Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Физиологические свойства гладких мышц желудка и эндогенные модуляторы хемореактивности (обзор литературы) 12
1.1. Морфологические особенности гладких мышц желудка человека и экспериментальных животных 12
1.2. Электрическая активность гладких мышц желудка человека и экспериментальных животных 16
1.3. Сократительная деятельность желудка человека и экспериментальных животных 18
1.4. Влияние вегетативной нервной системы на сократительную активность гладких мышц желудка 22
1.5. Влияние различных факторов на сократительную активность гладких мышц желудка 26
1.6. Эндогенные модуляторы хемореактивности 38
Глава 2. Объекты и методы исследования 44
Глава 3. Результаты исследований 48
3.1. Влияние ацетилхолина на сократительную активность гладкомышечных полосок различных регионов желудка крысы 48
3.2 Влияние сыворотки пуповинной крови новорожденных на тонотропный эффект ацетилхолина (10"6 г/мл) 51
3.3. Влияние сыворотки крови здоровых людей и пациентов с КЗЗ на сократительный эффект АХ в опытах с циркулярными полосками фундуса желудка и продольными полосками рога матки небеременных крыс 57
3.4. Исследование природы ЭБМХР. Влияния лизофосфатидилхолина (ЛФХ), фосфатидилхолина (ФХ) и куриного яичного желтка (ЯЖ) на сократительные эффекты АХ в опытах с циркулярными полосками фундуса желудка крысы 64
3.5. Сократительные эффекты адреналина (10" Приложение к главе 3 80 Глава 4. Обсуждение результатов исследований , 141 Заключение 159 Выводы 163 Список литературы 166 Введение к работе Вопрос о физиологической роли ЭСБАР, ЭББАР, ЭБМХР и других модуляторов, их природе, участии в патогенезе заболеваний, а также об их клиническом применении остается открытым. Показано, что при инфаркте миокарда (Мальчикова СВ. и соавт., 2003), бронхиальной астме (Кононова Т.Н., 2004), гипертонической болезни (Снигирева Н.Л. и соавт, 2004, 2005), слабости родовой деятельности (Братухина СВ.,1997) и угрозе преждевременных родов (Осокина А.А., 1998) содержание ЭСБАР, ЭББАР и ЭБМХР изменено. Установлено, что ЭСБАР-подобную активность проявляют гистидин, триптофан и тирозин, в связи с чем эти аминокислоты рассматриваются как компоненты ЭСБАР, а также триметазидин и милдронат (Циркин В.И., Дворянский С А., 1997; Ноздрачев А.Д. и соавт, 1998; Туманова Т.В., 1998; Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006). Предполагается, что компонентом ЭБМХР является лизофосфатидилхолин, или ЛФХ (Мальчикова СВ. и соавт., 2003; Кононова Т.Н., 2004; Сизова Е.Н. и соавт., 2004). Влияние эндогенных модуляторов хемореактивности на гладкие мышцы желудка не исследовалось, так же как и не изучался вопрос об их участии в патогенезе заболеваний ЖКТ, в том числе кислотозависимых заболеваний (КЗЗ), при которых, как известно (Ефименко П.В., 2005; Маев И.В. и соавт., 2000; Филимонов P.M., 1990, 2005), снижена моторная функция желудка. Поэтому мы считали возможным провести изучение этих вопросов, используя в качестве тест-объекта гладкие мышцы крысы, свойства которых описаны в литературе (Богач П.Г. и соавт., 1971;Медведев М.А., 1975; Boev К. et al., 1976; Petroianu A., Weinberg J., 1986; Ohta Т. et al., 1991). Однако анализ этих работ показал, что ряд вопросов физиологии гладких мышц желудка крысы, важных в методическом отношении для исследования эндогенных модуляторов хемореактивности, недостаточно изучены, в частности, вопрос о зависимости М-холинореактивности миоцитов желудка от их локализации в соответствующем слое и в регионе желудка (Богач П.Г. и соавт., 1971; Boev К. et al., 1976) и о характере сократительных эффектов 7 катехоламинов (Golenhofen К., Wegner H., 1975; Mandrek К., Kreis S., 1992; Fulop K. et al., 2005). Цель исследования - изучить влияние сыворотки крови человека (как источника эндогенных модуляторов хемореактивности) на М-холино- и а- и Р-адренореактивность гладких мышц различных отделов желудка крысы и оценить способность лизофосфатидилхолина изменять их М- холинореактивность. Задачи исследования. 