Содержание к диссертации
Введение
CLASS 1. Обзор литературы CLASS 9
1.1. Представление о нейро-гуморальных регуляторных системах 9
1.2. Влияние экспериментального стресса на адренер-гические и холинергические механизмы 24
CLASS 2. Методо и овьем исследований 4 CLASS 0
2.1. Методы исследования эффекторного звена основных нейро-гуморальных регуляторных систем 40
2.2. Схема проведения и объем исследований 47
2.3. Методика стрессорных воздействий 50
2.4. Методика определения катехоламинов в тканях 51
2.5. Разработка методики и аппаратуры для изучения адрено- и холинореактивности радужки глаза морской свинки 53
2.6. Методика определения функционального состояния
Р-адренорецепторов эритроцитов 70
3. Результаты исследований и их обсуждение 73
3.1. Экпериментальное обоснование фотометрического метода определения функционального состояния адрено- и холинорецепторов радужки глаза морской свинки 73
Исследование специфичности действия фарма кологических препаратов на рецепторы радужки глаза морских свинок 73
Сезонные изменения функционального состояния рецепторов радужки глаза морских свинок 82
3.2. Содержание катехоламинов в надпочечниках и радужке глаза морских свинок в динамике разви тия иммобилизационного и химического стрессов... 93
Влияние различных сроков иммобилизации на содержание катехоламинов в надпочечниках и радужке 93
Содержание катехоламинов в надпочечниках и радужке глаза в различные сроки после внутри мышечного введения четыреххлористого углерода 101
Сравнение стрессорного воздействия иммоби-лизации и внутримышечного введения четыреххлористого углерода на обмен катехоламинов.. 106
3.3. Функциональное состояния адрено- и холинорецепторов радужки глаза морских свинок при стрессе. 117
Функциональное состояние адрено- и холино-рецепторов при иммобилизации 118
Функциональное состояние адрено- и холино-реиепторов радужки глаза морской свинки
после введения четыреххлористого углерода 120
Сравнение стрессорного воздействия иммобилизации и внутримышечного введения четырех
хлористого углерода на функциональное состояние адрено- и холинорецепторов 122
3.4. Сравнительный анализ реактивности 3> -адрено-рецепторов различных тканей организма на примере мышцы радужки глаза и эритроцитов крови морской свинки 125
4. Заключение 129
Вывода 139
- Представление о нейро-гуморальных регуляторных системах
- Влияние экспериментального стресса на адренер-гические и холинергические механизмы
- Методы исследования эффекторного звена основных нейро-гуморальных регуляторных систем
- Экпериментальное обоснование фотометрического метода определения функционального состояния адрено- и холинорецепторов радужки глаза морской свинки
Введение к работе
Несмотря на то, что проблеме стресса посвящено большое количество исследований, некоторые стороны ее разработаны недостаточно. Вместе с тем, в глубоком изучении адаптационных изменений кроются перспективы дальнейшего развития не только общей биологии, но и практической медицины. Не подлежит поэтому сомнению научно-практическая актуальность исследований механизмов развития стресса.
Хорошо известно, что при адаптационных изменениях в ответ на воздействие различных стрессоров происходят значительные сдвиги в функциональном состоянии таких регуляторних систем, как симпато-адреналовая и парасимпатическая. Достаточно подробно изучены изменения, происходящие при стрессе в ней-ро-гуморальных звеньях этих систем (Матлина Э.Ш.,1972; Costa et al. ,1980; Kvetnanaky ,1980; Заводская И.С.,Морева Е.В., 1981), но на вопрос об участии в адаптационных процессах эф-фекторных звеньев адрено- и холинорецепторов - убедительного ответа пока не получено. Это обстоятельство объясняется, в частности, несовершенством методических приемов, используемых для изучения медиаторно-рецепторных взаимодействий. В то же время ряд косвенных данных свидетельствует о существенной роли специфических рецепторов в формировании ответной реакции организма на стресс ( Okada et al. ,І980;Дешевой Ю.Б.,І982).
