Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. CLASS Обзор литератур CLASS ы 11
1.1. Структурная и функциональная характеристика нефрона 11
1.2. Структурная и функциональная характеристика нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 18
1.3. Влияние различных факторов на митотическую активность эпителия нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 21
Глава 2. Закономерности структурных изменений нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 32
2.1. Материал и методы исследования 32
2.2. Закономерности изменений морфометрических показателей почечных телец нефронов разных генераций почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 36
2.3. Закономерности изменений морфометрических показателей отделов канальцев нефронов разных генераций почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 58
2.4. Закономерности изменений митотической активности эпителия нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии. Влияние фракций гомогената почки на митотическую активность эпителия нефронов 107
2.4.1. Влияние односторонней нефрэктомии на митотическую активность эпителия нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 107
2.4.2. Влияние фракций гомогената почечной ткани на митотическую активность почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии 111
Глава 3. Обсуждение полученных результатов 120
4. Выводы 151
5. Список литературы 153
- Структурная и функциональная характеристика нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
- Закономерности изменений морфометрических показателей почечных телец нефронов разных генераций почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
- Закономерности изменений митотической активности эпителия нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии. Влияние фракций гомогената почки на митотическую активность эпителия нефронов
- Влияние фракций гомогената почечной ткани на митотическую активность почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
Введение к работе
Актуальность проблемы. Значение почки в физиологических процессах организма, активное ее участие в развитие патологических состояний обусловливает пристальное внимание к ней ученых разных специальностей (Мельман Е.П., Шутка Б.В., 1988; Пантелеев СМ., 1994; Schofield P.N. etal., 1996; Weissgarten J. etal., 2000; De-kelB. etal., 2003).
Одной из важнейших функций почки является участие в регуляции концентрации осмотически активных веществ в крови и других жидкостях внутренней среды организма, что обеспечивается ультрафильтрацией в клубочках, реабсорбцией и секрецией веществ в канальцах, синтезом новых соединений, взаимодействием с гормональными, невральными, сосудистыми и другими системами организма (Наточин Ю.В. 1988). При этом совокупность функций почки, как у животных, так и человека является результатом интегративной деятельности различных генераций нефронов, особенности которых обусловлены различиями строения канальцев, почечных телец и их сосудистой системы (Проняев В.И., 1985; Наточин Ю.В., 1988; Bankir L, et al., 1987), а также функциональными особенностями отдельных участков канальцев (Fourman J.,1974; Memran A.,Casellas D.,1987).
Вопросы компенсации структуры и функции при утрате одного из парных органов представляют интерес для клинической практики, в связи с чем возрастает внимание исследователей к экспериментальному изучению органов, оставшихся после удаления контрала-теральных (Зуфаров К.А., 1983; Мкртчан О.З., 1983, Пантелеев СМ., 1994). Клиническая односторонняя нефрэктомия является результатом удаления травмированной почки, опухолей, аномалий почки (Мак R. Н. etal., 2004; ShirasakiY. etal., 2004), при этом, характеристике количественных показателей изменения оставшейся почки и ее структурных единиц - нефронов уделяется недостаточное внимание (Пантелеев СМ., 1994). Кроме того, отсутствуют сведения о сочетанных изменениях отделов нефронов разных генераций в различные фазы компенсаторной реакции почки после удалении кон-тралатерального органа.
Актуальность изучения интегративных отношений структурных элементов органов за последние годы значительно возросла (Наточин Ю.В., 1988; Сапин М.Р., 2000; Пантелеев СМ. с соавт., 2003). Известно, что интегративная морфометрия, в том числе почки, является эффективным методом выявления тканевых и органных реакций и установления взаимозависимых изменений ее структурных
РОС НАЦИОНАЛЬНА/. ,
СЛ!««!**Г 6пЧ\
з ад woftnluj
единиц в онтогенезе и эксперименте (Янин В.П., Вихарева Л.В., Пантелеев СМ., 1997; Пантелеев СМ. с соавт. 2001, 2004).