1. Изучить влияние ацетилхолина (АХ, 10" -10" г/мл) на сократительную активность (СА) продольно и циркулярно иссеченных гладкомышечных полосок фундуса, корпуса и антрума желудка крысы и способность 1000-, 500-, 100- и 50-кратных разведений сыворотки пуповинной крови человека изменять сократительные ответы полосок на АХ (10'6 г/мл). 2. Оценить способность 1000-, 500-, 100- и 50-кратных разведений * сыворотки крови здоровых людей и пациентов с кислотозависимыми заболеваниями (КЗЗ) желудочно-кишечного тракта изменять сократительные ответы циркулярных полосок фундуса Желудка крысы и продольных полосок рога матки небеременных крыс на АХ (10~6 г/мл). 3. Исследовать способность лизофосфатидилхолина (ЛФХ, 10"8 - 10"4_ г/мл), фосфатидилхолина (10"7-10"4 г/мл) и 1000-, 500-, 100- и 50-кратных разведений водного раствора куриного яичного желтка (как источника ЛФХ) изменять сократительные ответы циркулярных полосок фундуса желудка крысы на АХ (10"6 г/мл). 4. Изучить сократительные ответы полосок фундуса желудка крысы . при селективной активации адреналином (10"9-10"6 г/мл) р-адренорецепторов (на фоне блокады а-АР ницерголином, 10 г/мл) или а-адренорецепторов (на фоне блокады р-АР обзиданом, 10~6 г/мл) и влияние на них сыворотки крови человека. 8 Новизна исследования. Впервые показано, что чувствительность гладких мышц желудка крысы к АХ зависит от их локализации {она самая высокая у гладкомышечных полосок корпуса и самая низкая - у полосок антрума), но не зависит от пространственной ориентации гладкомышечных пучков Впервые установлено, что сыворотка пуповинной крови новорожденных за счет наличия в ней ЭБМХР проявляет М-холиноблокирующую активность в опытах с гладкими мышцами желудка. Чувствительность полосок желудка к ЭБМХР зависит от их локализации -она максимальна у продольных и циркулярных полосок фундуса и минимальна - у циркулярных полосок корпуса и антрума. Впервые отмечено, что сыворотка крови здоровых людей (1:1000, 1:500, 1:100 и 1:50) обладает такой же ЭБМХР-активностью в отношении гладких мышц желудка крысы, как и в отношении гладких мышц матки крысы. Сыворотка крови пациентов с КЗЗ ЖКТ проявляет подобную активность (в опытах на полосках желудка и матки крысы) только в разведениях 1:100 и 1:50, что указывает на 10-кратное снижение у них содержания в крови ЭБМХР. Впервые показано (совместно с Т.В. Помаскиной), что содержание ЭБМХР в сыворотке крови у больных КЗЗ после прохождения 21-дневного курса лечения ПМВ «Нижнеивкинская-2К» в условиях санатория возвращается к значениям, характерным для здоровых, что сопровождается улучшением состояния пациентов. Эти данные доказывают причастность ЭБМХР к развитию КЗЗ пищеварительного тракта. Впервые установлено, что ЛФХ в концентрациях 10"8 и 10"7 г/мл не влияет на сократительный эффект АХ (10"6 г/мл) в отношении гладких мышц желудка крысы, в концентрации 10"6 ЛФХ повышает его, т.е. проявляет ЭСМХР-активность, а в концентрациях 10"5-10"4 г/мл снижает его, т.е. проявляет ЭБМХР-активность. Фосфати д ил хол ин как предшественник ЛФХ проявлет только ЭСМХР-активность (в концентрации 10"6 г/мл), а куриный яичный желток, как источник неферментативного образования ЛФХ, демонстрирует только ЭБМХР-активность (в разведениях 1:500, 1:100 и 1:50). Все это подтверждает предположение о ЛФХ как одном из компонентов ЭБМХР и указывает на то, что продукты питания могут влиять на М-холиномодулирующие свойства крови. Впервые показано, что селективная активация Р-АР (на фоне ницерголина, 10"6 г/мл) адреналином (10~7 и 10'6 г/мл) снижает тонус полосок желудка, вызванный гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса, а сыворотка пуповинной крови (1:100, 1:50) снижает этот эффект, т.