Для изучения рецепции тканей организма традиционно используют биологические методы. Характерные недостатки этих методов - низкая точность оценки результатов, инерционность систем регистрации, травматичность. Перечисленные недостатки сочетаются в различных вариантах.
Несмотря на признание того, что в качестве стрессоров - б - могут выступать самые различные воздействия, стремящиеся изменить постоянство внутренней среды организма, не все такие факторы экспериментально изучены в достаточной степени. Так, влияние иммобилизационного и эмоционально-болевого стрессов на регуляторные реакции исследовано более тщательно ( Kvetnan) sky, Mikulay ,1970;Матлина Э.Ш. и соавт.,1974; Манухин Б.Н. и соавт.,1981), чем влияние химических веществ. В то же время исследование не только специфических изменений, но и закономерностей изменений общих регуляторних реакций под влиянием химических веществ должно дать ответ на многие нерешенные вопросы (Саноцкий И.В.,Уланова М.П.,1975).
В связи с изложенным, целью настоящей работы является параллельное изучение изменений в гуморальном и эффекторном звеньях симпато-адреналовой, а также эффекторного звена парасимпатической нервных систем при одной из форм традиционно используемого в эксперименте стрессорного воздействия - иммобилизации - и при неизученном в этом отношении влиянии токсичного химического агента.
В качестве химического стрессора был избран четыреххло-ристый углерод. Основанием для такого выбора послужили имеющиеся в литературе данные о проявлении общей неспецифической реакции организма при интоксикации ССІ^ (Колпащикова И.Ф., 1973; Клочкова СИ.,1980). Проведенные нами предварительные эксперименты показали, что у этого вещества нет специфического прямого действия на изучаемые звенья вегетативной нервной системы.
Были поставлены следующие задачи: -использовать для исследования медиаторно-репепторных взаимодействий радужную оболочку глаза морских свинок; разработать методику и аппаратуру бесконтактной фотометрической регистрации сокращений в изолированных от окружающей среды условиях; определить показатели чувствительности адрено и холинорецепторов радужки глаза морских свинок к агонистам -норадреналину, алупенту, ацетилхолину в норме, показать специфичность действия используемых фармакологических препаратов; -изучить динамику стресса по содержанию катехоламинов в надпочечниках и радужке глаза морских свинок под влиянием иммобилизации и при внутримышечном введении ССІ^; -изучить и сопоставить функциональное состояние at- и J3-адрено- и М-холинорецепторов при выбранных условиях развития стресса.
В ходе решения поставленных задач впервые в Советском Союзе были разработаны и апробированы методика и соответствующая аппаратура для изучения медиаторно-рецепторных взаимодействий, позволяющие с высокой чувствительностью, объективно и атравматично регистрировать сокращение радужки глаза теплокровного животного, что расширяет возможности и повышает точность таких исследований. Впервые изучены основные показатели, характеризующие функциональное состояние об- иЪ -адрено-, М-холинорецепторов радужки глаза морской свинки в норме, выявлены сезонные изменения чувствительности рецепторних образований мышцы. Это, в свою очередь, дало возможность обосновать пригодность избранного тест-объекта для исследований медиаторно-рецепторного взаимодействия и определить место этого объекта в ряду других биологических препаратов, используемых с такой же целью.
Исследования динамики содержания катехоламинов в надпочечниках и радужке, а также показателей чувствительности специфических рецепторов при иммобилизации и введении ССІ4 дали новый материал для характеристики влияний различных стрессоров на основные регуляторные системы.
На защиту автор выносит следующие основные положения: -методика фотометрического определения параметров меди-аторно-рецепторного взаимодействия на мышце радужки глаза морской свинки, величины этих параметров и их сезонные изменения у интактных животных; -результаты сравнительного изучения действия двух различных по природе стрессоров на содержание катехоламинов в тканях и чувствительность адрено- и холинорецепторов.
Представление о нейро-гуморальных регуляторных системах
Регуляция функций организма, приспособление его к условиям окружающей среды, сохранение постоянства внутренней среды осуществляются комплексом механизмов, включающих в се-бя нервную и эндокринную систему. При этом механизмы регуляции, действующие на различных уровнях в живом организме, тесно взаимосвязаны и оказывают друг на друга прямые и обратные влияния, осуществляемые с помощью гуморальных передатчиков » гормонов и нейромедиаторов.
