Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I Обзор литературы 10
1.1. Морфофункциональная организация крупноклеточных ядер гипоталамуса 10
1.2. Современные представления об особенностях нейроэндокринной функции супраоптических и паравентрикулярных ядер 17
1.3. Межцентральное взаимодействие крупноклеточных ядер и влияние гормонов периферических желез на нейросекрецию 22
1.4. Регуляторный аспект изучения функций крупноклеточных ядер гипоталамуса и обратная функциональная связь с периферическими эндокринными органами 24
1.5. Регуляторы и модуляторы функционального состояния нонапептидергических центров гипоталамуса 30
ГЛАВА II. Материал и методики исследований 39
2.1. Организация экспериментов и характеристика содержания серий опытов 39
2.2. Морфометрические методы оценки функционального состояния нейросекреторных клеток исследуемых центров гипоталамуса 42
2.3. Определение уровня свободнорадикального окисления липидов 44
ГЛАВА III. Результаты исследований 46
3.1. Влияние антиоксидантов на морфометрические показатели функционального состояния нейросекреторных клеток крупноклеточных центров гипоталамуса 46
3.1.1. Влияние антиоксидантов на морфометрические показатели функционального состояния нейросекреторных клеток супраоптического ядра 46
3.1.2. Влияние антиоксидантов на морфометрические показатели функционального состояния нейросекреторных клеток крупноклеточной и мелкоклеточной зоны паравентрикулярного ядра 55
3.2. Исследование морфофизиологических показателей функционального состояния неиросекреторных клеток неироэндокринных центров гипоталамуса при дефиците половых гормонов и модулирующих эффектов сс-токоферола 68
3.2.1. Функциональное состояние неиросекреторных клеток супраоптического ядра 68
3.2.2. Функциональное состояние неиросекреторных клеток паравентрикулярного ядра 87
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов исследований 116
Выводы 124
Литература 124
- Современные представления об особенностях нейроэндокринной функции супраоптических и паравентрикулярных ядер
- Организация экспериментов и характеристика содержания серий опытов
- Влияние антиоксидантов на морфометрические показатели функционального состояния нейросекреторных клеток супраоптического ядра
- Функциональное состояние неиросекреторных клеток супраоптического ядра
Введение к работе
Актуальность темы. Исследованиями последних десятилетий установлена важная роль антиоксидантов в регуляции функциональных систем организма человека и животных (Журавлев И. А., 1975; Теплый Д.Л., 1979,1984,1990; Roberts H.J., 1979; Колосова Н.Г. с соавт., 1986; Сейфулла Р.Д., Борисова И.Г., 1990; Yamauchi R. et al., 1994; Бобырев В.Н. с соавт., 1994; Rei-ter R.J., 1995; McClain D.E. et al., 1995; Сторожок H.M., Кутузова И.В., 1996; Сторожок H.M. с соавт., 1996; Кирпатовский В.И. с соавт., 1996; Тюрина Ю.Ю. с соавт., 1998 и др.). Исследованиями многих авторов установлена важная роль эндогенного биоантиоксиданта а-токоферола в метаболических процессах организма и его отдельных клеток. Как универсальный компонент клеточных мембран, а-токоферол принимает непосредственное участие в поддержании стационарного уровня свободнорадикального окисления в биомембранах; регулирует их проницаемость, препятствует деструкции белков и активации ферментов, стимулирует биосинтез белков и выполняет другие важные функции (Владимиров Ю.А. и Арчаков А.И., 1972; Molenaar Т. et al., 1972; Журавлев А.И., 1982; Patnaik R.N., Nair P.P., 1977; Бурлакова Е.Б., Храпова М.Е., 1989; Капралов с соавт., 1993).
Способность витамина Е влиять на биосинтез и проницаемость клеточных мембран является важным основанием для предположения о том, что он может оказывать модулирующий эффект на секреторный процесс. Экспериментальные наблюдения многих авторов говорят о сложной, но недостаточно объяснимой зависимости между уровнем витамина Е в организме и синтезом половых гормонов. А. Шараф и X. Гомаа (Sharaf A., Gomaa Н., 1972) выявили особенности андрогенного и эстрогенного эффектов витамина Е. И.А. Редчен-ко (1978) обнаружил резкое уменьшение уровня а-токоферола в организме самок крыс после овариэктомии.