е. проявляет ЭББАР-активность. Селективная активация а-АР (в присутствии р1- адреноблокатора обзидана, 10' г/мл) адреналином (10"6 г/мл) повышает у полосок желудка базальный тонус и тонус, вызванный гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса или сывороткой крови человека (1:1000, 1:500, 1:100, 1:50). Следовательно, катехоламины могут не только ингибировать СА гладких мышц желудка, но и повышать ее, что может иметь место при высоком уровне ЭББАР в крови или при наличии в ней Р-адренобл о каторов * как лекарственных препаратов. Впервые показано, что сыворотка крови человека в разведениях 1:1000, 1:500, и 1:100 проявляет а-адреноблокирующий эффект, который объясняется наличием в крови ЭБААР. Впервые установлено, что миоцитстимулирующая активность _ сыворотки крови человека (1:1000, 1:500, 1:100 и 1:50), обусловленная наличием в ней эндогенного активатора сократимости миоцитов (ЭАСМ), проявляется на гладких мышцах желудка крысы. Таким образом, впервые показано, что эндогенные модуляторы хемореактивности, в частности, эндогенные блокаторы (ЭБМХР, ЭББАР и ЭБААР), а также ЭАСМ могут участвовать в регуляции моторной функции желудка. Недостаточное или избыточное содержание этих факторов может быть причиной дисфункции и/или патологии желудка. Научная н практическая значимость работы. Результаты исследования расширяют представление об эндогенных модуляторах I» 10 хемореактивности прямого действия, в частности о возможном участии в регуляции моторики желудка ЭБМХР, ЭББАР и ЭБААР и их роли в развитии патологии желудка, что может учитываться при создании новых диагностических, профилактических и лечебных технологий в гастроэнтерологии. Они углубляют знание о ЛФХ как вторичном посреднике, в частности, об его участии в модуляции М-холинореактивности, а также о роли а- и р-адренергических механизмов в регуляции моторной функции желудка. Результаты работы важны в методическом отношении, так как демонстрируют возможность использования гладких мышц желудка крысы в качестве тест-объекта при оценке содержания в биологических жидкостях ЭБМХР, ЭСМХР и ЭАСМ. Результаты исследования могут представлять интерес для физиологии, фармакологии, внутренних болезней и гастроэнтерологии как учебных дисциплин. Положения, выносимые на защиту. Сыворотка крови человека проявляет М-холиноблокирующую, а- и р-адреноблокирующую и миоцитстимулирующую активность в отношении гладких мышц желудка крысы. Это означает, что содержащиеся в крови человека эндогенные блокаторы М-холинорецепторов (ЭБМХР) и а- и р-адренорецепторов (ЭББАР, ЭБААР), а также эндогенный активатор сократимости миоцитов (ЭАСМ) могут участвовать в регуляции сократительной деятельности желудка. ЭБМХР-активность сыворотки крови человека может снижаться при патологии (в частности, при кислотозависимых заболеваниях пищеварительного тракта), что указывает на возможность участия ЭБМХР в развитии патологического процесса. Лизофосфатидилхолин (ЛФХ) в высоких концентрациях (10"5-10~4 г/мл) проявляет ЭБМХР-активность, что позволяет рассматривать его как компонент ЭБМХР. В низких концентрациях ЛФХ (10"6 г/мл), как и фосфатидилхолин (К)"6 г/мл), повышает эффективность взаимодействия ацетилхолина с М-холинорецепторами (ХР), т.е. проявляет свойства эндогенного сенсибилизатора М-ХР (ЭСМХР). 4. Адреналин за счет активации а-адренорецепторов гладких мышц желудка может повышать их сократительную деятельность, особенно в условиях блокады р- адренорецепторов. Внедрение. Результаты исследования используются в учебной и научной деятельности кафедры нормальной физиологии, кафедры поликлинической терапии с курсом физиотерапии и курортологии Кировской государственной медицинской академии, кафедры анатомии, физиологии человека и валеологии Вятского- государственного гуманитарного университета и кафедры медико-биологических дисциплин Вятского социально-экономического института. Апробация работы. Результаты работы были представлены в материалах 19 съезда физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004), I съезда физиологов СНГ «Физиология и здоровье человека» (Сочи, 2005), IX международного конгресса «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2005), научной юбилейной конференции Российской Академии Естествознания (Москва, 2005), IV и V молодежных научных конференций «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар 2005, 2006), 9-й Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (С-Петербург, 2006), а также доложены на всероссийской конференции молодых исследователей «Физиология и медицина» (С-Петербург, 2005), на VI съезде научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2006) и на заседании Кировского отделения Физиологического общества им. И.