В связи с задачами, поставленными перед данным исследованием, особое внимание привлекают материалы, полученные при изучении гуморального и эффекторного звеньев симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы. Симпатическое и парасимпатическое влияние часто характеризуются противоположными эффектами, вместе с тем в их взаимоотношениях отчетливо выступает и синергизм,способствующий более тонкой регуляпии функций. Благодаря наличию ряда дублирующих механизмов обратной связи, взаимодействия между симпатическим и парасимпатическим отделами являются одним из существенных факторов физиологической надежности процессов регуляции и адаптации организма к изменяющимся условиям внешней среды (Ноздрачев А.Д.,1983).
Передатчиком нервных импульсов с постганглионарных парасимпатических нервов на иннервируемые клетки является аце-тилхолин; нейромедиатором нервных импульсов постганглионарных симпатических волокон является норадреналин. Выделяющийся в ответ на нервный импульс медиатор диффундирует через синаптическую щель и реагирует со специальными реактивными структурами постсинаптической мембраны. В результате этого взаимодействия развивается цепь биохимических процессов, приводящих к возбуждению или торможению иннервируемой клетки. Вместе с тем, конечный физиологический эффект обеспечивается также процессами синтеза, накопления, высвобождения и инактивации медиатора. Эти процессы подробно изучены. Сведения о ферментных системах и регулирующих факторах биосинтеза катехоламинов представлены в обзорах ( Biaschko ,1939; Udenfriend et al. ,195б;Матлина Э.Ш.,Меньшиков В.В.,1967; Горкин В.В.,197I; Axelrod ,1972; Kaufman ,1973; Матлина Э.Ш.,1976).
Синтез катехоламинов происходит в адренергических нейронах и хромафинных клетках. Из аминокислоты фенилаланина последовательно образуются тирозин, ДОФА (3,4-диоксифенилаланин), дофамин, норадреналин и адреналин.
Непосредственным продуктом превращения фенилаланина является тирозин. Суть реакции заключается во введении гидрок-сильной группы в бензольное кольцо. В реакции гидроксилиро-вания фенилаланина участвуют никотинамид-аденин-динуклеотид-фосфат (НАДФ) в востановленной форме, молекулярный кислород, а также в качестве кофактора тетрагидроптеридин.
Вторым этапом биосинтеза катехоламинов является гидрок-силирование тирозина с образованием ДОФА. Эта реакция, катализируемая тирозингидроксилазой (КФ 1.99.I), является наиболее медленным процессом биосинтеза и лимитирует скорость образования катехоламинов.
Под действием дофа-декарбоксилазы (КФ 4.1.1.26) происходит превращение диоксифенилаланина в дофамин. В качестве кофактора требуется пиридоксальфосфат.
Образование норадреналина из дофамина катализирует дофамин- -гидроксилаза (КФ 1.99Л). Для активирования этого процесса необходимо наличие ионов тяжелых металлов,аденозин-трифосфорной кислоты (АТФ) и аскорбиновой кислоты.
Последним этапом биосинтеза катехоламинов является превращение норадреналина в адреналин путем метилирования по азоту под действием фенилэтаноламин-М-метилтрансферазы (КФ 2.1Л.).Этот этап осуществляется в надпочечниках; в адренер-гических нейронах синтез заканчивается на стадии норадреналина, так как здесь нет -метилтрансферазы.
Предположение о том, что образующийся медиатор хранится в везикулах, впервые было высказано в 1955 г. (De Roberis, Bennet ,1955). Дальнейшие исследования в этом направлении ( ра1к e""t al- ,1962; Richardson Д962; Panzer et al.,1969; Pillenz et al. Д976) позволили придти к заключению, что в адренергических окончаниях существует два типа симпатических везикул - маленькие электроннопрозрачные и гранулярные. Вероятно, маленькие везикулы с высоким содержанием норадреналина представляют собой легко высвобождаемую форму медиатора ( Pillenz ,1977).
