Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 8-30
1.1. Пролактин и гормон роста: структура и биологическая роль 8-10
1.1.1. Биологическая роль пролактина 10-12
1.1.2. Биологическая роль гормона роста. 12-14
1.1.3. Структура генов пролактина и гормона роста 14-18
1.2. Полиморфизм гена пролактина и методы его определения 18-27
1.3. Изучение полиморфизма гена гормона роста (bGH)
Материалы и методы 31-40
2.1. Краткая характеристика исследуемых выборок пород крупного рогатого скота.
2.2. Выделение ДНК из цельной крови 32-33
2.3. Определение концентрации ДНК 33
2.4. Условия проведения полимеразной цепной реакции 34-35
2.5. Hot Start 35-36
2.6. Рестрикция продуктов амплификации 36
2.7. Приготовлениеполиакриламидногогеля 37
2.8. Электрофорез продуктов амплификации. 37-38
2.9. Клонирование и секвенирование 38
2.10. Статистическая обработка данных. 38-39
2.11. Использованные в работе компьютерные программы и базы данных. 39-40
Результаты и обсуждение 41-73
3.1. Полиморфизм гена пролактина (bPRL) у ярославской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота 42-54
3.1.1. Рестрикционный полиморфизм гена bPRL 42-46
3.1.2.Микросателлитный анализ полиморфизма гена bPRL 47-51
3.1.3. Анализ нуклеотиднои последовательности анализируемого фрагмента 5' -нетранслируемой области гена bPRL 51-53
3.1.4. Сравнительный анализ исследуемых выборок к.р.с. на гетерогенность распределения генотипов по двум маркерам 54
3.2. Полиморфизм гена гормона роста (bGH) у ярославской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота 55-64
3.3. Межпородное и енитрипородное генетическое разнообразие ярославского и черно-пестрого скота по локусам пролактина и гормона роста 64-68
3.4. Поиск ассоциаций полиморфных вариантов генов burl и bGH с различными признаками молочной продуктивности 69-73
Выводы 74-75
Список литературы 76-90
- Биологическая роль пролактина
- Выделение ДНК из цельной крови
- Приготовлениеполиакриламидногогеля
- Анализ нуклеотиднои последовательности анализируемого фрагмента 5' -нетранслируемой области гена bPRL
Биологическая роль пролактина
Хотя PRL первоначально был идентифицирован как лактотропный гормон, секретируемый гипофизом, к настоящему времени накоплено много данных о разнообразии физиологических функций PRL, включая осморегуляцию, репродукцию, поведенческие реакции (Ben-Jonathan et al.,1996, Bole-Feysot et al.,1998). Было показано также, что PRL синтезируется в различных тканях, включая эндотелиальные и иммунные клетки, нейроны и др. (Clapp et al. ,1998 , Ben-Jonathan et al. ,1996). Более того, участие PRL в регуляции иммунного ответа привела к созданию концепции о двойной функциональной роли PRL - как гормона и как цитокина (Ben-Jonathan et al. ,1996). Роль PRL как цитокина подтверждается сходством структуры PRL с белками семейства цитокина/гематопоэтина (Bazan, 1989 ), а рецептора PRL с рецепторами цитокина и гематопоэтина (Corbacho et al.,2000 )
PRL участвует в инициации и поддержании лактации у млекопитающих (Akers et al., 1981). В физиологических количествах он влияет на ткань молочной железы только тогда, когда она испытывает действие женских половых гормонов. Однако в избыточных количествах PRL может стимулировать развитие железы у овариэктомированных самок, а также у самцов. У грызунов PRL способен поддерживать существование желтых тел, отсюда название "лютеотропный гормон". Родственные ему молекулы, по-видимому, обеспечивают адаптацию морских рыб к пресной воде, линьку рептилий и продукцию молочка зобом птиц. Внутриклеточный медиатор действия PRL неизвестен. Высказано предположение о существовании пептида, выполняющего функцию такого медиатора, но это предположение не проверено. Опухоли, состоящие из PRL-секретирующих клеток, вызывают у женщин аменорею (прекращение менструаций) и галакторею (истечение молока из грудных желез). С избытком пролактина связаны гинекомастия (увеличение грудных желез) у женщин и импотенция у мужчин (цит по: Марри и др., 1993).
