило, моногенно наследуемыми.
II Вторая группа - болезни, в которых наследственность является этиологическим фактором, но для проявления мутантных генов необходимо соответствующее состояние организма,обусловленное вредными влияниями среды. Эти болезни можно отнести к группе болезней с наследственным предрасположением. Для одних из них среда имеет большее значение, для других - меньшее.
III. Третья группа - болезни, для которых этиологическими факторами являются влияния среды, однако частота возникнове - II ния и тяжесть течения болезней существенно зависят от наследственного предрасположения. Они возникают под действием внешних факторов гораздо чаще у лиц с наследственным предрасположением. Как и болезни второй группы, они относятся к болезням с наследственным предрасположением.
ІV Четвертая группа - в происхождении болезней этой группы наследственность не играет никакой роли. Генетические факторы могут влиять только на течение патологических процессов.
Болезни второй и третьей групп могут быть объединены в совокупность с наследственным предрасположением. Болезни с наследственным предрасположением отличаются от моногенных болезней I группы полигенным характером наследования и влиянием среды на реализацию предрасположения. Упрощенно классификацию генетических болезней можно схематично представить себе на рис.1.
Весьма актуально выяснение роли наследственных факторов в развитии и распространении наиболее опасных инфекционных и других, стимулирующих иммунный ответ, заболеваний человека и животных, ймунная система защиты играет чрезвычайно важную роль в способности организма противодействовать инфекции.Прежде, чем перейти к рассмотрению роли иммуногенетических факторов в патологии, напомним основные понятия иммунной системы и кратко ее опишем.
Главной функцией иммунной системы является удивительная способность различать "свое" от "чужого" и путем борьбы с чужим поддерживать гомеостаз собственного организма. Благодаря этому организм сохраняет все специфические черты вида, к которому он принадлежит, и индивида, которым он является. "Чужое" -это вещества, называемые антигенами, которые несут признаки генетически чужеродной информации и при введении в организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций (Петров, 1976, 1982). Конечные химические структуры антигенов, которые еще способны распознаваться иммунной системой как единое целое, называют антигенными детерминантами, а в последнее время более кратко - эпитопами. Развиваясь в онтогенезе, иммунная система становится толерантной (нечувствительной) в отношении компонентов собственно внутренней среды организма, воспринимая их как "свое". Приобретя толерантность к собственным эпитопам и таким образом созрев, иммунная система приобретает способность различать и давать положительный иммунный ответ на огромное разнообразие чужеродных эпитопов. Эти эпитопы поступают в организм извне при инфекциях (в форме вирусов, бактерий и входящих в их состав молекул), трансплантациях или возникают в самом организме за счет дифференциации.
Экспериментальные животные и образцы сывороток крови
Для получения аллоантисывороток к аллотипам IgG, норок иммунизировали очищенным препаратом этого белка. Антиген в полном адъюванте Фрейнда в количестве от 10 до 20 мг белка с добавлением 2-4 мг ЕЦЖ на инъекцию вводили подкожно в область шеи и крестца с 3-недельным интервалом. После достижения необходимого титра антител, что контролировалось пробным взятием крови, производили кровопускание, через 2 месяца цикл реиммуни-зации повторяли и затем снова брали кровь. Процедура повторялась, если это позволяло здоровье норок.
В работе использовали полученные в лаборатории норочьи аллоантисыворотки к аллотипам Lpm-и Ld-систем (Беляев и др., 1974; Баранов и др., 1975; Baranov et al., 1976). Методика иммунизации норок для получения реагентов к аллотипам этих систем в принципе не отличается от таковой IgG (Беляев и др., 1974).
Антигеном для анти-Ьрпналлосывороток служили цельные сыворотки крови, а для анти-bd -аллосывороток специально приготовленные фракции сывороточного ЛШ (Баранов, 1981;Baranov et al., 1976).
Для получения аллоантисывороток использовали, в основном, самцов норок стандартной окраски меха, поскольку они обладают большей крепостью конституции и легче переносят иммунизацию, меньше болеют. Титр антител в антисыворотках, как показали предварительные эксперименты, не зависит от окраски зверя.
