Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы. Продукты пчеловодства в апитерапии 9
1.1. Пчелиное маточное молочко и его препараты 9
1.2. Прополис и препараты на его основе 19
1.3. Апитерапия заболеваний органов дыхания 27
1.4. Общие вопросы апитерапии 30
2. Материал и методы исследования 33
2.1. Материал исследований 33
2.2. Методы исследований 36
2.2.1. Методы исследования клеточного иммунитета 36
2.2.2. Методы исследований in vitro 37
2.2.3. Исследования на изолированном органе 43
2.2.4. Исследование резистентности на модели альтерации (лучевая болезнь) 47
2.2.5. Исследование физиологической и биохимической активности препаратов при их включении в комплекс терапии больных ХНЗЛ 42
2.2.6. Статистическая обработка полученных результатов 55
3. Результаты и обсуждение исследований 57
3.1. Влияние исследуемых продуктов пчеловодства на клетки донорской крови 57
3.2. Воздействие исследуемых веществ на изолированные ткани 62
3.3. Влияние продуктов пчеловодства и их смеси на морфологические и иммунологические показатели крови крыс при облучении 67
3.4. Иммунологические и спирометрические показатели у больных ХНЗЛ при применении в комплексе стандартной терапии смеси маточного молочка и прополиса 77
Заключение 87
Выводы 88
Список литературы 91
- Пчелиное маточное молочко и его препараты
- Апитерапия заболеваний органов дыхания
- Исследование физиологической и биохимической активности препаратов при их включении в комплекс терапии больных ХНЗЛ
- Влияние исследуемых продуктов пчеловодства на клетки донорской крови
Введение к работе
Внедрение в медицинскую практику новых отечественных препаратов из продуктов пчеловодства (яд, маточное молочко, прополис, мед и пыльца) расширило возможности применения апитерапии для лечения ряда заболеваний. Возросший интерес к лечебным свойствам указанных препаратов связан как с их естественностью, так и с полифункциональным влиянием на самые различные системы организма. Известны нейротропные, кардиотропные, противовоспалительные, болеутоляющие и другие свойства яда пчел, прополиса, маточного молочка (Алескер, 1964; Люсов, Мещеряков, 1994; Крылов и др., 1990; Лудянский, 1994). Специфика действия препаратов пчелопродуктов определяется их сложностью многокомпонентного состава, высокой реактогенностью и, соответственно, множественностью биологических эффектов, связанных с воздействием на органы и системы живого организма, его биомембраны, субклеточные структуры, рецепторы, синапсы, ферментные системы.
Вполне естественно, что препараты продуктов пчеловодства, обладая высокой физиологической активностью с определенной чужеродностью для человеческого организма, оказывают выраженное влияние на гомеостаз человека. Они модулируют различные иммунные реакции: аллергию и анафилаксию, собственно иммунологические, специфические эффекты гуморального и клеточного иммунитета, неспецифическую реактивность, резистентность (Гущин, Шкендеров, 1985; Романова, 1988). Дальнейшее изучение иммунотропности и гомеотропности представляет принципиальный интерес для выяснения молекулярных, в том числе, и эволюционно-значимых механизмов действия ксенобиотиков, а также в плане широкого применения препаратов, сконструированных на их основе.
Кроме того, до сих пор нет ясности в аллергогенных свойствах пчелопродуктов. Для человеческих популяций характерно большое разнообразие в отношении чувствительности и сенсебилизации к продуктам пчеловодства. С одной стороны, известна повышенная чувствительность к ним и их препаратам (2-4% людей), с другой - толерантность, прежде всего пчеловодов, что очевидно, связано с десенсибилизацией при длительном воздействии этих продуктов. Так, указывается на успешное применение апитерапии при ревматоидных, воспалительных процессах (Шкендеров, Лудянский, 1990; Крылов, 1994). Так же противоречивы сведения о механизмах действия прополиса, маточного молочка пчел, хотя их терапевтическая эффективность хорошо известна (Вахонина, 1992, Лудянский, 1995).
В связи с указанным, в нашей работе проведены сравнительные исследования некоторых препаратов продуктов пчеловодства в плане оценки их эффективности на экспериментальных моделях заболеваний и при терапии больных, а также анализа механизмов полифункционального действия.