П. Павлова (Киров, 2006). По материалам диссертации опубликовано 11 работ. Желудок человека представляет собой расширенную в виде мешка часть пищеварительной трубки. Емкость желудка у взрослого человека в среднем равна приблизительно 2 л. Существует несколько точек зрения на анатомическое деление желудка человека (табл. 1.1) Желудок крысы, часто используемый в экспериментах, согласно Ноздрачеву А.Д., Полякову В.Л. (2001), делится на кардиальную (просвечивающую, слизистую оболочку) и пилорическую (непрозрачную, мышечную, васкуляризированную) части. При этом в нем они выделяют фундус или дно (средняя часть желудка со стороны большой кривизны, примыкающая к пищеводной части) и -пилорическую часть. Другие авторы (Petroianu A., Weinberg J., 1986; Mandrek К., Milenov К., 1991) выделяют в желудке крысы три области - фундус, корпус и антрум. Желудок человека и экспериментальных животных, согласно данным литературы (Климов П.К., 1976), имеет мышечную оболочку, которая состоит из трех слоев гладких мышц: косого (внутреннего), циркулярного (среднего) и продольного (наружного). Гладкомышечные пучки косого слоя переплетаются с пучками циркулярного слоя; при этом пучки циркулярных мышц вблизи пилорического канала сливаются по малой кривизне и веером окружают последние 2-2,5 см антрального отдела желудка. Продольный слой гладких мышц желудка наиболее выражен на малой кривизне и несколько меньше - на большой; он слабо представлен на передней и задней поверхности желудка (Torgersen J., 1942). Благодаря сложному строению мышечного слоя желудок может изменять свою величину и форму во всех направлениях (Климов П.К., 1976). Показано (Полтырев С.С., Курцин И.Т., 1980; Орлов Р.С., Ноздрачев А.Д., 2005), что миоциты, или глад ком ышечные клетки (ГМК) желудка человека и экспериментальных животных могут иметь форму веретена, конуса или даже многоугольника с ядром в средней, самой широкой части. В саркоплазме у полюсов ядра расположены многочисленные митохондрии, свободные рибосомы, саркоплазматический ретикулум, а миофиламенты ориентированы вдоль продольной оси клетки. Число клеток в пучках непостоянно, как и размеры самих клеток. Длина клеток, в основном, 100-200 мкм, диаметр - 2-Ю мкм. При сокращении длина и форма клеток изменяются. Общая площадь клетки составляет около 400 мкм2. На поверхности каждой клетки находится 100-150 отростков-нексусов, обеспечивающих боковые контакты с соседними клетками. Заостренными концами ГМК вклиниваются между соседними клетками и образуют мышечные пучки, в свою очередь формирующие слои гладкой мускулатуры. Морфологические особенности ГМК желудка, как и других органов (двусторонняя полярность поперечных мостиков), позволяет ей укорачиваться во время сокращения до 80%, а не ограничиваться 30%, как это имеет место в скелетной мышце; более высокой степени укорочения способствует и тот факт, что актиновые нити прикреплены к плотным тельцам, а не к Z-линиям, и миозиновые мостики могут взаимодействовать с актиновыми нитями на значительно большей протяженности их длины. (Орлов Р.С., Ноздрачев А.Д., 2005), Общепринято считать (Агаджанян Н.А. и соавт., 2001; Циркин В.И., Трухина СИ., 2001; Орлов Р.С., Ноздрачев А.Д., 2005), что сокращение ГМК желудка, как и ГМК других органов, происходит следующим образом. Под влиянием факторов, повышающих вход ионов Са2+ внутрь клетки, возрастает внутриклеточная концентрация ионов Са2+. Эти ионы связываются с кальмодулипом (аналог тропонина С поперечнополосатой мышечной ткани), что активирует киназу легких цепей миозина, которая фосфорилирует легкие цепи миозина. Это создает условие для взаимодействия миозиновых мостиков с актиновой нитью. В процессе этого взаимодействия головки миозина изменяют свою конформацию и совершают гребковые движения, следствием чего является втягивание актиновых миофиламентов между миозиновыми. В результате гидролиза АТФ разрушаются актин-миозиновые связи, головки миозина восстанавливают свою конформацию и готовы к совершению следующего гребка. Продолжающаяся стимуляция ГМК поддерживает формирование новых миозиновых миофиламентов и вызывает дальнейшее сокращение клетки. Расслабление ГМК обусловлено дефосфорилированием легких цепей миозина под