Ранее С. Симонеску с соавт.(Simonescu S et al., 1972; Simonescu S., 1974) установлено, что витамин Е стимулирует функцию гипофиза, яичников, регу- лирует половые циклы. Д.Л. Теплым (1979, 1984) было обнаружено гормоно- и дозозависимое действие витамина Е на разные функциональные системы лабораторных и других грызунов, в эффектах которого принимает участие половые гормоны. Были обнаружены и дозозависимые модулирующие эффекты ос-токоферола на функциональную активность НСК гипоталамических ядер (Теплый Д. Л., 1990).
Учитывая роль гипоталамо-гипофизарной системы в регуляции синтеза и выведения гормонов, можно предположить, что витамин Е оказывает не только непосредственный мембранотропный эффект, но и влияет на клетки, ткани и органы через изменение функционального состояния нейросекреторных клеток центров гипоталамуса.
Среди структур гипоталамуса, обеспечивающих центральную регуляцию гомеостаза, неослабевающий интерес вызывают супраоптическое (СОЯ) и особенно паравентрикулярное (ПВЯ) ядра. Благодаря специфике нервных связей нейромедиаторного и нейропептидного профиля, эти ядра могут выполнять ключевую роль в регуляции различных обменных, эндокринных и вегетативных функций (Сентаготаи Я., 1965; Сенчик Ю.И., 1969; Самсонова В.М., 1969; Поленов А.Л., 1971; Теплый Д.Л., 1984,1989,1990; ГоуфманЕ.Н., 1990; Акмаев И.Г., 1993 и др.). Однако влияние витамина Е на состояние нейросекреторного аппарата гипоталамуса изучено крайне недостаточно.
Витамин Е, обладая выраженными антиоксидантными и особенно антирадикальными свойствами (Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г., 1989) отличается и специфическим «витаминным» действием (Капралов А.А. с соавт., 1993). В связи с этим представляло интерес сравнить особенности эффектов природного (а-токоферол) и синтетического (ионол) антиоксидантов на функциональное состояние крупноклеточных ядер нейроэндокринной системы гипоталамуса белых крыс разного пола и изучить гормонозависимость эффектов витамина Е у интактных и подвергнутых предварительной гонадоэктомии животных.
Цель исследования состояла в изучении морфофизиологических критериев функционального состояния супраоптического и паравентрикулярного ядер гипоталамуса белых крыс в условиях напряжения антиоксидантной системы организма, вызванного природным и синтетическим антиоксидантами.
Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить влияние супрафизиологических доз биоантиоксиданта а- токоферола на показатели функционального состояния супраоптического и па равентрикулярного ядер гипоталамуса белых крыс.
Исследовать эффекты синтетического антиоксиданта ионола на нейро-секреторные клетки супраоптического и паравентрикулярного ядер.
Выявить роль половых гормонов и сезонных факторов в эффектах а-токоферола и ионола при воздействии антиоксидантов на нейроэндокринные центры гипоталамуса интактных самцов и самок белых крыс, а также крыс, подвергнутых гонадоэктомии.
Научная новизна: Впервые произведено сравнительное исследование эффектов биологического (а-токоферола) и синтетического (ионола) антиоксидантов на цитологические, морфометрические показатели функционального состояния нонапептидергических ядер гипоталамуса самцов и самок белых крыс.
Установлены половые различия в реакции крупноклеточных ядер гипоталамуса белых крыс на а-токоферол и ионол в норме и при дефиците половых гормонов, вызванных гонадоэктомией.
Впервые выявлены специфические особенности влияния на гипоталами-ческие нейроэндокринные центры витамина Е (а-токоферола) при сравнении его эффектов с влиянием синтетического антиокислителя - ионола.
Основные положения, выносимые на защиту;
1. Витамин Е изменяет функциональное состояние крупноклеточных ядер гипоталамуса белых крыс, изменяя нормальный физиологический баланс антиоксидантной и прооксидантной систем организма животных.
2. Специфичность, степень и направленность эффектов биологического и синтетического антиоксидантов на неироэндокринные центры гипоталамуса зависят от химической природы антиоксидантов и стероидного профиля, опре деляемого полом животных.
Теоретическая и практическая значимость: В результате исследования выявлена половая специфичность в изменениях функционального состояния крупноклеточных нонапептидергических центров гипоталамуса, что дает основание расширить представления о связи функции этих центров с репродуктивными процессами и роли в ней а-токоферола. Результаты опытов свидетельствуют об участии антиоксидантов в регуляции функционального состояния крупноклеточных центров гипоталамуса. Проведенные исследования углубляют представления о роли половых гормонов в механизмах действия антиоксидантов на нонапептидергические центры гипоталамуса и важны для понимания роли биоантиокислителей во взаимоотношениях компонентов гипота-ламо-гипофизарно-гонадной системы.