Анализ доступной литературы показал, что при изучении компенсаторных реакций почки внимание исследователей, в основном, обращено на характеристику макроскопических реакций, алломет-рических показателей, изменения функциональных, биохимических характеристик (Chang S.-G. etal., 2002; Devid Н. Sigmon etal., 2004), при этом практически отсутствуют работы, посвященные изучению морфометрических параметров почечных телец и отделов каналь-цевой части нефронов разных генераций в различные фазы компенсаторных изменений в почке после односторонней нефрэктомии.
Цель исследования. Определить закономерности структурных изменений нефронов разных генераций на этапах компенсаторной реакции почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии у белых беспородных половозрелых крыс.
Задачи исследования:
Определить морфометрические показатели почечных телец нефронов разных генераций в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Определить морфометрические показатели канальцев нефронов разных генераций в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Выявить различия в динамике морфометрических показателей отделов нефронов разных генераций и определить характер их участия на различных этапах компенсаторной реакции почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Определить пролиферативную активность эпителия нефронов и роль тканевых органоспецифических факторов в компенсаторной реакции почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Научная новизна. Впервые определено, что морфометрические показатели отделов нефронов разных генераций в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии достоверно превышают аналогичные показатели соответствующих отделов нефронов в почке контрольных интактных животных.
Определено, что изменения динамики морфометрических показателей почечных телец нефронов разных генераций при компенсаторной реакции в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии характеризуются прогрессивным приростом величин и этап-ностью На первом этапе ,(1-20 сутки) наблюдается незначительный
прирост, на втором этапе (после 20 суток) - резкий прирост величин почечных телец.
Определено, что динамика изменений средней площади отделов канальцев нефронов разных генераций в ходе компенсаторной реакции в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии характеризуется волнообразностью прироста величин и этапностью. В ходе первого этапа (1-7 сутки) наблюдается сходство прироста величин проксимальных и дистальных извитых отделов, а также проксимальных и дистальных прямых отделов канальцев нефрона. В ходе второго этапа (после 7 суток) наблюдается сходство прироста величин проксимальных извитых и прямых, а также дистальных извитых и прямых канальцев нефрона.
Впервые выявлена однотипность характера прироста морфо-метрических показателей идентичных отделов канальцев нефронов разных генераций и различия в приросте величин отделов канальцев нефронов одной генерации в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Выявлены различия в динамике морфометрических показателей между нефронами разных генераций в ходе компенсаторной реакции в почке, оставшейся после односторонней нефрэктомии. Установлено, что вовлечение нефронов в компенсаторную реакцию происходит в определенной последовательности: поверхностные нефроны - внутрикорковые нефроны - околомозговые нефроны.
Впервые выявлены изменения пролиферативной активности эпителия нефронов в почке, оставшейся после дносторонней нефрэктомии на фоне введения фракций гомогената ткани почки.
Научная и практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволяют на основании морфометрических данных обосновать отдельные механизмы компенсаторной реакции почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Полученные морфометрические данные позволяют объективно характеризовать межнефронные и внутринефронные взаимодействия, устанавливающиеся в оставшейся после нефрэктомии почке в разные фазы компенсаторного процесса.
Данные о последовательности вовлечения в компенсаторную реакцию нефронов разных генераций могут быть использованы в клинической практике при оценке структурно-функциональных изменений и определении тактики коррекции нарушений в почке оставшейся после нефрэктомии.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Односторонняя нефрэктомия обусловливает структурные изме
нения нефронов разных генераций в оставшейся почке, прояв
ляющиеся в закономерном увеличении морфометрических па
раметров всех отделов нефрона.
Нефроны разных генераций в почках, оставшихся после односторонней нефрэктомии, дифференцированно вовлекаются в компенсаторную реакцию в последовательности: поверхностные нефроны - внутрикорковые нефроны - околомозговые нефроны.
Компенсаторная реакция почек, оставшихся после односторонней нефрэктомии, характеризуется этапностью, и изменением меж- и внутринефронных взаимодействий, которые могут быть объективно оценены методами морфометрии.
Тканевые органоспецифические митозингибирующие факторы участвуют в реализации компенсаторной реакции почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии.