Многие биологические функции, такие, например, как экспрессия генов казеинов, осуществляется через рецепторы PRL (Hennighausen et al., 1997). Активирование торанскрипции генов белков молока включает олигомеризацию рецепнора и активацию киназы Jak2, которая фосфорилирует остатки тирозина у рецепторов сигнальных трансдукторов и активаторов транскрипции Stat5a and Stat5b (Hennighausen et al., 1997; Goffm et al., 1997 Seyfert et al.,2000). Сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции (STATs) представляют собой семейство из 7 транскрипционных факторов (Darnell et al.,1994, Schindler et al.,1995). STAT5 также известны как главные медиаторы действия гормона роста и пролактина (PRL) на гены, находящиеся под их контролем (Argetsinger et al.,1996; Antoniou et al. 1999)(Flisikowski et al. 2003).
Молекулярные события, которые индуцируются PRL, до сих пор мало изучены. Известно, что через несколько минут после добавления PRL происходит высвобождение арахидоновой кислоты (Bladder et al., 1988). Добавление арахидоновой кислоты в инкубационную среду с трансплантатами эпителиальных клеток лактирующей молочной железы приводит к стимуляции синтеза казеинов. По-видимому, пролактин стимулирует секрецию казеинов через арахидоновую кислоту. По контрасту с гормонами, которые быстро деградируют в лизосомах (Burgess et al., 1992), PRL остается в молоке не только в расщепленной, и но и в интактной форме (Sinha, 1995; Lkhider et al., 2001). PRL транспортируется через везикулярный путь, который включает не только эндосомы, поздние эндосомы и мультивезикулярные тельца, но также везикулы, локализованные в области аппарата Гольджи, и секреторные везикулы, содержащие казеиновые мицеллы (Ollivier-Bousquet, 1998). Возможно, это необходимо для разделения пролактин-индуцированных воздействий, которые зависят (сигнал к секреции белков молока) или не зависят (сигнал к экспрессии генов белков молока) от интеграции в аппарат Гольджи. Эти данные подтверждают гипотезу что пролактиновые сигналы могут восприниматься различными клеточными сайтами (Lkhider et al., 2001).
.Биологическая роль гормона роста. В настоящее время во многих странах гормон роста (GH) человека и животных получают на основе методов генетической инженерии и применяют, в частности, в медицине для лечения карликовости, заживления ран и переломов костей, а в сельском хозяйстве - для увеличения продуктивности скота. Применение гормона ведёт к увеличению мышечной и снижению жировой массы тела.
Рецептор гормона роста (GHR) относится к семейству цитокиновых рецепторов. Этот класс рецепторов представлен 15 членами, включая рецептрры эритропоэтина, пролактина, нескольких интерлейкинов, лептина и flp.(Waters et al., 1999). GHR играет главную роль в регуляции действия гормона роста и, таким образом, может рассматриваться как очевидный кандидатный ген, ассоциированный с признаками молочной продуктивности. В 1998 г. была секвенирована З -концевая область бычьего GHR (273 п.н.) и найдены три варианта, различающиеся по длине, и полиморфизм, обусловленный одиночной нуклеотидной заменой (Moisio et al., 1998). Частоты аллелей, различающихся по длине, различались у финской породы и у коммерческих пород крупного рогатого скота (к.р.с). GHR локализован у к.р.с. на хромосоме 20 (Moisio etal., 1998).
В настоящее время показано, что многие воздействия GH на ткани-мишени являются результатом прямого связывания GH с рецептором (Waters et al., 1999). Предположение, что GH действует только через интермедиатор IGF-1 носит упрощенный характер. В действительности GH вызывает индукцию множества факторов роста и их рецепторов, состав которых может варьировать в разных типах тканей и, возможно, на разных стадиях развития (Waters et al, 1999). У к.р.с, как и у многих других видов, самая высокая концентрация GHR - в печени.
Выделение ДНК из цельной крови
Ярославская порода крупного рогатого скота была выведена без участия иностранных пород методом народной селекции. Начало ее относят к 16 веку, а в 1869 г. она была зарегистрирована как самостоятельная порода. Ранее эта порода не исследовалась с использованием ДНК-маркеров, поэтому мы считали необходимым определить структуру исследуемого микросателлитного повтора у этой породы и его соответствие ранее описанной последовательности. Анализ нуклеотидной последовательности проводили на клонах, полученных после клонирования ПЦР-продукта, с использованием прямого и обратного праймера. В качестве контрольных образцов были использованы ПЦР-продукты, полученные на ДНК животных немецкой черно-пестрой породы, гомозиготных по микросателлитному маркеру гена bPRL (гомозигота 158/158 и 162/162 п.н.) (рис.7).