Исследования, посвященные изучению высвобождения норадреналина, свидетельствуют о том, что в мозговом веществе надпочечников и симпатических нервах норадреналин депонируется в виде комплекса с растворимыми внутривезикулярными белками хромогранином А и дофамин-jS-гидрокеилазой (Gewirtz »Kopin , I970;Smith % i97I;Weinshilboum et al. Д972; Bisby at a1 ,1973;Nelson ,Molinoff ,І97б;Авакян O.M.,1976). Однако, некоторые исследователи, работавшие с селезенкой собаки, полагают, что дофамин- -гидроксилаза в содержимом везикул отсутствует (De Potter ,1971; De Potter , Chubb ,1977).
Влияние экспериментального стресса на адренер-гические и холинергические механизмы
Изучение физиологических ответных реакций организма на предъявляемые ему требования началось по существу с работ К. Бернара, сформулировавшего положение о том, что основной чертой живых существ является способность сохранять постоянство внутренней среды организма, несмотря на изменения окружающей среды (К. Бернар,1937). Для обозначения постоянства внутренней среды организма У. Кеннон ввел специальный термин - "гомеостаз". Основоположник теории гомеостаза рассматривал организм как единое целое, способное оптимально приспосабливаться к изменениям внешней среды. По его мнению, ВДС поддерживает контакт с внешним миром, а вегетативная нервная система - гомеостаз, необходимый для осуществления всех функций организма. При этом большое значение У. Кеннон придавал симпато-адреналовой системе, обеспечивающей организм энергией для "борьбы или бегства" (Cannon ,1929,1932, 1937).
Значительный вклад в разработку проблемы, связанной с приспособительными реакциями организма к изменяющимся условиям среды, внесли русские и советские ученые (Павлов И.П., 1936; Орбели Л.А.,1937; Быков К.М.,1944; Быков К.М.,Курцин И.Т.,1949; Асратян Э.А.,1948 и др).
В 1936 г. канадский ученый Г. Селье (Selye ,1936) впервые показал, что в ответ на действие разных по качеству, но сильных раздражителей, развивается один и тот же комплекс изменений в организме, характеризующих неспецифическую адаптационную реакцию, которую он назвал общим адаптационным синдром (ОАС)или реакцией напряжения (стресс), а сами чрезвычайные раздражители, вызывающие стресс-реакцию - стрессорами.
Общий адаптационный синдром повышает устойчивость организма к действию повреждающих факторов, что, по мнению Г. Селье, связано с усилением функции желез внутренней секреции -гипофиза и коры надпочечников. Действуя на организм, стрессор вызывает повреждение тканей и выделение "метаболита", который воздействует на гипофиз, вызывает усиление освобождения гормонов его передней доли - соматотропного гормона (СТГ)и адре-нокортикотропного гормона (АКТГ). А уже АКТГ оказывает влияние на кору надпочечников, вызывая усиление секреции двух типов гормонов - минералокортикоидов и глюкокортикоидов. Именно этим и объясняется, по мнению Г.Селье, повышение устойчивости к действию различных стрессоров.
В концепции Г.Селье о стрессе имеются три основные положения. Во-первых, автор считает, что общий адаптационный синдром не зависит от природы стрессора, а также от вида животного. Ответная реакция, или ОАС, является универсальной моделью защитных реакций, направленных на сохранение целостности организма, то есть источник стресса не имеет значения и неспецифическая защитная реакция в основном одинакова для всех животных.
Во-вторых, защитная реакция при продолжающемся или повторяющемся действии стрессора проходит через три определенные стадии, которые и представляют "общий адаптационный синдром" (рис.3).