Полученные данные вносят вклад в понимание роли антиоксидантной системы организма в модификации функционального состояния нейроэндок-ринной системы при нарушении баланса анти- и прооксидантной систем и могут быть использованы для углубления представлений об общебиологическом значении антиоксидантного статуса животных разного пола. Полученные данные расширяют также теоретическую базу для применения антиоксидантов в медицине, ветеринарии и животноводстве.
Материалы диссертации включены в курс лекций по физиологии Астраханского государственного университета и Астраханской государственной медицинской академии.
Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на итоговых научных конференциях Астраханского государственного педагогического университета (1995-2002), Всероссийской научной конференции "Нейроэндокринология - 95" (Санкт-Петербург, 1995), Международной научной конференции "Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов" (Астрахань, 1996), Всероссийской научной конференции "Астраханский край: история и современность" (Астрахань, 1997), На XVII съезде всероссийского физиологического общества имени И.П. Павлова (Ростов-на-Дону, 1998), Международной научной конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем" (Санкт-Петербург, 1999), V Всероссийской конференции "Нейроэндокринология - 2000" (Санкт-Петербург, 2000), в журнале «Естественные науки» АГПУ (Астрахань-2000), международной конференции «Биолого-экологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» (Астрахань, 2000-2001), Всероссийской научной конференции «Биоразнообразие и биоресурсы среднего Поволжья и сопредельных территорий» (Казань, 2002).
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов исследования, обсуждения и выводов.
Общий объем диссертации 160 страниц с 39 таблицами и 36 рисунками. Список литературы включает 360 публикаций, в том числе 199 иностранных.
Современные представления об особенностях нейроэндокринной функции супраоптических и паравентрикулярных ядер
Основным критерием при идентификации нейросекреторных клеток является наличие в их цитоплазме секреторных гранул. В пределах перикарионов НСК СОЯ и ПВЯ млекопитающих гранулы были обнаружены многими авторами (Arcangelo Р., 1962; Kawabata I., 1966; Войткевич А.А., Дедов,И.И., 1967; Сенчик Ю.И., Поленов А.Л., 1967; Flament-Durand J., 1971; Сааков Б.А., и др., 1972).
Нейросекреторный материал крупноклеточных ядер состоит из гормонов ВП и ОТ и их белкового носителя - нейрофизина. Методом дифференциального центрифугирования доказано, что эти гормоны определяются во фракциях, которые содержат нейросекреторные гормоны (НСГ) (Lederis К., 1962; Dean C.R., 1968). Морфологические исследования, проведенные на крысах и собаках, показали, что НСГ в обоих ядрах имеют либо одинаковые размеры (Zam-bano D., de Robertis E., 1967; Smiechowska B. et al., 1972), либо в СОЯ они крупнее, чем в ПВЯ (Kalimo H.Z., 1971). Полиморфизм НСГ, в клетках этих ядер, связывают с различными факторами: видовыми или индивидуальными особенностями животных, действием фиксирующего раствора (Donev S., 1970), степенью зрелости гранул (Сенчик Ю.И., 1969), или наличием в них различных гормонов.
Считали, синтез ОТ преимущественно происходит в ПВЯ, а синтез ВП -в СОЯ (Борисова Е.А., 1977). В настоящее время рядом авторов (Асратян А.А. с соавт., 1990) установлено, что оба эти гормона могут синтезироваться и в СОЯ и в ПВЯ, т.е. речь идет о колоколизации функции этих ядер по выработке НСГ. В одной из работ (Mezey С, Kiss J.Z., 1991) даже показано, что у лакти-рующих крыс ОТ и ВП одновременно синтезируется в одних и тех же клетках СОЯ. Элементарные гранулы образуются в аппарате Гольджи перикарионов нейронов СОЯ и ПВЯ и с током аксоплазмы переносятся в ЗДГ (Polenov A.L. et al., 1992). Нейросекреторные гранулы значительно варьируют по размерам, форме и природе (Hokfelt N.A., 1967). Освобождение нейрогормонов происходит целиком или частично путем экзоцитоза, включающего растворение гранулярных и нейрональных мембран с последующим выходом содержимого гранул во внеклеточное пространство. Нейросекреторные нервные окончания в нейрогипофизе наряду с гранулами гормонов содержат мелкие везикулы, различные по природе и происхождению. Метаболические и митотические изменения в этих образованиях при различных гормональных состояниях указывают на включение этих клеток в процессы выделения гормонов. В гипоталами-ческих нейросекреторных клетках также отмечен чрезвычайно высокий уровень протеинового синтеза, интенсивная реакция на гидролитические и окислительные энзимы, высокое содержание цистеина. В связи с этим ПВЯ и СОЯ гипоталамуса рассматривают как единую часть нейроэндокринной системы.