Нуклеотидная последовательность анализируемого фрагмента 5 -области гена bPRL у ярославской породы к.р.с. была идентична последовательности, представленной в базе данных за исключением микросателлитного повтора. Микросателлитный повтор для аллеля 162 п.н. у этой породы имеет структуру: (TG)6TA(TG)3TA(TG)2, т.е. во второй половине повтора произошла транзиция G/A. Такая более сложная структура микросателлитного повтора в 5 -области гена bPRL описана нами впервые и была обнаружена только у ярославского скота (рис.7).
У одного из исследуемых животных черно-пестрой породы к.р.с. немецкой селекции была выявлена ранее не описанная трансверсия (С/А) в уникальной области амплифицируемого фрагмента (рис.7). Этот результат не является артефактом, поскольку анализ нуклеотидной последовательности проводили на 4-х отдельных клонах, полученных от одного образца.
Таким образом, хотя тестируемые с помощью микросателлитного анализа аллели не различались по длине, они были полиморфны как по структуре микросателлитного повтора (у ярославского скота), так и по наличию точковой замены в уникальной части анализируемого фрагмента 5 -области (у немецкой черно-пестрой породы) гена bPRL.
Для исследования полиморфизма гена bPRL у ярославской и черно-построй пород российской и немецкой селекции нами использовались два типа маркеров, локализованных в разных областях гена: микросателлитный повтор - в 5 -области и полиморфный сайт рестрикции эндонуклеазы Rsal - в экзоне 3. Ранее уже указывалось, что крупный рогатый скот характеризуется низким уровнем полиморфизма по многим типам маркеров, включая и микросателлитные, поэтому мы предполагали увеличить информативность локуса bPRL, используя два типа маркеров и тем самым увеличивая тестируемую гетерозиготность данного локуса.
Действительно, при использовании двух типов маркеров для одного локуса мы получили достоверные различия в распределении совокупных генотипов гена bPRL для всех трех исследованных выборок к.р.с. (табл. 8).
При попарном сравнении пород по частотам аллелей и генотипов по каждому из маркеров достоверные различия были получены не во всех случаях (см. разделы 3.1.1. и 3.1.2). Таким образом, использование двух типов маркеров для одного локуса существенно увеличивает его информативность как совокупного полиморфного маркера. 3.2. Полиморфизм гена гормона роста (bGH) у ярославской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота
В данной работе исследовали рестрикционный полиморфизм двух областей гена bGH у ярославской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота: интрона III и экзона 5.
Полиморфизм интрона III гена bGH тестировали методом ПЦР-ПДРФ с использованием рестрицирующей эндонуклеазы Mspl (рис. 8).
Праймеры выделены жирным шрифтом, сайт рестрикции эндонуклеазы Mspl выделен жирным шрифтом и подчеркнут. Нумерация нуклеотидов дана согласно Woychik et al. 1982 (J00008) Полиморфизм в интроне III гена bGH был описан ранее как результат одновременной инсерции Т в позиции 1163 и транзиции C/G в позиции 1164 (интрон III). Указанный вариант полиморфизма тестируется методом ПЦР-ПДРФ по отсутствию сайта рестрикции для эндонуклеазы Mspl (аллель Mspl (-)) (Hoj et al., 1993).
Сайт узнавания рестрицирующей эндонуклеазы Mspl, хотя и расположен в интронной области (интрон III) гена bGH оказался наиболее информативным для изучения связей с признаками молочной продуктивности, а именно, была показана четкая корреляция Mspl(-) — аллеля с высоким уровнем жирности молока, а также с повышением процента белка в молоке (Hoj et al., 1993; Lagziel et al., 1999a). Поскольку частота Mspl{-) - аллеля наиболее высокой была у зебу, был проведен сравнительный анализа частот Mspl{-) - аллеля у различных пород крупного рогатого скота в зависимости от их географической удаленности от места обитания зебу (Lagziel et al., 1996). Было показано, что частота Mspl(-) аллеля в различных породах крупного рогатого скота уменьшается с удалением от места происхождения зебувидного скота (Индийский полуостров) (Lagziel et al., 2000). Что позволило авторам придти к заключению, что Mspl{-) - аллель гена bGH имеет зебувидное происхождение.