Апробация работы. Основные этапы работы доложены и обсуждены на Конференции морфологов (Тюмень, 1996); Международном симпозиуме "Медицина и охрана здоровья" (Тюмень, 1996); Конференции молодых ученых "Актуальные вопросы современной науки и здравоохранения" (Екатеринбург, 1997); Международном симпозиуме "Медицина и охрана здоровья" (Тюмень, 1997); Конференции посвященной 100-летию со дня рождения З.Д.Н. РСФСР В.Г. Елисеева «Морфологические науки - практике здравоохранения и ветеринарии» (Омск, 1999); Всероссийской научной конференции, посвященный 300-летию образования в Сибири (Тюмень, 2002); V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004) и VII Конгрессе международной ассоциации морфологов (Казань, 2004).
Внедрение. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры гистологии и эмбриологии ГОУ ВПО Тюменской государственной медицинской академии МЗ РФ, кафедры гистологии ГОУ ВПО Омской государственной медицинской академии МЗ РФ, кафедры гистологии, биологии ГОУ ВПО Ханты-Мансийского государственного медицинского института.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследо-
Структурная и функциональная характеристика нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
Изучение процессов восстановления тканевых структур различных органов в процессе жизнедеятельности организма, при различных эн-до- и экзогенных влияниях имеет важное теоретическое и прикладное зна-чение для последующей оценки исходов ряда патологических процессов, а также для возможного последующего влияния на эти процессы.
В основе поддержания структурной стабильности нефрона лежит деление клеток (Доброхотов В.Н., Курдюмова А.Г., 1961; Иванова Л.Н., 1969; Пантелеев СМ., 1994; Saetren Н., 1972). Многие авторы в процессе деления отмечают образование двуядерных клеток (Воронцова М.А., Ли-ознер Л.Д., 1955; Поликар А., Бесси М., 1970), появление которых в основном обусловлено делением ядра без деления цитоплазмы (Pera F., 1971). Leblond С. (1972) считает, что паренхима почки характеризуется отсутст-вием утраты клеток и продолжительность жизнедеятельности этих клеток равна продолжительности жизни самого органа.
В настоящее время установлено, что все физиологические и морфологические процессы имеют четко организованный ритмический характер. Мнтотпческая активность клеток нефрона так же имеет выраженную ритмическую, суточную зависимость с максимальным ее уровнем в утренние часы и значительным снижением в вечерние и ночные. Имеется тесная взаимосвязь между процессами деления и функционирования клеток (Ша-рипов Ф.Х., 1968; Иванова Л.Н., 1969; Пантелеев СМ., 1978, 1994; Афа-насьев Ю.И. с соавт., 1999).
При физиологической регенерации пролиферация осуществляется в основном путем митотического деления клеток (Доброхотов В.Н., Курдюмова А.Г., 1961). Репаративная регенерация, возникающая при различных травмирующих воздействиях, во многом похожа на физиологическую и имеет лишь количественную разницу (Саркисов Д.С, 1970). Существует также мнение, что регенерация - это процесс вторичного развития, вызванный повреждающими факторами и характеризующийся перемещением клеток, делением, увеличением их объема и последующей дедиффе-ренцировкой. Под термином «дедифференцировка» подразумевается перестройка клеток, с утратой специализированной функции (Токин Б.П., 1972, 1977; Короткова Г.П., Токин Б.П., 1973; Бодемер Ч., 1971), а ядро и цитоплазма приобретают морфофизиологию необходимую для клеточного деления (Хэй Э., 1969). Некоторые авторы отрицают дедифференцировку как процесс обратного развития клетки, считая, что даже при структурно-функциональной перестройке клетка не лишается тканевой принадлежности, детерминации и принципиальных черт предшествующей функциональности (Саркисов Д.С., 1972, 1977).