Работа проводилась в рамках плановых НИР кафедры физиологии и биохимии человека и животных (№ Госрегистрации 81062913, программа «Университеты России» - биология) и кафедры молекулярной биологии и иммунологии. Ряд специализированных методик нами были осуществлены на врачебных базах: пульмонологического отделения Дорожной больницы станции Горький-Московский (Плоткин Е.В.), клинической лаборатории Нижегородского Областного диагностического центра (Крыжановская Н.А.), Областного центра переливания крови.
Целью работы явилось изучение влияние пчелиного маточного молочка, прополиса и их комбинации на некоторые показатели резистентности организма человека и животных в норме и при- альтерации функций.
Для достижения указанной цели решались следующие задачи:
1. изучить влияние продуктов пчеловодства и их препаратов на иммунологические показатели крови in vitro: - определение физиологических и цитотоксических концентраций препаратов при действии на систему мононуклеаров крови человека; влияние на адгезивные свойства иммунокомпетентных клеток крови; влияние на розеткообразование выделенных Т-лимфоцитов; - влияние на комплементарную активность в условиях модельной сывороточной системы морских свинок; исследовать влияние продуктов пчеловодства на изолированную трахею крыс; проанализировать изменение показателей крови при ингаляции препаратов животным в условиях моделирования лучевой болезни у крыс; изучить изменение функции внешнего дыхания и иммунного статуса больных ХНЗЛ при включении прополиса и маточного молочка в комплекс терапевтических мероприятий.
Новизна научных исследований.
Впервые в условиях in vitro установлено модулирующее влияние пчелиного маточного молочка, прополиса и их комплекса на пул лимфоцитов. Впервые в условиях изолированной трахеи крыс выявлено непосредственное бронхорасширяющее действие смеси прополиса и маточного молочка. В условиях моделирования лучевой болезни у крыс показано, что комплекс маточного молочка и прополиса обладает более выраженным радиопротекторым действием по сравнению с отдельными продуктами пчеловодства. Впервые изучена эффективность включения прополиса и маточного молочка в комплекс терапии больных ХНЗЛ. Показано, что препараты продуктов пчеловодства повышают скорость восстановления функции внешнего дыхания и иммунного статуса больных по сравнению со стандартной терапией. Получен патент «Средство для ингаляции, обладающее бронхорасширяющим действием» с приоритетом от 15.09.2000-№2174002. Научно-практическая значимость работы.
Выявленные биостимулирующие свойства прополиса и маточного молочка пчел позволяют утверждать, что они является перспективной основой для создания препаратов, нормализующих неспецифическую резистентность организма. Обнаруженное иммуностимулирующее и радиозащитное свойство смеси предполагает возможность его использования в терапии различных заболеваний, связанных с ослаблением иммунитета и кроветворения. На основании полученных результатов обоснована перспектива разработки нового ингаляционного препарата, обладающего бронхорасширяющим действием.
Апробация работы.
По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 2 из списка изданий, рекомендованных ВАК. Основные положения работы доложены на VI, XI, XII международных научно-практической конференции по апитерапии (Рыбное, 1998, 2001, 2006), Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 150-летию со дня рождения академика И.П. Павлова (Санкт-Петербург, 1999), научной конференции молодых ученых научно-исследовательских учреждений и высших медицинских учебных заведений Поволжья и Северного Кавказа (Нижний Новгород, 1999), на расширенном заседании кафедры физиологии и биохимии человека и животных ННГУ (2010).
Объем и структура диссертации.
Диссертация состоит из введения, 3 глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследований), заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Список литературы включает 266 работ отечественных и 114 работ зарубежных авторов. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и содержит 11 рисунков и 16 таблиц.
Пчелиное маточное молочко и его препараты
Пчелиное маточное молочко - уникальный природный продукт, содержащий в концентрированном виде оптимизированные компоненты пищи, необходимые для развития и здоровья пчелосемьи в целом. В нем содержится около 400 наименований необходимых человеческому организму веществ. Главные из них - ненасыщенные жирные кислоты и незаменимые аминокислоты, протеины, микроэлементы, естественные антибиотики, гормоноподобные вещества, и ферменты (Лудянский, 1990; Крылов и др., 1995). При этом авторы отмечают, что их пропорции подобраны таким образом, чтобы обеспечить форсированный метаболизм, направленный на развитие структур и функций организма.
