Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Динамика изменения концентрации рецепторов к экстрадиолу и тестостерону у самок и самцов крыс в ходе постнатального развития 52
а) Определение рецепторов к эстрадиолу в ЦНС у самок крыс в постпубертатный период 54
б) Динамика изменения концентрации эстрадиол- связывающих мест в мозге самцов крыс в период неонатального развития 67
в) Связывание 3Н-тестостерона в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса и коры мозга самцов крыс в ходе неонатального развития 76
Глава 2. Влияние неонатальной ацдрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-эстрадиола в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса . 85
Глава 3. Влияние неонатальной андрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-тестостерона в цитозольной и ядерной фракциях гипоталамуса 103
Заключение 115
Выводы. 129
Указатель литературы 131
- Динамика изменения концентрации эстрадиол- связывающих мест в мозге самцов крыс в период неонатального развития
- Связывание 3Н-тестостерона в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса и коры мозга самцов крыс в ходе неонатального развития
- Влияние неонатальной ацдрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-эстрадиола в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса
- Влияние неонатальной андрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-тестостерона в цитозольной и ядерной фракциях гипоталамуса
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Одной из наиболее важных проблем современной биологии и медицины является проблема половой дифференцировки мозга. Большой интерес исследователей разных направлений к изучению этого вопроса вызван тем, что дифференцировка мозга связана с основными процессами жизнедеятельности взрослого организма. Изучение половой дифференцировки мозга важно и в свете медицинских проблем, так как доказано, что воздействие на нейроендокринную систему гормонов или лекарственных препаратов в период ее развития могут вызвать необратимые изменения в регуляции гонадотропной функции гипофиза, проявляющиеся после достижения зрелого возраста.
Физиологические аспекты процесса становления пола достаточно полно освещены в литературе: показано наличие в гипоталамусе двух центров регуляции секреции гонадотропинов и полового поведения, которые дифференцируются по мужскому или женскому типу в зависимости от уровня андрогенов в крови. Однако более глубокий молекулярный механизм половой дифференцировки мозга окончательно не выяснен.
К настоящему моменту доказано, что действие гормонов в органах-мишенях, в данном случае в гипоталамусе, опосредуется специальными белками-рецепторами, которые обеспечивают избирательное связывание половых гормонов, инициацию и реализацию специфического гормонального эффекта в клетке. Естественно было предположить, что рецепторные белки являются одним из звеньев молекулярного механизма половой дифференцировки гипоталамуса.
Имеющиеся в литературе данные о половых различиях в концентрации рецепторов к эстрогенам и андрогенам в гипоталамусе самцов и самок крыс в период половой дифференцировки мозга, а также о зависимости уровня эстрогенных и андрогенных рецепторов у половозрелых животных от их гормонального статуса в "критический" период развития, противоречивы и немногочисленны (McGuire,Lisk,1969; S4erko,1974;McEwen et al.,1977; Moguilewsky, Raynoud, 1977; Greenstein, 1978 ).
Авторы приводят данные, касающиеся в основном определения числа связывающих мест в цитоплазматической фракции, тогда как степень функционального ответа ткани-мишени на воздействие гордона прямо коррелирует с количеством ядерных гормон-рецепторных комплексов Кроме того, эти работы не дают цельного представления об особенностях функционального состояния гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы в "критический" период развития.
Цель и задачи исследования» Для выявления и доказательства необходимости присутствия рецепторов к эстрадиолу и тестостерону в процессе половой дифференцировки ЦНС и в реализации эффекта гормонов на физиологические функции организма у половозрелых самцов и самок крыс целесообразно было провести исследование характеристик этих рецепторов у неонатальных животных, а также у взрослых особей в областях гипоталамуса, ответственных за тонический и циклический тип секреции гонадотропинов.
С этой целью в работе изучали динамику изменения концентрации цитоплазматических и ядерных рецепторов к эстрадиолу и тестостерону в гипоталамусе самцов и самок крыс с I по 5 день неонатального развития. У половозрелых интактных и неонатально андро-генизированных самок, а также у интактных и неонатально кастрированных самцов крыс определяли рецепторы к половым стероидам в преоптико-переднегипоталамической области и области аркуатного ядра - срединного возвышения.