Наиболее наглядно можно изучать изменение структур нефронов на примере почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии, когда мы искусственно вызываем развитие компенсаторных реакций. Этой теме посвящен целый ряд работ. По мнению многих авторов занимающихся этой проблемой, интактный орган, оставшийся после удаления контрала-тералыюй почки, восстанавливает объем функционирующих структур за счет их гипертрофии (АжипаЯ.И., 1962; Goldman J., 1971; Mandell J. et al., 1993), гиперплазии оставшихся клеток (Зуфаров К.А., Гонтмахер В.М., Са-гдулаев 3.3., 1974; Kurnick N., Lindsay P., 1968; Nowinsky W., Goss R., 1969; Saetren H., 1972), увеличения митотической активности (Зуфаров К.А., 1961, 1973; Пантелеев СМ., 1994; Franch G., 1960; Hegdeker В., 1968), компенсаторного увеличения функциональной нагрузки на оставшиеся клетки (Kairemo K.J. et al., 1996). Ряд авторов отмечает, что все отделы нефрона участвуют в реализации восстановительных процессов (Пантелеев СМ., 1978; Зуфаров К.А., 1983; Heine W., Stocker Е., Heine П., 1971; Mandache Е., Repcive Е., 1975). Однако имеется точка зрения, что далеко не все изменения в почке оставшейся после односторонней нефрэктомии направлены на восстановление почечной функции. Pollock С.А. и соавт. (1996), изучая изменения эпителиального транспорта в почке, оставшейся после односто -20-ронней исфрэктомии, выявили явное снижение массы почек, связанное на их взгляд, со снижением процессов транспорта Na и воды. Так же выявлена взаимосвязь между восстановительными процессами в оставшейся почке и общими процессами роста организма. Santos F. с соавт. (1996), анализируя критерии процессов роста у нефрэктомированных крыс, выявили явное снижение веса и роста у оперированных животных.
По вопросу о влиянии возрастных изменений на активность ре-паративных процессов большинство авторов считают, что основные восстановительные реакции почек от конкретного возраста не зависят, а связаны лишь с процессами деления и гипертрофии (Бабаева А.Г., 1970; Го-гиашвили Л.Е., J975; Гоптмахер В.М., 1975; Сидорова В.Ф., Горбунова В.Д., 1976, 1977). Ряд авторов считает, что компенсаторное образование новых нефронов возможно лишь у молодых особей, за счет элементов оставшейся нефрогенной ткани (1983; Алиметова М.С., 1970, 1971, 1972; Dicker S., Shirley D., 1973; Chang, S.G. et al., 2002).
Важным моментом в решении проблемы восстановительных процессов в почке является вопрос об источниках регенерации. До сих пор единого мнения по этому вопросу не сформировано. Саркисов Д.С. (1972, 1977) считает источником регенерации так называемые к летки-предшественнику, которые, дифференцируясь, пополняют пул зрелых клеток. Шарипов Ф.Х. (1966) выявил перемещение клеток из извитого канальца в капсулу почечного тельца при ее повреждении. Однако большинство авторов считают источником регенерации при патологических процессах, оставшиеся неповрежденными клетки почечных канальцев (Воло-щенко А.А., 1958; Яшина Н.Н., 1972; Никитина Т.Н., 1973), а так же клетки поврежденные частично (Ormos J., Elemer G., Csapo Z., 1973).
Закономерности изменений морфометрических показателей почечных телец нефронов разных генераций почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
В настоящем исследовании нами проведен анализ изменения площади почечных телец, сосудистых клубочков у крыс в почках, оставшихся после односторонней нефрэктомии.
Наиболее существенные изменения отмечены в почечных тельцах поверхностных нефронов. Так, уже через 24 часа после нефрэктомии площадь почечных телец нефронов этой генерации увеличивается на 2,28% (рис. 1) с 5117+138 до 5263+251 мкм2 (табл. 2).
Процент увеличения сосудистого клубочка составляет 4,45% и превышает на 1,83 процент увеличения площади почечного тельца.
Через 2 суток после нефрэктомии почечные тельца поверхност-ных нефронов увеличиваются на 7,3% с 5194+144 до 5572±155 мкм . Увеличение сосудистых клубочков на этой стадии эксперимента еще превышает увеличение почечных телец на 1,12% и составляет 8,42% (рис. 2).
Через 3 суток после проведения односторонней нефрэктомии величина почечного тельца увеличивается с 5871+194 до 6286+253 мкм2, при этом прирост площади почечного тельца незначительно уменьшается и составляет 7,07%. То же отмечается и для величины сосудистого клубочка, которая увеличивается с 5093+188 до 5451+235 мкм2 при уменьшении величины прироста до 7,03% (табл. 3). На этой стадии опыта происходит выравнивание площадей почечного тельца и сосудистого клубочка.