В качестве продуцентов гетероантисывороток использовали кроликов, норок и гибридных хорьков. Кроличьи гетероантисыво-ротки получали иммунизацией кроликов породы шиншила весом не менее 3,5 кг. Для получения моноспецифической гетероантисыво-ротки к IgG норки, взрослым самцам подкожно в область шеи вводили очищенный препарат этого белка в полном адъюванте Фрейнда в количестве 3 мг на инъекцию с 2-недельным интервалом (Зиль-бер, 1958). Адъювант Фрейнда готовили по методике Людоговской (1968). После трех таких иммунизации делали инъекцию жидким антигеном, содержащим 5 мг белка и через неделю брали кровь. Реиммунизацию проводили через 2-3 месяца. Таким же способом получали моноспецифические кроличьи антисыворотки к тяжелым ( н-) и легким ( L- ) цепям IgG норки, используя в качестве антигенного материала соответственно очищенные препараты субъединиц молекулы IgG. Хорьковые антисыворотки к IgG норки получали по следующей схеме: две иммунизации очищенным белком IgG норки в количестве 10-20 мг в Span-адъюванте с интервалом два месяца. Через неделю после последней инъекции брали кровь (Franek, Simek, 1971). Норочьи антисыворотки к IgG хорька получали иммунизацией норок очищенным препаратом этого белка в количестве 20 мг в адъюванте Фрейнда с 3-недельным интервалом три раза. Четвертую иммунизацию проводили через 2 месяца этим же антигеном в количестве 30 мг в Span-адъюванте. Через неделю брали кровь.
Двойная иммунодиффузия. Для типиро-вания аллотипов и других антигенов, а также определения наличия антител в антисыворотках нами использовался метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлони в микромодификапии (Гусев, 1968; Цветков, 1968). Реакцию проводили на предметных стеклах в 1,2$ геле агара ( Bacto-Agar фирмы " Dif ссР, США). Агар растворяли в физиологическом растворе (0,15 М NaOl) с добавлением поли-этиленгликоля до 3% концентрации, молекулярный вес которого 6000 (Harrington et al., 1971). Особое значение имела адаптация в общем-то простого метода двойной иммунодиффузии для тестирования таких слабых антигенов, какими являются аллотипы. Для этой цели в лаборатории был принят описанный ранее, наиболее удобный для типирования аллотипов, вариант расположения лунок (Lieberman, Dray, 1964). Был подобран удовлетворяющий исследуемым аллотипам диаметр лунок (2,6 мм). Лунки на предметных стеклах располагали тремя рядами. В 16 лунок двух внешних рядов вносили испытуемые сыворотки. Антисыворотку и контрольный антиген, т.е. сыворотку заведомо положительно реагирующую с теми или иными антителами, помещали в лунки среднего ряда. Лунки для слабых антисывороток могли быть увеличены. При такой схеме расположения каждая лунка для испытуемой сыворотки находится рядом с лункой контрольного антигена, благодаря чему имеется возможность сравнения реакции соответствующих антигенов на иммунологическую идентичность.
Краткие сведения о методах диагностики алеутской болезни
Успешное развитие норководства во многом зависит от надежности диагностики АБ, которая является самой распространенной у норок болезнью и наносит значительный ущерб (см. главу I).
Различают методы прижизненной и посмертной диагностики АБ. Последняя представляет собой чаще всего оценку типичной для АБ патологоанатомическои картины. Наиболее характерные макроскопические изменения развиваются в почках, печени, селезенке (Акулова, Гусев, 1968; Дукур и др., 1973, 1984; Leader et al.f 1963). При яркой форме АБ на вскрытии прежде всего находят изменения в почках. Они увеличены в объеме, поверхность их зернистая. Выделяются точечные кровоизлияния и серо-белые очажки, соответствующие очагам пролиферации В-клеток. Печень обычно увеличена и имеет цвет либо красного дерева, либо мускатного ореха. Желчный пузырь воспален, стенка утолщена. Селезенка,как правило, тоже увеличена, пятнистая. Изредка она подвергается атрофии. При этом отмечается уменьшение селезенки в объеме, края ее заострены, цвет ржаво-коричневый. Такое состояние органов на вскрытии характерно по степени выраженности патологоанатомическои картины для яркой формы АБ.
Помимо яркой формы, мы выделяли по степени выраженности патологоанатомическои картины среднюю форму АБ. При ней имеются изменения, подобные перечисленным выше, но менее выраженные и не во всех органах.
В сомнительных случаях мы относили норок также в группу со средней формой АБ. Норки, не имеющие видимых патологоана-томических изменений, были отнесены в группу здоровых.