влиянием фосфатазы легких цепей миозина. Дефосфорилированный миозин теряет сродство к актину, что предотвращает образование поперечных мостиков. Расслабление ГМК заканчивается разборкой миозиновых нитей. Одной из удивительных особенностей гладких миоцитов является феномен «мостика-зацепки» («мостика-щеколды», «мостика-задвижки»). Он проявляется в том, что при дефосфорилировании легких цепей миозина в условиях высокой внутриклеточной концентрации ионов Са+ (более 10" М), отрыв миозинового мостика, связанного с актиновой нитью, не происходит. Поэтому миоцит продолжает находиться в сокращенном состоянии. Таким образом, дефосфорилирование легких цепей миозина, возникающее при низкой внутриклеточной концентрации ионов Са2\ вызывает расслабление миоцита, в то время как дефосфорилирование на фоне высоких концентраций ионов Са2+, не приводит к расслаблению миоцита, а лишь пролонгирует его сокращенное состояние (Циркин В.И., Трухина СИ., 2001). В условиях in vivo показано, что, гладкая мускулатура желудка обладает широким и изменчивым диапазоном биопотенциалов, но все их многообразие можно свести к двум главным категориям: медленным и быстрым изменениям потенциала. Конфигурации потенциалов, записанные различными методами (моно- и биполярными электродами, внутриклеточно или от поверхности клеток, методом сахарозного мостика) могут настолько отличаться, что некоторые исследователи (Prosser С, Bortoff А., 1968; Климов П.К., 1976) не находят сходства в потенциалах, записанных при помощи внутриклеточных и хронически имплантированных электродов. Согласно данным, полученным при внеклеточной регистрации биопотенциалов, электрическая активность ГМК желудка крыс, мышей, морских свинок представляет собой медленную волну пилообразной или синусоидальной формы (Богач П.Г. и соавт., 1971; Устинов В.Н., 1972). Она начинается с фазы деполяризации, затем следует гребень (или плато) волны и фаза реполяризации. На гребне волны возникают быстрые осцилляции -потенциалы действия. Медленные потенциалы гладких мышц тела и антрального отдела желудка человека, собаки, кошки представляют собой сложный комплекс. Согласно данным Bass P. et al. (1961), комплекс состоит из двухфазного, трехфазного или четырех фазного колебаний общей продолжительностью около 13,6 с. Быструю деполяризацию сменяет такая же быстрая частичная реполяризация. За этим следует длительная волна реполяризации, на которой наблюдаются пики быстрой осцилляции -пиковые потенциалы. Появление пиковых потенциалов на медленных электрических волнах желудка свидетельствует о сокращении изучаемого участка гладких мышц. Частота медленных потенциалов гладких мышц в области антрального отдела и тела желудка человека составляет 3-Ю циклов в минуту, в то время как в кардиалыюм отделе она значительно больше и весьма изменчива. Согласно данным Устинова В.Н. (1974), спектр биопотенциалов гладких мышц желудка собаки находится в полосе частот 0,05-1000 Гц. Конфигурация этих потенциалов определяется, прежде всего, характером сократительной деятельности органов пищеварения и их функциональным состоянием. Golenhofen К. (1971) наблюдал периодичность изменений потенциалов в фундальном отделе желудка морской свинки в пределах нескольких часов (часовой ритм), 20-30 минут (минутный ритм) и слабые, почти непрерывные электрические разряды. Автор делает вывод о существовании в фундальной области нескольких внутренних ритмов, частично перекрывающих друг друга, что обусловливает значительную изменчивость форм спонтанной активности. В исследованиях in vitro показано, (Богач П.Г. и соавт., 1971), что величина мембранного потенциала клеток фундуса, корпуса и пилоруса у крыс и мышей достигает 45-52 мВ (в среднем - 31 мВ). Спонтанная электрическая активность ГМК желудка крыс, мышей и морских свинок состоит из ритмически возникающих медленных волн, потенциалов действия и предшествующих им генераторных (локальных) потенциалов. Частота возникновения медленных волн деполяризации мышц желудка составляет 4-6 циклов/мин у крыс, 4-7 у белых мышей и 5-8 у морских свинок. На плато медленных волн возникают 1-9 пиковых потенциалов действия, амплитудой 5-38 мВ. Явление овершута не наблюдается. Сокращения ГМК желудка следуют за каждым комплексом, состоящим из медленной волны и потенциалов действия на ее плато. В отсутствие потенциалов действия сокращения не возникают. Согласно данным Xue L. et al. (1996), изолированные гладкие мышцы желудка крысы электрически неактивны в фундальной части, но генерируют спонтанные медленные волны с наложенными потенциалами действия в антруме и привратнике. По данным Sarna S. (2002) и Выскребенцевой С.