На 4 сутки эксперимента площадь почечного тельца в поверхно-стной генерации нефронов увеличивается с 5668+227 до 5971+221 мкм с приростом в 5,35%. По сравнению с предыдущей стадией темп прироста величины почечного тельца уменьшается на 1,72%. Величина клубочка увеличивается с 4719 до 5009 мкм , ее прирост равен 6,15%, что на 0,88% меньше чем на предыдущей стадии.
На 5 сутки размеры почечных телец увеличиваются на 6,98% с 5730+194 до 6130+250 мкм , что на 1,63% больше, чем на предыдущей стадии. Прирост величины сосудистого клубочка носит менее выраженный характер и составляет 6,29%, что всего на 0,14% больше чем на предыдущей стадии эксперимента.
К 6 суткам после односторонней нефрэктомии отмечается значительный прирост величины и почечных телец и сосудистых клубочков. Так, почечные тельца к этой стадии увеличиваются на 9,1% с 5812±188 до 6340+201 мкм2, а сосудистые клубочки - на 10,74%. По сравнению с предыдущей стадией темп прироста почечных телец составляет 2,1%, а сосудистых клубочков - 4,45%.
Через 7 суток после нефрэктомии в оставшейся почке почечные тельца поверхностных нефронов увеличиваются на 12,7%, а сосудистые клубочки - на 11,9%. По сравнению с предыдущей стадией прирост величины почечных телец составляет 3,6%о, а сосудистых клубочков - 1,2%. Сравнение этих показателей с предыдущей стадией указывает на первичность гипертрофии сосудистых клубочков как пускового механизма гипертрофии почечных телец.
К 8-м суткам опыта величина почечных телец поверхностных нефронов увеличивается на 16% с 5168±177 до 5933±162 мкм2. Темп прироста размеров почечных телец на этой стадии составил 3,36%. Почти аналогичный прирост размеров в 3,42% отмечается и в сосудистых клубочках. При этом их величина на 15,4% превышает контроль и изменяется с 4527±169 до 5222±153 мкм . Общая тенденция изменения размеров компонентов почечных телец указывает на продолжающиеся процессы увеличения массы почечных телец.
Через 10 суток опыта величина почечных телец поверхностных нефронов увеличивается с 4682±196 до 5572±234 мкм2, что соответствует приросту в 19% по сравнению с контролем. Темп прироста размера почечных телец составил в среднем 1,5% в сутки за период с 8 по 10 сутки. Раз -42-меры сосудистых клубочков за этот же период увеличиваются с 4119±149 до 4892+225 мкм с темпом прироста 1,7% в сутки и общим приростом 18,8%о по сравнению с контролем. Общая тенденция реакции почечных телец поверхностных нефронов на этой стадии указывает на замедление темпов гипертрофии почечных телец в период с 8 по 10 сутки.
К 12 суткам опыта отмечается снижение темпа прироста величины почечных телец поверхностных нефронов до 13,6%, что на 5,5%) меньше, чем на предыдущей стадии. При этом величина почечных телец увеличивается с 5092±182 до 5782+225 мкм2. Величина же сосудистых клубочков изменяется к этой стадии незначительно и составляет 18,2%, что всего на 0,6%) меньше, чем на предыдущей стадии.
К 15 суткам опыта продолжается снижение темпа прироста размеров почечных телец и их размеры изменяются с 5708±146 до 6378±196 мкм , что составляет 11,74%. Этот показатель на 1,81% меньше чем на стадии 12 суток. Следует отметить, что средний темп снижения прироста размеров почечных телец за этот период составляет около 0,6%) в сутки. В то же время в сосудистых клубочках продолжается, хотя и незначительное, нарастание темпов прироста их размеров и к 15 суткам это увеличение составляет 19,64%). По сравнению с предыдущей стадией увеличение клубочков составляет 1,47% или 0,49% в сутки.