Научная новизна. В настоящей работе впервые проведен одно временный комплексный анализ центральных и периферических звеньев гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы у самок и самцов крыс в "критический" период развития и у половозрелых животных, гормональный фон которых в неонатальном возрасте был изменен.
Полученные результаты свидетельствуют, что в цитоплазмати -ческой и ядерной фракциях гипоталамуса самцов и самок крыс в неонатальном возрасте присутствуют рецепторы к эстрадиолу и их максимальное число отмечается в первый день после рождения у самцов. Эта величина значительно превышает концентрацию рецепторов к тестостерону у самцов и количество эстрадиол-рецепторных мест у самок в этот же период жизни. Установлено, что нормальное функционирование гипоталамических центров регуляции тонической и циклической секреции ЛГ у самок и самцов крыс непосредственно связано с уровнем рецепторов к половым гормонам, присутствующим в этих нервных структурах.
Теоретическая и практическая ценность. Результаты исследования расширяют современные представления о центральных механизмах, принимающих участие в регуляции гипоталамо-гипофизарно-гонадной системы и позволяют предположить, что одним из наиболее ответственных звеньев механизма половой дифференцировки мозга являются рецепторы к эстрадиолу и тестостерону, имеющиеся в гипоталамусе животных.
Полученные данные могут быть использованы в экспериментальных исследованиях, посвященных изучению механизмов половой дифференцировки ЦНС и контроля гонадотропной функции гипофиза, а также в разработке системы исследований, направленных на выявление и предупреждение возможных отклонений от нормального развития нейроэндокринной системы плода человека, связанных с гормональными нарушениями у матери.
Динамика изменения концентрации эстрадиол- связывающих мест в мозге самцов крыс в период неонатального развития
Морфологические исследования структуры и ультраструктуры гипоталамуса в период половой дифференнировки показали, что у новорожденных крысят аркуатные ядра вполне дифференцированны и находятся на разных фазах секреторного цикла. В течение первой недели постнатальной жизни происходит массовое образование синапсов на этих клетках (Е.Х.Приймак, 1974). В супрахиазматических же ядрах нейроциты с гранулами секрета выявлены только на 7-й день постнатальной жизни (И.И.Дедов, Н.А.Демина, 1978). Объем ядер нервных клеток в аркуатных ядрах увеличивается быстрее, чем в супрахиазматических. Таким образом, к моменту рождения тонический центр регуляции секреции гонадотропинов уже достаточно дифференцирован,чего нельзя сказать о циклическом центре. Авторы считают, что разница в темпе развития ядер объясняет преимущественное влияние андрогенов, вводимых в неонатальный период, на циклический центр.
Прослеживается и некоторая зависимость между размерами ядер нейроцитов гипоталамуса и уровнем андрогенов в критическом периоде половой дафференцировки мозга. Кастрация самцов на 1-5 день постнатальной жизни приводит к увеличению объема ядер нейроцитов гипоталамических центров регуляции гонадотропной функции гипофиза; введение же этим животным ТП устраняет указанные выше изменения в нейроцитах (Borisoval 979 drawer et аі 1983). В критический период развития на структуру нервных клеток влияют не только андрогени, но и эстрогены. Так, введение эстрогенов неонаталь-ным самкам крыс вызывает синаптогенный эффект в аркуатном ядре, который не наблюдается у половозрелых ЖИВОТНЫХ (McGinnis et ai.,1981). Используя деафферентациго медиобазального гипоталамуса, приводящую к частичной деградации пресинаптических элементов, ряд авторов показал, что эстрогены способны стимулировать образование аксодендритных синапсов (Nance et al, 1975;Matsumoto, Arai,i98t ). Как отмечает McEwen (198I), в соответствии с настоящим пониманием процессов нейронального развития, рост нейритов, стимулируемый половыми гормонами может быть достаточным условием для инициации различий в числе клеток и их размеров, в образовании синаптических связей, которые являются главными признаками половых различий в мозге половозрелых животных. Не исключаются исследователями и эффекты тестостерона на другие процессы нейронального развития, включая реинициациго клеточного деления, предотвращение смерти клеток и продукцию веществ, подобных фактору роста нейритов.