Следует отметить, что у голштинской породы была описана мутация, которая находилась в том же полиморфном Mspl-сайте рестрикции, но представляла собой Т/С транзицию в третьем интроне (Yao et al., 1996), а не одновременную инсерции Т в позиции 1163 и транзициюС/G в позиции 1164, как было описано ранее (Hoj et al., 1993; Lagziel et al, 1996). Обе мутации вызывают отсутствие сайта рестрикции для Mspl, обе обнаружены у голштинского скота, однако по-разному ассоциированы с молочной продуктивностью. Мутация, обнаруженная Hoj et al. (1993), давала положительную корреляцию, тогда как мутация, описанная Yao et al. (1996) напротив коррелировала с понижением количества молока, его жирности и процентом белка в молоке. Позднее было показано, что у монгольского скота и монгольских яков Mypl-полиморфизм в интроне III гена bGH обусловлен транзицией Т/С в положении 1163 (Туркова, 2003).
Нами был исследован Mspl-полиморфизм в интроне III гена bGH у ярославской и черно-пестрой пород к.р.с. Типичная картина электрофоретического анализа рестрикционных фрагментов продуктов амплификации фрагмента гена bGH представлена на рис.9.
Приготовлениеполиакриламидногогеля
Отмечена чрезвычайно низкая частота МярК -штеля. у ярославской породы к.р.с. Ранее такая низкая частота была показана только для голштинской породы. Следует отметить, что для североевропейских пород к.р.с. вообще характерна низкая частота МїрІ(-)-аллеля геяа, bGH (табл.10).
Различия в частотах аллелей гена гормона роста, тестируемых с использованием рестриктазы Mspl, достоверны только между выборками ярославской и российской черно-пестрой пород (t=2,57, Р=0,01). (t=l,24 для ярославской и немецкой черно-пестрой пород).
По частоте аллеля Alul+ (L- аллель) гена гормона роста достоверно отличается только немецкая черно-пестрая порода от ярославской породы K.p.c.(t= 4.2, р 0.01 ). Различия в частотах этого аллеля между другими породами к.р.с. недостоверны.
Наблюдаемое распределение частот генотипов в исследованных выборках для локуса bPRL соответствует теоретически ожидаемому равновесному распределению Харди-Вайнберга (табл. 11).
Примечание: N- число исследованных животных, P,% - частоты генотипов, Но и Не - наблюдаемый и ожидаемый уровень гетерозиготности. Уровень гетерозиготности по у4/гЛ-маркеру выше, чем по Mspl-маркеру гена bGH, что наглядно представлено на диаграмме (рис.12). Обращает на себя внимание высокий уровень гетерозиготности по А1и\-маркеру у ярославской породы к.р.с. (более 50%).
Уровень гетерозиготности по Mspl- и Alul-маркерам гена гормона роста в выборках черно-пестрой породы российской (1) и немецкой (2) селекции и ярославского скота (3). Породы: 1 - чёрно-пёстрая российская, 2 - чёрно-пёстрая немецкая, 3- ярославская.
Интересно отметить, что более высокий уровень гетерозиготности отмечен для полиморфизма в белок-кодирующей области гена (экзон 5), причем нуклеотидная замена, приводящая к появлению полиморфного сайта для эндонуклеазы Alul, приводит и к замене в белковом продукте аминокислоты Val на Leu (отсюда и название аллелей V и L). К сожалению, пока в литературе нет данных о различиях в функциональной значимости этих аллельных вариантов bGH. Тем не менее нельзя исключать, что такие различия имеются и распределение частот V- и L-аллелей гена bGH и уровень гетерозиготности поддерживается искусственным отбором. Как и в случае с геном bPRL, для исследования полиморфизма гена bGH использовалися два маркера, локализованных в разных областях гена: Mspl-полиморфизм в интроне III и /гЛ-полиморфизм в экзоне 5. Частоты совокупных генотипов существенно различались у исследованных пород (рис. 13). Однако различия в частотах распределения совокупных генотипов по двум маркерам гена bGH внутри черно-пестрой породы (российской и немецкой селекции) были недостоверны (табл. 12).