А. и соавт., (2005), нормальная электрическая активность мышц желудка человека состоит из медленных волн и спайк-потенциалов. В норме частота медленных волн желудка у человека составляет 2,4-3,6 цикла/мин, и любая активность вне этого ритма определяется как дисритмия. Chen J. et al. (1990, 1994), утверждают, что желудочные дисритмии характеризуются волнами высокой (тахигастрия) и низкой (брадигастрия) частоты. Показано, что тахигастрия коррелирует с отсутствием антральных сокращений, а брадигастрия может быть связана как с сильными антральными сокращениями, так и с их отсутствием. В целом, можно констатировать, что полной ясности в литературе относительно характера биоэлектрической активности ГМК желудка до настоящего времени нет. Установлено (рис. 3.3), что продольные полоски фундуса желудка небеременных крыс, при перфузии раствором Кребса могли генерировать спонтанные низкоамплитудные фазные сокращения, а уровень тонической активности оставался низким на протяжении всего периода (60-240 мин) перфузии раствором Кребса. Ацетилхолин (АХ) в концентрации 10" г/мл вызывал увеличение тонуса полосок до 0,78±0,12 мН, а при отмывке ацетилхолина раствором Кребса тонус полосок возвращался к исходному уровню (рис. ЗД, 3.3, табл. 3.3). АХ в концентрациях 10"7, 10"6 и 10 5 г/мл повышал тонус соответственно до 1,87±0,29 мН, 4,81±0,65 мН и 6,81±1,70 мН (рис. 3.1, 3.3, табл. 3.3); удаление АХ сопровождалось снижением тонуса до исходного уровня. Во время действия АХ полоски также могли начать развивать фазные сокращения на фоне повышенного тонуса (рис. 3.3). На основании расчетов щ значение КД5о составило 710±120 нг/мл (рис.3.2, табл. 3.3). Таким образом, миоциты продольного слоя фундуса желудка могут повышать свой тонус под влиянием АХ. Наиболее вероятно, что реакция на ацетилхолин реализуется за счет активации М-ХР, о чем свидетельствуют результаты опытов с атропином. Действительно, в опытах с продольными полосками из фундуса установлено (рис. 3.6, 3.7; таб. 3.4) что их тонус, вызванный АХ (10 6 г/мл), Q 7 под влиянием атропина в концентрации 10" - 10" г/мл дозозависимо снижался; атропин в концентрации 10" г/мл не оказывал влияния на эффект АХ. Так, в опытах с атропином в концентрации 10" г/мл, АХ повышал тонус до 3,48±0,58 мН. При добавлении атропина тонус не менялся и составил 3,48±0,60 мН или 103,30±9,59%. В экспериментах с атропином в концентрации І О"9, 10"8 и 10"7 г/мл, значения АХ-вызванного сокращения составили соответственно 3,97±0,56 мН, 3,67±0,38 мН и 3,43±0,79 мН, а при добавлении атропина тонус составил соответственно 2,99±0,45 мН, 0,63±0,12 мНи 0 мН или 75,44±5,14%\ 22,50±4,16% и 0% ( - изменения достоверны, р 0,05, по критерию Фишера-Стыодента). Циркулярные полоски из фундуса желудка крысы. При исследовании М-холинореактивности циркулярных полосок фундуса желудка крысы показано, что полоски при перфузии раствором Кребса могли развивать спонтанные низкоамплитудные фазные сокращения, уровень тонической активности оставался низким (рис 3.3). АХ в концентрации 10"8 г/мл вызывал увеличение тонуса полосок до 0,36±0,23 мН (рис 3.1, 3.3, табл, 3.3). При отмывке АХ раствором Кребса тонус полосок возвращался к исходному уровню. Во время действия АХ полоски также могли начать развивать фазные сокращения на фоне повышенного тонуса (рис. 3.3). При исследовании действия АХ в концентрациях 10"7, 10"6 и 10"5 г/мл амплитуда тонического сокращения составила соответственно 1,28±0,18 мН, 3,06±0,36 мН и 4,41 ±1,05 мН (рис. 3.1, 3.3, табл.3.3). Удаление АХ сопровождалось снижением тонуса до исходного уровня. Значение КДзо составило 635±130 нг/мл (рис. 3.2., табл. 3.3) Продольные полоски из корпуса желудка крысы. В