Если суммировать их данные, с учетом региональных и возрастных колебаний состава, различия методов анализа, - в нативном маточном молочке содержится 60-70% воды, соответственно, 30-40% сухого остатка, в котором больше всего белков - 10-52%, также много углеводов (12-40%) и липидов (2-10%). Кроме того, в значительном количестве содержатся свободные органические и аминокислоты (7-32%), а также минеральные вещества (до 2%). Остальные компоненты (до 16%) до сих пор не идентифицированы. В табл. 1, даны основные количественные параметры молочка, усредненные при исследовании ряда образцов маточного молочка, полученного в разных климатических зонах России (указанные в таблице 1 значения показателей существенно не отличаются от данных других авторов).
Белки маточного молочка электрофоретически разделяются на 5-8 фракций, которые в основном представлены альбуминами и глобулинами. При этом соотношение альбуминов к глобулинам достигает 2:1. Выявлены также липо- и кликопротеиды, вещества с гормоноподобным действием.
Ферменты представлены в незначительном, даже следовом количестве. Из аминокислот в маточном молочке обнаружены 22, причем из общего количества незаменимые достигают 7 процентов. Весьма высоко содержание пролина и оксипролина — их содержание иногда может достигать 80 процентов от суммы всех аминокислот молочка (Вахонина с соавт., 1988). Авторы указывает, что при хранении молочка содержание некоторых аминокислот возрастает, видимо, за- счет автогидролиза белка (увеличивается содержание лизина, серина, аланина, цистеина и орнитина). При старении маточного молочка в нем возрастает также содержание свободных сульфгидрильных групп (Овощников, 1990). Как отмечает Т.В. Вахонина (1992), количество сырого протеина в молочке стабильно и практически не изменяется сыром молочке 12 месяцев. При хранении 12-27 месяцев при температуре 6С количество свободных активных групп уменьшается ежемесячно лишь на 1 процент. С другой стороны автор утверждает, что количество сульфгидрильных групп при этом не возрастает, а уменьшается.
Кроме белков в маточном молочке широко представлены углеводные компоненты. Основная часть углеводов представлена обычным для медопродуктов набором моносахаридов - глюкоза до 10 процентов, так же, как и фруктоза. Меньше сахарозы (до 4 процентов) и доли процента других Сахаров - рибозы, мальтозы, трегалозы и т. д. (Шкендеров, 1985).
Количество углеводов в молочке возрастает по мере его старения (Вахонина, 1992). С другой стороны, увеличение пировиноградной кислоты, продукта превращения глюкозы, должно свидетельствовать об обратном процессе. Это касается и других Сахаров (Аллее с соавт., 1982). В частности, возрастает содержание глюконовой кислоты, видимо, вследствие окисления глюкозы под влиянием имеющейся в маточном молочке глюкооксидазы (Овощников, 1990).
Другой важной фракцией наряду с белковой и углеводной в маточном молочке содержится фракция липидов и органических кислот. В ней входят стерины (до 3%), глицерины - 0,8%, фосфолипиды - 1,3%, воск - 0,05%, жирные кислоты - до 6,5%. Стерины представлены в основном холестеролом и его производными. Важно отметить, что у пчел, как и у всех растительноядных насекомых, синтез холестерола не происходит по обычной схеме (фаонезол-сквален-холестерол), т. к. для его производства используются фитостерины (Ванг Баолонг, 1987).
Наибольшая часть липидов представлены жирными кислотами. В свою очередь, из их набора особо выделяется 10-гидроокси-2-деценовая кислота -ГОДК (до 90 процентов всех жирных кислот молочка). Бутенандт и Ремболд (1957), впервые выделившие ее из маточного молочка пчел, определили ее строение, а Баркер с соавт. (1959) доказали наличие в ней двойной связи в альфа-, бета-положении:
Ранее эта кислота в природных веществах была неизвестна. Ее специфичность, отражающая очень редкую форму для природных средств, может служить и служит одним из основных критериев подлинности маточного молочка пчел. Интересно, что если для липидов насекомых обычным состоянием липидов являются цис-состояния, то для этой 10-ГОДК, также как и для другой специфической кислоты молочка - 9-окси-2-деценовой, характерна трансформа.