Одной из задач нашего исследования было сравнение межпородного и внутрипородного генетического разнообразия исследуемых пород к.р.с. по локусам пролактина и гормона роста. Это представляет особый интерес, поскольку пролактин и гормон роста непосредственно участвуют в формировании признака молочной продуктивности и находятся под сильным селекционным давлением.
Исследованные нами породы к.р.с. были представлены двумя разными выборками: ярославская порода была представлена выборками животных из двух хозяйств ярославской области, черно-пестрая порода была представлена выборками животных русской селекции из хозяйства им. С.М.Кирова Московской области и немецкой селекции из хозяйства Думмерсторф-Росток, (Германия).
Выборки ярославской породы к.р.с, полученные из разных хозяйств, не различались по частотам аллелей генов bGH и bPRL ни по одному из использованных критериев (табл. 13). Таблица 13.
Достоверность отличий двух выборок ярославского скота по распределению Примечания: DF - число степеней свободы, Р - вероятность, N - размер выборки. Из табл. 13 видно, что выборки достоверно не отличаются по частоте ни одного из трех маркеров (согласно тесту G2) и характеризуются крайне слабой позразделенностью по всем трем маркерам. Это позволило нам объединить две выборки ярославской породы и рассматривать их как единую выборку.
При попарном сравнении ярославской породы и двух выборок черно-пестрой породы (российской и немецкой селекции) по трем рестрикционным маркерам различия в распределении генотипов были достоверны во всех случаях (табл. 14).
Классы, которые были попарно нулевыми, удалялись при расчетах.
Обращает на себя внимание тот факт, что достоверность внутрипородных различий может быть выше (черно-пестрая немецкая и черно-пестрая российская), чем межпородных (ярославская и черно-пестрая немецкая), что еще раз указывает на ведущее значение селекции на распределение частот аллелей генов хозяйственно-полезных признаков.
При проведении сравнительного анализа распределения в разных породах совокупных генотипов по двум генам были выявлены резкие различия по спектру генотипов и частотам их встречаемости в исследованных выборках (табл.15). Из представленных данных видно, что одни генотипы являются общими для исследованных пород, другие генотипы характерны только для конкретных выборок. Особенно четко это просматривается на диаграммах (рис. 14).
Из 22 выявленных совокупных генотипов (по четырем маркерам двух генов) только 5 типов относятся к широко распространенным и присутствуют у более половины всех исследованных животных.
Анализ нуклеотиднои последовательности анализируемого фрагмента 5' -нетранслируемой области гена bPRL
Поскольку исследуемые нами гены участвуют в формировании признака молочной продуктивности к.р.с, можно было ожидать наличия ассоциаций маркеров генов bPRL и bGH с конкретными параметрами молочной продуктивности. Ранее для голштинского канадского скота была описана ассоциация Alul- полиморфизма гена bGH с молочной продуктивностью (Sabour et al., 1996). Была показана также корреляция генотипа V/V с большим выходом гормона роста в кровь (Lucy et al., 1993; Lee et al., 1993, 1996; Grochowska et al., 1999). Для МурІ-полиморфизма гена bGH была показана корреляция Mspl (-) — аллеля с высоким уровнем жирности молока, а также с повышением процента белка в молоке (Hoj et al., 1993; Lagziel et al., 1999a). По данным других авторов (Yao et al., 1996) МурІ(-)-аллель напротив коррелировал с понижением количества молока, его жирности и процентом белка в молоке.
Нами на ярославской породе был проведен анализ на наличие ассоциаций аллелей и генотипов по ifaal-маркеру гена bPRL с параметрами молочной продуктивности. На уровне аллельного полиморфизма никаких ассоциаций обнаружено не было. Однако при анализе подвыборок животных с определенными генотипами по гену bPRL прослеживаются некоторые слабо выраженные тенденции (рис.15). По удойности и содержанию белка в молоке эти тенденции слабо выражены. Более четко просматривается положительная зависимость жирности молока от ВВ-генотипа гена bPRL. Разумеется, это не более чем тенденция, и полученные результаты можно рассматривать только как предварительные.