опытах с продольными полосками корпуса желудка крысы выяснено, что полоски при перфузии раствором Кребса также генерировали спонтанные фазные сокращения, и, кроме того, могли развивать фоновую тоническую активность, которая выражалась в виде волнообразных подъемов и спадов о тонуса (рис. 3,4). АХ в концентрации 10" г/мл вызывал увеличение тонуса полосок до 0,49±0,15 мН (рис. 3.4, таб. 3,3). При отмывке АХ раствором Кребса тонус полосок возвращался к исходному уровню. Во время действия АХ полоски также могли начать развивать фазные сокращения на фоне повышенного тонуса. Амплитуда тонического сокращения при действии АХ в концентрациях 10 7, 10"6 и 10"5 г/мл составила соответственно 1,86±0,28 мН, 3,43±0,60 мН и 4,01 ±0,78 мН (рис. 3.1, 3.4). Удаление АХ сопровождалось снижением тонуса до исходного уровня. Значение КД5о составило 240±160 нг/мл (рис. 3.2, табл. 3.3). Циркулярные полоски из корпуса желудка крысы. В экспериментах с циркулярными полосками корпуса желудка крысы, обнаружено, что при перфузии раствором Кребса полоски генерировали спонтанные фазные сокращения и могли развивать фоновую тоническую активность (рис. 3.4). АХ в концентрации 10 г/мл вызывал увеличение тонуса полосок до 0,57±0,15 мН (табл. 3.3). При отмывке АХ раствором Кребса тонус полосок возвращался к исходному уровню. Во время действия АХ полоски также могли начать развивать фазные сокращения на фоне повышенного тонуса. Амплитуда тонического сокращения при действии АХ в концентрациях 10"7, 10"6 и 10"5 г/мл составила соответственно 1,55±0,19 мН, 3,02±0,49 мН и 4,65±0,74 мН (рис. 3.1, 3.4, табл. 3.3). Удаление АХ сопровождалось снижением тонуса до исходного уровня. На основании расчетов значение КД50 составило 502±140 нг/мл (рис. 3.2, табл. 3.3). Продольные полоски из антрума желудка крысы. Исследуя М-холинореактивность продольных полосок антрума желудка крысы, обнаружено, что полоски при перфузии раствором Кребса обладали щ спонтанной сократительной активностью фазного типа и могли развивать фоновую тоническую активность (рис. 3.5). АХ в концентрации 10"8 г/мл вызывал увеличение тонуса полосок до 0,57±0,15 мН (табл. 3.3). При отмывке ацетилхолина раствором Кребса тонус полосок возвращался к исходному уровню. Амплитуда тонического сокращения при действии АХ в 7 ft концентрациях 10", 10" и 10" составила соответственно 1,55±0,19 мН, 3,02±0,49 мН и 4,65±0,74 мН (рис. 3.1, 3.5, табл. 3.3). Установлено (рис. 3.33), что циркулярные полоски фундуса желудка под влиянием АХ (10"6 г/мл) развивали сокращение тонического типа на фоне которого наблюдались дополнительные колебания тонуса, напоминающие фазные сокращения. Величина тонического сокращения составляла в среднем, 3,56±0,14мН (рис. 3.34, табл. 3.17). В опытах при исследовании ЛФХ в концентрации 10" г/мл АХ-вызванный тонус составил 3,10±0,53 мН. При введении ЛФХ (10 8 г/мл) АХ-вызванный тонус достоверно не менялся - он составил 3,51±0,68 мН или 112,50±10,28% от первоначального. При удалении из среды ЛФХ (10" г/мл) АХ-вызванный тонус составлял 3,51±0,70 мН и 109,83±5,86% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ЛФХ в о концентрации 10" г/мл не проявляет М-хол и неблокирующую активность. В опытах при исследовании ЛФХ в концентрации 10"7 г/мл АХ-вызванный тонус составил 3,99±0,65 мН. При введении ЛФХ (10 г/мл) АХ-вызванный тонус достоверно не менялся; он составил 4,06±0,43 мН или 108,14±9,92% от первоначального. При удалении из среды ЛФХ (10"7 г/мл) АХ-вызванный тонус составлял 3,57±0,49 мН и 93,71±7,51% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ЛФХ в концентрации 10 г/мл не проявляет М-хол и неблокирующую активность. В опытах при исследовании ЛФХ в концентрации 10"6 г/мл АХ-вызванный тонус составил 3,47±0,42 мН. При введении ЛФХ (10"6г/мл) АХ-вызванный тонус достоверно возрастал до 3,79±0,51 мН или 122,80±5,83% от первоначального. При удалении из среды ЛФХ (10"6 г/мл) АХ-вызванный тонус составлял 3,06±0,51мН или 85,50±8,76% от исходного. Эти результаты указывают на то, что ЛФХ в этой концентрации проявляет М-холиносенсибилизирующую активность. В опытах при исследовании ЛФХ в концентрации 10 г/мл АХ вызванный тонус составил 3,65±0,50 мН. При введении ЛФХ (10"5 г/мл) АХ вызванный тонус не менялся и составил 3,31±0,53 мН или 92,07±8,46% от первоначального. При удалении из среды ЛФХ (10 5 г/мл) АХ-вызванный тонус составлял 2,90±0,48 мН или 76,23±5,69% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ЛФХ в концентрации 10 5 г/мл проявляет М-хол и неблокирующую активность, но она выявляется после удаления ЛФХ, т.