Во время первой стадии - реакции тревоги - в организме появляются изменения, характерные для первоначального действия стрессора, при этом уровень резистентности снижается. тер am -В случае достаточно сильного раздражителя резистентность может упасть до нуля и тогда организм погибнет. В случае же умеренно сильного воздействия уровень устойчивости возраща-ется к норме. Эта стадия развивается через 6 ч после стрес-сорного воздействия и длится 24-48 ч. Для нее характерно уменьшение тимуса, лейкоцитоз, лимфопения, анэозинофилия, нейтрофилез, развитие кровоизлияний и язв в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта. В результате стимуляции гипофизом секреции АКТГ в коре надпочечников повышается секреция глюкокортикоидных и минералокортикоидных гормонов, деятельность щитовидной и половых желез угнетены.
Во второй стадии - стадии резистентности - организм на -чинает адаптироваться к продолжающемуся воздействию стрессора. Исчезают изменения, характерные для стадии тревоги, происходит нормализация деятельности желез внутренней секреции и ти-мико-лимфатической системы, а иногда даже повышение функциональной активности желез, угнетенной в первой стадии. Уровень устойчивости организма поднимается выше нормы. Если раздражитель очень сильный и действует продолжительно, то стадия резистентности переходит в стадию истощения. При этом повторно угнетаются защитные системы организма. Характер изменений в тимико-лимфатической и эндокринной системах очень близок к таковому в стадии тревоги. Отличие от первой стадии состоит в том, что секреция глюкокортикоидов в стадии истощения постепенно снижается. Во время этой стадии организм также может погибнуть.
Третье положение концепции Г.Селье заключается в том, что защитная реакция организма, если она будет чрезмерно сильной и продолжительной, может перейти в болезнь - болезнь адаптации.
Таковы основные положения концепции Г.Селье о стрессе, изложенные в его работах (1956,1960,1961а,б).
Несмотря на то, что Г.Селье указывал на важное значение нервной системы в развитии стрессовой реакции (Selye ,1954, 1956), согласно его теории все явления "неспецифической резистентности" сводятся к процессам, протекающим в системе гипофиз - кора надпочечников.
Это дало повод для справедливой критики. В монографии Г.И. Косицкого и В.М. Смирнова (1970) обобщены работы, критикующие односторонность подхода к изучению столь сложной проблемы. "Отмеченные Г. Селье гуморальные сдвиги не могут объяснить все явления резистентности. В настоящее время противопоставление гуморальных факторов нервным лишено смысла. Это два звена единого механизма регуляции, причем ведущим звеном является, как известно, нервная система" (Косицкий Г.И., Смирнов В.М., 1970).
Методы исследования эффекторного звена основных нейро-гуморальных регуляторных систем
Для изучения структуры и функций основных нейро-гуморальных регуляторних систем - симпато-адреналовой и парасимпатической - в фармакологической регуляции адренергического и хо-линергического процессов пытаются применять различные методические приемы и подходы. При этом ряд работ посвящен спепи-ально разработке и описанию методов изучения различных звеньев адренергических и холинергических процессов (Турпаев Т.М., Г9б2;Манухин Б.Н.,1968; Авакян О.М.,1977). Анализ методических приемов, применяемых для изучения адренергических и холинергических процессов - синтеза, высвобождения, захвата, рецепции, - показывает, что для данных целей используют как би« охимические, так и биологические методы. Последние, несмотря на известные недостатки (нестабильность тест-объектов, недостаточную воспроизводимость), необходимо применять в тех случаях, когда не разработаны достаточно чувствительные и специфичные химические методы. Так, биологические методы широко используют при изучении содержания ацетилхолина в биологическом материале (Кассиль Г.Н. и соавт.,1971; Виннипкая К.Б.и соавт., 1976), а также при первичном фармакологическом исследовании биологически активных веществ (Гацура В.В.,1974). Исследование действия препаратов на рецепторы также проводят с помощью биологических методов, используя различные органы и ткани животных в зависимости от наличия в них тех или иных групп рецепторов.
Некоторые из органов применяются особенно часто, что обусловлено, прежде всего, доступностью тест-объектов, специфичностью их реакции, сравнительно хорошей воспроизводимостью получаемых результатов.