На ярославской породе был проведен также анализ на наличие ассоциаций L- и V-аллелей гена гормона роста с различными параметрами молочной продуктивности: удойностью, содержанием белка и жира в молоке. На уровне аллельного полиморфизма не было обнаружено никаких ассоциаций. Для генотипов гена bGH по у4М-маркеру прослеживается тенденция связи конкретных генотипов с параметрами молочной продуктивности (рис.16).
В подвыборке животных с генотипом L/L доля особей с относительно низким содержанием белка в молоке (3,2-3,6%) была выше, чем в подвыборках животных с генотипами L/V и V/V. Среди животных с генотипом V/L было больше особей со средней жирностью молока. В выборках животных с генотипами L/L и L/V чаще встречались особи с относительно низкой молочной продуктивностью (не выше 5000 кг). Складывается впечатление, что L-аллель гена, особенно в гомозиготном состоянии, менее благоприятный аллель с точки зрения хозяйственной ценности, чем V-аллель.
Методом дисперсионного анализа была проанализирована достоверность зависимости параметров молочной продуктивности от генотипов гена bGH. Достоверная связь генотипов по маркеру Alul прослеживается только с жирностью молока (F=4,50 Р= 0,013).
При исследовании ассоциаций генотипов по .ЛЫ-маркеру гена bGH на выборке немецкой черно-пестрой породы с параметрами молочной продуктивности были также выявлены значимые ассоциации (F=4,l, р=0,041) с жирностью молока (рис.17). I
Полученные данные позволяют сделать вывод, что Alul-игркер гена bGH может рассматриваться как потенциальный маркер жирности молока у к.р.с. Можно ожидать, что при увеличении размера выборок и использовании новых дополнительных маркеров генов bPRL и bGH будут выявлены значимые ассоциации с другими параметрами молочной продуктивности. Гены bPRL и bGH могут рассматриваться как перспективные гены, на основе полиморфизма которых могут быть созданы эффективные маркеры молочной продуктивности к.р.с. выводы
1. Проведен сравнительный анализ полиморфизма гена пролактина {bPRL) по двум типам ДНК-маркеров (ПЦР-ПДРФ и микросателлитный анализ) у черно-пестрой породы российской и немецкой селекции и у ярославской породы к.р.с. Показано, что различия в частотах аллелей и генотипов по исследуемым локусам выражены как на межпородном, так и на внутрипородном уровнях. Отмечен низкий уровень гетерозиготности по ifoal-маркеру (9,4%) у российского черно-пестрого скота и по микросателлитному маркеру гена bPRL (от 3,2 до 24%) для всех исследованных пород.
2. Впервые у европейских пород Bos taurus (немецкой черно-пестрой и ярославской пород) обнаружены животные гомозиготные по В-аллелю гена bPRL, ранее описанные только у зебувидного и монгольского скота
3. Описан новый тип микросателлитного повтора (TG)6TA(TG)3TA(TG)2 (для аллеля 162 п.н.) в 5 -области гена bPRL, встречающийся только у ярославского скота и отличающийся транзицией G/A в 11-ом звене от повтора (TG)gTA(TG)65 присутствующего у других пород к.р.с. У немецкого черно-пестрого скота обнаружена ранее не описанная трансверсия (С/А) в уникальной части 5 -области гена bPRL.
4. Показаны достоверные межпородные и внутрипородные различия по частотам аллелей и генотипов по ПЦР-ПДРФ-маркерам, локализованным в разных областях (Mpl-маркер в интроне III и ylM-маркер в экзоне 5) гена гормона роста {bGH). Уровень гетерозиготности по Alul-маркеру выше, чем по МтрІ-маркеру гена bGH и достигает 55% у ярославского скота.
5. Впервые описаны совокупные генотипы по четырем маркерам генов bPRL и bGH (по двум маркерам для каждого гена) и определены их частоты
у черно-пестрого и ярославского скота. Показано, что исследуемые выборки различались как по спектру представленных генотипов, так и по их частотам. Из 22 выявленных совокупных генотипов только пять относятся к широко распространенным и присутствуют более чем у половины исследованных животных.
6. Изучены связи аллелей исследуемых генов с показателями молочной продуктивности: впервые выявлены значимые ассоциации 4М-маркера гена bGH с жирностью молока у ярославского (F=4,50 р= 0,014) и немецкого черно-пестрого скота (F=4,l р=0,041).