Первые иммуногистохимические исследования ГГНС появились в начале 70-х годов (Watkins W.B, 1975). В дальнейшем применение иммунной гистохимии позволило выделить непосредственно вазопрессин- и окситоцин-реактивные структуры и описать их локализацию в гипоталамусе и вне его, а также в ЗДГ у животных различных видов (Vandesande F., a Dierikx К., 1977; Sofroniew M.V. et al., 1979; Van Leeuven F. et al, 1979; De Kloet R. a De Wied D., 1980; Merker G. et al., 1980; Stoeckel M.E. et al, 1982; Van Leeuven F. a Gaffe R., 1983;). Однако применяемая окраска паральдегид-фуксином по Гоммори-Габуне позволяла дифференцировать окситоцинергические (ОЕ) и вазопрессинер-гические (BE) клетки. Между тем, имеются многочисленные данные, указывающие на различные, часто противоположные, эффекты ОТ и ВП (De Kloet R. a De Wied D., 1980; Telegdy, 1982; Sawchenco P.E., Swanson Z. W., 1983; Kpac-новская И.А., 1984; Leng Q. et al., 1989; Ciosek Joanna, 1992). BE и ОЕ клетки в пределах СОЯ и ПВЯ в экспериментальных условиях могут изменяться как од-нонаправлено, так и различным образом (Красновская И.А., 1984). И.А. Крас-новская (1985) показала, что в ростральных отделах СОЯ ОЕ и BE клетки расположены вперемешку, ОЕ клетки на этом уровне составляют приблизительно 50% всех клеток СОЯ. Каудальные ОЕ клетки смещаются более дорсально, хотя четкой границы между BE и ОЕ не существует. При морфологическом исследовании клеток СОЯ, автор значимых отличий ОЕ и BE клеток не выявила, хотя заметила, что перикарионы ОЕ клеток несколько мельче, BE клеток. В ПВЯ BE клетки были сосредоточены, в основном, в дорсолатеральной ее части, ОЕ составляли вентромедиальный отдел ПВЯ. ОЕ клетки, преобладающие в вентромедиальной части ПВЯ, по размерам перикарионов и ядер оказались значительно меньше BE клеток, составляющих дорсолатеральную часть ПВЯ.
Л.А. Кожевникова, А.Ф. Косенко, (1987) при изучении ответа ГГНС на введение ВП показали, что введение лизин-ВП способствовало накоплению нейросекреторного вещества в НСК СОЯ и ПВЯ и уменьшению его в ЗДГ. Это позволило авторам предположить, что ВП ингибировал отток нейросекреторного вещества из СОЯ и ПВЯ гипоталамуса и способствовал выведению НСВ из ЗДГ, что свидетельствовало об интенсивном сбросе в общий кровоток ней-рогормонов. Существует большое количество исследований развития вазо-прессинергической системы у разных видов млекопитающих (Choy V.J., Wat-kins W.B., 1979; Whitnall М.Н. et al., 1985; Laurent F.M. et al., 1989; Trembleau A. et al., 1995; и др.). H. Okamura с соавторами (1983) выполнили на мышах работу, в которой определили точные сроки образования вазопресинергических нейронов гипоталамуса, показав что нейроны СОЯ и ПВЯ образуются в одно и то же время - в первые дни второй половины внутриутробного развития. Предполагают, что источником этих нейронов являются нейроэпителиальные клетки ромбовидного расширения Ш-го желудочка на уровне вентральной та-ламической бороздки (Altaian J., Bayer S.A., 1978, 1986). Первые нейроны, экс-прессирующие специфические маркеры - мРНК и ВП и сам пептид, появляются в СОЯ одновременно с окончанием процесса образования BE нейронов из нейроэпителиальных клеток-предшественников, у мышей - на 15-16-й день развития (Yamashita Т. et al., 1988; Hyodo S. et al., 1992). Использование общего маркера для вазопрессинергических и окситоцинергических нейронов - ней-рофизина, позволило уточнить, что они начинают выделяться в СОЯ к концу 10-й недели внутриутробного развития, в добавочные ядра - на 13-й неделе и в ПВЯ - на 14-й неделе (Mai J.K. et al., 1997). Было установлено, что из нейро-эпителия Ш-его желудочка вазопрессинергические нейроны мигрируют в каудальную часть СОЯ (Reppert S.M., Uhl G.R., 1988; Laurent F.M. et al., 1989; Buijs R.M., 1992). После выселения вазопрессинергических нейронов в СОЯ, они, также, появляются в ПВЯ вокруг ромбовидного расширения Ш-го желудочка (Yamashita Т. et al, 1988; Buijs R.M., 1992), но могут выселяться и в добавочные ядра, располагающиеся между СОЯ и ПВЯ (Trembleau A. et al., 1995; Гриневич В.