Широко применяются в экспериментальной практике полоски аорты кролика (Furchgott, Bhadrakom ,1953).Этот тест-объект отличается потоянством реакции в течение длительного времени. Важным обстоятельством является также то, что имеется возможность одновременного приготовления нескольких препаратов и проведения, таким образом, параллельных опытов. Используют также полоски аорты других лабораторных животных: морских СВИНОК И кошек (Birmigliam, Szolcsanyi ,1965), крыс (Wolil et ai. ,1967). Применяют также полоски артерий: легочной (Bevan, Osher ,1965), коронарных (Тринус Ф.П.,Черкес А.И., І96І; Zuberbuhler, Bohr ,1965), мезентериальной (Абрамец И.И., Шовтута В.И.,1975).
Высокой чувствительностью к с -адреномиметикам и т6- адрено-блокаторам отличаются семявыносящие протоки и семенные пузырьки крысы и морской свинки (Rossum ,I965;Vohra, Reiffenstein, 1967).
Семенные пузырьки используют для изучения адреноблокиру-ющих свойств препаратов (Lewis, Miller , I966;Swamy, 1971). Преимуществом этих тест-объектов является то обстоятельство, что они практически лишены спонтанных сокращений.
Чувствительным гладко-мышечным объектом, широко используемым в фармакологической практике( Bickerton et al. Д962, 1966), в том числе для анализа действия б -адреноблокаторов ( Davies, v/ithrington , 1973), является полоска селезенки кошки.
Как уже было сказано, б-адренорецепторы, в соответствии с их чувствительностью к агонистам, подразделяют на две группы Л и _/ -аДРенорецепторы. Исследование действия химических веществ на эти рецепторы проводят на изолированных органах,а также и на интактных животных. Так, уменьшение тахикардии, вызванной изадрином, служит показателем -адреноблокирующей активности препартов (Levy, Ahlquist ,1961; Black et al. f 1965). По изменению артериального давления у кроликов, собак, кошек, крыс (Авакян О.М.,Норовян О.С.,197б;Норовян О.С.,Ава кян О.М.,1976) судят о действии препаратов наД-адренорецеп торы сосудов. :
. В качестве тест-объекта для изучения -адренорецепторов широко используется матка крысы (Levy, Toasi ,1963).Вместе с тем имеются данные, указьшающие на то, что в этом органе в стадии предтечки и после родов присутствуют возбуждающие -адре-норецепторы (Голанд Л.Г.,Манухин Б.Н.,1969).
В зарубежной литературе имеются также сведения об использовании в качестве тест-объекта отрезков радужной оболочки глаза различных животных, проявляющих высокую чувствительность к медиаторам холинергической и адренергической систем и их антагонистам (Bean, Bohr ,1941; Beaver et al. ,1962). Богатая симпатическая и парасимпатическая иннервация, присутствие в иннервирующем аппарате радужки глаза волокон, содержащих норад-реналин и ацетилхолинэстеразу (Eranco, Raisanen Д965; Тог bjorn,I965; Wepiere et al. Д975) дают возможность проводить на этом объекте исследование адренергической и холинергической системы. Особый интерес представляют работы, в которых используется интактная радужная оболочка глаза (Гацура В.В.,1974). В то же время, приспособления, используемые для регистрации реакций отрезков гладко-мышечных органов, изменяющих свои линейные размеры, не пригоды, так как реакция радужной оболочки проявляется в изменении размеров зрачка. Поэтому наиболее удобный способ регистрации реакций радужки - фотометрический (Quil liam ,1949;Barlow et al. ,1972).
Этот"способ фактически воспроизводит функцию зрительного анализатора: изменения отверстия в биологической диафрагме (радужной оболочке глаза) влияют на количество проходящего через нее света от искусственного излучателя, а фотоприемник регистрирует эти изменения.