Апитерапия заболеваний органов дыхания
О положительном опыте прополисотерапии при респираторных болезнях как инфекционной, так и неинфекционной этиологии сообщили С.Ю.Алешкайтис (1970), А.Н.Песчанский (1976), И.Богдан (1972), Л.С.Скалозуб и другие (1972), Г.Г.Качный (1980), В.П.Калиновский и другие (1987), И.Ф.Шеметков и другие (1987). Например, З.Х.Каримова, Е.И.Родионова (1975) провели наблюдения над 147 больными туберкулезом легких и бронхов, туберкулезным мезаденитом, бронхаденитом и туберкулезом почек, которых лечили прополисовым маслом, водно-спиртовым раствором прополиса и сочетанием препаратов прополиса с антибактериальными препаратами. На основании полученных данных исследователи сделали обобщение, «что прополис является хорошим дополнением в общем комплексе лечения больных, страдающих туберкулезом легких, бронхов, лимфоузлов и почек, способствует снятию ряда токсических проявлений туберкулеза, рассасыванию очаговых и инфильтративных наслоений и исчезновению БК». Ю.С.Танасиенко в 1969 г. применил для лечения 52 детей, в возрасте от 2 до 14 лет, больных хронической пневмонией, катаром верхних дыхательных путей, бронхиальной астмой, трахеитом, фарингитом, электроаэрозоли эмульсии спиртового раствора прополиса в персиковом, абрикосовом маслах и масле шиповника. В результате лечения у 14 больных хронической пневмонией были ликвидированы катаральные явления, у 10 детей, страдавших бронхиальной астмой, были купированы приступы, и лишь у одного был рецидив после гриппа, а при лечении больных катарами, фарингитами, трахеитами выздоровели все дети.
Благодаря выраженному антимикробному и иммуномодулирующему действию препараты прополиса с положительным результатом апробированы при туберкулезе (Каримова, 1963; Родионова, 1985), герпесе (Кришан с сотрудниками, 1976, 1985; Филипич, Ликар, 1985; Лудянский, 1994), гриппе (Жуку с сотрудниками, 1976, 1982; Кришан с сотрудниками, 1976, 1985), брюшном тифе, дизентерии, колиэнтеритах, сальмонеллезе (Деревич, 1985; Малюгина, 1985; Омаров, 1991; Тартаковская, 1991; Тришкова с сотрудниками, 1991), актиномикозе (Попеску с сотрудниками, 1985), бруцеллезе (Лудянский, 1994), трихомониазе (Корич, Любимова, 1965; Лудянский, 1994), при дерматомикозах (Большакова, 1972; Брэиляну с сотрудниками, 1985; Соркин, Вяхирев, 1974; Довжанский, 1985; Кендзия с сотрудниками, 1987).
Большинство исследователей и практических врачей полагает, что терапевтический эффект препаратов апитерапии при различных по происхождению заболеваниях в первую очередь обусловлен активацией функции гипо-физарно-надпочечниковой системы. Известно, что при коллагенозах, аллергических и других заболеваниях терапевтический эффект дают кортикосте-роиды, АКТГ и средства, способные стимулировать, подобно пчелиному яду, гипофизарно-надпочечниковую систему (салицилаты, "неспецифическая терапия раздражения" и т.д.).
Однако применение гормонов, хотя и дает быстрое и сильное лечебное действие, но оно кратковременно и сопровождается истощением соответствующих систем. Напротив, пчелиные препараты, стимулируя железы в соответствии с возможностями индивидуального организма, приводит их в деятельное состояние на продолжительное время. Давно известны неблагоприятные побочные последствия, вызванные применением глюкокортикоидных препаратов: например АКТГ, широко используемый стимулятор коры надпочечников, при хронических и аллергических заболеваниях снижает гипофи-зарно-надпочечниковую активность, угнетая секрецию гипофиза по системе обратной связи (Шкендеров, Василев, 1985). Как отмечают авторы, активация пчелиным ядом гормональной системы имеет преимущество в том, что она осуществляется путем активирования самых верхних "этажей" гипофи-зарно-надпочечниковой системы. В результате происходит перестройка реактивности организма, активируются его защитные силы. При этом секреция гормонов является лишь одним из звеньев сложной цепи приспособительных и защитных реакций организма в ответ на действие яда как естественного раздражителя.
Для объяснения терапевтических эффектов апитерапии нельзя не отметить экспериментально установленные их свойства снижать кровяное давление, увеличивать время свертывания крови, антиангинальное, антиаритмическое, гемостимулирующее, радиозащитное и т.д. действие (Омаров, 1995, 2006). Все указанные свойства, проявляющиеся как на целостном организме, так и на изолированных органах и тканях, могут быть следствием как общей реакции адаптации на воздействие пчелиных продуктов как стресс-агентов, так и непосредственного влияния компонентов на те или иные функции и структуры органов и тканей.