Твердо установленная зависимость половой дифференцировки мозга от присутствия или отсутствия андрогенов не исключает участия в этом процессе других факторов. К таким факторам относятся моноамины, продуцируемые нейронами гипоталамуса и, как известно из данных литературы, влияющих на секреторные процессы гипофиза. Так показано, что введение артериально дофамина (ДА), а также предшественника катехоламинов ь-ДОФА овариэктомированным крысам, получавшим эстроген и прогестерон, стимулирует секрецию гонадотропинов и угнетает выделение пролактина (Kamberi,1973, 1975). Ряд авторов показал стимулирующее влияние норадреналина (НА) в триггерном механизме регуляции овуляции (Kamberi,1973 Suwer,1978 ). По данным Kamberi стимуляция овуляторного освобождения ЛГ отмечается только при введении больших доз НА (100 мкг) в 3-й желудочек мозга. В то же время Parvizi (1978) показал, что микроинъекции больших доз НА в гипоталамус овариэктоми-рованных крыс вызывает снижение уровня ЛГ. Не менее противоречивы данные и о дофамине. По мнению ряда авторов, стимулирующее действие катехоламинов на освобождение гонадотропин-рилизинг гормонов осуществляется черезtf-адренергические рецепторы (Schneider, 1969 ;Kamberi, 1970).Schneider(1969-);Otequi(1978),бло-кируя эти рецепторы показали, что дофамину принадлежит ведущая роль в регуляции овуляторного выброса ЛГ. В то же время другие авторы обнаружили ингибирующее влияние ДА на освобождение ЛГ (Fuxe,l976 ;Rabii, 1980 ). В отличие от катехоламинов инъекции серотонина угнетают преовуляторный выброс ЛГ и стимулируют секрецию пролактина (Kamberi,1975 ).
Показано участие моноаминергических нейромедиаторных систем в проявлении полового поведения. Так активность серотонинэргичес-ких нейронов гипоталамуса и преоптической области не изменяется под влиянием андрогенов, но эти нейроны модулируют половое поведение, предварительно активированное гормонами ( Brashow et ai., 1982). Этот факт подтверждается в опытах с инактивацией моноами-ноксидазы (МАО), когда увеличение концентрации серотонина в выше упомянутых структурах приводит к дозозависимому угнетению лор-до зного поведения ( Luine,i982 ). Адреналин, введенный в преоптическую область овариэктомированных крыс облегчает проявление лор-дозного поведения после обработки эстрогенами и прогестероном, тогда как норадреналин такого действия не оказывает (Janase, Murakami,1979 ).
Проявление активационных эффектов моноаминов, как и половых гормонов, определяется в период половой дифференцировки мозга и, по-видимому, сами моноамины принимают участие в ней, являясь медиаторами половых гормонов. В работах разных авторов показано, что в "критический" период развития, уровень биогенных аминов различен у особей разного пола. Так, Hardin (1973) в мозгу у 2-х дневных крысят-самцов на 15% больше норадреналина и на 37f0 меньше серотонина, чем у самок. Содержание дофамина у них было одинаковым. В возрасте 5- и 10 дней автором не были обнаружены половые различия в содержании биогенных моноаминов. В то же время Ladosky (1972) показал повышенный уровень серотонина у самок только на 12 день постнатального развития. По данным Носенко Н.Д. (1981) более высокая концентрация серотонина у самок по сравнению с самцами была выявлена на 7 день. В уровне же катехолами-нов автору половых различий выявить не удалось.
Связывание 3Н-тестостерона в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса и коры мозга самцов крыс в ходе неонатального развития
Если для самцов наличие андрогенных рецепторов несомненно, то присутствие их у самок все еще остается спорным. Одни авторы не обнаружили рецепторов к Т в гипоталамусе и гипофизе (Korach, Muldoon,l974 jGustafsson et al.,1976 ), тогда как другие показали их наличие в гипофизе, преоптико-переднем гипоталамусе, медио-базальном гипоталамусе, амигдале (i ieberburg,i977 ). Эстрогенше и андрогенные рецепторы, опосредуя эффект половых гормонов на уровне ЦНС, обнаруживаются на самых ранних этапах развития организма. ИСПОЛЬЗУЯ аВТОраДИОГрафиЧеСКИЙ МеТОД, Sheridan et al. (1974) выявили локализацию Н3-Е2 у 2-дневных самок и самцов крыс в тех же областях, что и у взрослых животных, то есть в нейронах преоптической области, базального гипоталамуса и амигдалы. Убедительные доказательства в пользу присутствия рецепторов к эстради-олу у неполовозрелых животных приведены в работах Kato et al. (1972,1974 ). Авторы, используя метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы, показали, что цитозол гипоталамуса, поглощая Н3-Е2 в области 8,5s , содержит специфически связывающие рецепторные белки уже у 7-дневных крыс, а к 28-му дню постната-льного развития их количество достигало максимума. Подобные данные были ПОЛучеНЫ И Ginsburg et а1.(1972).