В принципе в исследовательских лабораториях возможна также посмертная диагностика АБ путем выделения вируса и его типизация с помощью различных критериев: морфология, серология и т.д.
В прижизненной диагностике используются специфические и неспецифические методы. До недавнего времени пораженных АБ норок диагностировали только с помощью неспецифических методов, большинство которых основано на выявлении повышенной концентрации иммуноглобулинов и парапротеинемии. К ним относятся ЙАТ, тимоловая проба, глютаральдегидный тест, электрофорез, радиальная иммунодиффузия. Тимоловая проба весьма трудоемка и неспецифична в отношении АБ, выявляя многие другие патологии норки. Столь же неспенифичен, хотя и проще в постановке, глютаральдегидный тест. В силу названных и других причин тимоловая проба и глютаральдегидный тест редко используются в практике. Наибольшее распространение получил ЙАТ, который прост в постановке и доступен не только лабораториям, но и всем практическим работникам (Берестов, 1969; Слугин, 1975, 1982). Этот метод впервые был предложен Малленом и др. ( Mallen et al., 1950) для выявления диспротеинемии и парапротеинемии любой этиологии. В дальнейшем он был успешно использован и для диагностики АБ. Подробнее см. главу 2. .
Важнейший современный специфический метод диагностики АБ-РИЭОФ был предложен в 1972 году (Cho, Ingram, 1972 а, б,). Этот метод позволяет выявлять с помощью препарата вируса АБ специфические антитела к нему в сыворотке крови больных норок (см. главу 2). В.С.Слугин провел серию исследований по приготовлению в СССР стандартного вирусного антигена АБ, который не только не уступал зарубежным образцам по иммунно-химичес-ким характеристикам, а также срокам и условиям его хранения, но и оказался более простым и надежным диагностикумом (Слугин, 1980 а, б;Слугин и др., 1980 б). В настоящее время этот препарат производится Тобольской биофабрикой и широко используется в зверосовхозах для диагностики АБ с помощью РИЭОФ. Несмотря на успешное применение РИЭОФ, остается проблемой повышение чувствительности этого метода для выявления антител к вирусу АБ, а также идентификации характерных для АБ аутоанти-тел, дифференциации популяций противовирусных антител, отличающихся по специфичности, которые количественно в различной мере должны проявляться при разных формах и стадиях развития, АБ. Другие специфические методы (двойная иммунодиффузия,реакция непрямой флюоресценции, реакция связывания комплемента, разрабатываемые иммуноферментный и радиоиммунный тесты на АБ) находят применение лишь в лабораторных экспериментах ( Porter et al.,I969, McGuire et al., 1971; Rejnek et al., 1972; Burger et al., 1978; Aasted, Bloom, 1983).
Естественно, что в нашем иммуногенетическом исследовании АБ было крайне важно надежно диагностировать больных норок. Кроме того, представляло интерес впервые дать сравнительную оценку нескольких методов диагностики АБ, основываясь на точном количественном определении содержания иммуноглобулина IgG в сыворотке крови норок. Ниже будут представлены сравнительные данные диагностики АБ с помощью патологоанатомическои картины, МАТ, данным РИЭОФ, электрофореза и измерения количества IgG методом радиальной иммунодиффузии.
Количественные исследования IgG у норок из популяций, представляющих собой очаги алеутской болезни
Количество IgG методом радиальной иммунодиффузии определяли в сыворотках крови норок трех генотипов по окраске меха: сапфир, топаз и стандарт из двух неблагополучных по АБ зверосовхозов I и П.
О пораженности норок судили по: I. паталогоанатомическои картине; 2. ЙАТ; 3. РИЭОФ. Выделены группы с яркой и средней выраженностью, паталогоанатомическои картины, типичной для АБ и соответственно реагирующие положительно по ЙАТ и в РИЭОФ. В группу здоровых отнесены норки,не имеющие видимых паталогоана-томических изменений и не реагирующие положительно в ЙАТ и РИЭОФ.
Отдельно выделена сомнительная группа, куда мы отнесли норок, дающих положительную йодную реакцию, имеющих сомнительную или среднюю выраженность патологоанатомической картины и дающих отрицательную РИЭОФ.