Из приведенного обзора данных по клиническому применению пчелопродуктов и их препаратов может создаваться впечатление о всесторонней эффективности. Однако считать апитерапию панацеей от всех болезней, наверное, будет ошибочным. Более того, и те заболевания, которые поддаются апитерапии, также дифференцируются по степени тяжести, времени возникновения и длительности и т.д. Видимо, более целесообразно заключить, что эффект апитерапии так же индивидуален, как и при воздействии других лекарств. Но у апипрепаратов много преимуществ перед рядом известных, применяемых сегодня средств. Наиболее важным является их естественность, создающая своеобразный, эволюционно подготовленный настрой систем организма к встрече с компонентами яда, молочка, прополиса.
Из результатов лечения следует, что использование нарастающих доз препаратов более эффективно, чем применение обычных дозировок. В то же время, при длительном применении не отмечено случаев интоксикаций и появления побочных реакций. Так, Бентон (1971), проведя специальный анализ физиологических реакций нормальных людей на пчелиный яд, показал, что в возрасте от 12 лет инъецирование яда два раза в неделю в течении 4,5 месяцев не приводит к патологическим отклонениям картины крови (кальций сыворотки, общее число лейкоцитов, лимфоцитов, эозинофилов, сегментных клеток, оксалат глютаминовой кислоты), мочи (рН, удельный вес), уровня кортизола, а также психического состояния. В то же время из обзора наблюдений следует, что при проведении лечебных курсов инъекций пчелиного яда 3-15% больных реагируют с появлением общей или местной аллергической реакции. При появлении таких реакций либо вначале, при биологической пробе, либо в процессе лечения врачи поступают различно: одни прекращают лечение пчелиным ядом, другие снимают аллергию медикаментозными средствами и продолжают апитерапию.
Исследование физиологической и биохимической активности препаратов при их включении в комплекс терапии больных ХНЗЛ
В ходе эксперимента было изучено влияние препарата на адгезивные свойства иммунокомпетентных клеток крови человека. Адгезия - это свойство клеток прикрепляться к определенным субстатам и задерживаться на них. Этот эффект взаимосвязан с «прилипанием» различных клеток в определенные синапсы. Об адгезивности судят по способности клеток прилипать к поверхности синтетических и биологических материалов, прикрепляться к эндотелию, вступать во взаимодействие друг с другом с образованием агрегатов (Маянский, 1989). Адгезивные свойства оценивались по проценту прилипания клеток к капроновому волокну.
Реактивы и оборудование: Раствор Хенкса, верографин, плотность 1,077, гепарин, 3% раствор уксусной кислоты, донорская кровь; центрифуга лабораторная MPW-340, центрифужные пробирки, пастеровские пипетки, камера Горяева, меланжеры, микроскоп МБИ-15У4.2, шприцы туберкулиновые, синтетическое волокно. Ход работы: Взвесь лейкоцитов получали по описанной выше методике (2.2.2.1.). На синтетическое волокно (20 мг), помещенное в туберкулиновый шприц (высота колонки 1 см), наносили 1 мл исследуемой взвеси клеток, предварительно обработанных - различными концентрациями исследуемых препаратов в течение 1 часа при 37С и отмытых от препаратов. Контролем служила взвесь необработанных клеток. В камере Горяева производили подсчет клеток до и после пропускания через волокно. Затем рассчитывали процент адгезированных на синтетическом волокне клеток. В основу метода положена способность клеток к адгезии к различного рода синтетическим материалам. Метод был нами несколько модифицирован: вместо пастеровских пипеток, предложенных Arnold (1974), были использованы туберкулиновые шприцы, что позволило стандартизировать условия постановки экспериментов, а именно: установить постоянную скорость протекания жидкости через синтетическое волокно. . Исследования на изолированном органе 2.2.3.1. Приготовление препарата трахеи крыс Животное обездвиживалось при помощи кратковременной ингаляции хлороформом (1 мл/кг 0,5% р-ра), а затем животное умертвлялось методом цервикальной дислокации (Крылов, Ястребова, 1998). Брюшная полость вскрывалась от лонного соединения до грудины при помощи ножниц. Изолированный препарат готовили в соответствии