В ряде работ было изучено связывание рецепторов к эстрадиолу ядерной фракцией гипоталамуса. По данным Vertes et al. (1973, 1 977) ядерные рецепторы к эстрадиолу обнаруживаются только с 21-го дня жизни, что, по их мнению, связано с отсутствием транслокации гормон-рецепторного комплекса в ядро.
В период с 21 по 28-й день и у самцов и у самок было отмече- но увеличение числа эстрогенных цитоплазматических и ядерных рецепторов, максимальное количество которых наблюдалось на 28-й день, причем у самцов эта величина была ниже, чем у самок.
Особый интерес представляют исследования эстрадиол-связыва-ющей системы гипоталамуса у крыс в неонатальный период развития. По данным Eisenfeid (1970), эстрадиол-связывавдая способность цитозоля мозга неонатальных животных на I мг белка в 200 раз больше, чем таковая гипоталамуса взрослых крыс, а константа ассоциации на 1-2 порядка ниже, чем у взрослых животных. Имеются различия между двумя Е -связывакщими системами и в отношении специфичности связывания. Если в гипоталамусе половозрелых самок ДЭС конкурирует с Н3-& за места связывания, то у неонатальных самок такая конкуренция не наблюдается. Кроме того, отмечены различия и в седиментационных свойствах белков этих систем. При центрифугировании в градиенте плотности сахарозы пик радиоактивности Е2-связывающего белка в цитозоле мозга неонатального животного концентрируется в области 4s , а у взрослого - в области 8-8,5s . Однако имеются работы, в которых показано наличие истинных рецепторов к эстрадиолу в мозге неонатальных животных. Эстрадиол-свя-зывавдие молекулы с высоким сродством к 17/3 -эстрадиолу, эстро Ну И ДЭС бЫЛИ Обнаружены В ЦИТОЗОЛе 5-ДНеВНЫХ СаМОК КрЫС (Barley et ai.,1974 ). Используя хроматографию на колонке с сефадексом iH-20 и последующее центрифугирование меченого материала в градиенте плотности сахарозы, westley et ai., (1976) показали присутствие в цитозоле гипоталамуса 4-дневных самок крыс рецепторов к эстрадиолу. В этом же возрасте авторы отметили наличие рецепторов и в ядерной фракции гипоталамуса. Ядерные рецепторы к эстрадиолу у неонатальных самок показаны и в работе McEwen et ai. (1976), Авторы не только выявили такие рецепторы у 2-3-дневных самок крыс, но и показали, что их концентрация в 2 раза ниже, чем на Ю-П-й день жизни. Наличие эстрог енных рецепторов в гипоталамусе у 3-5 дневных мышей обоего пола было отмечено в работе Attar-di,ohno (1976), причем у самцов этого возраста количество рецепторов было на 25% меньше, чем у самок.
Эстрогенные рецепторы были обнаружены не только в неонаталь-ном мозге крыс, но и в период пренатального развития животного.
MacLusky et.al .(1979) ОбнаЩЖИЛИ рецепторы К ЭСТрЭДИОЛу В ЦИТ030 ле мозга 21-дневных плодов, количество которых увеличивалось до 6 дня. Но авторам не удалось выявить эстроген-рецепторные молекулы в ядерной фракции ни у 21-дневных зародышей, ни у 5-дневных животных.