В период от 15 до 20 суток после односторонней нефрэктомии отмечается прогрессивное нарастание размеров почечных телец гюверхно-стных нефронов от 5444+176 до 6458±168 мкм . Общий прирост величины почечных телец составляет 18,63% , а разность прироста по сравнению с предыдущей стадией составляет 6,89% или 1,38%) в сутки. Размеры сосудистых клубочков к этой стадии увеличиваются на 13,17% с 4686±163 до 5303±153 мкм , что на 6,47% меньше чем на предыдущей стадии. Это свидетельствует о функциональной активности механизма фильтрации.
Закономерности изменений митотической активности эпителия нефронов почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии. Влияние фракций гомогената почки на митотическую активность эпителия нефронов
В ходе проводимых нами исследований, с целью детального сопоставления пролиферативной активности эпителия нефронов в норме и эксперименте, возникла необходимость в изучении суточных колебаний митотической активности эпителия нефрона почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии. Литературные данные, касающиеся этого вопроса, весьма немногочисленны и сводятся к констатации активности иро-лиферативных процессов почки в целом, без изучения каких либо влияний на нее или ее отделы.
t
Забор материала начали проводить через 48 часов после односторонней нефрэктомии. Так, на 3 сутки после проведенной операции уровень митотической активности эпителия нефронов значительно колебался и был максимально высок в дневные часы, достигая уровня 1,107%о в 14 часов и 1,086%о в 17 часов реального времени суток, или через 3 и 6 часов после начала 3 суток эксперимента (рис. 8).
В вечерние и ночные часы происходил спад пролиферативной активности эпителиальных клеток, митотический индекс колебался от 1,036%о до 0,941%о в 23 и 8 часов реального времени суток соответственно, или через 12 и 21 час после начала 3 суток эксперимента (табл. 9).
Средний уровень митотической активности в период от 20 до 8 часов реального времени 3 суток составил 1,002±0,004%о. Следует отметить, что по истечении первых суток от начала забора материала, т.е. в период от 21 часа 3 суток и до 3 часов 4 экспериментальных суток, вновь происходит резкое повышение уровня митотической активности в эпите - 109 лий нефронов почки. Митотический индекс в интервале от 8 до 14 часов 4
суток реального времени достигает 2,26%о. В период с 17 до 20 часов реального времени 4 суток происходит постепенное снижение уровня про-лиферативных процессов. Митотический индекс составил 1,35%о и 1,024%о в 17 и 20 часов соответственно (через 6 и 9 часов после начала 4 суток эксперимента).
В период с 23 часов 4 суток и до 2 часов 5 суток реального времени митотический индекс опять незначительно увеличивается и составля-ет 1,036%о и 1,06%о соответственно, после чего происходит его снижение, и в 5 часов 5 суток митотический индекс составляет 1,026%о.
Таким образом, средний уровень митотической активности в вечерние и ночные часы 4 суток реального времени составляет 1,036±0,004%о. Дальнейший анализ полученных нами данных показывает, что и на 5 сутки эксперимента колебания митотической активности имеют такие же суточные закономерности, как и в предыдущие сутки опыта. Так, в период от 8 до 11 часов реального времени 5 суток эксперимента происходит увеличение количества делящихся эпителиальных клеток, а митоти-ческий индекс в это время достигает уровня 1,62%о. К 14 часам реального времени 5 суток опыта происходит снижение митотической активности клеток - митотический индекс составляет 1,055%о. Далее, в период от 17 часов 5 суток до 5 часов 6 суток реального времени (через 6 и 18 часов после начала 5 суток эксперимента), митотическая активность незначительно изменяется. Митотический индекс колеблется от 1,084%о до 1,026%о, составляя в среднем 1,052±0,002%о.
Таким образом, анализируя полученные нами данные можно сделать вывод о том, что суточные колебания пролиферативной активности эпителиальных клеток нефрона почки, оставшейся после односторонней нсфрэктомии имеют определенную закономерность. Закономерность эта заключается в достоверно значимом повышении митотической активности в утренние и дневные часы (максимальный митотический индекс отмечен в 14 часов 3 суток и составил 1,107%о, в 14 часов 4 суток - 2,26%о, в 11 часов 5 суток - 1,б2%о, реального времени эксперимента) и снижении уровня пролиферативной активности в вечерние и ночные часы реального времени суток (средний уровень пролиферативной активности в вечерние и ночные часы составил 1,002±0,004%о на 3 сутки, 1,036+0,004%о на 4 сутки и 1,052±0,002%о на 5 сутки эксперимента).