с правилами экспериментов на изолированных органах. Трахея захватывалась пинцетом и отрезалась ножницами. Затем отрезок трахеи, длинной 15 сантиметров помещалась в теплый гипокальциевый раствор Тироде при температуре 37-38,5С и разрезался на 5-6 равных частей. Каждая из них тщательно промывалась в растворе Тироде несколько раз (табл.4). Препарат прикреплялся к регистрирующей системе при помощи пружинящего зажима из тонкой проволоки (серфины) с плоскими концами. Прикрепление препарата осуществляется таким образом, чтобы концы отрезков трахеи оставались свободными, так как в противном случае постоянно образующаяся слизь не сможет оттекать, и будет растягивать стенки препарата, приводя к спонтанной двигательной активности. Препарат крепился за диагонально противоположные углы разрезов. Полная система для данных опытов состоит из двух основных элементов, связанных при помощи третьего. Первый элемент - это биологическая система, то есть устройство, позволяющее добиваться in vinro оптимальных стандартных условий для препаратов. Второй элемент - это система измерений, то есть измеряющее устройство, и, наконец, третий элемент -механическая связь между первым и вторым, то есть передача (рис.1). Вначале отрезок трахеи помещался в ванночку для препаратов, заполненную раствором Тироде, прикреплялся к регистрирующей системе при помощи серфины. Препарат отмывался перед началом эксперимента, и после окончания действия одного из веществ. Отмывание производилось 2-3 раза, после чего препарат выдерживался в течение нескольких минут. После этого проводили исследование раствора на препарате трахеи по следующим вариантам: Вариант 1. В 98.5 мл воды растворяли 0.5 г маточного молочка. В 0.8 г этилового спирта растворяли 0.2 г прополиса. Растворы маточного молочка и прополиса объединяли и перемешивали в течение 60 минут при комнатной температуре. Фильтровали через двойной марлевый фильтр. Вводили 1 мл смеси в термостатируемую камеру (температура в камере - 37С) объемом 40 мл, заполненную питательным раствором Тироде, с размещенным в камере препаратом изолированного отрезка трахеи крысы длиной 15 мм. Регистрировали расслабление препарата трахеи (увеличение длины). Эффект наблюдался через 1 мин. в течение 10 мин. на 1 относительную единицу. Увеличение длины препарата трахеи устранялось введением в кювету ацетилхолина в дозе 310" г/мл. Препарат изолированной трахеи восстанавливал первоначальную длину и реакцию на тест-контроль на ацетилхолин в дозе 10" г/мл, после трехкратного отмывания питательным раствором. Вариант 2. Условия исходные те же, но брали 93 г воды, 2 г маточного молочка, 4 г этилового спирта, 1 г прополиса. Эффект наступал через 1 мин., длится около 1.5 часа. Увеличение длины препарата на 7 отн. ед.. Эффект не устранялся дозой ацетилхолина. Препарат изолированной трахеи восстанавливал первоначальную длину и тест - реакцию на ацетилхолин (10" г/мл) после трехкратного отмывания питательным раствором. Вариант 3. Условия исходные те же, но брали 65 гр. воды, 5 г маточного молочка, 25 г этилового спирта, 5г прополиса. Эффект наступал через 30 сек, длился более 2.5 часов. Увеличение длины препарата на 9 отн.ед. Эффект не устранялся ацетилхолином (препарат изолированной трахеи не восстанавливал первоначальной длины в тест-реакции на ацетилхолин после многократного отмывания). Для сравнения в экспериментах использовали фармакологические агенты в физиологических концентрациях: ацетилхолин (5x10" г/мл), норадреналин (2х10"6 г/мл), адреналин (2x10"6 г/мл), димедрол (1х10"4 мг/мл), 3-блокатор (5x10" мг/мл).
Влияние исследуемых продуктов пчеловодства на клетки донорской крови
Как видно из таблицы 9, амплитуды сокращения гладкой мускулатуры при добавлении растворов прополиса 1+10 и 1+5 существенно не отличаются между собой (18,00+1,73 мм и 17,00+1,73 мм) также, как и амплитуды расслабления (9,00+1,73 мм и 8,33+1,53 мм). Таким образом, можно сказать, что по силе сокращения и расслабления водные растворы прополиса разной концентрации действуют одинаково, т.е. не выражен дозозависимый эффект. Возможно, действующие вещества прополиса в растворах разной концентрации, не отличаются по составу, поэтому оказывают одинаковое действие.