Показано, что андроген-рецепторная система локализуется в тех же нейронах, что и эстрогенные рецепторы. Attardi et ai. (1976) отметили наличие андрогенных рецепторов в гипоталамусе у обоих полов 3-х-дневных мышей. Уровень цитозольных рецепторов к андрогенам увеличивался в ПО гипоталамуса в течение первых 3-х недель и почти не изменялся в МБГ. По данным Kato (1975) концентрация рецепторов к ДТТ у 7-дневных самцов крыс была незначительной, увеличивалась у 14 и 21-дневных животных, достигая максимума на 28 день жизни.
Влияние неонатальной ацдрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-эстрадиола в цитоплазматической и ядерной фракциях гипоталамуса
Изучение рецепции эстрогенов и андрогенов в гипоталамусе самцов и самок крыс в период половой дифференцировки мозга показало, что в этот интервал времени имеются половые различия в концентрации рецепторов как к эстрадиолу, так и к тестостерону. Причем в исследуемый период жизни у животных не наблюдались связанные с полом различия в концентрации эстрадиола в сыворотке крови, но был отмечен повышенный (в 2-3 раза) уровень тестостерона у самцов, по сравнению с самками. Общепризнанно, что в процессе половой дифференцировки мозга, и в том числе гипоталамуса, андрогени играют ведущую роль (Pfeiffer, I936;Harris, Jakobsohn, I952;Barraclo-. ugh, I961; В.Н.Бабичев, 1981; М.В.Пропп, О.Н.Савченко, 1981). От их уровня в организме в этот "критический" период развития зависит дифференцировка ЦНС по типу самки или по типу самца. Известно, что самки, помимо тонической секреции гонадотропинов, присущей и самцам, обладают и циклической секрецией гормонов гипофиза.
Местом локализации центра циклической секреции являются нервные структуры преоптической области и области переднего гипоталамуса, а тонической - область.аркуатного ядра и срединного возвышения (McGuire,Lisk, 1969; Kalra, Kalra, 1975;Goodman,1978). Именно в этих областях гипоталамуса отмечено преимущественное поглощение 8Н-Е2 (McGuire,Lisk, I969;Maurer, Wooly, 1974). Установлено, что связывание Е2 клетками-мишенями,и в том числе, нейронами гипоталамических структур, отражает наличие рецепторних молекул ( Kato et al.,1969;pierko, 1974 ;o»Malley,Buller,1976 )
Представляется, что установление определенного уровня рецепторов к эстрадиолу в нервных центрах регуляции функции гипофиза, является ведущим моментом половой дифференцировки мозга, которая приводит, в конечном результате, к мужскому или женскому типу гипоталамической регуляции гонадотропной секреции гипофиза.
В связи с вышесказанным представляется важным вопрос о наличии и распределении рецепторних белков в гипоталамических структурах, ответственных за тип секреции гонадотропинов и полового поведения у особей разного пола. В литературе этот вопрос освещен недостаточно, а имеющиеся данные весьма разрозненны.
В своей работе мы поставили перед собой задачу исследовать влияние гормональной среды в "критический" период половой дифференцировки мозга на уровень рецепторов к эстрадиолу в областях гипоталамуса, регулирующих секрецию гонадотропинов у крыс обоего пола, достигших половозрелости. С этой целью мы использовали в нашей работе две экспериментальных модели: I) андрогенизирован-ных на 1-3 день после рождения самок и 2) кастрированных в этом же возрасте самцов крыс, достигших половозрелости. Гормональный фон у этих животных как в "критический" период развития, так и во взрослом состоянии отличался от такового у интактных крыс.
Как видно из таблицы II и рис.7 у интактных самок (в CT.AJ) крыс уровень связывания эстрадиола в цитоплазматической фракции преоптико-передней области гипоталамуса (ПО) в два раза выше, чем в области аркуатного ядра и срединного возвышения АРК-СВ (8,4+0,9 и 3,7+0,5х1СП13 моль/мг белка соответственно, Р 0,01). У самок же, андрогенизированных в неонатальном возрасте, число связывающих эстрадиол мест в ПО и AFK-CB почти не отличалось (4,0+0,8 и 3,5+0,7хЮ"13 моль/мг белка). Т.е. в результате неомоль/мг белка соответственно). Связывание эстрадиола цито-рецепторами гипоталамуса интактных и неонатально андрогенизированных самок характеризовалось высоким сродством, величина которого находилась в пределах 0,8-1,3 0-1.