Проведенные нами исследования показали, что у интактных животных митотический индекс эпителия нефрона колеблется от 0,31 до 0,40%о и составляет в среднем 0,356±0,031%о. В группе экспериментальных животных уже через 48 часов после операции митотическая активность возрастает до 1,2бЗ±0,072%о и в течение 3-5 последующих суток колеблется в пределах от 0,875%о до 1,581%о.
Влияние фракций гомогената почечной ткани на митотическую активность почки, оставшейся после односторонней нефрэктомии
Анализируя полученные нами данные в сериях опытов по введению гомогената почки, взвеси осадка и надосадочной жидкости мы исходили из представления, что в гомогенате находятся как молекулярные образования, так и фрагменты субклеточных структур, и обломки мембран. Надосадочная жидкость содержит различные виды молекул не связанных с мембранными комплексами и обломками субклеточных структур. В свою очередь взвесь осадка представляет собой комплекс обломков клеток и субклеточных структур.
Проведенные исследования показали, что после внутрибрюшин-ного введения гомогената почки уже через 1 час митотический индекс в почке подопытного животного снижается до 0,278±0,057%о, что в 4,3 раза ниже исходного митотического индекса в почке нефрэктомированного животного (рис. 9).
Следует отметить, что при достаточной вариабельности индивидуальных показателей митотического индекса у различных экспериментальных животных (коэффициент вариации равен 35%), максимальный митотнческий индекс у отдельных животных не превышает 0,41%о, что в 3 раза ниже исходного уровня митотической активности у экспериментального животного и имеющиеся различия носят достоверный характер (р 0,01)(табл. 10).
Через 2 часа после введения гомогената ткани почки митотнческий индекс в почке нефрэктомированных животных составил 0,589±0,12%о. Этот показатель следует рассматривать как статистически значимый (р 0,05) подъем митотической активности по сравнению с данными полученными через 1 час. Однако показатель митотической активности, на этой стадии опыта, значительно ниже исходного уровня (более чем в 2 раза) и эти различия являются статистически достоверными (р 0,01). Следует отметить, что вариабельность индивидуальных показателей митотической активности у различных животных на этой стадии опыта составляла также около 35%, а максимальный митотнческий индекс у отдельных животных был равен 0,842%о.
Через 4 часа после введения гомогената ткани почки нефрэкто мированным животным митотический индекс в почке экспериментальных животных составил 0,504±0,077%о и статистически значимо не отличался от показателя, полученного через 2 часа. Отличие же митотического индекса на этой стадии опыта от исходного уровня было статистически значимо (р 0,01), что свидетельствует о продолжающемся подавлении мито-тической активности эпителия нефронов после введения гомогената ткани почки. Вариабельность показателей на этой стадии опыта составила 26%, а максимальный митотический индекс был равен 0,684%о.
Через 8 часов после введения гомогената ткани почки нефрэкто-мированным животным снижение митотического индекса по сравнению с показателями через 2 и 4 часа до 0,489±0,095%о было статистически недостоверным, однако митотический индекс был в 4,5 раза ниже исходного уровня, а различия между ними были статистически достоверны (р 0,01). При высокой вариабельности индивидуальных показателей митотической активности у отдельных животных (V=43%) максимальный митотический индекс был равен 0,645%о, что в 1,6 раза ниже исходного показателя в группе контрольных животных.
После 8 часов опыта отмечено значительное статистически достоверное (р 0,01) подавление митотической активности эпителия нефронов до 0,031 ±0,001%о на 16 часов опыта. При этом коэффициент вариации был низким и составил 9%, а максимальный индивидуальный показатель митотического индекса был равен 0,033%о. Обращает на себя внимание значительное подавление на этой стадии опыта митотической активности эпителиальных клеток в почке нефрэктомированных животных в 16 раз по сравнению с 8-часовым показателем и в 39 раз по сравнению с исходным.