е. проявляется с большим латентным периодом. В опытах при исследовании ЛФХ в концентрации 10 г/мл АХ-вызванный тонус составил 3,83±0,53 мН. При введении ЛФХ (104 г/мл) АХ-вызванный тонус снижался до 3,11±0,53 мН или до 77,90±10,14% от первоначального. При удалении из среды ЛФХ (10 г/мл) АХ-вызванный if тонус составлял 2,53±0,66 мН или 61,0±6,78% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ЛФХ в концентрации 10 г/мл проявляет М-холиноблокирующую активность, которая особенно выражена после удаления ЛФХ, т.е. лучше проявляется через 10-20 минут от начала воздействия. Таким образом, проведенное исследование показало, что АХ в концентрации 10 6 г/мл во всех 5 сериях опытов вызвал повышение тонуса в одинаковой степени, что позволяет проводить сравнение эффективности I действия ЛФХ в разных концентрациях. ЛФХ в концентрациях 10 8, 10"7 и 10" г/мл при своем воздействии не проявляет М-холиноблокирующую активность, а в концентрации 10"4 г/мл проявляет ее, снижая АХ-вызванный тонус до 77,90±10,14% от его исходной величины. ЛФХ; этот эффект еще более выражен в последующие 10 минут, т.е. в период отмывки ЛФХ. Следовательно, ЛФХ способен проявить М-холиноблокирующий эффект, но лишь в высоких концентрациях (10 5 и 10"4 г/мл), причем этот эффект развивается в основном не в первые 10 минут воздействия, а в следующие 10 минут, т.е. на фоне отмывки. В концентрации 10"6 г/мл ЛФХ способен проявлять М-холиносенсибилизирующий эффект, т.е. усиливать } положительный тонотропный эффект АХ (до 122,80±5,83% от первоначального). Фосфатидилхолин Под влиянием АХ (10"6 г/мл) гладкомышечные полоски развивали сокращение тонического типа (табл. 3.18, рис. 3.35, 3.36), величина которого составляла, в среднем, 3,31±0,22 мН. В опытах при исследовании ФХ в концентрации 10 7 г/мл АХ вызванный тонус составил 3,43±0,82 мН. При введении ФХ (10 г/мл) АХ вызванный тонус достоверно не менялся; он составил 3,30±0,85 мН или 96,62±2,92% от первоначального. При удалении из среды ФХ (10 7 г/мл) АХ i вызванный тонус составлял 3,18±0,81 мН и 92,75±3,85%. В целОхМ, эти результаты указывают на то, что ФХ в концентрации 10 г/мл не проявляет М-хол и неблокирующую активность. В опытах при исследовании ФХ в.концентрации 10"6 М АХ-вызванный тонус составил 2,23±0,21 мН. При введении ФХ (10" г/мл) АХ-вызванный тонус достоверно возрастал до 2,50±0,23 мН или 113,11±5,48% от первоначального. При удалении из среды ФХ (10 6 г/мл) АХ-вызванный тонус составлял 2,17±0,16 мН или 102,11±7,73% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ФХ в концентрации 10 г/мл не проявляет М-холиноблокирующую активность; более того, в этой концентрации ФХ (как и ЛФХ) проявляет М-холиносенсибилизирующую $ активность. В опытах при исследовании ФХ в концентрации 10 г/мл АХ вызванный тонус составил 2,55±0,26 мН. При введении ФХ (10 5 г/мл) АХ вызванный тонус не менялся и составил 2,94±0,30 мН или П0,88±7,24% от первоначального. При удалении из среды ФХ (10 г/мл) АХ-вызванный I тонус составлял 2,72±0,28 мН или 108,0±6,04% от первоначального. В целом, эти результаты указывают на то, что ФХ в концентрации 10"5 г/мл не проявляет М-холиноблокирующую активностьМорфологические особенности гладких мышц желудка человека и экспериментальных животных
Электрическая активность гладких мышц желудка человека и экспериментальных животных
Влияние ацетилхолина на сократительную активность гладкомышечных полосок различных регионов желудка крысы
Исследование природы ЭБМХР. Влияния лизофосфатидилхолина (ЛФХ), фосфатидилхолина (ФХ) и куриного яичного желтка (ЯЖ) на сократительные эффекты АХ в опытах с циркулярными полосками фундуса желудка крысы
Похожие диссертации на Влияние сыворотки крови человека на M-холино- и Z-, Z-адренореактивность гладких мышц желудка крысы