Исследование природы адренорецепторов этой ткани как на целостном организме (Bermet et al. ,1961; Preundt ,1965), таки in vitro (Alphen et al.jI964;I5atil jg6g. Alphen 1976) показало, что радужка глаза содержит с»С - йуЗ-адреноре-цепторы. При этом в мышце дилятатора глаза человека обнаружены преимущественно т-адренорецепторы, а в сфинктере -оС - тлА-адренорецепторы (Alphen ,1976). У кошек также в дилятаторе имеются ?6-адренорецепторы, а в сфинктере - Аадренорецепторы (Alphen ,1964). Некоторые различия в соотношенииd-іл -адренорецепторов "сфинктера и дилятатора радужки глаза у различных животных, согласно литературным данным, связаны с видовой вариабельностью вегетативной иннервации данного объекта ( baties, Jacolowitz ,1966). Кроме того, показано, что этот гладко-мышечный объект содержит холинорецепторы М-типа (Barlow et al., 1972; Kloog et al. ,1979).
Экпериментальное обоснование фотометрического метода определения функционального состояния адрено- и холинорецепторов радужки глаза морской свинки
При проведении исследований с помощью разработанной нами методики изучения функционального состояния адрено- и холинорецепторов с использованием радужки глаза морской свинки были поставлены следующие задачи: - проверить возможность количественной оценки реакций избранного тест-объекта на действие - -адрено- и М-холиноактивных веществ; - выбрать фармакологические препараты для изучения медиаторно-рецепторного взаимодействия, определить эффективные их дозы и показать специфичность вызываемых ими изменений в радужке глаза; - получить количественные данные о чувствительности адрено и холинорецепторов и сравнить их с аналогичными показателями других биологических объектов. Исследование специфичности действия фармакологических препаратов на рецепторы радужки глаза морских свинок
В работе использовали следующие препараты. Норадреналин-агонистсС-адренорецепторов; алупент - агонист J$ -адренорецеп-торов; ацетилхолин - агонист холинорецепторов. В качестве бло-каторово -адренорецепторов использовали соответственно - фен-толамин, б-адренорецепторов - пропранолол и М-холинорецепто-ров - атропин.
Для доказательства специфичности действия агонистов на соответствующие рецепторы избранного тест-объекта, экспери -менты проводили следующим образом: тестирование нарастающих доз агониста - отмывание препарата до исходного уровня диаметра зрачка - введение антагониста - тестирование нарастающих доз агониста.
Норадреналин и фентоламин. Известно, что воздействие норадре-налина на радужную оболочку глаза вызывает расширение зрачка -мидриаз. Это действие осуществляется через оС-адренорецепторы и предупреждается специфическим блокатором фентоламином.
Результаты применения норадреналина для исследования чувствительности сб-адренорецепторов радужки глаза морских свинок представлены в таблице 5.
Увеличение в присутствии антагониста величины максимальной реакции можно, по-видимому, рассматривать как адаптивное изменение рецепторной системы мышцы зрачка глаза морской свинки на снижение чувствительности под влиянием этого антагониста. Возрастание величины максимальной реакции при увеличении константы приводит к тому, что в присутствии фентоламина не удается обнаружить достоверного изменения показателя реактивности адренергической системы - ее эффективности.
Алупент и пропранолол. Далее проводили исследование воздействия синтетического -адреномиметика алупента на рецепторы радужной оболочки глаза морских свинок. Для этого алупент тестировали в нарастающих в два раза концентрациях в диапазоне 0,24 - I,90 I0"UM. Доза блокатора была на порядок выше - 3,2 10 М. Результаты этого исследования приведены в таблице 6.
высокой - 0,24-0,05»10 М. Тестирование алупента на фоне пропранолола показало, что величина константы диссоциации увеличивается, то есть, чувствительностьуЗ-адренорецепторов радужки глаза уменьшается (р 0,05). Тот факт, что величина Рм не изменяется после воздействия пропранолола, свидетельствует, что антагонист блокирует -адренорецепторы по конкурентному типу ( рис. 12). Ингибиторная константа для пропранолола равна 4,77-2,14« 10 М. При взаимодействии пропранолола с/-адрено-рецепторами эффективность адренергической системы снижается в 2,2 раза (р 0,1).
Следует отметить, что алупент, также как и норадреналин вызывал расширение зрачка.
Ацетилхолин и атропин. В таблице 7 приведены результаты определения константы диссоциации комплекса ацетилхолин-холинорецептор, величины максимальной реакции, эффективности холинергической системы и ингибиторной константы для атропина.