Концентрация ядерных рецепторов к эстрадиолу в ПО и в АН СВ у интактных самок близки между собой (19,1+2,1 и 20,5+1,9х I0"11 моль/мг ДНК). В результате неонатальной андрогенизации количество ядерных рецепторних мест в гипоталамусе снижалось до неопределяемого уровня. Константа ассоциации для ядерных рецепторов у интактных самок имела значения 1,1-1,2x10%"" .
В таблице 12 и на рис.8 представлены данные, характеризующие связывание эстрадиола цитозольной и ядерной фракциями областей гипоталамуса у интактных и неонатально кастрированных самцов. Из таблицы и рисунка видно, что число цитоплазматических, связывающих эстрадиол,мест в ПО у интактных самцов почти в 2 раза меньше, чем в АРК-СВ (6,0+0,5 и 10,3+1,7x10""13 моль/мг белка соответственно, Р« 0,01). У самцов, кастрированных в неонатальном возрасте, концентрация эстрогенных рецепторов в ПО в 1,5 раза выше, чем в АЇК-СВ (9,6+1,9 и 6,9+0,7хЮ"13 моль/мг белка, Р 0,05). В результате неонатальной кастрации у самцов число рецепторных мест в ПО повышалось от 6,0+0,5 до 9,6+I,9xI0 "I,:J моль/мг белка (Р 0,05), а в АРК-СВ - снижалось от 10,3+1,7 до 6,9f0,7xI0 13 моль/мг белка (Р 0,05). Значения константы ассоциации для ци-торецепторов интактных и неонатально кастрированных самцов находились в пределах 0,5-1 101%-1 и не отличались от их значений для самок (0,8-1 101-1).
В ядерной фракции концентрация рецепторов к эстрадиолу у интактных .самцов в ПО практически не отличалась от таковой в АРК-СВ (21,7+2,8 и ХЭД+г хЮ"11 моль/мг ДНК). У самцов, кастрированных в неонатальном возрасте, количество ядерных рецепторов к Ер в ПО было в 3 раза больше, чем в АРК-СВ (33,7+3,3 и II,3+1,2x1О"11 моль/мг ДНК, Р 0,01). Т.е. в результате неонатальной кастрации самцов число ядерных, связывающих 1 , рецепторов в ПО увеличивается в 1,5 раза (21,7+2,8 и 33,7+3,3x10""11 моль/мг ДНК соот ветственно, Р 0,05), а в АРК-СВ несколько снижается (19,1+2,2 и II,3+1,2x10" 11 моль/мг ДНК, Р 0,05). Константа ассоциации для ядерных рецепторов к Eg в гипоталамусе самцов обеих групп колебалась в пределах от 0,9 до 2, 10-1 и не отличалась от константы ассоциации для ядерных рецепторов гипоталамуса интакт-ных самок. Кроме того, было показано, что у всех экспериментальных групп животных связывание 3Н-эстрадиола в обеих фракциях гипоталамуса в присутствии избытка Eg и ДЭС снижалась на 35-50$, а в присутствии тестостерона - на 2-10$. Из этого следует, что рецепторы к эстрадиолу обладают высокой стереоспецифичностью.
Влияние неонатальной андрогенизации самок и неонатальной кастрации самцов крыс на связывание 3Н-тестостерона в цитозольной и ядерной фракциях гипоталамуса
В последние годы получено немало данных о том, что наряду с эстрогенами, выполняющими у особей обоих полов важную физиологическую роль, определенную роль выполняют и андрогены. Более того, андрогенам приписывают первостепенное значение в регуляции первичных физиологических процессов, протекающих в организме под контролем гормонов. Такими процессами является дифференцировка половых органов и центральной нервной системы по типу самца. Несмотря на то, что участие андрогенов в процессе половой дифферен-цировки тканей, органов и физиологических систем неоспоримо, все еще не решен вопрос о механизме, благодаря которому андрогены включаются в регуляцию не только этого процесса, но в регуляцию полового поведения и секреции гонадотропинов.
В настоящее время известно, что тестостерон, основной гормон, синтезируемый семенниками, в тканях-мишенях метаболизируется. Метаболизм тестостерона протекает по двум путям: 1) 5о(-редуктазному, 2) ароматазному.