В., 1997). Предполагают, что образование окситоцинергических нейронов происходит таким же образом, как и вазопрессинергических, но с незначительной задержкой во времени (Altaian J., Bayer S.A., 1986; Laurent F.M. et al., 1989; Trembleau A. et al., 1995). По мнению M.H. Whitnall с соавторами (1985) в СОЯ окситоцинергичекие нейроны занимают дорсальное положение, так как вентральная часть занята вазопрессинергическими, а в ПВЯ ок-ситоцинергические нейроны распределены по периферии ядра. По мнению Gibbs D.M. с соавторами (1984) источником ВП в портальном кровотоке считается мелкоклеточная часть ПВЯ, а источник ОТ авторами точно не установлен. Используя морфометрическую характеристику развития ИСК СОЯ и ПВЯ гипоталамуса у крыс в ходе постнатального онтогенеза, О.А. Данилова, М. Христич и Е.В. Черниговская (1982) обнаружили уменьшение количества нейросекрета в перикарионах СОЯ и ПВЯ с возрастом. Темпы нарастания объема ядрышка были более значительны в СОЯ, чем в клетках ПВЯ, которые имели более мелкие ядрышки и больший процент полиядрышковых НСК, на основании чего авторы заключили о неодинаковом функциональном значении СОЯ и ПВЯ. О.А. Данилова, И.А. Држевецкая, A.M. Коровина (1983) показали, что у стареющих крыс при физической нагрузке выделение нейрогормонов происходит, в основном, из области ЗДГ в общий кровоток. В большей степени активировались НСК СОЯ и реакция протекала по типу затяжного стресса, ПВЯ вовлекалось позже.
Организация экспериментов и характеристика содержания серий опытов
Изучалось функциональное состояние супраоптического и паравентри-кулярного ядер гипоталамуса интактных белых крыс в условиях напряжения антиоксидантной системы, вызванного 14 - дневным введением per os 5% масляного раствора D, L, а-токоферолацетата в дозе 2 мг/ЮОг массы тела и ионола (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол) - в эквивалентной D, L, а-токоферолацетату дозе - 4 мг/100 г массы тела животного. Антиоксиданты вводили ежесуточно в одно и то же время.
Выбранная доза витамина Е обусловлена данными об оптимальном проявлении антиоксидантных свойств витамина при разовом введении не более 5 мг на животное средней массой тела 200 г (Yasuda М. at. al., 1979) и его максимальном уровне в тканях через 12 часов после перорального введения (Carpenter М.Р., 1971). В крупноклеточной зоне ПВЯ изучались объемы ядер и ядрышек НСК ЛКС и МКС субъядер, а в мелкоклеточной - ПВМС и ММС субъядер. II серия опытов (86 животных, зимний период). Изучалось влияние антиоксидантов на нейросекреторные клетки крупноклеточных (СОЯ и ПВЯ) центров гипоталамуса интактных крыс и подвергнутых гонадоэктомии после двухнедельного воздействия per os D, L, a-токоферолацетатом, в дозе 2 мг/100 г массы тела животного и ионолом, в эквивалентной дозе О,ь,а-токоферолацетату, - 4 мг/100 г. Животных подвергали гонадоэктоимии за две недели до введения антиоксидантов. Для исключения возможных эффектов оперативного вмешательства одну из групп животных подвергли ложной гонадоэктомии. Критериями оценки функционального состояния СОЯ, кПВЯ и мПВЯ, являлись: 1. изменение объемов ядер НСК; 2. изменение объемов ядрышек НСК; 3. количественная оценка состояния НСК по соотношению центрально-расположенных, эксцентричных и эктопированных ядрышек; 4. соотношение одно- и полиядрышковых НСК; 5. полуколичественный анализ содержания РНК в НСК СОЯ и ПВЯ гипоталамуса; 6. качественная оценка состояния синтеза нейроскерета в НСК крупноклеточных ядер гипоталамуса белых крыс. Для оценки функционального состояния нейроэндокринных центров гипоталамуса при помощи световой микроскопии и изучения морфометрических показателей головной мозг животных после декапитации фиксировали в смеси Буэна с последующей проводкой (Венгерская -1). После заливки мозга в парафин приготавляли серийные срезы гипоталамуса, которые окрашивали параль-дегидфуксином по Гейденгайну с последующей докраской по Гомори-Габу для выявления нейросекрета в крупноклеточных (СОЯ, ПВЯ) нонапептидерги-ческих центрах гипоталамуса.