В табл. 6 представлены результаты определения количества IgG в сыворотках крови здоровых и больных, с различной степенью выраженности АБ, норок. (В дальнейшем для краткости мы будем называть норок этих групп соответственно "нормальные", "яркие" и "средние", рис. 12. В таблице 6 суммированы данные по выборкам норок трех генотипов по окраске шкурки из популяций I и П. Поскольку между стандартными норками этих двух популяций нет существенных различий по количеству IgG, а "ярких" норок этой окраски в популяции П всего две, мы объединили их).
Отсутствуют достоверные различия по количеству IgG в сыворотках крови между исследованными нормальными норками трех окрасок: сапфир, топаз и стандарт. Точно также отсутствуют различия между норками этих генотипов по окраске шкурки с яркой картиной АБ. Близки, хотя все же достоверно различаются по количеству IgG цветные (сапфир, топаз) и стандартные "средние" норки. Во всех цветных группах норок прослеживается четкая зависимость между количеством igG и степенью развития болезни. У "средних" норок количество IgG в 2-3 раза превышает его содержание у нормальных норок, а у "ярких" в 6-7 раз, достигая в среднем концентрации 38-39 мг/мл. Максимальное количество IgG у отдельных "ярких" норок достигало 70 мг/мл.
генную структуру молекул igG, а также их тяжелых(Н ) и легких ( L ) цепей у больных АБ норок в сравнении с нормальными особями (рис. 13). Исследовали сыворотки норок с окраской шкурки сапфир (11=195) и стандарт (п=1б5) популяции I.
Не установлено различий по антигенной структуре нативных молекул IgG между здоровыми и больными норками. С помощью кроличьей антисыворотки к н-цепям IgG также не выявлены качественные различия этих цепей в виде "шпор" на стыке линий преципитации в двойной иммунодиффузии. Однако замечены особенности линий преципитации у многих больных норок в виде большей их диффузности и близкого расположения к лунке антисыворотки.
Сравнительный анализ антигенной структуры IgG проведен нами также с использованием антисыворотки хорька против IgG американской норки (хорьковая антисыворотка). Эта антисыворотка, как показано в лаборатории А.В.Тараниным, реагирует только с
Н -цепями IgG, по которым установлены четкие межвидовые антигенные отличия американской норки от других видов куньих (Баранов и др., 1983).
С помощью хорьковой антисыворотки выявлены следующие основные картины реакций иммунопреципитации (рис. 14): I. Одна линия преципитации. 2. Две линии преципитации, интенсивность которых относительно друг друга у разных норок неодинакова: а) две четко разделенные линии примерно одинаковой интенсивности; б) внешняя линия тонкая; в) внутренняя линия тоньше внешней; г) почти сливающиеся две линии; д) диффузность одной (внутренней) из линий преципитации. 3. Отсутствие одной из двух линий преципитации и наличие на ее месте шпоры. Последняя картина реакции, по-видимому, обусловлена генотипом и мы будем говорить о ней специально в следующем разделе.
С использованием хорьковой антисыворотки протестировали 193 норки окраски сапфир, среди которых у 71 выявлены различные картины реакции иммунопреципитации, описанные выше. Сыворотки всех остальных норок образовывали обычный преципитат в. виде одной четкой линии (рис. I4-I). В основном у всех здоровых животных в реакции с хорьковой антисывороткой формируется только одна линия преципитации. Такая же линия формируется и сыворотками многих норок с АБ. Две четко разделенные линии (рис.14-2г) преципитации формируются сыворотками 17 норок, из которых большинство (90$) поражены АБ и имеют яркую паталогоанатомическую картину, содержание сывороточного IgG у них составляет 28-57 мг/мл. Остальные необычные картины преципитации в реакции с хорьковой антисывороткой также формируются в основном сыворотками больных АБ норок, но с разной степенью выраженности патало-гоанатомической картины. Процент здоровых норок с измененной картиной преципитации н-цепей здесь несколько выше, чем в случае картины преципитации в виде четкой двойной линии.
С помощью антисыворотки к L-цепям среди всех исследованных норочьих сывороток выявлено 16, у которых вместо одной наблюдалось две линии преципитации (рис. 13). Пятнадцать из них имели ярко выраженную паталогоанатомическую картину, характерную для АБ. сывороток больных АБ норок окраски сапфир из популяции I были протестированы норочьими антисыворотками против IgG хорька и соболя. Ни одна из этих сывороток не реагировала с указанными антисыворотками (рис. 15).