И тот и другой путь был показан многими авторами в разных органах, В ТОМ числе и ЦНС (Naftolin et al.,1972;Massa et al.,1975; McGinley et al., 1-983).
Широко распространено мнение, что тестостерон оказывает свое биологическое действие, благодаря процессу ароматизации в bэстрогены (Luttge,Y/halen, 1970; McDonald, Doughty, 1974 ). Но В последнее время появляется все больше данных о непосредственном участии андрогенов в физиологических процессах. Так, Korenbrot (1975) показал, что тестостерон и дигидротестостерон непосредственно участвуют в нервной регуляции освобождения гонадотропинов, a Do&ier (1979) обнаружил, что ДТТ способен самостоятельно вызывать НеонатаЛЬНую аНДрОГеНИЗаЦИЮ. В Своей работе Sodersten,Gus tafsson (1980) выявили эффективность ДТТ, вводимого самцам вместе с эстрадиол-бензоатом, в регуляции мужского полового поведения. Исследуя влияние андрогенов на половую дифференцировку мозга крыс, целесообразно изучить помимо эстрадиол-рецепторной системы гипоталамуса еще и андроген-рецепторнуго систему гипоталамуса этих животных.
Перед нами стояла задача установить наличие или отсутствие рецепторов к Т в нервных структурах гипоталамуса, регулирующих секрецию гонадотропинов гипофизом и половое поведение у интактных самцов и самок крыс и у животных, подвергавшихся в неоната-льном возрасте андрогенизации или кастрации.
Из таблицы 14 и рис.9 видно, что концентрация рецепторов к тестостерону в цитоплазме ПО у интактных самцов крыс в два раза выше, чем в АРК-СВ (10,8+1,1 и 5,0+0 101 моль/мг белка соответственно, Р 0,01). Число ядерных рецепторов к Т в ПО в 1,5 раза ниже, чем в АРК-СВ (4,3+1,0 и 6,0+0,8хЮ-11 моль/мг ДНК, Р 0,05).
У неонатально кастрированных самцов в ПО не были обнаружены Т-связывающие рецепторы ни в цитоплазме, ни в ядерной фракции; в области аркуатного ядра - срединного возвышения концентрация цитоплазматических рецепторов к Т не отличалась от таковой у интактных животных (4,8+0,4 и 5,0+0,6x10""1 моль/мг белка), а в ядерной фракции число связывающих мест было в два раза ниже (3,0+0,2 и 6,0+0,8хПГП моль/мг ДБК соответственно, Р 0,01).
У половозрелых интактных (табл.14, рис.Ю) самок мы не смогли обнаружить рецепторы к тестостерону ни в одной из областей гипоталамуса. В результате же неонатальнои андрогенизации, мозг самок крыс приобрел способность поглощать тестостерон, причем, в цитоплазме рецепторы к тестостерону были обнаружены только в то APK-GB (4,5+0,2x10 моль/мг белка), а в ядерной фракции наблюдалась высокая концентрация рецепторов к Т в обеих областях (7,1+1,7 и 5,4+0,8хЮ п моль/мг ДНК соответственно в ПО и АИС-СВ).
Определяя концентрацию связывающих тестостерон мест, мы обнаружили, что для всех исследуемых фрагментов гипоталамуса, где было выявлено образование тестостерон-рецепторного комплекса, характерно высокое сродство рецепторных белков к Т. Константа ассоциации для цитоплазматических рецепторов находилась в пределах 0,5-0 101%- а для ядерных-1,9-2, 7X10%-!
Связывание Т и в цитоплазме, и в ядерной фракции у всех групп животных характеризовалось высокой стереоспецифичностью. Было показано, что в присутствии избытка Т и ДГТ, связывание снижалось на 37-58%, а в присутствии кортикостерона - только на 1-12%.
В результате наших экспериментов мы выявили специфическое связывание тестостерона в гипоталамических нервных центрах регуляции гонадотропной функции гипофиза у половозрелых интактных самцов крыс. Причем, в ПО концентрация цитоплазматических рецепторов к Т в 2 раза выше, чемеАРК-СВ, а ядерных рецепторов-в 1,5 раза ниже. Аналогичные данные о распределении меченого тестостерона в мозгу крыс были получены stumpf (1983).