Для характеристики функционального состояния ИСК необходима оценка содержания нуклеиновых кислот, так как гормоны, вырабатываемые НСК, имеют белковую природу. С целью выявления нуклеиновых кислот головной мозг крыс фиксировали в этиловом спирте или смеси Карнуа. После заливки мозга в парафин были изготовлены серийные срезы гипоталамуса с последующей окраской галлоцианин-хромовыми квасцами по Эйнарсону (Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996). Было учтено, что изменение количества РНК в цитоплазме нейроцитов является одним из существенных и постоянных показателей, характеризующих повышение или снижение функциональной активности НСКГГНС (Охонская И.А. (Красновская), 1972).
Метод оценки нейросекреторного материала в НСК, как способ выявления функциональных сдвигов ГТНС, рассматривался с позиции качественной характеристики процесса нейросекреции в сочетании с количественным мор-фометрическим методом (Майорова В.Ф., 1964; Константинова М.С., 1965; Фофонова К.А., 1974; Поленов А.Л., 1974; Сенчик Ю.И., 1976; Автандилов Г.Г., 1980; Данилова О.А с соавт., 1982; Красновская И.А., 1989 и др.).
Содержание НСВ и РНК в НСК оценивали визуально по интенсивности окраски в баллах под микроскопом с увеличением 1350х. Выделяли две градации клеток по количеству РНК и НСВ: темные и светлые. По каждому ядру подлежало оценке не менее 50 клеток от каждого животного. Подсчет одно- и полиядрышковых клеток, а также клеток с центральнорасположенными, эксцентричными и эктопированными ядрышками проводили на срезах под микроскопом БИОЛАМ - И при увеличении 900х, с помощью окулярной сетки на микроскопе.
О возможном развитии стрессорной реакции животных судили по изменению количества эозинофильных гранулоцитов в крови (проба Торна на эози-нопению). После окрашивания мазков крови жидкостью Дунгера (Ронин B.C., Старобинец Г.М., 1989) в камере Горяева с последующим пересчетом числа эо-зинофилов в 1 мм3 крови.
Влияние антиоксидантов на морфометрические показатели функционального состояния нейросекреторных клеток супраоптического ядра
Воздействие ос-токоферолом привело у самцов к уменьшению размеров ядер НСК (р 0,001) и увеличению размеров ядрышек (р 0,001). У самок размеры ядер и ядрышек НСК под влиянием а-токоферола уменьшились (р 0,01 и р 0,05 соответственно) (табл. 1,3, рис. 1,3). Двухнедельное введение ионола сопровождалось значительным увеличением объёмов ядрышек НСК как у самцов, так и у самок (р 0,001 в обоих случаях), в то время как объёмы ядер НСК у самцов под влиянием ионола достоверно уменьшились (р 0,001), а у самок -не изменились (р 0,5) (табл. 1,3, рис. 1,3).
Результаты гистографического анализа подтвердили данные морфомет-рии. Распределение размеров ядер и ядрышек НСК СОЯ указывает на смещение кривой распределения размеров ядер у самцов влево, развитие бимодаль-ности, сужение диапазона и появление эксцессивности кривой. Распределение размеров ядрышек НСК отличалось резким смещением гистограммы вправо, увеличением диапазона распределения и появлением эксцессивности кривой. Для гистограммы объёмов ядер самок, получавших сс-токоферол, характерны отрицательный эксцесс и асимметрия; в распределении размеров ядрышек НСК обнаружилась двувершинность (табл. 2,4, рис. 2,4).
У самок произошло смещение кривой распределения размеров ядер вправо, сформировался положительный эксцесс, но более выраженными оказались изменения гистограммы размеров ядрышек НСК: диапазон распределения увеличился и сместился вправо, обнаружилась бимодальность и отрицательный эксцесс (табл. 2,4; рис. 2,4).