Исследования на гладкомышечном препарате трахеи показали, что введение композиции прополиса и маточного молочка вызывает двухфазную реакцию, которая характеризуется тем, что фаза сокращения препарата по длительности менее выражена, чем фаза расслабления (табл. 11)
Двухфазная реакция, полученная на изолированной трахее при введении смеси маточного молочка и прополиса может быть обусловлена многокомпонентностью прополиса и маточного молочка, входящих в состав исследуемой смеси продуктов пчеловодства.
Как видно из таблицы 11, при введении исследуемой смеси фаза сокращения препарата трахеи по длительности была менее выражена (31,33+1,53 мм), чем фаза расслабления (121,00+2,00 мм), а именно разница составляет 4 раза. Введение отдельно маточного молочка реакции сокращения не вызывало, тогда как фаза расслабления препарата хорошо выражена и составила 30,03+0,03 мм. Таким образом, из опытов следует, что в комбинированном препарате за фазу сокращения в большей мере отвечает прополис, а за расслабление трахеи -маточное молочко. При этом совместное их влияние приводит к более выраженной фазе расслабления гладкой мускулатуры.
Анализ выявленных фаз действия смеси маточного молочка и прополиса показал, что механизмы сокращения гладких мышц препарата сложны и основаны на гистаминоподобном свойстве прополиса, что было показано в исследованиях с раствором прополиса и димедрола. Кроме того, возможно, что механизмы сокращения гладких мышц препарата основаны и на холиномиметрическом свойствах смеси прополиса и маточного молочка (Ошевенский, Горелая, Сокольский, 1999).
Длительная фаза расслабления, вероятно, связана с блокадой веществами, содержащимися в маточном молочке, р - адренореактивных систем, которые ответственны за расслабление трахеи. (3 - адренореактивные системы воспринимают симпатические импульсы. Эти системы высокочувствительны к норадреналину и блокируются адренолитическими веществами. Исследования на гладкомышечном препарате трахеи показали, что смесь пчелопродуктов на фоне действия [3 - блокатора вызывал только фазу сокращения, длительностью 52,67+2,31 секунды. 3-адреноблокаторы оказывают специфическое блокирующее действие на эффекты, связанные со стимуляцией (3-адренореактивных систем. Вероятно, 3-адреноблокатор заблокировал адренорецепторы, отвечающие за расслабление, и наблюдалась только фаза сокращения.
Таким образом, можно сделать вывод, что при добавлении раствора прополиса 1+10 наблюдается максимальная длительность фазы сокращения (70,67+3,21 с), а минимальная - при добавлении исследуемой смеси (30,67+1,15 с) и раствора прополиса 1+5 (31,33+1,53 с). Максимальная длительность фазы расслабления наблюдается при добавлении смеси прополиса и маточного молочка (121,00+2,00 с), а минимальная - при добавлении раствора прополиса 1+5 (41,67+1,53 с). Амплитуда сокращения мускулатуры была максимальной при добавлении композиции пчелопродуктов (45,00+5,00 мм), минимальной при добавлении растворов прополиса 1+5 (17,00+2,00 мм) и 1+10 (18,00+1,73 мм). Максимальная амплитуда расслабления наблюдалась при добавлении смеси пчелопродуктов (17,67+2,52 мм), минимальная - при добавлении раствора прополиса 1+5 (8,33+1,53 мм) и 1+10 (9,00+1,73 мм).
Кроме того, на фоне действия димедрола, данные продукты пчеловодства вызывали только расслабление гладкой мускулатуры. Максимальная длительность фазы расслабления наблюдалась при добавлении раствора прополиса 1+10 (95,00+1,73 с) и смесь пчелопродуктов (95,80+4,30 с), тогда как минимальная - при добавлении водного раствора прополиса 1+5 (75,00+4,34 с). Амплитуда расслабления при добавлении исследуемой смеси была максимальной (9,73+0,97 мм), минимальной - при добавлении раствора прополиса 1+5 (5,27+0,12 мм).
Также было выявлено, что на фоне действия р-блокатора данные вещества вызывали только сокращение гладкой мускулатуры. Максимальная длительность фазы сокращения наблюдалась при добавлении смеси (52,67+2,31 с) и водного раствора прополиса 1+5 (53,07+1,01 с), тогда как минимальная длительность фазы сокращения была при добавлении раствора прополиса 1+10 (47,13+1,03 с). Амплитуда сокращения была максимальной при добавлении смеси прополиса и маточного молочка (9,03+1,47 мм), а минимальной - при добавлении раствора прополиса 1+5 (2,17+0,35 мм).