Для углубления анализа результатов изменений функционального состояния ядер и ядрышек НСК, вызванных антиоксидантами, был применён метод дисперсионного анализа, с помощью которого удалось установить долю влияния исследуемых факторов (ос-токоферола и ионола) в общем разнообразии изучаемого признака, а так же выявить - в какой степени а-токоферол и ионол влияют на изменение функционального состояния ядер и ядрышек ней-роцитов СОЯ. Анализ показал, что а-токоферол достоверно влияет на изменение размеров ядер НСК СОЯ самцов (р 0,05) и доля его влияния в общем разнообразии факторов составляет 47%. Сила влияния а-токоферола на изменение размеров ядрышек была меньшей (23%). У самок а-токоферол оказал достоверное влияние на изменение размеров ядер (р 0,01) с силой 70%, а на ядрышки подействовал со значительно меньшей силой (19%). Сила влияния ионола на морфометрические показатели ядер НСК СОЯ самцов составила всего 15%, однако, влияние ионола на изменение размеров ядрышек оказалось значительным (87%) и было в высшей степени достоверным (р 0,001). Для ядер НСК самок сила влияния ионола составила 38% , а для ядрышек - 56% (р 0,01) (табл. 5,6).
С целью углубления анализа результатов карио- и кариолометрии, определяющих функциональную активность НСК нейроэндокринных центров гипоталамуса подсчитывалось число клеток с центрально-расположенными, децентрализованными, эктопированными и множественными ядрышками (Anderson C.U., 1990). НСК СОЯ с эктопированным и децентрализованным ядрышком. Известно, что эктопия и эксцентричное положение ядрышка в ядре свидетельствуют об активации процесса синтеза белка в клетке. У самцов под действием а-токоферола наблюдалось некоторое увеличение процента клеток с эксцентричным (70%) и эктопированным (3%) ядрышками в сравнении с контролем (64% и 2% соответственно). Воздействие ионолом повлекло за собой незначительное увеличение числа клеток с эксцентричным ядрышком (66%) и уменьшение числа клеток с эктопированными ядрышками (1%). Иначе отреагировали НСК самок: воздействие а-токоферолом привело к уменьшению числа клеток с децентрализованным ядрышком до 63% (в контроле -73%), а количество клеток с эктопированными ядрышками не изменилось (3%, в контроле - 3%). Действие ионола повлекло за собой увеличение процента клеток с эктопированным (6%) и эксцентрично расположенным ядрышками (81%) (табл. 7,8). Полиядрышковые НСК СОЯ. В наших опытах под действием сс-токоферола как у самцов так и у самок выявлено уменьшение количества полиядрышковых клеток НСК (5% и 4% соответственно). Под действием ионола процент этих клеток также уменьшился (4% и 5% соответственно) вне зависимости от пола (табл. 7,8). Полученные результаты свидетельствую о положительной корреляции между числом полиядрышковых клеток и увеличением биологической деятельности НСК под влиянием антиоксидантов разной природы. Содержание РНК и НСВ в НСК СОЯ. Исходя из полученных нами данных: а-токоферол (и особенно ионол) способствовали увеличению числа темноокрашенных клеток у самцов (51% и 64% соответственно, в контроле - 42%). У самок, получавших а-токоферол, количество темно-окрашенных клеток оказалось меньше (44%), чем в контроле (53%). У самок количество НСК с большим содержанием РНК в НСК после воздействия ионолом составило 56%. Увеличилось процентное соотношение темно- и светлоокрашенных НСК (табл. 7,8). Наиболее распространено утверждение, что при повышении функциональной активности НСК количество НСВ в них уменьшается, либо задерживается в перикарионе в связи с преобладанием синтеза НСВ над его выведением из НСК (Поленов А.Л., 1968, 1974, 1993; Rodeck Н., 1969; Плужников Л.Т., 1978; Онищенко Л.С., 1984; Гарлов П.Е. с соавт., 1994; Поленов А.Л. с соавт., 1996). В наших опытах в НСК СОЯ у самцов, получавших а-токоферол, содержание НСВ уменьшилось (32%, в контроле - 40%), а у самок, практически не изменилось (54%, в контроле - 50%) (табл. 7,8). Содержание НСВ в клетках СОЯ у крыс, получавших ионол (вне зависимости от пола) заметно отличались от исходного уровня, обнаружив заметное уменьшение его содержания (особенно у самок) (табл. 7,8).
Функциональное состояние неиросекреторных клеток супраоптического ядра
У самцов под действием антиоксидантов количество темноокрашенных клеток увеличилось до 80% - 85%. В контроле всего 40%. У кастрированных животных и животных, которые после кастрации получали витамин Е и ионол, произошло так же значительное увеличение числа темноокрашенных клеток (85%, 72% и 86% соответственно). У подвергнутых ложной кастрации, количество темноокрашенных клеток мало отличалось от контроля (32%).
У самок, получавших а-токоферол, число темноокрашенных клеток в сравнении с контролем изменилось незначительно (32% и 40% соответственно). Ионол же, напротив, способствовал заметному увеличению числа темноокрашенных клеток до 65%. У овариэктомированных крыс содержание РНК в НСК не изменилось (39%), а введение витамина Е таким животным привело к уменьшению числа "темных" клеток до 21%, напротив, воздействие ионолом после овариэктомии способствовало росту числа темноокрашенных клеток (86%). ЛГЭ заметного влияния на синтез РНК в НСК СОЯ самок не оказа-ла(46%) (табл. 31).
НСК СОЯ с эктопированным и эксцентричным ядрышком. У самцов под действием а-токоферола наблюдалось некоторое увеличение процента НСК с эксцентрично расположенным ядрышком (91%) и уменьшение - с эктопированным (5%) в сравнении с контролем (82% и 7%). Аналогичный эффект наблюдался и под влиянием ионола (91% и 3% соответственно). У кастрированных самцов, а также самцов, получавших витамин Е и ионол после кастрации, произошло некоторое увеличение числа НСК с эксцентричным ядрышком (91%, 87%, 83% соответственно). Количество клеток с эктопированным ядрышком уменьшилось только при тестэктомии (3%), а у кастрированных самцов, получавших а-токоферол, число клеток с эктапированным ядрышком от контроля не отличалось (7%).В группе кастрированных крыс получавших ионол число НСК с эктопированным ядрышком заметно возросло (15%). У животных, подвергавшихся ЛГЭ, число клеток с эксцентричным и эк-тапированным ядрышком не изменилось (табл. 31).
Влияние ос-токоферола на самок существенно не изменило число клеток с эксцентричным (87%) и с эктапированным ядрышком (9%, в контроле 89% и 6% соответственно). Действие ионола сопровождалось некоторым увеличением процента НСК с децентрализованным ядрышком (92%). У овариэктомиро-ванных крыс, а также крыс получавших витамин Е после овариэктомии, произошло уменьшение числа клеток с децентрализованным ядрышком (85% и 86% соответственно). В результате действия ионола на гонадоэктомированных крыс, а также у ложногонадоэктомированных животных число НСК с эксцентричным ядрышком изменилось незначительно (табл. 31). Полиядрышковые НСК СОЯ. Под действием антиоксидантов число полиядрышковых НСК в СОЯ самцов и самок изменилось незначительно (табл. 31) Как тестэктомия, так и введение антиоксидантов кастрированным животным сопровождалась резким уменьшением числа полиядрышковых клеток (1%, 1% и 0% соответственно, в контроле - 6%). В тех же условиях изменение числа ядрышек в НСК самок было незначительным. Как и незначительными были изменения числа полиядрышковых клеток СОЯ у ложногонадоэктомированных животных (табл. 31). Следовательно, кастрация животных привела к увеличению размеров, как ядер, так и ядрышек у самцов, а овариэктомия - к их уменьшению. Ведение а-ТФ и И не способствовало каким-либо изменениям в размере ядер и ядрышек у животных обоего пола по сравнению с аналогичными показателями предыдущего опыта с животными, не подвергшихся гонадоэктомии. Данные гистографического анализа подтверждают данные морфометрии. Дисперсионный анализ показал более выраженное влияние комбинации кастрации на фоне а-ТФ на объемы ядер и ядрышек, увеличивая их, в отличие от овариэктомированных животных. Содержание РНК у кастрированных животных и получавших а-ТФ и И на фоне кастрации заметно увеличилось, что свидетельствует о повышении функциональной активности клеток. У овариэктомированных животных и животных, получавших а-ТФ, содержание РНК мало изменилось, а сочетание данных факторов привело к уменьшению содержания РНК у самок. Под действием И количество РНК увеличилось как под действием овари-эктомии, так и при сочетанном действии данных факторов Антиоксиданты у кастрированных животных вызвали увеличение количества НСК СОЯ с эксцентричным ядрышком, в отличие от самок, аналогичные показатели которых уменьшились. Результаты проведенных исследований не выявили принципиальных половых отличий в реакции НСК СОЯ самцов и самок при действии И. Однако, отмечены половые различия в реакциях НСК этого центра на а-ТФ и действии гонадоэктомии.
